ISOLASI DAN KARAKTERISASI MONO TERPENOID DARI AKAR SYZYGIUM

SAMARANGENSE
M. MADHAVI DAN M. RAGHU RAM * Departemen Botani & Mikrobiologi, Universitas
Acharya Nagarjuna, Guntur, Andhra Pradesh, India.

ABSTRAK
Penelitian ini melaporkan isolasi dan karakterisasi terpenoid baru yang diekstraksi dari
ekstrak berair akar Syzygium samarangense. Tanaman ini terbukti sebagai sumber potensial
untuk phytochemical untuk penggunaan tradisional sebagai terapi. Secara tradisional akar
digunakan sebagai diuretik dan diberikan untuk meringankan edema. Ini juga digunakan untuk
pengobatan gatal. Ekstrak berair dari akar telah dikenai teknik kromatografi untuk mengisolasi
senyawa Terpenoid. Struktur mereka dianalisis dengan menggunakan metode spektroskopi
termasuk ultraviolet (UV), spektrometri massa ionisasi elektron (MS), resonansi magnetik nuklir
hidrogen (HNM R) dan CNM R senyawa bioaktif akhir diidentifikasi sebagai (1E) -2-
methylbuta-1, 3-dien-1-yl 8a-methyl-5- (methylamino) decahydronaphthalene-2-karboksilat.
Bioaktivitas awal senyawa juga dievaluasi. Metode isolasi sederhana, hemat biaya dan efisien.

KATA KUNCI: Syzygium samarangense (wax jambu), terpenoid, aktivitas antioksidan,

aktivitas anti inflamasi, aktivitas anti diabetes.

PENGANTAR
Terpenoid merupakan salah satu kelas senyawa yang paling khas pada tumbuhan
tingkat tinggi. Tanaman terpenoid digunakan secara luas untuk kualitas aromatik mereka dan
memainkan peran dalam pengobatan herbal tradisional1. Tugas yang paling penting dalam
paradigma ini adalah penyaringan senyawa ini pada tumbuhan. Syzygium samarangense (nama
umum - lilin jambu) adalah tanaman tropis milik keluarga Myrtaceae2-5. Banyak klaim
tradisional telah dilaporkan pada daun, akar, kulit kayu, dan buah dari tanaman6-8. Berbagai
kegiatan Farmakologi dilaporkan dengan berbagai bagian dari tanaman9-13, dan juga para
peneliti telah menemukan konstituen utama mereka untuk menjadi tanin, glikosida Quercetin,
monoterpena, metabolit sekunder14, 15. Secara tradisional akar digunakan sebagai diuretik dan
diberikan untuk meringankan edema dan juga untuk gatal. Oleh karena itu penyelidikan saat ini
difokuskan pada isolasi terpenoid dari ekstrak akar berair Syzygium samarangense. Terpenoid
dengan kuantitas tertinggi (81.923 mikrogram per gram ekstrak) telah dilaporkan dalam studi
sebelumnya yang dilakukan untuk skrining fitokimia dan kuantifikasi metabolit sekunder dan
aktivitas biologis mereka dari ekstrak akar Syzygium samarangense. Senyawa hasil tinggi
selanjutnya diisolasi dengan menggunakan kromatografi yang berbeda dan dipelajari lebih lanjut
untuk mengevaluasi aktivitas biologis mereka seperti aktivitas antidiabetes, antioksidan,
antibiotik, dan anti inflamasi. Struktur isolat bioaktif dievaluasi dengan teknik spektroskopi.
Bahan Kimia dan Pelarut Eksperimental
Semua bahan kimia yang digunakan adalah kelas reagen laboratorium dan dibeli dari
bahan kimia Merck dan Fisher ilmiah Mumbai. Semua barang pecah belah yang digunakan
adalah alat Borosil. Pelat TLC Merck Millipore digunakan untuk analisis TLC.

Instrumen spektrofotometer
UV-Visible (Techcomp UV-2301, software Hitachi 2.0), versi 2.0, spektrometer FT-IR
(BRUKER VERTEX 80 / 80v), Spektrofotometer Massa (Agilent-1100 Series), NMR
(BRUKER-400mhzseries), HPLC (Gradient PUNCAK –LC 7000 series) digunakan untuk
analisis.

Koleksi bahan tanaman, ekstraksi dan studi Awal

Akar tanaman Syzygium samarangense dikumpulkan dari peternakan di berbagai
tempat di distrik Godavari timur, Andhra Pradesh, India. Bahan akar kering ditumbuk halus dan
digunakan untuk ekstraksi pelarut. Skrining fitokimia patogen dan kuantifikasi metabolit
sekunder dan aktivitas biologis mereka dari ekstrak akar yang berbeda telah dilakukan dan
kandungan terpenoid yang tinggi (81,923 µg / ekstrak gm) ditemukan dalam ekstrak air dan juga
menunjukkan aktivitas biologis yang tinggi. Jadi dalam penelitian ini ekstrak akar berair lebih
lanjut diselidiki untuk isolasi terpenoid dan aktivitas biologis mereka seperti aktivitas
antidiabetes, antioksidan, antibiotik, dan anti-inflamasi.

