Ginkgolides, trilactones diterpen Ginkgo biloba, sebagai antagonis

di rekombinan reseptor a1h2g2L GABAA

abstrak

Ginkgolides A, B, dan C adalah trilactones diterpen dan konstituen aktif dari 50: 1 Ginkgo
biloba ekstrak daun banyak digunakan dalam pengobatan simtomatik ringan sampai sedang
demensia. Menggunakan dua elektroda metodologi tegangan klem, ginkgolides ini ditemukan
menjadi antagonis cukup kuat di rekombinan reseptor a1h2g2L GABAA manusia dinyatakan
dalam Xenopus oosit. Ginkgolides A, B, dan C menghambat tindakan langsung dari asam-
aminobutyric g (GABA) dengan nilai Ki dari 14.5F1.0, 12.7F1.7, dan 16.3F2.4 AM masing-
masing. Antagonisme oleh ginkgolides ini pada reseptor GABA a1h2g2L tampaknya tidak
kompetitif seperti yang ditunjukkan oleh pergeseran kanan nonparallel dan mengurangi
respon GABA maksimal dalam GABA kurva konsentrasi-efeknya.

pengantar

-g aminobutyric acid (GABA) adalah penghambat utama neurotransmitter di sistem saraf

pusat mamalia mediasi neurotransmisi cepat terutama melalui Reseptor GABA. Reseptor
GABA milik keluarga saluran pemancar-gated penghambatan yang juga mencakup Reseptor
GABAC dan reseptor glisin. Saluran GABA A, reseptor GABA, dan glisin terbuka dalam
menanggapi mengikat dari pemancar masing-masing, GABA, atau glisin memungkinkan Cl?
ion untuk mengikuti gradien elektrokimia ke dalam sel, menyeimbangkan efek eksitasi
neuronal (Jentsch, 2002). Saluran GABAA, GABAC, dan reseptor glisin diblokir oleh
picrotoxin convulsant tanaman. Picrotoxinin merupakan antagonis kompetitif dari GABAA
reseptor (Akaike et al., 1985). [35S] t-butil phosphorothionate ([35S] Tbps) adalah
radioligand untuk picrotoxinin mengikat situs pada reseptor GABA (Olsen et al., 1989).
Picrotoxinin dan situs mengikat Tbps telah terbukti berada dalam saluran reseptor GABA
(Jursky et al., 2000; Perret et al., 1999). Reseptor GABA juga menggabungkan situs mengikat
untuk GABA, barbiturat, benzodiazepin, dan steroid. Reseptor GABA adalah polimer
oligomer hetero dirakit dari beberapa kemungkinan kombinasi subunit protein. Sampai saat
ini, setidaknya 16 subunit yang berbeda untuk reseptor GABA manusia telah diidentifikasi,
yaitu, A1-6, h1-3, g1-3, y, k, dan u (Chebib dan Johnston, 2000). Kebanyakan reseptor GABA
dibentuk oleh coexpression dari a, h, dan g subunit dengan kombinasi subunit a1h2g2L
menjadi subtipe reseptor GABA utama dalam otak (Upton dan Blackburn, 1997).
Ginkgolides (Gbr. 1) adalah lakton diterpen dari pohon maidenhair, Ginkgo biloba. Daun
Ginkgo memiliki panjang telah digunakan dalam pengobatan tradisional Cina. penggunaan
modern menggunakan ekstrak dari daun untuk pengobatan insufisiensi vaskular
serebrovaskular dan perifer, gejala yang berhubungan dengan penurunan kognitif dan
neurosensorik gangguan yang mungkin terkait dengan demensia, penuaan, dan kepikunan
(Blumenthal et al., 2000). Ekstrak ini disiapkan untuk 35-67: 1 (rata-rata 50: 1) rasio daun
kering ekstrak akhir. Ekstrak mengandung 5-7% lakton terpene, dimana sekitar 2,8-3,4%
terdiri dari ginkgolides A, B, dan C, dan sekitar 2,6-3,2%, dari bilobalide. Ginkgolides adalah
inhibitor spesifik dari lipid-mediator trombosit menggabungkan faktor (Braquet dan Hosford,
1991; Huet al., 1999). Baru-baru ini, para ginkgolides telah dilaporkan ke menjadi blocker
selektif dan kuat reseptor glisin (IC50 = 0,27-2,0 AM) (Chatterjee et al, 2003;.. Ivic et al,
2003; Kondratskaya et al., 2002). Ada laporan di literatur menunjukkan interaksi ginkgolides
dengan Reseptor GABA. Ginkgolides A dan B memperpendek waktu disebabkan oleh
barbiturat pada tikus tidur (Brochet et al., 1999; Wada et al., 1993). Muscimol-dirangsang Cl?
Ion serapan dalam synaptosomes kortikal yang potensial oleh ginkgolide B, dan efek ini
diblokir oleh benzodiazepine yang flumazenil antagonis (Miller et al., 1991). Para
ginkgolides telah terbukti menggusur Tbps dari situs mengikat (Chatterjee et al., 2002, 2003),
menunjukkan interaksi dengan situs picrotoxin reseptor GABA. Sebuah laporan baru-baru ini
menunjukkan bahwa ginkgolide B adalah blocker dari GABAA reseptor pada irisan kortikal
tikus (Ivic et al., 2003). Kami sebelumnya telah melaporkan bahwa bilobalide adalah
kompetitif antagonis dari a1h2g2L manusia rekombinan Reseptor GABA (Huang et al.,
2003). Kami sebelumnya telah melaporkan bahwa bilobalide adalah kompetitif antagonis dari
a1h2g2L manusia rekombinan Reseptor GABA (Huang et al., 2003). Kami ingin melaporkan
yang ginkgolides A, B, dan C juga ditemukan antagonis nonkompetitif pada reseptor yang
sama tapi kurang ampuh daripada bilobalide. Makalah ini melaporkan efek dan kemungkinan
mekanisme aksi ginkgolides A, B, dan C pada GABA-diaktifkan arus dari rekombinan
manusia a1h2g2L reseptor GABA dinyatakan dalam Xenopus oosit menggunakan dua
elektroda metode tegangan klem.

