Universitas Sumatera Utara

ANALISIS Escherichia coli SEBELUM DAN SESUDAH
PENAMBAHAN SERBUK BIJI KELOR (Moringa oleifera Lam)

PADA AIR SUMUR GALI
SKRIPSI
OLEH:
YUNI PUTRI RANGKUTI

NIM 151524095
PROGRAM STUDI EKSTENSI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2018
Universitas Sumatera Utara

ANALISIS Escherichia coli SEBELUM DAN SESUDAH
PENAMBAHAN SERBUK BIJI KELOR (Moringa oleifera Lam)
PADA AIR SUMUR GALI
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh

Gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
OLEH:
YUNI PUTRI RANGKUTI

NIM 151524095
PROGRAM STUDI EKSTENSI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2018

iii
KATA PENGANTAR
Bismillahirrahmanirrahim,
Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT atas segala limpahan
berkat, rahmat dan karunia Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian
dan penyusunan skripsi ini. Skripsi ini di susun untuk melengkapi salah satu syarat
mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera
Utara, yang berjudul “Analisis Escherichia coli Sebelum dan Sesudah Penambahan
Serbuk Biji Kelor (Moringa oleifera Lam) Pada Air Sumur Gali”.
Pada kesempatan ini dengan segala kerendahan hati penulis mengucapkan
terima kasih yang sebesar-besarnya kepada Ibu Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt.,
selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara Medan. Ibu Dra.
Sudarmi, M.Si., Apt., dan Bapak Popi Patilaya, S.Si., M.Sc., Apt., selaku
pembimbing yang telah membimbing dan memberikan petunjuk serta saran-saran
selama penelitian hingga selesai nya skripsi ini. Ibu Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt.,
selaku dosen penguji dan Bapak Drs. Awaluddin Saragih, M.Si., Apt., selaku dosen
penguji yang telah memberikan kritik, saran dan arahan kepada penulis dalam
menyelesaikan skripsi ini dan telah memberikan izin dan fasilitas untuk penulis
sehingga dapat mengerjakan dan menyelesaikan penelitian. Bapak dan Ibu Staf
Pengajar Fakultas Farmasi USU Medan yang telah mendidik selama perkuliahan.
Penulis mengucapkan terima kasih kepada kedua orang tua tercinta,
Ayahanda Agus Sanip Rangkuti dan Ibunda Masrifa Tanjung, atas segala doa dan
dukungannya serta keridhaannya bagi penulis dalam menempuh dan menyelesaikan
iv
pendidikan, juga untuk adik-adikku Ismail Afif Rangkuti dan Pikri Halim Rangkuti
serta sahabat bidsyur atas doa, nasehat serta pengorbanan baik moril maupun
materil dalam penyelesaian penelitian dan bahan skripsi ini. Penulis juga
mengucapkan terima kasih kepada teman-teman Farmasi Ekstensi 2015, atas doa
dan dukungannya.
Penulis menyadari sepenuhnya bahwa dalam penulisan skripsi ini masih
jauh dari kesempurnaan, oleh karena itu penulis menerima kritik dan saran demi
kesempurnaan skripsi ini. Akhirnya penulis berharap semoga skripsi ini dapat
memberi manfaat bagi kita semua.
Medan, November 2017

Penulis,
Yuni Putri Rangkuti

NIM 151524095
v
vi
ANALISIS Escherichia coli SEBELUM DAN SESUDAH PENAMBAHAN
SERBUK BIJI KELOR (Moringa oleifera Lam) PADA
AIR SUMUR GALI
ABSTRAK
Air merupakan sumber daya alam yang diperlukan untuk hajat hidup orang
banyak, bahkan oleh semua makhluk hidup. Air yang digunakan sebagai kebutuhan
sehari-hari, sebaiknya tidak bewarna, tidak berasa, tidak berbau, dan jernih.
Penentuan kualitas air secara mikrobiologis menurut APHA (American Public
Health Association) dan WHO (World Health Organization) dilakukan berdasarkan
analisis adanya indikator, yaitu bakteri golongan Coli Fecal. Oleh karena itu
PDAM menggunakan kaporit untuk membunuh bakteri patogen dalam air. Salah
satu bahan untuk penjernihan air yang dapat digunakan adalah serbuk biji kelor
(Moringa oleifera Lam). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui karakteristik
simplisia biji kelor, menganalisis jumlah koloni E. coli sebelum dan sesudah
penambahan serbuk biji kelor.