Pemisahan kromatografi Terpenoid

Ekstrak akar menjadi sasaran teknik kromatografi yang berbeda seperti TLC, HPLC
dan pemisahan kolom preparatif. Berbagai kondisi pemisah dengan TLC untuk pemisahan
Terpenoid diadaptasikan ke ekstrak akar berair. Berbagai fase gerak yang digunakan untuk
pemisahan Terpenoid adalah Hexanes: perfluorokerosine dalam rasio 1: 116, Benzena: Etil asetat
dalam rasio 1: 117, n-heksana: etil asetat: asam asetat glasial dalam rasio 85:20 : 518,
Petroleumether: Ethylacetate dalam rasio 2: 519 dan Hexane: Toluene: Etil asetat dalam rasio 2:
15: 0,520. Analisis HPLC dilakukan untuk identifikasi jumlah terpenoid hadir dalam ekstrak.
Kondisi yang dikembangkan oleh Xiao-Ling Luo et al21, J E. Newbery et al22 diadopsi untuk
analisis Terpenoid dalam ekstrak aqueuos dan dibandingkan dengan waktu retensi standar
mereka. Kondisi pemisahan terbaik dengan TLC dipilih untuk pemisahan colum untuk
memisahkan dan memulihkan isolat. Pendirian ini lebih lanjut disesuaikan untuk mendapatkan
pemulihan terbaik.

Studi tentang aktivitas biologis dari isolat

Aktivitas antioksidan dari ekstrak akar ditentukan berdasarkan aktivitas pembilasan
mereka dari tabel 1, 1- dipheny1-2-picryl hydrazyl (DPPH) radikal bebas. lml setiap larutan
dengan konsentrasi berbeda (1-500 g / ml) dari isolat ditambahkan ke 3 ml 0,004% etanol DPPH
larutan radikal bebas. Setelah 30 menit, absorbansi dari sediaan diambil pada 517 nm dengan
spektrofotometer UV yang dibandingkan dengan absorbansi yang sesuai dari konsentrasi asam
askorbat standar (1-500μg / m1) dan persentase inhibisi diukur. Studi in vitro aktivitas
penghambatan α-amilase dengan metode Spectrophotometric dilakukan untuk mengukur
aktivitas antidiabetes24. 1 ml alpha amylase dan 1 ml isolat dalam tabung reaksi diinkubasi pada
37 ◦C selama 10 menit. Setelah pra-inkubasi, 1 ml larutan pati 1% (v / v) ditambahkan ke
masing-masing tabung dan diinkubasi pada suhu 37◦C selama 15 menit. Reaksi diakhiri dengan
2mL 3, 5 - reagen asam dinitrosalicylic, ditempatkan dalam air mendidih selama 5 menit,
didinginkan hingga suhu kamar, diencerkan, dan absorbansi diukur pada 546 nm dan
dibandingkan dengan kontrol. Aktivitas anti inflamasi dari isolat diukur dengan Albumin
denaturation Assay25. Larutan stok dari isolat dengan enam konsentrasi yang berbeda (10-500μg
/ ml) disiapkan dengan air sebagai pelarut. 50μl masing-masing ekstrak dipindahkan ke tabung
Eppendorf dan 5 ml 0,2% W / V bovine serum albumin (BSA-pH-6.8) ditambahkan. Kontrol
terdiri dari 5 ml 0,2% W / V BSA solusi dengan 50 µl metanol. Tabung reaksi dipanaskan pada
72 ° C selama 5 menit dan kemudian didinginkan selama 10 menit dan absorbansi diukur pada
660nm. The% penghambatan presipitasi (denaturasi protein) ditentukan pada basis% relatif
terhadap kontrol menggunakan rumus. Isolat diuji dengan metode Agar difusi26 untuk
menentukan aktivitas antimikroba. Konsentrasi yang berbeda dari isolat (10- 1000μg / ml)
ditambahkan (100 µl volume) ke benih diinokulasi Sumur (diameter 10mm dan sekitar 2 cm
bagian) di piring Nutrient agar (NA). Pelat diinkubasi pada 37 ° C selama 18-24 jam. Diameter
zona penghambatan (mm) diukur dan indeks aktivitas juga dihitung. Obat Ofloxacin digunakan
sebagai agen antibakteri standar dan dibandingkan dengan hasil standar.