2. Bahan dan metode

2.1. bahan Bahan

A1 manusia, h2, dan g2L cDNA subcloning di pcDM8 (Stratagen, La Jolla, CA, USA) yang
baik yang disediakan oleh Dr Paul Whiting (Departemen Biokimia dan Molekuler Biologi,
Neuroscience Research Centre, Merck Sharp dan Dohme Research Laboratories, Harlow,
Essex, Inggris).GABA, diazepam, seng sulfat, dan dimetil sulfoksida (DMSO) yang dibeli
dari Sigma (St Louis, MO,

USA). Ginkgolides A, B, dan C diisolasi dari ekstrak G. biloba daun disediakan oleh Jepang
Greenwave (Tokyo) dan dimurnikan berikut metode yang dijelaskan sebelumnya oleh Wada
et al. (1993). Solusi obat disiapkan dengan cara pengenceran 100 mM larutan stok berair
GABA dan seng sulfat dan 100 larutan stok mM DMSO dari ginkgolides A, B, dan C di
ND96 penyangga (96 mM NaCl, 2 mM KCl, 1 mM MgCl2.6H2O, 1,8 mM CaCl2, 5 mM
HEPES, pH 7,5). Konsentrasi tertinggi DMSO superfusing oosit adalah 0,8%, di mana
konsentrasi DMSO tidak memiliki efek.