Metode penelitian yang dilakukan adalah penelitian yang eksperimental
yaitu meliputi pengambilan sampel dengan konsentrasi 0; 0,00125; 0,0025; 0,005;
0,01%, identifikasi sampel, karakterisasi simplisia, pengolahan sampel, uji
mikrobiologi dilakukan dengan Angka Lempeng Total dan identifikasi
Escherichia coli untuk memastikan koloni bakteri yang ada dalam air sumur gali di
jalan Bunga Teratai X Pasar 2 Padang Bulan Medan.
Hasil penelitian menunjukkan jumlah koloni sebelum penambahan biji
kelor 2,1 x 102 kol/g sedangkan setelah penambahan 0,00125% biji kelor yaitu 4,7
x 102 kol/g; 0,0025% yaitu 2,0 x 102 kol/g; 0,005% yaitu 3,5 x 101 kol/g; 0,01%
yaitu 0 kol/g. Hasil identifikasi menunjukkan positif bakteri Escherichia coli
ditandai dengan koloni berwarna hijau metalik dan pengecatan gram didapat gram
negatif berbentuk batang berwarna merah muda. Karakteristik simplisia biji kelor
meliputi pemeriksaan mikroskopik parenkim dengan minyak atsiri, sklerenkim,
berkas pembuluh dan serat sklerenkim. kadar air 2,46%; kadar sari larut air
21,77%; kadar sari larut etanol 13,07%; kadar abu total 2,05% dan kadar abu tidak
larut dalam asam 0,79%. Serbuk biji kelor dengan konsentrasi 0,01% efektif dalam
membunuh koloni Koloni Escherichia coli pada air sumur gali.
Kata kunci: air sumur gali, angka lempeng total, Escherichia coli, serbuk biji
kelor
vii
ANALYSIS OF Escherichia coli BEFORE AND AFTER ADDITION
MORINGA SEED POWDER (Moringa oleifera Lam) IN
DUG WELL WATER
ABSTRACT
Water is a natural resource that is necessary for the living of many people,
even by all living creatures. Water for daily activity must be colorless, tasteless,
odorless, clear. Water quality determination of microbiological according to APHA
(American Public Health Association) and WHO (World Health Organization) is
based on presence analysis of indicator, PDAM use chlorine to kill pathogens in
water. One of natural source for water purification that can be used is moringa seed
powder (Moringa oleifera Lam). The purpose of this study is to determine the
characteristics of moringa seed powder, analysis of Escherichia coli before and
after addition moringa seed powder.
The method used is an experimental study that includes sampling at a
concentration of 0; 0.00125; 0.0025; 0.005; 0.01%, sample identification, simplicia
characterization, sample processing, microbiological testing conducted by Total
Plate Count and identification of Escherichia coli to ensure colonies of bacteria in
the dug well water in Jl. Bunga Teratai X Pasar 2 Padang Bulan Medan.
The results showed the number of colonies before the addition of moringa
seed powder 2.1 x 102 col/g, while after the addition of 0.00125% of moringa seed
powder at 4.7 x 102 col/g; 0.0025% is 2.0 x 102 col/g; 0.005% is 3.5 x 101 col/g;
0.01% is 0 col/g. Identification result positive bacteria Escherichia coli colonies are
marked with a green metallic and Gram coloring showed gram-negative, shaped
basil pink. Characteristics of moringa seed powder include microscopic
examination of the parenchyma with essential oils, sklerenkim, file vessels, and
sklerenkim fibers. Water content 2.45%; water soluble extract content 21.77%;
ethanol soluble extract content 13.07%; total ash content 2.05% and ash content
acid insoluble 0.79%. Moringa seed powder at a concentration 0.01% kill colonies
Escherichia coli in dug well water effectively.
