JURNAL PRAKTIKUM

MIKROBIOLOGI UMUM

ISOLASI MIKROBA

NAMA : DINO KANINO

NIM : G311 16513
KELOMPOK : V (LIMA)
ASISTEN : ERVAN TOGATOROP

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI DAN BIOTEKNOLOGI PANGAN

PROGRAM STUDI ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN
DEPARTEMEN TEKNOLOGI PERTANIAN
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS HASANUDDINN
MAKASSAR
2017
 ISOLASI MIKROBA
Dino Kanino1), Ervan Togatorop 2)
Abstrak
Isolasi adalah proses pemindahan mikroba dari media yang satu ke media yang lain. Isolasi
mikroba dilakukan untuk memisahkan satu mikroba dari mikroba lainnya sehingga
didapatkan kultur mikroba murni. Praktikum ini mengisolasi bakteri Lactobacillus casei
menggunakan teknik tusuk dan cawan gores dengan pola zig-zag dan persegi. Pola zig-zag
dilakukan pada cawan petri dan media agar miring, sementara teknik tusuk dilakukan pada
media agar tegak. Media yang digunakan pada cawan petri adalah media PCA (Plate
Count Agar) dan media yang digunakan pada tabung reaksi adalah media NA (Nutrient
Agar). Proses isolasi dilanjutkan dengan inkubasi selama enam hari kemudian
kenampakannya diamatai satu hari sekali. Praktikum ini menghasilkan isolat berwarna puti
dan pola zig-zag hanya terlihat jelas pada media agar miring.
Kata Kunci : Agar miring, Agar tegak Cawan Gores, Isolasi.

Abstract

Isolation is microbes transfer from natural to artificial media. Isolation of microbes

performed to separate one from the other microbes microbes to obtain pure microbial
cultures. This lab isolate the bacteria Lactobacillus casei using techniques puncture and
scratch cup with zig-zag pattern and square. Zig-zag pattern carried on a petri dish and the
media in order to tilt, while the puncture technique performed on an agar medium upright.
Media used in a petri dish is media PCA (Plate Count Agar) and the media used in the test
tube is NA media (Nutrient Agar). The isolation process followed by incubation for six days
were observed one day later appearance for all. This results in a color lab isolates puti and
zig-zag pattern is only visible on the media for oblique.
Keywords: To tilt, To erect the Cup Gores, Isolation.

I. PENDAHULUAN menghindari adanya tetesan air yang

I.1 Latar Belakang
Isolasi mikroba adalah proses
memisahkan suatu mikroba tersebut dari
lingkungannya di alam dan
menumbuhkannya sebagai biakan murni
dalam medium buatan. Isolasi harus
diketahui cara-cara menanam dan
menumbuhkan mikrobia pada medium
biakan serta syarat-syarat lain untuk
pertumbuhannya. Memindahkan bakteri
dari medium lama kedalam medium yang
baru diperlukan ketelitian dan pengsterilan
alat-alat yang digunakan, supaya dapat
dihindari terjadinya kontaminasi. Pada
pemindahan bakteri dicawan petri setelah
agar baru, maka cawan petri tersebut harus
dibalik, hal ini berfungsi untuk
mungkin melekat pada dinding tutup
cawan petri (Alam dkk. 2013).
Ada beberapa cara atau metode yang
digunakan untuk mengisolasi mikroba,
diantaranya adalah metode cawan gores,
agar miring dan agar tegak. Masing-
masing metode memiliki fungsi, kelebihan
dan kekurangan.
Ose jarum dan ose bundar
merupakan alat yang digunakan dalam
isolasi mikroba. Ose jarum digunakan
dalam isolasi metode agar tegak,
sementara ose bundar digunakan dalam
isolasi metode cawan gores dan agar
miring.
Berdasarkan teori di atas,
dilakukanlah praktikum Isolasi mikroba
untuk mengetahui prosedur isolasi
mikroba menggunakan metode yang
berbeda-beda dan mengasah keterampilan
menggunakan alat-alat isolasi mikroba.
I.2 Tujuan
Tujuan praktikum Isolasi Mikroba
adalah :
1. Mengetahui jenis-jenis isolasi mikroba
2. Memahami penggunaan ose bundar dan
ose jarum
3. Memahami penggunaan media agar
tegak dan agar miring
II. METODOLOGI PRAKTIKUM
II.1 Waktu dan Tempat
Praktikum Isolasi Mikroba
dilaksanakan pada hari Kamis, 13 April
2017 pada pukul 08.00-11.00 WITA di
Laboratorium Mikrobiologi dan
Bioteknologi Pangan, Program Studi Ilmu
dan Teknologi Pangan, Departemen
Teknologi Pertanian, Fakultas Pertanian,
Universitas Hasanuddin, Makassar.
II.2 Alat dan Bahan
Alat yang digunakan pada
praktikum Isolasi Mikroba adalah ose
bundar, ose jarum, cawan petri, tabung
reaksi, Erlenmeyer, laminar air flow, pipet
ukur dan bulb.
Bahan yang digunakan pada
praktikum Isolasi Mikroba adalah Media
PCA, media NA, kapas, aluminium foil,
label, dan bakteri Lactobacillus casei.
II.3 Prosedur Praktikum
II.3.1 Pembuatan Media
Timbang PCA 5,25 gram,
dan NA 5 gram kemudian masuk
kan masing masing bahan ke
dalam tabung
erlenmeyer.Tambahkan aquadest
250 ml ke dalam masing-masing
tabung Erlenmeyer, campur hingga
rata. Homogenisasikan dan
panaskan larutan tersebut
menggunakan microwave. Setelah
dingin, tutup mulut Erlenmeyer
menggunakan kapas dan
aluminium foil kemudian
masukkan ke dalam autoclave
untuk disterilkan dengan tekanan 1
atm, suhu 1210 C selama 15 menit.
II.3.2 Sterilisasi Alat
Alat-alat yang disterilisasi
fisik aalah alat-alat yang terbuat
dari kaca, yaitu cawan petri,
erlenmeyer, pipet ukur, dan tabung
reaksi. Masing-masing lubang
pada alat ditutupi kapas dan
dibalut dengan aluminium foil
kemudian dibungkus dengan
kertas bekas, setelah itu
dimasukkan ke autoclave untuk
disterilkan pada tekanan 1 atm,
suhu 1210 C selama 15 menit.
Alat yang disterilkan dengan
sterilisasi kimia adalah batang pengaduk.
Batang pengaduk disiram dengan alkohol
kemudian dikeringkan menggunakan
tissue. Ose bundar dan ose jarum
disterilkan dengan cara dipanaskan
menggunakan api bunsen sampai berpijar.
II.3.3 Pembuatan Larutan Fisiologis
NaCl 6,379 gram dilarutkan
ke dalam aquades 750 ml.
Kemudian larutan NaCl
dihomogenkan. Setelah itu, larutan
NaCl disterilkan ke dalam
autoclave pada tekanan 1 atm,
suhu 1210 C selama 15 menit.
II.3.4 Prosedur Pengenceran Bertingkat
Bahan sebanyak 1 gram
dimasukkan ke dalam tabung
reaksi pertama kemudian
ditambahkan larutan fisiologis
sebanyak 9 ml. Homogenkan
menggunakan vorteks. 4 buah
tabung reaksi diisi dengan larutan
fisiologis 9 ml. 1 ml dari tabung
reaksi pertama dipipet dan
dimasukkan ke tabung reaksi
kedua. Pada tabung reaksi kedua
merupakan pengenceran 10-1.
Larutan pada tabung reaksi kedua
 dihomogenkan menggunakan
vorteks kemudian dipipet II.3.6.2Isolasi pada Tabung Reaksi
sebanyak 1 ml kemudian Media NA dituang ke dalam dua tabung
dimasukkan ke dalam tabung reaksi, satu tabung reaksi untuk media
reaksi ketiga. Pada tabung reaksi agar miring dan tabung reaksi lain untuk
ketiga merupakan pengenceran 10- media agar tegak, kemudian media
2
. Lakukan hingga pengenceran 10- ditunggu hingga mengeras. Bakteri
4
. Lactobacillus casei diambil menggunakan
ose bundar kemudian digoreskan pada
permukaan media agar miring dengan pola
II.3.5 Inokulasi zig-zag, setelah itu bakteri Lactobacillus
II.3.5.1Inokulasi Metode Pour Plate casei diambil menggunakan ose jarum
Media dituang sebanyak 1/5 kemudian ditusukkanpada media agar
volume cawan petri ke dalam tegak. Setelah diisolasi, mulut tabung
cawan petri, kemudian media reaksi ditutup menggunakan kapas dan
ditunggu hingga mengeras. aluminium foil kemudian diinkubasi.
Suspensi dalam pengenceran 10-4
dipipet sebanyak 1 ml ke dalam III. HASIL DAN PEMBAHASAN
cawan petri. Kemudian media III.1 Hasil
dituang sebanyak ¼ volume cawan Pengamatan ke :0
petri. Media didinginkan kemudian Hari / tanggal : Kamis, 13 April 2017
dibungkus menggunakan kertas Tabel 01. Hasil Pengamatan Mikroba
bekas. Media yang telah sumber Metode
Kenampakan Gambar
dibungkus dimasukkan ke dalam mikroba Isolasi

inkubator. Cawan Mikroba

gores belum
Lactoba
zig-zag tumbuh
II.3.5.2Inokulasi Metode Spread Plate cillus
Mikroba
Media dituang sebanyak 2/3 volume casei Cawan
belum
cawan petri kemudian tunggu hingga gores T
tumbuh
media mengeras. Suspensi dalam Sumber : Data Primer Mikrobiologi Umum, 2017.
-4
pengenceran 10 dipipet sebanyak 1 ml Pengamatan ke :1
ke dalam cawan petri. Kemudian suspensi Hari / tanggal : Jumat, 14 April 2017
diratakan menggunakan drugalsky. Tabel 02. Hasil Pengamatan Mikroba
Setelah itu cawan petri dibungkus sumber Metode
Kenampakan Gambar
menggunakan kertas bekas.Media yang mikroba Isolasi
telah dibungkus dimasukkan ke dalam Lactoba Bercak
Cawan berwarna
inkubator. cillus
gores putih banyak
casei zig-zag dan tidak
II.3.6 Isolasi beraturan.
II.3.6.1Isolasi pada cawan petri Bercak besar
berwarna putih
Media PCA dituang ke dalam cawan petri Cawan
menyebar,
sebanyak ¾ volume cawan petri, gores T terdapat bintik
kemudian media ditunggu hingga kecil soliter.
mengeras. Bakteri Lactobacillus casei Cawan Goresan Radian
Gores belum ada
diambil menggunakan ose bundar perubahan yang
kemudian digoreskan pada permukaan Radian
menunjukkan
media dengan pola zig-zag dan persegi. adanya mikroba.
Setelah digoreskan, cawan petri dibungkus
menggunakan kertas bekas kemudian
Cawan Goresan Persegi
dinkubasi. belum ada
Gores
 Persegi perubahan yang Tidak ada
menunjukkan Cawan perubahan
adanya mikroba.
gores T yang
signifikan.
Sumber : Data Primer Mikrobiologi Umum, 2017.
Cawan Muncul
mikroba
Gores berbentuk
bintik-bintik
Radian
berwarna
putih
Pengamatan ke :2
Hari / tanggal : Sabtu, 15 April 2017 Cawan Muncul
Tabel 03. Hasil Pengamatan Mikroba Gores mikroba
Sumber Metode Persegi berbentuk
Isolasi
Kenampakan Gambar
mikroba bintik-bintik
Terdapat berwarna
koloni besar putih
Cawan
dan kecil Sumber : Data Primer Mikrobiologi Umum, 2017.
gores saling Pengamatan ke :4
zig-zag tumpang Hari / tanggal : Senin, 17 April 2017
tindih.
Mikroba
Tabel 05. Hasil Pengamatan Mikroba
tumbuh Sumber Metode
Isolasi
Kenampakan Gambar
memenuhi mikroba
permukaan Tidak ada
Cawan Cawan
cawan petri, perubahan
gores T gores
goresan yang
Lactoba Lactoba zig-zag
berbentuk T signifikan.
cillus sudah tidak cillus
Tidak ada
casei kentara. casei Cawan perubahan
gores T yang
Cawan Muncul signifikan.
Gores mikroba Cawan Muncul
Radian berbentuk Gores mikroba
bintik-bintik Radian berbentuk
berwarna bintik-bintik
putih berwarna
putih. Tidak
ada
Cawan Muncul
mikroba perubahan
Gores
berbentuk yang
Persegi
bintik-bintik signifikan
berwarna Cawan Muncul
putih Gores mikroba
Sumber : Data Primer Mikrobiologi Umum, 2017. Persegi berbentuk
Pengamatan ke : 3 bintik-bintik
Hari / tanggal : Minggu, 16 April 2017 berwarna
Tabel 04. Hasil Pengamatan Mikroba putih. Tidak
sumber Metode Gamba ada
Kenampakan perubahan
mikroba Isolasi r
Lactoba Cawan Tidak ada yang
cillus gores perubahan signifikan
zig-zag yang nSumber : Data Primer MikrobiologiUmum,2017.
casei
signifikan.
III.2 Pembahasan
III.2.1 Media
PCA merupakan media
sintesis non selektif yang dapat
menumbuhkan bakteri, khamir,
dan kapang. PCA berupa bubuk
yang nantinya akan dicampur
dengan aquades. PCA tersusun
dari kasein hidrolisat enzimatik 5
gram, ekstrak khamir 2,5 gram,
dextrose 1 gram, dan agar 15
gram. PCA merupakan media
padat karena mengandung agar.
Hal ini sesuai dengan Partic (2008)
yang menyatakan bahwa Medium
plate count agar (PCA) dapat
berfungsi sebagai medium untuk
menumbuhkan mikroba.
NA merupakan media
sintesis yang berfungsi sebagai
medium kultivasi dan enumerasi
bakteri. NA berupa bubuk yang
nantinya akan dicampur dengan
aquades. NA tersusun dari intisari
peptikum jaringan hewan 5 gram,
Sodium Klorida 5 gram, ekstrak
daging sapi 1,5 gram, ekstrak
khamir 1,5 gram, dan agar 15
gram. NA merupakan media padat
karena mengandung agar. Hal ini
sesuai dengan Addina (2014) yang
menyatakan bahwa Nutrient Agar
(NA) merupakan suatu media yang
mengandung sumber nitrogen
dalam jumlah cukup yang dapat
digunakan untuk budidaya bakteri
dan untuk penghitungan
mikroorganisme dalam air, limbah,
kotoran dan bahan lainnya.
III.2.2 Larutan Fisiologis
Larutan fisiologis adalah
larutan yang digunakan dalam
proses pengenceran bertingkat.
Larutan fisiologis mampu menjaga
tekana osmotik antara cairan di
luar sel dan cairan di dalam sel
sehingga mikroba yang diencerkan
tidak mengalami lisis. Larutan
fisiologis terbuat dari campuran
NaCl 0,85% dan aquades. Hal ini
sesuai dengan Nurjannah dan
Fajrihanif (2010) yang
menyatakan bahwa larutan
pengencer yang sering digunakan
adalah larutan garam fisiologis
(NaCl 0,85%).
III.2.3 Pengenceran Bertingkat
Pengenceran bertingkat
merupakan salah satu proses dalam
inokulasi. Pengenceran bertingkat
dilakukan untuk mengurangi
jumlah mikroba sehingga jumlah
koloni pada cawan mudah
dihitung. Pengenceran bertingkat
menggunakan larutan fisiologis
yang terdiri campuran NaCl dan
aquades dengan takaran yang telah
ditentukan. Hal ini sesuai dengan
Wasteson dan Hornes (2009) yang
menyatakan bahwa tujuan dari
pengenceran bertingkat yaitu
memperkecil atau mengurangi
jumlah mikroba yang tersuspensi
dalam cairan.
III.2.4 Inokulasi
Mikroba yang diinokulasi adalah
bakteri Lactobacillus casei.Lactobacillus
casei merupakan Bakteri Asam Laktat
(BAL), karena menghasilkan asam laktat
sebagai produk akhir fermentasi. L. Casei
banyak digunakan dalam produk makanan
dan minuman karena merupakan bakteri
probiotik karena dapat meningkatkan
kekebalan dan keadaan fisiologis tubuh
juga dapat membantu menjaga kesehatan
usus. L. caseiberbentuk batang atau basil,
tidak berspora, dan tidak motil. Hasil
pewarnaan gram pada bakteri L. Casei
menunjukkan bahwa bakteri tersebut
merupakan bakteri gram positif. Hal ini
sesuai dengan Desai (2008) yang
menyatakan bahwa bakteri yang termasuk
dalam anggota L. casei merupakan bakteri
gram postif, anaerob fakultatif, katalase-
negatif, heterofermentatif fakultatif,
berbentuk batang dan tidak membentuk
spora dan dapat diisolasi dari banyak
habitat.
III.2.5 Isolasi
Isolasi mikroba adalah proses
memindahkan mikroba dari lingkungan
asalnya ke media buatan. Tujuan dari
isolasi adalah untuk memperoleh biakan
murni, yang dimaksud dengan biakan
murni adalah hanya satu jenis mikroba
saja yang tumbuh di media tersebut, tidak
ada mikroba lain. Proses isolasi diperlukan
kondisi yang aseptis agar benar-benar
didapatkan biakan yang murni. Hal ini
sesuai dengan Nur dan Asnani (2007)
yang menyatakan bahwa prinsip dari
isolasi mikroba adalah memisahkan satu
jenis mikroba dengan mikroba lainnya
yang berasal dari campuran bermacam-
macam mikroba.
III.2.6 Metode Zig-zag dan T
Metode gores atau streak plate adalah
salah satu metode yang digunakan dalam
proses isolasi mikroba, metode ini
dibutuhkan keterampilan khusus. Metode
gores dilakukan dengan menggoreskan
mikroba ke media menggunakan ose
bundar untuk mendapatkan koloni yang
terpisah. Pola goresan yang digunakan
adalah zig-zag dan T, penggoresan pola
dilakukan satu kali dan tidak berdempetan
antara satu goresan dengan goresan
lainnya, sehingga koloni terpisah dan
dapat dilihat dengan jelas. Hal ini sesuai
dengan Buckle (2007) yang menyatakan
bahwa untuk memperoleh hasil yang baik
diperlukan keterampilan, yang biasanya
diperoleh dari pengalaman, metode cawan
gores yang dilakukan dengan baik
kebanyakan akan menyebabkan
terisolasinya mikroba yang diinginkan.
III.2.7 Hasil Pengamatan
Hasil dari praktikum yang
dilakukan terlihat ketika hari ke nol semua
cawan petri belum ditumbuhi oleh
mikroba karena baru dilakukan proses
isolasi. Pada hari pertama isolasi teknik
goresan zig zag dan goresan T sudah
ditumbuhi oleh mikroorganisme pada
cawan gores zig-zag terdapat bercak
berwarna putih banyak dan tidak
beraturan. Sedangkan pada cawan gores T
muncul bercak besar berwarna putih
menyebar, terdapat bintik kecil soliter.
Untuk cawan gores radian dan persegi
belum ada mikroba yang tumbuh. Pada
hari kedua pada cawan gores zig-zag
muncul koloni besar dan kecil saling
tumpang tindih sedangkan cawan gores T,
mikroba tumbuh memenuhi permukaan
cawan petri, goresan berbentuk T sudah
tidak kentara. Pada cawan gores radian
dan persegi muncul mikroba berbentuk
seperti bintik bintik berwarna putih pada
cawan petri. Pada hari ketiga hingga hari
keempat tidak ada perubahan yang
signifikan pada cawan gores T dan zig-zag
hanya mikroba yang bertambah.
Sedangkan pada cawan gores radian dan
persegi hanya mengalami sedikit
pertumbuhan mikroba pada cawan. Hal ini
disebabkan karena proses isolasi pada
cawan gores T dan zigzag berlangsung
ditempat yang suhunya optimum artinya
suhu tempat isolasi hampir sama dengan
suhu inkubator sedangkan cawan gores
radian dan persegi mengalami kegagalan
yang disebabkan karena suhu ruangan
tidak sesuai dengan inkubator dan tempat
yang digunakan untuk inkubasi selalu
berubah-ubah. Hal ini sesuai dengan
pernyataan Suriani (2013) bahwa suhu
sangat mempengaruhi kecepatan
pertumbuhan mikrobia, kecepatan sintesis
dan kecepatan inaktivasi enzim. Setiap
mikroorganisme meiliki suhu optimum,
maksimum, dan minimum untuk
pertumbuhannya. Jika suhu lingkungan
lebih kecil dari suhu minimum atau lebih
besar dari suhu maksimum
pertumbuhannya maka aktvitas enzim
akan terhenti bahkan pada suhu yang
terlalu tinggi akan terjadi denaturasi
enzim.
IV. PENUTUP
IV.1 Simpulan
 Berdasarkan praktikum Nur Indriyani, Asnani. 2007. Penuntun
Isolasi Mikroba, kesimpulan yang Praktikum Mikrobiologi Akuatik,
dapat diperoleh adalah : Kendari : Fakultas Perikanan dan
1. Ada empat metode yang digunakan Ilmu Kelautan. Unhalu.
dalam proses isolasi mikroba, yaitu Partic, Li. 2008. Media pertumbuhan
pour plate, streak plate (metode gores), Mikroorganisme.http://dunia-
agar miring dan agar tegak. mikro.com/id. Diakses pada tanggal
2. Ose bundar digunakan dalam metode 12 April 2017 di Makassar.
cawan gores dan agar miring sementara Rusdimin. 2003. Mikrobiologi Dasar
ose jarum digunakan dalam metode Dalam Praktek. Jakarta: Pt
tusuk. Gramedia.
3. Media agar miring digunakan untuk Suriani, Sanita., Soemarno., Soeharjo.
menumbuhkan mikroba aerob, 2013. Pengaruh Suhu dan pH
sementara media agar tegak digunakan Terhadap Laju Pertumbuhan Lima
untuk menumbuhkan mikroba anaerob Isolat Bakteri Anggota Genus
dan anaerob fakultatif. Pseudomonas yang Diisolasi dari
Ekosistem Sungai Tercemar
IV.2 Saran Detegen Disekitar Kampus
Sebaiknya praktikan lebih Universitas Brawijaya.J-PAL Vol 3
memperhatikan suhu ruangan dalam No 2. Malang: Universitas
penyimpanan media karena bila suhu Brawijaya
ruangan tidak memenuhi syarat maka Wasteson, Y, and Hornes, E. 2009.
Pathogenic Escherichia Coli Found
pertumbuhan mikroba akan terhambat.
in Food. International Journal Of
Food Microbiology, 12, 103-114.
DAFTAR PUSTAKA
Addina, G. 2014. Evaluasi Kadar Bakteri
di Udara dengan Menggunakan
LAMPIRAN
Media Plate Count Agar (PCA)
Berdasarkan Tinggi Secara Vertikal
Lampiran 10. Diagram Alir Media NA
di Departemen Bedah Mulut
RSGMP FKG USU dengan Metode
Total Plate Count (TPC)[skripsi].
Medan: Universitas Sumatera Utara.
Alam, M.S, Sarjono P.R, Aminin, A.L.N.
2013. ‘Isolasi Bakteri Selulolitik
Termofilik Kompos Pertanian Desa
Bayat, Klaten, Jawa Tengah’. Chem
Info. Vol: 1. No: 1. hh:190-195.
Buckle. 2007. Mikrobiologi Terapan.
Yogyakarta : Universitas Gadjah
Mada.
Colome,J.S. Et al. 2001. Laboratory
Exercises in Microbiology. New
York : West Publishing Company.
Desai, A. Strain Identification, Viability
and Probiotics Property of
Lactobacillus casei[Tesis]. Australia
: School of Biomedical and Health
Sciences Victoria University.
 Lampiran 13. Diagram Alir Pengenceran
Bertingkat

Lampiran 11. Diagram Alir Sterilisasi

Alat

Lampiran 12. Diagram Alir Pembuatan

Larutan Fisiologis