2.2. Ekspresi a1b2c2L reseptor GABA di Xenopus

laevis oosit

Prosedur yang terlibat dalam penggunaan X. laevis yang disetujui oleh Komite Etika Hewan
Universitas Sydney. Perempuan X. laevis dibius dengan 0,17% etil 3-aminobenzoate di
garam, dan lobus ovarium adalah pembedahan. Lobus ovarium dibilas dengan OR-2 buffer
yang mengandung 82,5 mM NaCl, 2 mM KCl, 1 mM MgCl2? 6H2O, 5 mM HEPES, pH 7,4,
dan tergantung di larutan Kolagenase A (2 mg / ml di OR-2, Boehringer Mannheim, Jerman)
selama 2 jam untuk memisahkan oosit dari jaringan ikat dan sel folikel. oosit dilepaskan
kemudian dibilas di ND96 penyangga ditambah dengan 2,5 mM natrium piruvat, 0,5 mM
teofilin, dan 50 Ag / ml gentamycin, dan tahap V VI oosit yang dikumpulkan. A1 manusia,
h2, dan cDNA g2L subkloning di pcDM8 yang linearised menggunakan NOTI enzim
restriksi. Linearised plasmid mengandung a1, h2, dan g2L cDNA yang ditranskripsi
menggunakan T7 RNA polymerase dan ditutup dengan 5,7-methylguanosine menggunakan ''
mMESSAGE mMACHINE '' kit (Ambion, Austin, TX, USA). sepuluh nanogram per 50 nl
dari 1: 1: 2 campuran a1, h2, dan g2L cRNAs disuntik menggunakan 15 sampai 20 Am ujung
diameter mikropipet (mikropipet penarik, Sutter Instrumen, USA) dalam sitoplasma oosit
defolliculated individu dengan menggunakan injektor Nanoject (Drummond Ilmiah,
Broomall, PA, USA). Oosit diinkubasi di ND96 penyangga pada 16 Jc dalam pengocok
orbital dengan dua kali sehari perubahan penyangga.

2.3. Rekaman Electrophysiogical

Aktivitas reseptor diukur dengan tegangan dua elektroda teknik klem 2-8 hari setelah
penyuntikan. Rekaman microelectrodes yang dibuat dengan penarik mikropipet (Narishige
Ilmiah Instrumen Lab, Tokyo, Jepang), dan diisi dengan larutan 3 M KCl. Oosit ditempatkan
dalam mandi sel dan tegangan dijepit pada 60 mV. Sel yang terus superfused dengan ND96
penyangga. Arus menimbulkan respon terhadap penerapan obat yang direkam menggunakan
Geneclamp 500 amplifier (Axon Instrumen, Foster City, CA, USA), Mac Lab perekam 2e
(AD Instrumen, Sydney, NSW, Australia), dan versi Bagan 3.5.2 program pada Macintosh
Quadra 605 komputer. Obat Obatan diuji untuk aktivasi langsung GABA di GABAA reseptor.
Untuk pengukuran aksi penghambatan obat pada aktivasi reseptor, obat yang ditambahkan ke
buffer larutan yang mengandung GABA pada konsentrasi yang memproduksi 10%, 50%,
75%, 90%, dan 100% dari efek (GABA EC10, EC50, EC75, EC90, dan EC100) pada reseptor
membangun kurva dosis-respons penghambatan GABA. Itu prosedur yang sama, tetapi
dengan konsentrasi tetap antagonis dan meningkatkan konsentrasi GABA, diterapkan untuk
membangun kurva dosis-respons GABA. Sebuah washout periode 3-5 menit diizinkan antara
setiap aplikasi obat untuk mencegah desensitisasi reseptor.