Keywords: dug well water, total plate count, Escherichia coli, moringa seed
powder
viii
DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL ........................................................................................................ i
HALAMAN JUDUL .................................................................................. ii
LEMBAR PENGESAHAN ........................................................................ iii
KATA PENGANTAR ................................................................................ iv
SURAT PERNYATAAN ........................................................................... vi
ABSTRAK .................................................................................................. vii
ABTRACT .................................................................................................. viii
DAFTAR ISI ............................................................................................... ix
DAFTAR TABEL ....................................................................................... xiii
DAFTAR GAMBAR .................................................................................. xiv
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... xv
BAB I PENDAHULUAN ........................................................................... 1
1.1 Latar Belakang .......................................................................... 1
1.2 Perumusan Masalah .................................................................. 3
1.3 Hipotesis .................................................................................... 3
1.4 Tujuan Penelitian ...................................................................... 4
1.5 Manfaat Penelitian .................................................................... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ................................................................ 5
2.1 Uraian Tumbuhan....................................................................... 5
2.1.1 Sistematika Tumbuhan .................................................... 5
2.1.2 Nama Daerah ................................................................... 5
2.1.3 Morfologi Tumbuhan ...................................................... 5
ix
2.1.4 Kandungan Kimia ........................................................... 6
2.1.5 Khasiat Tumbuhan ......................................................... 6
2.2 Air .............................................................................................. 7
2.3 Sumur Gali ................................................................................ 10
2.4 Simplisia .................................................................................... 11
2.5 Sterilisasi ................................................................................... 11
2.5.1 Sterilisasi Panas Kering ................................................... 12
2.5.2 Sterilisasi Panas Basah .................................................... 13
2.6 Bakteri ....................................................................................... 14
2.6.1 Uraian Umum .................................................................. 14
2.6.2 Escherichia coli ............................................................... 15
2.7 Metode Uji Angka Lempeng Total ........................................... 18
BAB III METODE PENELITIAN .............................................................. 20
3.1 Tempat dan Waktu Penelitian .................................................... 20
3.2 Metode Pengambilan Sampel ..................................................... 20
3.3 Alat dan Bahan ........................................................................... 20
3.3.1 Alat .................................................................................. 20
3.3.2 Bahan ............................................................................... 21
3.4 Pengumpulan Sampel dan Pengolahan Bahan Tumbuhan ......... 21
3.4.1 Identifikasi Tumbuhan .................................................... 21
3.4.2 Pengumpulan Bahan Tumbuhan ..................................... 21
3.4.3 Pembuatan Serbuk Biji Kelor .......................................... 21
3.4.4 Pengambilan air sumur gali ............................................. 22
3.4.5 Pengolahan Sampel ......................................................... 22
x
3.5 Pembuatan Media ....................................................................... 23
3.5.1 Media Lactose Broth ....................................................... 23
3.5.2 Media Plate Count Agar ................................................. 23
3.5.3 Media Eosin Methylene Blue Agar ................................. 24
3.6 Sterilisasi Alat ............................................................................ 24
3.7 Karakterisasi Simplisia............................................................... 24
3.7.1 Pemeriksaan Makroskopik ............................................... 24
3.7.2 Pemeriksaan Mikroskopik................................................ 25
3.7.3 Penetapan Kadar Air ........................................................ 25
3.7.4 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air ........................... 25
3.7.5 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol ...................... 26
3.7.6 Penetapan Kadar Abu Total ............................................ 26
3.7.7 Penetapan Kadar Abu yang tidak Larut Asam ................ 27
3.8 Metode Pengujian Angka Lempeng Total ................................. 27
3.8.1 Pengenceran Sampel untuk Uji Angka Lempeng Total .. 27
3.8.2 Uji Angka Lempeng Total ............................................... 28
3.8.3 Identifikasi Escherichia coli ........................................... 29
3.8.3 Pengecatan Gram ............................................................ 29
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ..................................................... 30
4.1 Identitas Tumbuhan ................................................................. 30
4.2 Karakteristik Simplisia ............................................................ 30
4.3 Analisis Angka Lempeng Total .............................................. 31
4.4 Identifikasi Escherichia coli .................................................... 34
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ..................................................... 35
xi
5.1 Kesimpulan .............................................................................. 35
5.2 Saran ........................................................................................ 35
DAFTAR PUSTAKA .................................................................................. 36
xii
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
4.1 Karakterisasi simplisia serbuk biji kelor ..................................... 30
4.3 Tabel nilai ALT sebelum (0%) dan sesudah (0,00125; 0,0025;
0,005; 0,01%) penambahan serbuk biji kelor .............................. 31
xiii
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
2.1 Escherichia coli ....................................................................... 16
4.1 Jumlah koloni Escherichia coli sebelum dan sesudah

penambahan serbuk biji kelor .............................................. 32
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Hasil identifikasi tumbuhan...................................................... 38
2 Sampel yang digunakan ............................................................ 39
3 Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk biji kelor .................... 43
4 Analisis angka lempeng total ................................................... 44
5 Identifikasi Escherichia coli ..................................................... 47
6 Bagan alir penelitian ................................................................. 48
7 Pengolahan sampel untuk uji ALT ........................................... 49
8 Pengenceran sampel untuk uji ALT ......................................... 50
9 Uji ALT sebelum dan sesudah penambahan serbuk biji kelor . 51
10 Identifikasi escherichia coli ..................................................... 52
11 Perhitungan karakterisasi simplisia .......................................... 54
12 Perhitungan jumlah koloni ....................................................... 57
xv
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Air merupakan sumber daya alam yang diperlukan untuk hajat hidup
orang banyak, bahkan oleh semua makhluk hidup. Oleh karena itu, sumber
daya air harus dilindungi agar tetap dapat dimanfaatkan dengan baik oleh
manusia serta makhluk hidup yang lain. Pemanfaatan air untuk berbagai
kepentingan generasi sekarang maupun generasi mendatang (Effendi, 2003).