Analisis spektral dari terpenoid isolat untuk penjelasan struktural

Di antara tiga terpenoid isolat WATF telah ditemukan baru, aktif secara biologis serta
hasil yang tinggi dalam kolom preparatif. Jadi isolat WATF telah dipilih dan isolat kemudian
dianalisis lebih lanjut melalui berbagai spektroskopi seperti spektroskopi UV untuk properti
penyerapan ultraviolet, spektroskopi FT-IR untuk menentukan gugus fungsi, spektroskopi Massa
Resolusi Tinggi untuk menentukan massa molekul dan spektroskopi Nuklir Magnetik Resonansi,
Proton. karbon (1H & 13C) untuk karakterisasi fisikokimia yang tepat.

Hasil dan diskusi

Analisis TLC menegaskan bahwa metode ini terdiri dari fase gerak n-heksana: etil asetat: asam
asetat glasial dalam rasio 85: 20: 5 memberikan pemisahan yang lebih baik dan tiga senyawa diamati
dengan nilai Rf 0,38, 0,86 dan 0,93. Dalam fase-fase bergerak lainnya dalam penelitian ini, dua senyawa
dan kurang dari 2 diamati. Gambar-1 merupakan pemisahan terpenoid oleh TLC hasil ekstrak akar berair.
Metode yang memberikan jumlah maksimum titik dalam analisis TLC diterapkan untuk pemisahan kolom
kromatografi, kemudian dioptimalkan untuk pemulihan yang lebih baik dari isolat. Maksimal 35 fraksi
dikumpulkan dan hasilnya dianalisis. Fraksi dengan bintik-bintik seperti yang diamati dalam KLT
dipisahkan dan dianggap sebagai isolat dan fraksi lainnya dibuang. Fraksi yang menunjukkan nilai Rf
yang sama dicampur dan dikeringkan. Fraksi nomor 6-9 menunjukkan nilai Rf yang sama dan
diperlakukan sebagai satu senyawa, 12, 13 menunjukkan nilai Rf yang sama dan 31, 32 juga
menunjukkan satu tempat dengan nilai Rf yang sama dan karenanya ketiga ini dianggap sebagai tiga
senyawa dan dinamakan sebagai WATF 1 , WATF 2 dan WATF 3 masing-masing. Ketiga senyawa ini
dikeringkan dan senyawa kering digunakan untuk penentuan aktivitas biologis. Ekstrak mentah dan isolat
menjadi sasaran instrumen HPLC untuk menentukan jenis senyawa terpenoid. Hasil kromatogram HPLC
menunjukkan bahwa keberadaan senyawa yang diketahui (Terpeneol, Thymol) dalam jumlah yang lebih
sedikit dan senyawa yang tidak diketahui dengan kuantitas tinggi bila dibandingkan dengan waktu retensi
standar. Ekstrak akar berair mentah telah dibuktikan dengan semua aktivitas biologis yang dipilih. Studi
dengan isolat individu juga telah dilakukan untuk menentukan senyawa bioaktif, yang mewakili aktivitas
farmakologis dari akar. Ketiga isolat (WATF 1, WATF 2 dan WATF 3) yang dikumpulkan dari kolom
menjadi sasaran untuk mempelajari aktivitas biologis seperti antioksidan (aktivitas pembilasan radikal
DPPH), anti diabetic (aktivitas penghambatan α-amilase), antibiotik (metode difusi agar-agar), aktivitas
anti inflamasi (Albumin denaturation Assay). Di antara tiga senyawa WATF 3 ditemukan memiliki aktivitas
biologis yang tinggi (Gambar 2). Hasil aktivitas anti oksidan disajikan dalam tabel 1 dan hasil anti
diabetes, anti inflamasi disajikan dalam tabel 2. Hasil komparatif dari semua kegiatan yang dipelajari
disajikan dalam grafik 1. Pertumbuhan hasil penghambatan isolate disajikan pada gambar-3.
Spektrum UV menunjukkan adanya puncak serapan (λ maks) pada 227nm, yang menunjukkan
kerangka, harus mengandung sistem diena terkonjugasi. Spektra IR FT memberi kelompok
fungsional yang ada dalam molekul. Intens Amide N-H Stretch diamati pada 3707cm-1. Puncak
penyerapan tajam yang tajam diamati pada 1731cm-1 Ester C = O Stretch atau Ketone C = O
Meregangkan molekul. Penyerapan lentur pada 855 dan 924cm-1 mengkonfirmasi keberadaan =
C-H. Ikatan intens pada 1367cm-1 menegaskan adanya ikatan CN dalam molekul. Spektrum 1H
NMR jelas menunjukkan 6 kelompok metil angular sebagai triplet pada d 0,8, 1,18, 1,29, 1,22,
1,24 dan 1,28 sesuai dengan kehadiran siklik non aromatik. berdering. Diena tak jenuh hadir di d
1.845, 1.955 dan 1.962. R2NH diamati pada d 3,082m dan 3,102. Spektrum C13
mengkonfirmasi keberadaan 18 karbon dalam kerangka molekul. Perbandingan spektrum 13C
dengan DEPT 135o dan DEPT 90o spektra mengungkapkan keberadaan 4methylenesgroups
dalam konjugasi mengkonfirmasi adanya mono-terpene skeleton. Analisis lebih dekat dari data
NMR 13C memungkinkan identifikasi karbonil keton, sp2 metilen dan karbon sp2 yang tidak
terhidrogenasi, sangat khas dari hubungan eter, metilena teroksigenasi dan methine yang
teroksigenasi. Semua sinyal lain menunjukkan karbon non-difungsionalisasi, jenuh. Spektrum
EI-Massa menunjukkan ion molekuler [M] + pada m / z 291 kompatibel dengan rumus molekul
C18H29NO2 sesuai dengan struktur monoterpene tersubstitusi (Gambar 4-7). Oleh karena itu,
rumus molekul dari fraksi yang diisolasi haruslah C18H29NO2. Nama IUPAC dari senyawa
akhir berasal dari sistem nomenklatur IUPAC standar sebagai (1E) -2-methylbuta-1,3-dien-1-yl
8a-metil-5 (methylamino) decahydronaphthalene-2-karboksilat. Struktur kimia yang dievaluasi
monoterpenoid disajikan pada gambar-8. Spesies tanaman yang berbeda dalam genus Syzygium
ditemukan kaya dalam berbagai terpenoid Di antara mereka Syzygium cumini telah banyak
diteliti dan terpenoid seperti eugenoltriterpenoid A dan eugenol-triterpenoid B pada bunga,
γTerpinene, terpinolene, α-terpineol, terpinilvalerat dari minyak esensial daun27. Lupeol, 12-
oleanen-3-ol-3ßacetate, Stigmasterol, ßsitosterol juga diidentifikasi dari fraksi n-heksana ekstrak
daun segar28. Studi skrining fitokimia awal mengungkapkan bahwa terpenoid juga ada pada
kulit kayu, biji, daun, buah dari tanaman29-36. Tanaman lain dari genus yang sama Syzygium
aromaticum juga ditemukan dalam kandungan terpenoid. Monoterpen, sesqueterpenes telah
diidentifikasi dalam buah-buahan segar dari Syzygium aromaticum. Skrining fitokimia awal
mengungkapkan bahwa kehadiran terpenoid dalam bubuk rempah-rempah, daun, tunas muda dan
batang Syzygiumaromaticum37. Demikian juga triterpenoid pentasiklik (3β-O- (E) -caffeoyl
methyl oleanolate) dalam buah-buahan dan Friedelane, 3β-Friedelinol, Stigmasterol inbark38
telah diisolasi dari Syzygium alternifolium. Demikian juga 4epifriedelin, dan 12 terpenoid yang
diketahui (oksida caryophyllene, friedelin, canophyllal, glutinol, αterpineol, phytol, asam
betulinic, uvaol, lupeol, betulin, asam ursolat, dan asam oleanolic) telah diisolasi dari daun
Syzygiumformosanum39. Hidrokarbon monoterpene dan hidrokarbon seskuiterpen ditemukan
dalam minyak esensial daun S. polyanthum. Dua triterpenoid, yaitu, betulinic dan asam ursolat
diisolasi dari daun Syzygium campanulatum Korth (Myrtaceae) 40. Ini jelas menunjukkan
adanya berbagai senyawa terpenoid dalam genus Syzygium dan Syzygium samarangense juga
terbukti dengan kaya terpenoid. Dari penyelidikan ini terbukti bahwa akar juga memiliki isolat
terpenoid yang diketahui dan baru dengan potensi khasiat obat.
KESIMPULAN
Sebagai kesimpulan, penyelidikan fitokimia dari akar Syzygium samarangense
memberikan monoterpenoid baru (1E) -2-methylbuta-1,3-dien-1-yl 8 amethyl-5- (methylamino)
decahydronaphthalene-2carboxylate bersama dengan dua terpenol terpenol terpenol terpenoid. .
Isolat-isolat itu menunjukkan aktivitas biologis dan pada gilirannya terbukti penggunaan
farmakologi dari akar tanaman. Hasil menunjukkan bahwa isolat baru mungkin merupakan
senyawa utama yang bertanggung jawab untuk biologisnya
Penelitian ini memberikan bukti bahwa Syzygium Samarangense adalah salah satu sumber
potensial terpenoid dalam genus syzyium dan sumber senyawa aktif farmakologis baru dan
penelitian lebih lanjut diperlukan untuk menyelidiki mekanisme