2.4. Analisis data

Puncak amplitudo arus dalam menanggapi setiap konsentrasiobat dicatat dan standar dengan
menghitung rasio% Imax = I / Imax 100, di mana saya adalah puncak amplitudo arus dengan
dosis tertentu agonis atau agonis / antagonis, dan Imax adalah arus maksimal yang dihasilkan
oleh GABA untuk setiap sel. Data dinyatakan sebagai rata-rata error% ImaxFstandard dari
mean (SEM). Itu dosis efektif yang membangkitkan 50% dari Imax (EC50) dihitung dari data
dosis-respons dibangun dengan% Imax sebagai fungsi dari konsentrasi agonis ([A]) oleh least
square metode untuk persamaan Bukit I = Imax [A] nH / (EC50 nH + [A] nH), di mana nH
adalah koefisien Hill. Dosis efektif yang menghambat 50% dari Imax (IC50) dihitung dalam
yang sama cara untuk nilai EC50 dari persamaan terbalik Bukit I = Imax {Imax [Ant] nH /
(IC50 nH + [Ant] nH)}, di mana [Ant] adalah konsentrasi antagonis. EC50, IC50, khasiat
maksimal, dan Hill koefisien Jumlah tersebut diperkirakan dengan pas concentration- yang
hubungan respon terhadap persamaan logistik menggunakan Graph- Pad Prism v3.02
(GraphPad Software). Kecuali mencatat, parameter dihitung untuk sel-sel individual dan
kemudian dirata-ratakan. Parameter ini dilaporkan sebagai meanF S.E.M. (N = 5-15 oosit).
Signifikansi statistik perbedaan antara respon GABA dengan dan tanpa antagonis ditentukan
dengan metode dua arah ANOVA, sedangkan perbedaan antara nilai-nilai IC50 pada berbeda
Konsentrasi GABA, dengan t-test mahasiswa di signifikansi tingkat P <0,05.

3. Hasil
3.1. Properti Fungsional a1b2c2L GABAA reseptor di X. laevis oosit
Manusia tipe liar a1, h2, dan g2L cRNAs dihasilkan Saluran GABA-gated dengan besarnya
ke dalam arus seluruh sel 300-3000 nA tercatat? 60 mV. Arus GABA-dimediasi tidak
terdeteksi ketika a1, h2,, atau subunit g2L saja dinyatakan dalam oosit di bawah kondisi yang
sama yang digunakan untuk ekspresi reseptor a1h2g2L GABAA. Profil farmakologis dari
a1h2g2L GABAA reseptor tersebut sejalan dengan laporan dijelaskan sebelumnya untuk
reseptor oligomer hetero menunjukkan nilai GABA EC50 antara F35 dan 60 AM dan
koefisien Hill (NH) nilai antara 1,2 dan 2,5 (Duke et al, 2000;. Huang et al, 2003;. Scheller
dan Forman, 2001). Penggabungan subunit g2L didirikan dengan pengamatan biphasic
(rendah dan tinggi afinitas) diazepam potensiasi (Mihic et al, 1994;.. Walters et al, 2000) dan
ketidakpekaan terhadap Zn2 + ion (Draguhn et al., 1990).

3.2. Penghambatan arus GABA-dimediasi langsung di a1b2c2l reseptor GABA

Ginkgolides A, B, dan C dosis-dependen menghambat klorida konduktansi yang dihasilkan