Sumur merupakan sumber air yang banyak dipergunakan masyarakat
Indonesia. Agar air sumur memenuhi syarat kesehatan sebagai air rumah tangga,
air sumur harus dilindungi terhadap bahaya pengotoran dan pencemaran.
Standar air minum meliputi standar fisik dari suhu, warna, bau, rasa, dan kekeruhan
air. Standar biologi meliputi kuman patogen, dan bakteri golongan Coli. Standar
kimia meliputi derajat keasaman dan bahan kimia (Widyati dan Yuliarsih, 2002).
Penentuan kualitas air secara mikrobiologis menurut APHA (American
Public Health Association) dan WHO (World Health Organization) dilakukan
berdasarkan analisis kehadiran jasad indikator, yaitu bakteri golongan Coli Fecal
yang selalu ditemukan didalam tinja atau hewan berdarah panas, baik yang sehat
maupun yang sakit. Pencemaran materi fekal sangat tidak diharapkan. Pada suatu
kadar tertentu, bakteri E. coli terbukti dapat menyebabkan berbagai infeksi, antara
lain diare, infeksi pada saluran kencing dan meningitis. E. coli tidak menimbulkan
penyakit kecuali apabila bakteri ini hidup dan berkembang dalam jumlah yang
sangat banyak (Nugroho, 2006).
1
Oleh karena itu Perusahaan Daerah Air Minum (PDAM) menggunakan
kaporit untuk membunuh bakteri patogen dalam air. Kandungan klorin yang
terdapat pada kaporit juga diatur dalam PP No. 22 Tahun 2001 yaitu sebesar 0,03
ppm (mg/L). Akan tetapi, penggunaan bahan kimia kaporit (Ca(ClO) 2) oleh PDAM
secara terus menerus akan menyebabkan gangguan fungsi ginjal dan merusak
vitamin B, C, E dalam tubuh (Latif, 2014).
Salah satu bahan untuk penjernihan air yang dapat digunakan
adalah serbuk biji kelor (Moringa oleifera Lam). Dari beberapa hasil penelitian
menunjukkan bahwa serbuk biji kelor ternyata dapat digunakan sebagai
pengabsorbsi, menggumpalkan sekaligus penjernihan air. Hal ini disebabkan
karena adanya kandungan bahan aktif 4-alfa-4 rhamnosilox-benzil-isothiocynate
yang terkandung dalam biji kelor (Latif, 2012).
Salah satu cara untuk mengendalikan mutu simplisia dengan melakukan
standarisasi simplisia. Standarisasi simplisia mempunyai pengertian bahwa
simplisia yang digunakan untuk obat sebagai bahan baku harus memenuhi
persyaratan tertentu. Parameter mutu simplisia meliputi susut pengeringan, kadar
air, kadar abu total, kadar abu tidak larut dalam asam, kadar sari larut air dan kadar
sari larut etanol. Untuk uji kebenaran bahwa dilakukan uji makroskopik (Ditjen
POM, 2000).
