Abstrak

Penelitian ini bertujuan untuk menyelidiki efek dari penyesuaian energi non-protein pada mitokondria
biosintesis dan fungsi ambalcephala remaja Megalobrama. Ikan (berat rata-rata: 37,98 ± 0,07 g) adalah
memberi makan delapan diet yang mengandung dua tingkat karbohidrat diet (30% dan 43%) dan empat
sumber lipid (minyak ikan, minyak kedelai, minyak sawit dan minyak campuran) selama 11 minggu.
Aktivitas rantai mitokondria pernapasan kompleks V dan ATP (adenosine triphosphate) konten keduanya
meningkat secara signifikan dengan peningkatan diet karbohidrat tingkat, sedangkan yang sebaliknya
berlaku untuk AMP (adenosine 5′-monophosphate) / ATP ratio, transkrip hati dari AMP-activated protein
kinase α1 (AMPKα1), AMPKα2, peroxisome proliferators γ-activated receptor coat- ivator-1α (PGC-1α),
NADH dehidrogenase 1 dan cytochrome c oxidase 1 (COX1) serta aktivitas Na + - K + -ATPase, suksinat
dehidrogenase (SDH), sitrat sintase (CS) dan kompleks rantai pernapasan mitokondria I, III dan IV. Selain
itu, konten ATP hati, transkrip AMPKα, COX1 dan ATP6 dan kegiatan Na + -K + -ATPase, SDH, CS dan
mitochondrial respiratory chain complex III semuanya dipengaruhi oleh lipid sumber. Selanjutnya,
interaksi antara tingkat karbohidrat dan sumber lipid juga diamati pada kegiatan hati mitokondria Na + -K
+ -ATPase dan rantai pernapasan kompleks III serta transkrip ATP6 dan PGC-1α. Secara keseluruhan,
temuan ini menunjukkan bahwa tingkat karbohidrat dan sumber lipid makanan kembali sangat
mempengaruhi biosintesis mitokondria dan fungsi M. amblycephala. Diet yang mengandung 30%
Karbohidrat dan FO dapat meningkatkan biosintesis mitokondria, sementara itu 30% karbohidrat dan SO
bisa meningkatkan fungsi mitokondria.