oleh 40 AM GABA (Gbr. 2A-C). Tidak ada efek yang diamati ketika senyawa ini diuji sendiri
pada 100 AM. Potensi dari ginkgolides dihitung dari inhibisi dosis-respons kurva yang
mewakili efek dari berbagai antagonis konsentrasi pada konsentrasi tetap GABA (Gambar. 3).
Kurva penghambatan dosis-respons ginkgolides A, B, dan C pada 10, 40, 100, 300 AM, dan 1
mM GABA ditunjukkan pada Gambar. 3A-E, masing-masing. The IC50 dan NH nilai untuk
setiap senyawa ditabulasikan pada Tabel 1. Tabel 1 menunjukkan bahwa ginkgolides A, B,
dan C ditampilkan Potensi terbesar dalam menghambat 10:00 GABA dibandingkan dengan
potensi mereka diperoleh pada konsentrasi GABA tinggi (40 AM-1 mM). Potensi ginkgolide
A pada 10:00 GABA (IC50 = 2.6F0.6 AM) adalah sekitar lima kali lebih tinggi dibandingkan
potensinya pada konsentrasi yang lebih tinggi dari GABA (40, 100, 300 AM, dan 1mM
GABA, IC50 = 13.0F3.4, 13.7F1.1, 11.9F1.7, dan 12.2F2.4 AM, masing-masing).
Menggunakan IC50 nilai pada 40 AM sebagai titik standar untuk perbandingan (yang
mengukur perbandingan yang sama juga digunakan untuk ginkgolides B dan C), potensi
ginkgolide A ditentukan pada 10:00 berbeda nyata (P = 0,0046) sedangkan variasi dalam
potensi ditentukan lebih dari 40 AM-1mM GABA tidak signifikan (P = 0,8428, 0,5726, dan
0,8498, masing-masing). Dengan demikian, potensi ginkgolide A tampaknya independen dari
konsentrasi GABA pada 40 AM GABA dan di atas, menunjukkan bahwa sebagian besar
diberikannya kompetitif antagonis di a1h2g2L GABAA reseptor. Potensi ginkgolide B di
10:00 GABA (IC50 = 4.8F0.8 AM) adalah sekitar dua kali lebih tinggi dibandingkan
potensinya pada konsentrasi GABA antara 40 AM dan 1mM (IC50 = 9.6F1.5, 9.5F1.5,
10.1F2.9, dan 11.4F2.9 AM, masing-masing). Mirip dengan ginkgolide A, nilai IC50
ginkgolide B di 10:00 GABA adalah berbeda nyata (P = 0,0210) itu pada 40 AM GABA,
tetapi tidak ada perbedaan yang signifikan di seluruh nilai yang diperoleh selama 40 AM-
1mM GABA (P = 0,9693, 0,8654, dan 0,5676, masing-masing). Potensi ginkgolide B pada 40
AM GABA dan di atas tampaknya independen pada konsentrasi GABA, menunjukkan bahwa
juga sebagian besar diberikannya antagonis kompetitif di a1h2g2L Reseptor GABA. Mirip
dengan ginkgolides A dan B, ginkgolide C lebih ampuh dalam menghambat konsentrasi
GABA terendah diuji (10:00, IC50 = 5.6F0.6 AM). Potensi ginkgolide C di 10:00 adalah
sekitar dua kali lebih tinggi dari potensinya ditentukan lebih dari 40 AM-1 mM GABA (IC50
= 9.5F1.8, 12.8F1.4, 12.0F2.2, dan 10.3F2.7 AM, masing-masing). The IC50 nilai yang
ditentukan pada 10:00 (P = 0,0288) adalah signifikan berbeda dari yang pada 40 AM, dan
lagi, ada adalah tidak ada perbedaan yang signifikan antara nilai-nilai yang ditentukan untuk
40, 100, 300 AM, dan 1 mMGABA (P = 0,8161, 0,6182, dan 0,9951, masing-masing). Hasil
menunjukkan bahwa antagonisme oleh ginkgolide C pada reseptor GABA a1h2g2L sebagian
besar kompetitif. Secara keseluruhan, ginkgolides A, B, dan C sebagian besar equipotent
dalam menghambat tindakan langsung dari GABA pada 40 AM dan di atas.

Gambar. 4A, B dan C (Dixon plot) menunjukkan timbal balik plot dari respon persentase
10:00-1mM GABA ke 0,1-10 AM ginkgolides A, B, dan C masing-masing. Linear analisis
regresi dari data menunjukkan bahwa linearitas Dixon plot signifikan (P <0,0001) dengan
kebaikan fit (r2) nilai dari 0,8671-0,9969. hambat yang nilai konstan (Ki) ditentukan dari plot
Dixon adalah 14.5F1.0, 12.7F1.7, dan 16.3F2.4 AM untuk ginkgolides A, B, dan C masing-
masing. Ki nilai antara ginkgolides A dan B, ginkgolides A dan C, dan ginkgolides B dan C
tidak berbeda nyata (P = 0,3918, 0,4990, dan 0,2511, masing-masing).