Peneliti dari Universitas Gadjah Mada melaporkan bahwa serbuk biji kelor
mampu mengisolasi bakteri secara luar biasa, yaitu 90% dari total bakteri E. coli
dalam 1 liter air selama 2 menit. Hasil penelitian ini juga membuktikan bahwa
serbuk biji ini mampu menjernihkan air, sehingga relatif aman untuk diminum. Biji
kelor (Moringa oleifera Lam) dipilih sebagai bahan percobaan, karena cara
2
penjernihan ini sangat mudah dan dapat digunakan di daerah pedesaan yang banyak
ditumbuhi pohon kelor (Latif, 2014).
Berdasarkan uraian diatas, agar serbuk biji kelor dapat dimanfaatkan secara
efektif maka konsentrasi dalam penggunaan serbuk biji kelor harus diketahui. Oleh
karena itu, dilakukan penelitian analisis Escherichia coli sebelum dan sesudah
penambahan serbuk biji kelor (Moringa oleifera Lam) pada air sumur gali untuk
mengetahui potensi biji kelor dalam menurunkan jumlah koloni Escherichia coli
sehingga dapat digunakan dalam pengolahan air sumur gali, serta dilakukan
standarisasi untuk mengetahui mutu simplisia.
1.2 Perumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang di atas, maka perumusan masalah pada
penelitian ini adalah:
a. Bagaimana karakterisik dari simplisia biji kelor?
b. Apakah serbuk biji kelor efektif membunuh koloni Escherichia coli pada air
sumur gali?
1.3 Hipotesis
Berdasarkan perumusan masalah di atas, maka hipotesis pada penelitian ini
adalah:
a. Simplisia biji kelor memiliki karakteristik tertentu dan dapat diperoleh dengan
menggunakan prosedur yang terdapat pada Materia Medika Indonesia.
b. Serbuk biji kelor efektif membunuh koloni Escherichia coli pada air sumur
gali.
3
1.4 Tujuan Penelitian
Tujuan dilakukannya penelitian ini adalah untuk:
a. Mengetahui karakteristik simplisia biji kelor
b. Mengetahui efektifitas serbuk biji kelor dalam membunuh koloni Escherichia
coli pada air sumur gali.
1.5 Manfaat Penelitian
Manfaat dari penelitian ini adalah sebagai infomasi mengenai karakteristik
simplisia dan efektifitas serbuk biji kelor (Moringa oleifera Lam) dalam
membunuh koloni Escherichia coli pada air sumur gali sehingga meningkatkan
pemanfaatannya sebagai penjernih air dan antibakteri.
BAB II
4
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Uraian Tumbuhan
2.1.1 Sistematika tumbuhan
Hasil identifikasi tumbuhan dari Herbarium Medanense, (2017), diperoleh:
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Kelas : Dicotyledoneae
Ordo : Brassicales
Famili : Moringaceae
Genus : Moringa
Spesies : Moringa oleifera Lam
2.1.2 Nama daerah
Kelor (Sunda, Jawa, Bali, Sumatera Utara, dan Lampung), kerol (Buru),
maronggih (Madura), moltong (Flores), kelo (Gorontalo), keloro (Bugis), kawano
(Sumba), ongge (Bima), serta bau fo (Timor) (Tilong, 2012).
2.1.3 Morfologi tumbuhan
Tanaman kelor jenis perdu yang dapat memiliki ketinggian batang 7-11 m
(sumber lain menyatakan 7-12 m). Tanaman ini berupa semak atau pohon dan
mempunyai umur panjang (perenial). Batangnya berkayu (lignosus), tegak,
berwarna putih kotor, berkulit tipis, permukaan kasar dan batang kayunya getas
(mudah patah). Daun tanaman kelor memiliki karakteristik bersirip tidak sempurna,
berbentuk kecil dan menyerupai telur, serta hanya sebesar ujung jari. Bunga
5
tanaman kelor berwarna putih kekuningan dan tudung pelepah bunganya berwarna
hijau (Tilong, 2012).
Sementara itu, buah kelor (Jawa: klentang) berbentuk panjang dan segitiga,
dengan panjang sekitar 20-60 cm. Ketika masih muda, buah tanaman kelor ini
berwarna hijau, namun setelah tua warnanya berubah menjadi cokelat. Bentuk
bijinya bulat, berwarna cokelat kehitaman, sayap bijinya ringan, kulit bijinya
mudah dilepas sehingga meninggalkan biji yang berwarna putih. Bila terlalu kering
di pohon, polong biji akan pecah dan “terbang” kemana-mana (Tilong, 2012).