Pendahuluan

Sebagai dua sumber energi non-protein penting, keduanya karbohidrat dan lipid memainkan peran
penting dalam mengatur kinerja pertumbuhan dan metabolisme ikan (Zhou et al. 2016). Umumnya, lipid
kembali garded sebagai molekul utama yang menghasilkan protein non-protein untuk ikan untuk
pencernaan mereka yang efisien. Namun, ketersediaannya kaya dan berbiaya rendah Karbohidrat
membuat penyertaan mereka dalam diet lebih menarik (Wilson 1994). Penggabungan nutrisi ini tidak
hanya bermanfaat efek terhadap kualitas pelleting pakan (Arnesen dan Krogdahl 1993) sebagai serta
kinerja pertumbuhan ikan (Peragon et al. 1999), tetapi juga bisa protein cadangan dan lipid dalam pakan
serta mengurangi kehilangan nitrogen ikan menjadi lingkungan akuatik (Hemre dan Deng 2015). Namun,
lipid harus dipertimbangkan ketika memaksimalkan penggunaan carbo- diet hidrat, karena lipid dan
karbohidrat umumnya memiliki hubungan satu sama lain dalam metabolisme glikolipid ikan (Castro et al.
2015, 2016a; Wang et al. 2017). Karena itu sangat penting untuk menentukan efek interaktif antara diet
karbohidrat dan lipid untuk spesies yang dibudidayakan untuk memfasilitasi pemanfaatan energi non-
proteinnya. Mitokondria adalah situs utama respirasi aerobik oleh sel. Di Faktanya, sekitar 90% energi
disintesis terutama melalui mirantai pernapasan tochondrial (Eya et al. 2011). Dengan demikian, kedua
mobilbohidrat dan lipid teroksidasi dalam mitokondria untuk menghasilkan energi sel dalam bentuk
adenosin trifosfat (ATP). Karena itu, mitokondria memainkan peran penting dalam metabolisme glikolipid
binatang. Umumnya, kerusakan biosintesis mitokondria dan fungsi akan meningkatkan stres oksidatif,
karena dapat mengurangi rakapasitas sel yang dicair-pembilasan. Ini akibatnya dapat menyebabkan
penghambatan enzim kompleks pernafasan mitokondria aktivitas dan transfer energi, dengan demikian
menghambat metabolis glikolipid bolisme (Wang et al. 2013). Mempertimbangkan ini, mempertahankan
mi-biosintesis dan fungsi tochondrial sangat penting untuk mempromosikan pemanfaatan energi protein
oleh hewan. Sebagai reseptor untuk energi, adenosine 5′-monophosphate (AMP) - activated protein
kinase (AMPK) memainkan peran utama dalam mempertahankan keseimbangan energi dalam sel.
Kurangnya energi akan meningkatkan rasio AMP / ATP, sebagai akibatnya dapat mengaktifkan AMPK,
sehingga mengakibatkan lipatan katabolisme dan penghambatan anabolisme. Umumnya, AMPK
merupakan aktivator penting dari peroxisome proliferators γ activated receptor coativator-1 α (PGC-1α),
yang merupakan pengatur utama mibiosintesis tochondrial, mengkoordinasikan fungsi mi-tubuh rantai
pernapasan tochondrial untuk memenuhi pasokan dan permintaan energi yang berbeda (Finck dan Kelly
2006). Setelah diaktifkan, AMPK bisa meningkatkan ekspresi protein PGC-1α, sehingga merangsang
mitokondria biogenesis dan fosforilasi oksidatif (Leick et al. 2010). Dengan demikian, umumnya diakui
bahwa AMPK / PGC- Jalur 1α adalah salah satu jalur paling penting yang mengatur mibiosintesis
tochondrial (Wright et al. 2007). Namun, hingga saat ini, ini jalur terutama diteliti pada mamalia (Ashabi
dkk. 2014; Leick dkk. 2010; Wright dkk. 2007). Misalnya, aktivasi AMPK oleh metformin melindungi
terhadap iskemia serebral global pada tikus melalui mediasi jalur AMPK / PGC-1α (Ashabi et al. 2014).
Selain itu, hormon tiroid dan aktivitas kontraktil bisa naik- mengatur ekspresi PGC-1α dari tetikus,
sehingga mendorong miadaptasi tochondrial (Irrcher et al. 2003). Namun, potensinya peran jalur ini
dalam biosintesis mitokondria ikan masih kurang dipahami, sebagaimana dijamin studi lebih lanjut.
Fungsi kompleks rantai pernafasan mitokondria adalah untuk duce ATP melalui serangkaian proses
redoks (Eya et al. 2017). Disebabkan oleh peran penting dalam metabolisme energi, fungsi mitokondria
ikan baru-baru ini menarik perhatian. Sampai saat ini, mitokondria fungsi ikan telah dilaporkan
dipengaruhi oleh sejumlah besar faktor, seperti genetika, pertumbuhan dan / atau tahap perkembangan,
air suhu, komposisi makanan, dan sebagainya (Houlihan et al. 1993; Papa dan Skulachev 1997;
Korshunov dkk. 1998; Eya et al. 2010). Untuk contoh, tingkat lipid diet telah dilaporkan sangat
mempengaruhi jumlah salinan DNA mitokondria hati dari croaker kuning besar (Larimichthys crocea)
(Liao et al. 2016). Selain itu, mitokondria fungsi trout pelangi (Oncorhynchus mykiss) telah dilaporkan
dipengaruhi oleh diet dan keluarga (Eya et al. 2011) serta antar aksi antara diet dan suhu (Eya et al.
2017). Namun, terangeratures mengenai regulasi nutrisi dari mitochondrial functions ikan masih sangat
terbatas, terutama untuk interaksi antara nutrisi makanan. Blunt moncong bream Megalobrama
amblycephala adalah ekonomi ikan mas air tawar herbivora yang penting di Cina dengan distribusi
globaltion. Dalam beberapa tahun terakhir, kebutuhan untuk memaksimalkan laba pasti mengarah pada
penggabungan tinggi sumber energi non-protein dalam pakannya. Namun, penggunaan yang tidak tepat
dari karbohidrat dan lipid dapat menyebabkan metabolisme gangguan spesies ini, sebagai akibatnya
menghasilkan peningkatan istirahat penyakit hati berlemak (Prathomya et al. 2017; Prisingkorn et al.
2017). Oleh karena itu, sangat mendesak untuk menyelidiki energi non-protein pemanfaatan oleh
spesies ini, dan menemukan pendekatan yang efektif untuk mempromosikannya. Di sebuah penelitian
sebelumnya, kami menemukan bahwa efek interaktif dari carbo diet tingkat hidrat dan sumber lipid
sangat mempengaruhi pertumbuhan performance dan metabolisme perantara spesies ini (Wang et al.
2017). Untuk lebih mengeksplorasi mekanisme yang mendasari, penelitian ini adalah dilakukan untuk
mengevaluasi efek dari tingkat karbohidrat dan lemak dalam diet sumber serta interaksi mereka pada
biosintesis mitokondria dan fungsi bream moncong tumpul.
Bahan dan metode

1. Etika hewan

Semua prosedur eksperimental yang melibatkan hewan dilakukan di bawah Panduan Perawatan dan
Penggunaan Hewan di Laboratorium Cina. Penelitian ini disetujui oleh Perawatan dan Penggunaan
Hewan Komite Universitas Pertanian Nanjing (Nanjing, Cina) (izin nomor: SYXK (Su) 2011-0036).

2. Makanan eksperimental

Desain faktorial 2 × 4 digunakan dalam penelitian ini. Sebanyak delapan diet eksperimental dirumuskan
mengandung dua diet karbohidrat kadar drate (yaitu ekstrak bebas nitrogen) (30% dan 43%) dan empat
sumber lipid (minyak ikan, FO; minyak kedelai, SO; minyak sawit, PaO; dan minyak campuran (FO: SO:
PaO = 1: 1: 1), MO), masing-masing. Penelitian sebelumnya telah ditunjukkan bahwa tingkat karbohidrat
diet optimal untuk moncong tumpul remaja bream adalah 29–32% (Li et al. 2013, 2014; Zhou et al.
2013). Karena itu, diet yang mengandung 30% karbohidrat diadopsi sebagai kontrol, sementara bahwa
dari 43% ditetapkan sebagai diet tinggi karbohidrat. Sebagai tambahan, FO, SO dan PaO dipilih
berdasarkan penyelidikan penelitian sebelumnya pemanfaatan sumber lipid makanan oleh spesies ini (Li
et al. 2015). Asam lemak (FA) komposisi berbagai sumber lipid disajikan di Tabel 1. Formulasi, komposisi
proksimat dan komposisi FA diet eksperimental disajikan pada Tabel 2 dan Tabel 3, masing-masing tively.
Tepung ikan, bungkil kedelai, makan rapeseed dan biji kapas disajikan sebagai sumber protein. Pati
jagung diadopsi untuk mendapatkan makanan tingkat karbohidrat yang dibutuhkan pada kompensasi
mikrokristalin selulosa. Semua bahan digiling halus dan dicampur dengan minyak. Jumlah air yang tepat
ditambahkan untuk menghasilkan adonan yang lembut. Itu adonan kemudian dilapis melalui pelletizer
(MUZL 180, Jiangsu Muyang Group Co., Ltd., Yangzhou, China). Pelet dikeringkan dalam oven pada 40 ° C.
Setelah kering, diet dipecah dan diayak ukuran pelet yang tepat. Semua makanan disegel dalam kantong
plastik dan disimpan di −20 ° C hingga digunakan.

3. Ikan dan percobaan makan

Yangzhou (Jiangsu, Cina). Sebelum percobaan, ikan dipelihara di beberapa kandang (1 × 1 × 1,5 m, L: W:
H) dengan memberi makan diet komersial (pakan No. 191, kelompok pakan Tongwei Co, Ltd, Wuxi, Cina)
mengandung Protein 32% dan 5% lipid selama 2 minggu. Setelah aklimatisasi, 360 ikan dari ukuran yang
sama (berat rata-rata: 37,98 ± 0,07 g) secara acak di tributed ke 24 keramba jaring apung (1 × 1 × 1,5 m,
L: W: H) pada tingkat 15 gr untuk tiap kandang. Ikan di setiap kandang secara acak diberi satu dari
delapan ekor diet perimental. Setiap diet diuji dalam rangkap tiga. Ikan diberi makan dengan tangan
untuk kenyang yang jelas tiga kali sehari (07:30, 11:30 dan 16:30) untuk 11 minggu. Selama uji coba
makan, ikan dipelihara di bawah ini kondisi: suhu air berkisar antara 26 hingga 29 ° C; larut oksigen
dipertahankan pada 5,0-6,0 mg / L; pH berfluktuasi menjadi- tween7.1-7.3; dan nitrogen amonia total
dijaga <0,04 mg / L.
4. Koleksi sample

Pada akhir percobaan makan, ikan kelaparan selama 24 jam untuk mengungsi isi saluran pencernaan
sebelum pengambilan sampel. Empat ikan berlari- dikumpulkan dari setiap kandang (dengan total 12
ikan dari masing-masing pengobatan), dan dibius dalam MS-222 yang diencerkan (tricaine
methanesulfonate, Sigma, USA) pada konsentrasi 100 mg / L. The solu- tion dinetralkan dengan NaOH
sebelum digunakan, karena MS-222 telah terbukti lebih aman dan lebih efektif untuk hewan akuatik
pada pH netral (Paduano et al. 2013). Kemudian, ikan ini diambil sampelnya untuk hati, yang disimpan
dalam nitrogen cair untuk analisis selanjutnya.

5.