3.3. Antagonisme ginkgolides A, B dan C di a1b2c2L reseptor GABA

Mekanisme aksi ginkgolides ditentukan dengan perbandingan kurva dosis-respons GABA

(Kurva GABA konsentrasi efek) dalam ketiadaan dan kehadiran antagonis (mewakili efek
dari Konsentrasi tetap setiap ginkgolide [30, 50, dan 100 AM] pada berbagai konsentrasi
GABA). Kurva GABA dosis-respons dari GABA di Kehadiran 30, 50, dan 100 AM
ginkgolides A, B, dan C (Gambar. 5A-C) semua menunjukkan pergeseran yang tepat tanpa
mencapai respon maksimal dari GABA. Respon GABA di Kehadiran 30, 50, dan 100 AM
ginkgolide A adalah 59,9% (P <0,0001), 77,1% (P <0,0001), dan 52,6% (P <0,0001); orang-
orang dari ginkgolide B adalah 71,1% (P <0,0001), 53,2% (P <0,0001), dan 60,4% (P
<0,0001); dan orang-orang ginkgolide C adalah 77,3% (P <0,0001), 70,9% (P <0,0001), dan
69,0% (P <0,0001) respon maksimal GABA, masing-masing (Tabel 2). Pada 30, 50, dan 100
AM, ginkgolide A peningkatan EC50 GABA nilai 1,5 kali (39,0-58,1 AM), 2,6 kali (41,8-
77,1 AM), dan 4,1 kali (59,5-242,9 AM), masing-masing; ginkgolide B meningkat GABA
EC50 nilai 3.8 kali (49,2-188,2 AM), 5,2 kali (38,6-201,4 AM), dan 4,4 kali (49,5-218,2
AM), masing-masing; dan ginkgolide C peningkatan EC50 GABA nilai 1,3 kali (35,5-45,9
AM), 1,5 kali (41,8-62,1 AM), dan 3,2 kali (50,2 -162,1 AM), masing-masing (Tabel 2).
Ginkgolides A, B, dan C berkurang GABA tanggapan maksimal dan menyebabkan hak
nonparallel bergeser dalam kurva GABA konsentrasi-efek, menunjukkan bahwa ginkgolides
menunjukkan antagonisme kompetitif di reseptor a1h2g2L GABAA.

4. Diskusi

Studi ini menunjukkan bahwa ginkgolides A, B, dan C menghambat GABA-dimediasi arus

dari a1h2g2L manusia rekombinan GABA A reseptor. Hasilnya mendukung berbagai
indikasibahwa ginkgolides memiliki kegiatan di reseptor GABA seperti memperpendek
waktu tidur barbital-diinduksi (Brochet et al., 1999; Wada et al., 1993), diperkuat muscimol-
dirangsang Cl? ion serapan dan blokade oleh flumazenil (Miller et al., 1991), dan
perpindahan [35S] Tbps dari yang situs pengikatan (Chatterjee et al., 2002, 2003). Ginkgolide
B lebih kuat di a1h2g2L rekombinan Reseptor GABA (IC50 = 09:06 pada 40 AM GABA;
Tabel 1) dari pada reseptor GABA asli pada irisan kortikal tikus (IC50 = 73 AM pada 30 AM
GABA;. Ivic et al, 2003). Ivic et al. (2003) juga melaporkan bahwa tindakan ginkgolide B
dan bilobalide pada reseptor GABA pada irisan kortikal tikus tidak gunakan tergantung.
Menariknya, bilobalide juga lebih kuat di a1h2g2L reseptor GABA (IC50 = 04:06 pada 40
AM GABA; Huang et al., 2003) dibandingkan pada reseptor GABA di tikus iris kortikal
(IC50 = 46 AM pada 30 AM GABA;. Ivic et al, 2003). Temuan ini menunjukkan bahwa
kegiatan bilobalide dan ginkgolides pada reseptor GABA tergantung pada Komposisi subunit.
Ginkgolides A, B, dan C menghambat GABA diperantarai arus pada reseptor GABA
a1h2g2L dengan potensi sebanding (Ki = 14.5F1.0, 12.7F1.7, dan 16.3F2.4 AM, masing-
masing) dan mirip dengan bilobalide (Ki = 14.8F0.6 AM, Huang et al., 2003). Antagonisme
bilobalide di a1h2g2L GABAA reseptor itu tidak kompetitif dengan kemungkinan tingkat
kecil antagonisme kompetitif pada konsentrasi yang lebih rendah dari GABA. Potensi dari
antagonis nonkompetitif klasik reseptor GABA A, picrotoxin, ditentukan di bawah kondisi
yang sama adalah independen konsentrasi GABA. Pada a1h2g2L GABAA reseptor,
ginkgolides A, B, dan C dipamerkan memiliki karakteristik antagonis nonkompetitif termasuk
nonparallel pergeseran kanan GABA concentration- kurva efek dan penurunan respon
maksimal GABA. Ginkgolides A, B, dan C yang ditampilkan tertinggi Potensi di 10:00
GABA dan menjadi sekitar dua sampai lima kali lebih kuat dalam menghambat aksi langsung
GABA pada 40 AM dan di atas. Tidak ada yang signifikan perbedaan potensi yang ginkgolide
individu ditentukan lebih dari 40 AM-1mM GABA. Dibandingkan, bilobalide ditampilkan
potensi tertinggi pada 10 dan 40 AM GABA dan menjadi sekitar dua kali lebih kuat di
menghambat tindakan langsung dari GABA pada 100 AM dan di atas (Huang et al., 2003).
Bilobalide dan ginkgolides A, B, dan C telah terbukti menghambat [35S] Tbps mengikat
(IC50 = 4,9,> 50, 14,9, dan> 50 AM, masing-masing; Chaterjee et al., 2002, 2003),
menunjukkan bahwa mereka mengikat picrotoxin pengikatan Situs reseptor GABA.
Mengingat struktural mereka kesamaan dengan picrotoxin di (Gbr. 1), temuan ini tidak sama
sekali tak terduga. Kesamaan fitur struktural termasuk rongga hidrofilik dan rantai samping
hidrofobik yang mungkin penting bagi antagonisme mereka di GABAA reseptor.