2.1.4 Kandungan kimia
Biji kelor merupakan bagian dari tanaman kelor yang memiliki protein
dengan konsentrasi tinggi. Protein biji kelor penting untuk diketahui dalam proses
penjernihan air, protein inilah yang berperan sebagai koagualan partikel-partikel
penyebab kekeruhan. Biji kelor juga berperan sebagai koagulan yang efektif karena
adanya zat aktif 4-alfa-4-rhamnosyloxy-benzil-isothiocynate yang terkandung
dalam biji kelor (Khasanah, 2008).
2.1.5 Khasiat tumbuhan
Biji kelor berkhasiat mengatasi mual/muntah. Biji kelor yang masak dan
kering mengandung pterigospermin yang pekat hingga bersifat germisida. Selain
itu, biji tua kelor yang dicampur dengan kulit jeruk dan buah pala dapat menjadi
spiritus kelore composites yang digunakan sebagai stimulan, stomachikum,
carminativum, dan diuretikum (Tilong, 2012).
Biji kelor tua bisa digunakan untuk penjernihan air permukaan, sebagai
pengendap dengan hasil yang memuaskan. Kelor bermanfaat karena memiliki sifat
antimikroba, khususnya terhadap bakteri. Sifat antimikroba inilah yang mampu
6
menghancurkan bakteri, sehingga meskipun di dalam air terdapat bakteri
Escherichia coli (salah satu bakteri yang terdapat di dalam air minum), itu bisa
tereduksi atau mati (Tilong, 2012).
Serbuk biji kelor bertindak sebagai koagulan alami, mampu menjernihkan
air keruh. Bahkan, serbuk biji kelor ini dapat digunakan sebagai metode yang
paling cepat dan sederhana untuk membersihkan air kotor. Serbuk mengikat
padatan dalam air dan menenggelamkannya ke dasar (Tilong, 2012).
2.2 Air
Air merupakan suatu sarana utama meningkatkan derajat kesehatan
masyarakat, karena air merupakan salah satu media dari berbagai macam
penularan, terutama penyakit perut. Melalui penyedian air bersih baik dari segi
kualitas maupun kuantitasnya di suatu daerah, maka penyebaran penyakit menular
dalam hal ini adalah penyakit perut diharapkan bisa ditekan seminimal mungkin
(Sutrisno dan Eni, 1996).
Air merupakan sumber daya alam yang diperlukan untuk hidup orang
banyak, bahkan oleh semua makluk hidup. Oleh karena itu, sumber daya air harus
dilindungi agar tetap dapat dimanfaatkan dengan baik oleh manusia serta makluk
hidup lain. Pemanfaatan air untuk berbagai kepentingan harus dilaksanakan secara
bijaksana, memperhitungkan kepentingan generasi mendatang (Effendi, 2003).
Meskipun rumus kimia air murni dilingkungan laboratorium adalah H2O
namun kenyataannya di alam, rumus tersebut seolah-olah berupa menjadi H2O + X.
Dalam hal ini, X merupakan komponen-komponen yang masuk atau dimasukkan
kedalam badan air sehingga menyebabkan perairan menurunkan kualitasnya dan
7
tidak sesuai dengan peruntukannya. Komponen-komponen tersebut dapat berupa
komponen non-biologis dan komponen biologis. Komponen non-biologis dapat
berupa pupuk/nutrient tanaman, sampah/padatan, minyak, bahan radioaktif,
senyawa anorganik dan mineral, termasuk logam-logam berat. Komponen biologis
dapat berupa mikroba, khususnya mikroba yang bersifat merugikan manusia dan
makhluk lainnya seperti patogen bakteri pencemar (Nugroho, 2006).
Menurut peruntukanya, air pada sumber air dapat dikategorikan menjadi
empat golongan, (Efendi, 2003) yaitu:
a. Golongan A yaitu air yang digunakan sebagai air minum langsung tanpa
pengolahan terlebih dahulu.
b. Golongan B yaitu air yang dapat digunakan sebagai air baku untuk diolah
sebagai air minum dan keperluan rumah tangga lainnya.
c. Golongan C yaitu air yang dapat digunakan untuk keperluan perikanan dan
pertanian.
d. Golongan D yaitu air yang dapat digunakan untuk keperluan pertanian dan
dapat digunakan untuk usaha perkotaaan, industri dan listrik tenaga air.
Menurut Widyati dan Yuliarsih, (2002), ditinjau dari perlu tidaknya
pengolahan sumber air minum dapat dibebankan atas:
a. Air yang langsung dapat diminum, misalnya air tanah yang tidak
terkontaminasi.
b. Air yang perlu pembunuhan desinfektan, misalnya air dalam tanah yang tidak
terkontaminasi.
c. Air yang membutuhkan penyaringan pasir cepat dan dilanjutkan dengan
klorinasi secara tetap.
8
Menurut Widyati dan Yuliarsih, (2002), untuk mengelola ketiga jenis air
tersebut, secara umum dapat dibedakan menjadi sebagai berikut:
a. Pengolahan secara alamiah (sistem sedimentasi)
Dilakukan dengan penyimpanan/pengendapan (purifikasi). Penyimpanan air
yang cukup tinggi asal dijaga agar tempat penampungan terhindar dari
kontaminasi dengan pengawasan yang baik.
b. Pengolahan air dengan penyaringan (sistem filtrasi)
Dalam proses ini dikenal dua jenis saringan, sebagai berikut:
 Saringan pasir lambat (slow sand filter) dimana aliran air hanya
berdasarkan gaya gravitasi.
 Saringan pasir cepat (rapid sand filter) dalam hal ini aliran berdasarkan
tekanan dan perlu adanya pengolahan air sebelumnya, misalnya dengan
menambahkan zat koagulan (zat kimia untuk mempercepat proses
penjernihan).
c. Pengolahan air dengan menambahkan zat kimia (sistem desinfektan)
Adapun zat kimia yang digunakan dalam proses ini, sebagai berikut:
 Zat koagulan yaitu zat kimia yang berguna untuk mempercepat proses
penjernihan.
 Zat klor yaitu proses yang dinamakan dengan klorinasi, yaitu bertujuan
untuk membunuh bibit penyakit (kuman) dalam air.
d. Pengolahan air dengan mengalirkan udara (aeration)
Proses ini bertujuan untuk:
 Menghilangkan rasa dan bau yang tidak enak;
 Menghilangkan gas-gas yang tidak dibutuhkan, misalnya;
9
 CO2, metan, H2S, dan lain-lain
 Menaikkan pH air
 Menambahkan gas-gas yang diperlukan.
e. Memanaskan air hingga mendidih
Pada waktu klorinasi, kadar klor sisa dalam air untuk air minum adalah 0,1
ppm-0,2 ppm, maksimal 0,4 ppm.
f. Sistem koagulasi
Sistem pembersihan dan penjernihan air dengan cara keeping-keping kotoran
digumpalkan dengan zat penggumpal, seperti tawas, kapur, dan soda.
2.3 Sumur Gali
Sumur merupakan sumber air yang banyak dipergunakan masyarakat
Indonesia. Agar air sumur memenuhi syarat kesehatan sebagai air rumah tangga,
air sumur harus dilindungi terhadap bahaya pengotoran dan pencemaran (Widyati
dan Yuliarsih, 2002).
Menurut Widyati dan Yuliarsih, (2002), sumur yang baik harus memenuhi
syarat-syarat sebagai berikut:
a. Lokasi/tempat yaitu jarak sumur dengan WC minimum 10 meter.
b. Konstruksi yaitu dinding sumur satu meter diatas tanah dan tiga meter dalam
tanah harus dibuat dari tembok (disemen) yang tidak tembus air agar
perembesan air dari sekitar tidak terjadi.
Menurut Chandra, (2007), secara teknis sumur dapat dibagi menjadi 2 jenis:
a. Sumur dangkal (shallow well)
10
Sumur semacam ini memiliki sumber air yang berasal dari resapan air hujan di
atas permukaan bumi terutama di daerah dataran rendah. Jenis sumur ini
banyak terdapat di Indonesia dan mudah sekali terkontaminasi air kotor yang
berasal dari kegiatan mandi-cuci-kakus (MCK) sehingga persyaratan sanitasi
yang ada perlu diperhatikan.
b. Sumur dalam (deep well)
sumur ini memiliki sumber air yang berasal dari proses purifikasi alami air
hujan oleh lapisan kulit bumi menjadi air tanah. