Pengantar

terumbu karang memainkan peran penting dalam biosfer kita; menyediakan sumber daya
lingkungan, ekonomi dan budaya dihargai di miliaran dolar (Cesar et al., 2003). Faktor
penting untuk bertahannya
terumbu karang adalah kemampuan dari spesies karang untuk mereproduksi, yaitu,
membentuk baru individu dari saham sebelumnya. Sebelumnya penelitian reproduksi karang
telah memberikan banyak informasi di berbagai spesies menggambarkan kerangka waktu
yang tepat untuk reproduksi karang, reproduksi strategi (pemijahan vs merenung) dan
sexualmode (hermafrodit vs gonochoric) (Richmond dan Hunter, 1990; Veron, 1995, 2000;
Twan et al., 2006). Meskipun array ini klasifikasi dan pengamatan data, mekanisme
molekuler reproduksi karang, terutama produksi, disposisi, jaringan distribusi dan
pembersihan molekul terikat reproduksi, telah menerima perhatian yang terbatasdan tetap
tidak diketahui. molekul steroid berasal dari kolesterol prekursor dan melayani sejumlah
fungsi fisiologis penting. Set molekul yang dikenal sebagai "hormon steroid," membantu
memediasi proses fisiologis seperti pertumbuhan, perkembangan dan reproduksi (Gorski dan
Gannon, 1976; Evans, 1988; Porterfield dan Putih, 2007). Beberapa hormon steroid identik
dengan vertebrata hormon seks memiliki telah diidentifikasi dalam anggota filum Cnidaria.
Dalam banci laut, Renilla koellikeri, pola tahunan tingkat 17β-estradiol yang bertepatan
dengan siklus reproduksi ditemukan (Pernet dan Anctil, 2002). Beberapa hormon steroid
termasuk estrone, 17β-estradiol, progesteron, androstenedion dan testosteron telah terdeteksi
di kedua berbatu dan lembut karang (Slattery et al, 1997, 1999;.. Tarrant et al, 1999, 2003;
Pernet dan Anctil, 2002; Twan et al, 2003, 2006.; Blomquist et al., 2006; Armoza-Zvuloni et
al., 2012). Selain itu, enzim steroidogenik bertanggung jawab untuk produksi steroid hormon,
termasuk 5α-reduktase, dehidrogenase 3β-hidroksisteroid (3βHSD), 17β-hidroksisteroid
dehidrogenase, aromatase dan asil transferase, juga telah dilaporkan (Slattery et al, 1997;.
Tarrant et al., 2003; Twan et al., 2003). Penyelidikan saat ini dirancang untuk mengukur
hormon steroid dan prekursor mereka di karang merenung hermafrodit, Pocillopora
damicornis. Selain itu, kehadiran dan aktivitas terkait steroidogenik, steroid eliminasi dan
steroid regenerasi enzim juga diselidiki untuk mengatasi potensi molekul mekanisme yang
terkait dengan reproduksi karang. Kegiatan enzim steroidogenik 3βHSD, sitokrom P450 17
dehidrogenase (CYP17), dan aromatase serta enzim izin UDPglucuronosyl transferase (UGT)
dan sulfotransferase (sult) dan enzim regenerasi β-glucuronidase dan arylsulfatase C (ASC)
memiliki juga telah ditandai. Selain itu, penentuan fluktuasi alami dalam molekul ini
dilakukan, dalam rangka memberikan: (1) deskripsi nilai-nilai dasar (dengan perkiraan error),
untuk meningkatkan kualitas dan efektivitas "point-in-time" studi, karena tanpa perkiraan
fluktuasi dasar sulit untuk menentukan signifikansi perubahan pada titik waktu individu; dan
(2) menentukan apakah reproduksi siklus menyelaraskan dengan perubahan diukur. Data
yang disajikan disini mewakili penjelasan rinci pertama dari perubahan ini karakteristik
dalam spesies karang P. damicornis lebih reproduksi lunar nya siklus. Sejak enzim steroid
juga dapat terlibat dalam xenobiotic metabolisme, penting untuk memahami fluktuasi alam di
untuk secara akurat menerapkan teknik proteomik untuk mempelajari efek stres eksogen pada
kesehatan terumbu karang dan karang.
2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1. koleksi Coral

koloni seluruh (~ diameter 15 cm; n = 5) dari karang P. Damicornis dikumpulkan dari dana
rataan terumbu sekitar Pulau Kelapa di Kaneohe Bay, Oahu bawah khusus Izin Aktivitas
2009-42, yang diberikan oleh Hawaii Departemen Tanah dan Sumber Daya Alam, Divisi
Aquatic
Sumber. Karang dipilih secara acak, dibersihkan dari organisme asing dan ditempatkan dalam
tangki karantina selama dua minggu sebelum pengenalan menjadi mengalir tangki air laut di
Marine Laboratory Kewalo. Semua air yang meninggalkan tangki karantina disaring dan
disterilkan menggunakan SMART Ultraviolet Sterilizer Model 02025 (Kaisar Aquatics Inc.,
Pottstown, PA, USA) sebelum rilis. Setelah karantina, koloni dipelihara dalam tangki air laut
yang terpisah dan memungkinkan setidaknya 31 hari untuk memulihkan diri fromcollection
stres frompossible dan diizinkan untuk menyesuaikan diri ke Kewalo air laut systemprior
untuk pengambilan sampel jaringan. The Kewalo Sistem air laut terdiri dari sebuah aliran
terbuka tanpa filter dengan asupan 300 m lepas pantai pada kedalaman 10 m.

2.2. Prosedur percobaan

koloni individu (n = 5) berulang kali sampel untuk dua bulan pada titik-titik waktu yang
dipilih selama siklus lunar reproduksi, didefinisikan sebagai dari satu bulan purnama ke
berikutnya, sekitar 29 hari (Richmond dan Jokiel, 1984). titik waktu pengambilan sampel
yang diambil pada setiap kuartal lunar, setiap tujuh sampai delapan hari, dengan P.
damicornis planulation peristiwa yang terjadi setiap kuartal ke-3 dalam siklus lunar
(Richmond dan Jokiel, 1984; Kolinski dan Cox, 2003). cabang karang (~ 7 cm, lebar 2,5 cm)
telah dihapus dari dasar koloni mana kerangka itu tidak memiliki jaringan untuk menghindari
stres lebih lanjut. Sampel ditempatkan di kerucut 50 ml tabung polypropylene Falcon, Flash-
beku dalam nitrogen cair dan langsung ditempatkan pada -80 ° C sampai proses selanjutnya.
Untuk tepat mewakili waktu siklus reproduksi P. damicornis, data dilaporkan sebagai hari
dari awal sampling, dengan hari 1 menjadi hari pertama pengambilan sampel pada bulan
purnama. titik waktu ini juga merupakan satu minggu sebelum planulation. Itu waktu
sampling poin berikutnya mewakili perempat lunar sebagai berikut: kuartal bulan 3
(planulation event), bulan baru (satu minggu setelah acara planulation), 1 quartermoon
(twoweeks setelah planulation event), selama periode pengambilan sampel dua bulan.
2.3. persiapan jaringan lisat sel utuh dan postmitochondrial
fraksi subselular
Coral tissuewas dihapus kerangka dari dana menggunakan aWater Pik gigi bersih dan 0,2 m
disaring air laut (FSW) (Johannes dan Wiebe, 1970). Yang dihasilkan karang "blastate"
dipindahkan ke kerucut 50 mL polypropylene tabung Falcon dan berputar di 10.000 × g
selama 10 menit pada 4 ° C dalam Sorvall RC-5B Centrifuge menggunakan rotor tetap
(DuPont Instruments, San Pedro, CA) untuk pelet sel jaringan dan mengambang bebas. yang
dihasilkan pelet diresuspensi dan digabungkan dalam 5 mL homogenisasi dingin penyangga
(FSW; 1 mM phenylmethylsulfonylfluoride) dan homogen di atas es dengan-Turrax Ultra
homogenizer selama 60 s. Itu homogenat ditempatkan ke dalam kerucut 15 mL
polypropylene Falcon tabung dan disentrifugasi pada 2.000 × g selama 5 menit pada 4 ° C di
Eppendorf Centrifuge 5810R (Eppendorf, Hauppauge, NY). Zooxanthellae pelet dibuang dan
supernatan dipindahkan ke baru 15 tabung mL Falcon dan berputar lagi di 2000 × g selama 3
menit untuk menghapus tersisa zooxanthellae. Supernatan akhir, seluruh sel lisat (KMK),
yang terutama terdiri dari jaringan karang, aliquoted dan dibekukan pada -80 ° C sampai
digunakan. The postmitochondrial subselular fraksi protein tuan rumah karang, kekosongan
zooxanthellae, mitokondria, membran plasma dan inti, diperoleh dengan mengolah KMK
menggunakan homogenizer kaca selama 2 menit (kira-kira. 30 stroke) di atas es. homogenat
yang dihasilkan mensentrifugasi di 10.000 × g selama 20 menit pada 4 ° C dalam
EppendorfMicrocentrifuge 5415D (Eppendorf, Hauppauge, NY). Setelah sentrifugasi akhir
ini, supernatan mewakili fraksi jaringan postmitochondrial protein untuk karang, yang terdiri
dari mikrosom dan sitosol.

2.4. Tes untuk hormon steroid

Pengukuran kolesterol dan steroid hormon adalah dilakukan pada jaringan karang KMK.
Semua WCLs diencerkan dengan yang diinginkan konsentrasi protein: 0,25 mg / mL untuk
kolesterol total, 1 mg / mL untuk bebas kolesterol dan 2 mg / mL untuk hormon steroid
ELISA tes menggunakan metode BCA (Smith et al., 1985). Jumlah dan bebas kolesterol yang
diukur dengan menggunakan biokimia kit uji sesuai pabrikan instruksi (Cayman Kimia, Ann
Arbor, MI, USA). Steroid hormon estrone, 17β-estradiol, testosteron dan progesteron yang
diukur dengan ELISA, juga sesuai instruksi pabrikan (ALPCO Immunoassays, Salem, NH,
USA). Spiking dan pemulihan experimentswere dilakukan untuk progesteron dan 17β-
estradiol sebagai ELISA perwakilan dari produsen ke memeriksa tingkat pemulihan dan
penerapan KMK karang di ini ELISA kit. Setiap sampel dinilai dalam rangkap tiga, dibubuhi
murni steroid standar (produsen disediakan) dan pemulihan diukur dengan
dibandingkan dengan kurva standar. Metodologi ELISA atas mempekerjakan penggunaan
antibodi spesifik terhadap struktur kimia yang menarik, dengan kurang dari 6% reaktivitas
silang terhadap bahan kimia struktural terkait (dengan pengecualian dari progesteron ELISA
yang silang bereaksi 100% dengan 11α-OH-progesteron). Sejak, menurut definisi, tidak ada
dua bahan kimia dapat memiliki struktur yang sama, antibodi diangkat ke bahan kimia murni
mewakili yang sangat specificmethod untuk detectionwith farmore dibatasi reaktivitas silang,
biasanya hanya untuk modifikasi kimia dari struktur yang sama.

2.5. tes enzim kinetik

Semua tes steroidogenik dilakukan di 5 tabung kaca mL, kecuali ditentukan lain, dan
kemudian aliquoted dalam rangkap tiga ke 96-baik jelas microplates. Untuk clearance dan
regenerasites enzim, fraksi jaringan postmitochondrial dari protein, assay penyangga dan
substrat yang dimuat ke sumur di microplates yang disimpan di atas es. Microplates yang pra-
hangat di dalam lempeng a reader (Spectra Max atau Gemini XS, Perangkat Molekuler,
Sunnyvale, CA) pada 37 ° C sebelum penambahan co-faktor yang digunakan untuk memulai
reaksi. tes neon dilakukan dalam warna hitam, pelat datar dipercaya padat dan tes kolorimetri
di piring yang jelas. Bila perlu, substrat dilarutkan dalam pelarut (DMSO dan metanol), yang
tidak pernah lebih dari 2% dari volume reaksi; oleh karena itu, operator pelarut properti tidak
harus memiliki aktivitas enzim yang terkena (Williams et al., 2008). Microplates yang dibaca
baik menggunakan Spectra Max 340 Plus atau Gemini XS (Molecular Devices, Sunnyvale,
CA). Studi linearitas yang dilakukan dengan menggunakan sampel karang dikumpulkan (n =
5) untuk setiap steroidogenik enzim assay untuk menentukan waktu linier reaksi, protein
optimal konsentrasi dan konsentrasi substrat yang optimal. enzim individu kegiatan yang
dinilai sebagai dijelaskan (melaporkan nilai menunjukkan konsentrasi akhir). Tes yang
digunakan substrat spesifik untuk enzim tertentu dan isoform pada vertebrata.

2.6. 3β-hidroksisteroid dehidrogenase (3βHSD)

Enzim 3βHSD bertanggung jawab untuk katalisis progestagens dan androgen, termasuk
konversi pregnenolon ke progesteron. Aktivitas 3βHSDwas ditentukan dengan mengukur
konversi dari pregnenolon ke progesteron seperti yang dijelaskan sebelumnya (Bauer dan
Bauer, 1989;. Raunig et al, 2011). ELISA dan nilai-nilai dikonversi ke ng / min / mg protein
menggunakan kurva standar progesteron (produsen disediakan).

2.7. Sitokrom P450 17 dehidrogenase (CYP17)

Konversi pregnenolon 17α-hidroksi progesteron ini dan 17α-hidroksi progesteron ke

androgen dehydroepiandrosterone dan androstenedion, masing-masing, yang merupakan
prekursor dalam jalur produksi estrone, dilakukan oleh CYP17. Kegiatan CYP17 ditentukan
dengan menggunakan metode diadaptasi dari Holtorff dan Koch (Holtorff dan Koch, 1940).
Secara singkat, jaringan postmitochondrial fraksi protein karang (20 mg) di 0.1MTris-HCl
penyangga pH 7,4, mengandung 50mMMgCl2 dan 500 μM17α hydroxypregnenolonewas
ditambahkan ke tabung kaca di atas es. Tabung preincubated selama 30 s pada 37 ° C
sebelum inisiasi reaksi melalui penambahan 1 mM NADPH. tabung yang kemudian
diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 5 menit. Reaksi dihentikan melalui penambahan volume
yang sama dari 5 M KOH. Volume yang sama 2% m-dinitrobenzene, dalam etanol 95%,
ditambahkan dan warna diperbolehkan untuk mengembangkan selama 2 menit. Campuran ini
dipindahkan ke 1,5 mL tabung microcentrifuge dan berputar di 10.000 × g selama 3 menit
untuk pelet endapan, dalam Eppendorf MiniSpin centrifuge (Hauppauge, NY, USA).
Absorbansi ditentukan pada λ = 520 nm pada sumur rangkap tiga dan Hasil
ditransformasikan ke nmol / min / mg protein menggunakan standar kurva DHEA (0-1 mM).

2.8. aromatase

Aromatase bertanggung jawab untuk konversi dari androgen androstenedion dan testosteron
ke estrogen estron dan estradiol, masing-masing. aktivitas aromatase ditentukan dengan
mengukur konversi testosteron ke 17β-estradiol seperti sebelumnya dijelaskan (Lephart dan
Simpson, 1991) dan digunakan oleh kami (Sugawara et al., 2012). Deteksi 17β-estradiol
ditentukan melalui ELISA dan hasil dikonversi ke fg / min / mg protein menggunakan
standar kurva 17β-estradiol (produsen disediakan).

2.9. UDP-glucuronosyl transferase (UGT)

UGT, enzim Tahap II, sarat dengan ratna asam glukuronat, besar polar kelompok, untuk
senyawa endogen dan xenobiotik untuk menghasilkan lebih banyak metabolit hidrofilik untuk
ekskresi. Total kegiatan UGT adalah ditentukan dengan menggunakan metode Collier et al.
(2000) seperti sebelumnya dijelaskan (Rougee et al., di tekan). Hasil diubah ke pmole / min /
mg protein menggunakan kurva standar yang dihasilkan dengan 4-methylumbelliferone (4-
MU).

2.10. Sulfotransferase (Sult)

Sult, enzim Tahap II yang lain, sarat dengan ratna penambahan sulfonat bagian untuk
memfasilitasi ekskresi senyawa. kegiatan ini dari SULT1A1 diukur dengan menggunakan
metode Frame et al. (2000), sementara aktivitas Sult umum (termasuk 1A1, 1A2, 1A3, 1B1,
1E1, 2A1 isoform) diukur dengan menggunakan metode dengan Tabrett dan Coughtrie
(2003).

2.11. beta-Glucuronidase

β-Glucuronidase mengkatalisis hidrolisis asam β-D-glukuronat residu pada molekul

mengembalikan mereka ke bentuk yang lebih lipofilik, dan membantu memperpanjang durasi
mereka. Kegiatan untuk ini enzymewas ditentukan menggunakan metode Trubetskoy dan
Shaw (1999) seperti sebelumnya dijelaskan (Rougee et al., di tekan). Fluoresensi adalah terus
menerus dipantau di em 355 nm ex / 460 nm. Hasil diubah ke pmole / min / mg protein
menggunakan kurva standar yang dihasilkan dengan 4-MU.

2.12. Arylsulfatase C (ASC)

Arylsulfatase C, juga disebut sulfatase sebagai steroid, bertanggung jawab untuk

mengkonversi steroid sulfat ke bentuk steroid bebas mereka. kegiatan iniASC ditentukan
dengan menggunakan modifikasi dari metode Roy (1958) seperti yang dijelaskan sebelumnya
(Rougee et al., Di tekan). Hasil dihasilkan menggunakan kurva standar para-nitrofenol.

2.13. Analisis statistik

Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan GraphPad Prism Program versi 5.02.
Karena ukuran sampel yang kecil, normalitas Data diperiksa melalui uji Kolmogorov-
Smirnov yang mempekerjakan pendekatan Dallal andWilkinson ke metode Lilliefors '.
Persamaan varians dari sampel diverifikasi menggunakan uji Bartlett. Sebuah satu arah
analisis varian (ANOVA) digunakan jika data yang ditemukan menjadi berdistribusi normal
dan homogen. perbandingan beberapa Bonferroni post hoc testwas kemudian digunakan
untuk membandingkan perbedaan antara sampel tanggal. Namun, jika data tidak memenuhi
persyaratan untuk normal distribusi, Kruskal-Wallis (KW) satu arah ANOVA pada peringkat
itu dilakukan untuk mengkompensasi, dan uji post hoc Dunn dipekerjakan untuk
membandingkan perbedaan antara tanggal sampel. Jika perbedaan yang signifikan di varian
berdasarkan tes Bartlett ditemukan, data itu logtransformed dan satu arah ANOVA dilakukan.
Jika Bartlett Tes pada datawas berubah signifikan, varianceswere yang dianggap
aKWANOVAwas tidak sama dan dilakukan; jika tidak, satu arah ANOVA dilaporkan. Jika
ANOVA dilakukan, nilai p dari
pengujian awal Bartlett masih dilaporkan dan varians dijelaskan. signifikansi statistik
didefinisikan sebagai p ≤ 0,05.

3. Hasil

3.1. kadar hormon steroid

Tidak ada perbedaan yang signifikan yang terdeteksi antara setiap titik waktu untuk total
kolesterol atau bebas (Gambar. 1). Kecenderungan yang sama diamati untuk semua hormon
steroid, dengan pengecualian 17β-estradiol (Gbr. 2). Meskipun ANOVA tidak signifikan (p =
0,0540), post hoc tes mendeteksi perbedaan yang signifikan (p b 0,05) antara hari 16 dan 54
sampling (oneweek dan dua minggu setelah titik waktu planulation, masing-masing; Ara.
2A). Rentang konsentrasi rata-rata antara hormon steroid bervariasi, dengan progesteron dan
estron tingkat menjadi 6 kali lipat lebih besar dari mereka 17β-estradiol (Tabel 1). Nilai untuk
hari 16 (Satu minggu setelah planulation) secara konsisten pada akhir lebih tinggi dari
kisaran, sedangkan untuk hari 30 dan 54 (satu minggu sebelum dan dua minggu

Gambar...........
Ara. 1. Kadar kolesterol di P. damicornis. Total () dan free () tingkat lebih dari dua kali
berturut-turut siklus lunar (ANOVA). Bar geometrik ± SEM untuk n = 5 penentuan diuji
dalam rangkap tiga.

17β-estradiol menunjukkan bahwa tingkat pemulihan yang lebih besar dari 100% (Karena
tingkat steroid sisa dalam sampel) dan konsisten (Intra-hari CV = 6% dan 7%, masing-
masing).

3.2. enzim steroidogenik

Aktivitas enzim steroidogenik tetap konsisten selama karang siklus reproduksi dengan tidak
ada perbedaan yang signifikan secara statistik diamati. Kegiatan 3βHSD (Gambar. 3A)
berkisar antara 6.78 ± 3.13 (hari 30) untuk 9,36 ± 2,4 (hari 16) ng / min / mg protein,
sedangkan CYP 17 (Gambar. 3B) berkisar dari 125,0 ± 11,11 (hari 30) ke 160,7 ± 28,46 (hari
23) nmol / min / mg protein. Namun, varians untuk 3βHSD atas siklus lunar berbeda secara
signifikan (Bartlett test; p = 0,0329 sebelum transformasi data). Ini penyebaran aktivitas pada
titik waktu tertentu mungkin menunjukkan perubahan dalam induksi dan regulasi enzim.
aktivitas aromatase rendah, dengan beberapa sampel memiliki nondetectable Kegiatan hingga
951,3 ± 714,3 fg / min / mg protein (Gambar. 3C). Tidak ada perbedaan yang signifikan dapat
dihitung untuk aromatase.

3.3. enzim clearance dan regenerasi steroid

The sulfotransferases tidak terdeteksi baik uji coba untuk setiap sampel karang, meskipun
kontrol positif menunjukkan bahwa tes bekerja. Aktivitas enzim UGT secara signifikan lebih
tinggi (ANOVA p b 0,0001; post hoc p b 0,05) pada dua minggu setelah titik waktu
planulation untuk bulan pertama sampling (hari 23) di 770,8 ± 470,9 pmole / min / mg
protein (Gambar. 4A). Namun, meskipun umum Kecenderungan peningkatan aktivitas
diamati setelah planulation (1 dan 2 minggu setelah planulation), tidak ada perbedaan yang
signifikan dicatat untuk bulan kedua. Selain itu, varian antara titik waktu berbeda secara
signifikan (Bartlett p b 0,0001 sebelum transformasi data) menunjukkan bahwa regulasi
aktivitas enzim UGT dapat diubah relatif terhadap siklus reproduksi bulan. enzim izin
terbalik β-glucuronidase dan ASC tidak berfluktuasi secara signifikan selama bulan tersebut
siklus (Gambar. 4C, D).

Gambar..........
Ara. 2. Steroid tingkat hormon di P. damicornis. A, 17β-Estradiol (ANOVA); B, estrone
(KWANOVA); C, progesteron (ANOVA); D, testosteron (KW ANOVA). Capped garis
mewakili perbedaan yang signifikan antara titik waktu di topi (Bonferroni p ≤ 0,05).
Bargeometrik ± SEM untuk n = 5 penentuan diuji dalam rangkap tiga.

Gambar...........

Ara. 3. kegiatan enzim steroidogenik. A, 3βHSD (ANOVA); B, CYP17 (ANOVA); C,

aromatase (KW ANOVA). Bar adalah sarana ± SEM untuk n = 5 penentuan diuji dalam
rangkap tiga.

Gambar............
Ara. 4. Fluktuasi enzim clearance dan regenerasi steroid lebih dari dua reproduksi siklus
lunar. A, UGT (ANOVA p b 0,0001, Bonferroni p ≤ 0,01); B, β-glucuronidase (ANOVA); C,
ASC (ANOVA). Capped garis mewakili perbedaan yang signifikan antara waktu poin di
bawah kawat gigi, dan hari 23. Bar aremeans ± SEMfor n = 5 penentuan diuji dalam rangkap
tiga.

4. Diskusi

Di sini, kami menyajikan bukti keberadaan steroid hormon 17β-estradiol, estrone,

progesteron, testosteron, serta sebagai aktivitas enzim steroidogenik 3βHSD, CYP17 dan
aromatase, di karang merenung P. damicornis. Sebelumnya upaya penelitian menyelidiki
mekanisme molekuler reproduksi karang telah berfokus pada karang spesies yang
bereproduksi melalui acara pemijahan massal (Slattery et al., 1997, 1999; Tarrant et al, 1999,
2003.; Blomquist et al., 2006; Twan et al., 2006; Armoza-Zvuloni et al., 2012), dengan
investigasi yang terbatas dilakukan pada merenung spesies (Gassman, 1992; Slattery et al.,
1997; Tarrant et al., 1999, 2003). Fisiologi yang unik dari P. damicornis, sebuah hermafrodit
brooder yang planulates setiap bulan tahun ini, membuat spesies ini model ideal untuk
mempelajari mekanisme molekuler dan tanggapan dari protein yang terlibat dalam reproduksi
karang. Studi kami tidak terdeteksi fluktuasi yang signifikan (dengan minor pengecualian)
untuk prekursor hormon steroid, steroid hormon atauenzim steroidogenik, selama siklus
reproduksi bulan karang 'di P. damicornis. Dengan asumsi bahwa hormon steroid berperan
dalam karang fisiologi reproduksi, hasil ini selaras dengan pengamatan sebelumnya dari
pematangan oosit di P. damicornis (Stoddart dan Black, 1985). investigasi histologis telah
mencatat kehadiran beberapa tahapan jatuh tempo oosit selain berkembang yang planulae di
P. damicornis (Stoddart dan Black, 1985;. Permata et al, 2000). Dengan demikian, karena
setiap kohort planulae sedang dipersiapkan untuk rilis, merenung dua bulan berikut
berkembang. Ini berbeda dengan, misalnya, oosit manusia, di mana steroid seks puncak dan
mereda dalam rangkaian acara hormonal untuk mendorong oocytematuration dan melepaskan
dalam fase folikuler dan luteal (Porterfield dan Putih, 2007). Oleh karena itu, untuk P.
damicornis, kadar tinggi hormon steroid mungkin diperlukan untuk gametogenesis terus
menerus, embrio pematangan dan pengembangan, dan dapat menjelaskan kurangnya
fluktuasi kadar hormon steroid yang diukur dalam penelitian ini. Namun, karena peran
sebenarnya dari hormon steroid di karang belum dijelaskan, penyelidikan lebih lanjut
diperlukan untuk menentukan signifikansi temuan ini. Salah satu pengamatan menarik adalah
fluktuasi izin aktivitas enzim selama siklus reproduksi bulan karang '. Meskipun tidak ada
perubahan signifikan yang diamati untuk enzim regenerasi β-glucuronidase atau ASC,
clearance enzim UGT berfluktuasi secara signifikan selama siklus lunar, memuncak
twoweeks pasca-planulation. Hasil dari penelitian ini selama dua siklus lunar berturut-turut,
mengkonfirmasi temuan sebelumnya di laboratorium kami, dan menyarankan bahwa regulasi
enzim ini terkait dengan siklus reproduksi karang (Rougee et al., di tekan). Superfamili UGT
adalah berbagai bertanggung jawab untuk glucuronidation dari racun (Bock dan Schirmer,
1987; Jin et al., 1993; Orzechowski et al., 1994) serta ligan endogen dan steroid hormon
(Bélanger et al, 1998;.. Hum et al, 1999). Peraturan ini jalur dapat memainkan peran dalam
kecenderungan untuk toksisitas. hasil kami menunjukkan bahwa P. damicornis mungkin lebih
rentan dan / atau sensitif terhadap racun, diatur melalui glucuronidation, jika terkena pada
titik waktu antara planulation eventswhen UGT aktivitas menurun. Hal ini membawa
memperhatikan "point-in-time" studi. Karena enzim dapat melayani beberapa peran luar
detoksifikasi, karakterisasi fluktuasi alami dan tingkat dasar adalah hal yang terpenting untuk
memahami howenvironmental polutan dapat mengganggu jalur pada waktu tertentu selama
karang hidup siklus. Perbandingan tingkat aktivitas enzim maksimal antara ekskresi dan
belahan dada sebaliknya menunjukkan bahwa sistem nikmat ekskresi melalui
glucuronidation, sementara di jalur sulfation, retensi senyawa disukai. Namun, pernyataan ini
maraholeh ketidakmampuan kita untuk mendeteksi enzim Sult di karang. Analisis
Nematostella vectensis genom menemukan bahwa gen Sult ini yang lebih erat terkait dengan
enzim Sult terikat membran yang terlibat dalam metabolisme energi daripada ke Hasil
pengujian sitosol terkait dengan reaksi detoksifikasi pada vertebrata (Goldstone, 2008).
Selain itu, substrat yang digunakan (4-nitrofenol dan 2-naftol) di penyelidikan kami mungkin
tidak diakui oleh Hasil pengujian karang. Karakteristik ini, disertai kami menggunakan
metode spektrofotometri sebagai lawan untuk spektrometri massa, kemungkinan menjelaskan
kurangnya deteksi enzim Sult di karang. Investigasi Sult di tingkat isoform individu
diperlukan untuk menjelaskan keberadaan jalur sulfotransferase di karang. Waktu dan kontrol
dari sumbu reproduksi molekul di karang masih tetap tidak jelas. Steroid dan bentuk
terkonjugasi mereka telah terdeteksi konsisten dalam jaringan karang dan air laut sekitarnya,
dengan perubahan tingkat berpusat di sekitar peristiwa reproduksi, menyarankan pelepasan
steroid ke dalam air sekitarnya sebagai isyarat yang potensial untuk pemijahan sinkronisitas
(Slattery et al, 1997, 1999;.. Tarrant et al, 1999, 2003; Pernet dan Anctil, 2002; Twan et al,
2003, 2006.; Blomquist et al., 2006; Armoza-Zvuloni et al., 2012). Selain itu, karang telah
terbukti penyerapan estrogen terlarut dalam air laut, yang mengakibatkan umpan balik negatif
pada kapasitas reproduksi karang dan penurunan skeletal tingkat pertumbuhan (Tarrant et al.,
2001, 2004). Namun, sementara karang memiliki kapasitas untuk antar-mengkonversi
hormon steroid (mis mengkonversi estradiol untuk estrone) dan mengandung steroid hormon,
sampai saat ini, tidak ada bukti untuk menunjukkan bahwa karang memproduksi hormon
steroid de novo (Tarrant et al., 1999, 2003; Twan et al., 2006). Kontribusi dari penelitian ini
adalah bahwa P. damicornis memiliki prekursor hormon steroid (kolesterol). Menggabungkan
bukti di sini dengan bukti dari penelitian lain mengenai enzim yang bertanggung jawab untuk
produksi dan konversi steroid hormon, disarankan agar karang memiliki alat yang diperlukan
mampu mensintesis hormon steroid de novo dalam jaringan mereka. Meskipun banyak
contoh mengurangi kapasitas reproduksi karang, reproduksi kegagalan, dan penurunan
terumbu terus menerus telah didokumentasikan (Hughes dan Tanner, 2000; Knowlton, 2001;
Szmant, 2002), yang pasti jawaban menghubungkan penyebab untuk efek yang kurang.
pengamatan umum telah memberikan banyak informasi deskriptif tentang reproduksi karang.
Namun, komunikasi karang untuk reproduksi sinkron dan jalur molekuler untuk produksi
gamet (sperma dan sel telur) serta mekanisme untuk mengganggu peristiwa alam tetap tidak
diketahui. Oleh karena itu, memahami besarnya dan berbagai efek "pengacau endokrin" tidak
advancedwithout pemahaman yang rinci mekanisme molekuler untuk reproduksi dan sinyal
di spesies ini, serta perubahan jalur non-reproduksi yang dapat berfluktuasi dengan siklus
reproduksi. Di sini, kami menyajikan pertama langkah menuju mendefinisikan fisiologis
normal dan lunar / variabilitas reproduksi dalam spesies karang. pemahaman lebih lanjut
reproduksi karang di tingkat molekuler akan diperlukan untuk benar-benar memahami nya
gangguan, yang menjadi perhatian besar bagi lingkungan dan kelautan polutan, dan kegigihan
terumbu karang secara keseluruhan.

Ucapan Terima Kasih

Kami berterima kasih kepada Hawaii Organ Manusia dan Tissue Bank dan staf dari Organ
Donor Pusat Hawaii untuk menyediakan jaringan manusia digunakan sebagai kontrol positif
dalam percobaan ini. Penggunaan jaringan-jaringan arsip, dari donor meninggal, dianggap
dibebaskan oleh The University of Hawaii Institutional Review Board untuk Subyek
Manusia. sebagian pendanaan Dukungan diberikan oleh hibah NA09NOS4780178 dari
NOAA / NCCOS / CSCOR dan Grup Lingkungan Pew untuk R. H. Richmond.