Studi pemodelan molekul (Ivic et al., 2003) memilikimenunjukkan bahwa ginkgolide B dan
picrotoxinin membentuk rongga ukuran serupa. Posisi absolut dan relatif dua kelompok
lakton yang terdiri bagian dari rongga Struktur juga sangat mirip. Posisi diproyeksikan
kelompok t-butil yang lebih besar dari ginkgolide B juga mirip dengan kelompok
isoproprenyl dari picrotoxinin. Ivic et al. (2003) mengemukakan bahwa kelompok t-butil dari
ginkgolide B pas di saku lipofilik reseptor glisin sebagai
apakah kelompok isoproprenyl dari picrotoxinin di GABAA reseptor. Ivic et al. (2003) juga
menunjukkan bahwa 1-OH dari ginkgolide B dilapis sangat baik dengan 6-OH dari
picrotoxinin. Asetilasi 6-OH mengarah pada penurunan aktivitas dari picrotoxinin pada
reseptor GABA (Anthony et al., 1993). Zhorov dan Bregestovski (2000) mengemukakan dari
hasil studi docking yang 6-OH dari picrotoxinin membentuk ikatan hidrogen dengan residu
treonin di M2 segmen lapisan pori reseptor GABA. Diambil bersama-sama, pengamatan ini
menunjukkan bahwa 1-OH mungkin juga penting untuk aktivitas ginkgolides di GABAA
reseptor. Namun, pada reseptor GABA a1h2g2L, yang potensi dari ginkgolide A (Ki =
14.5F1.0 AM) dan ginkgolide B (Ki = 12.7F1.7 AM) tidak berbeda nyata (P = 0,3918).
Potensi dari ginkgolide B dan ginkgolide C (Ki = 16.3F2.4) juga tidak signifikan berbeda (P
= 0,2511). Hasil penelitian menunjukkan bahwa hidroksil substitusi pada posisi 1 dan 7
beruang sedikit efek jika ada pada aktivitas ginkgolides di a1h2g2L GABAA reseptor
Singkatnya , penelitian kami menunjukkan bahwa diterpen trilactones G. biloba ginkgolides
A , B , dan C adalah antagonis kompetitif dari a1h2g2L GABAA reseptor dengan profil
antagonisme serupa, tetapi kurang kuat dibandingkan yang dilaporkan sebelumnya , G.
Biloba guaian trilactone bilobalide.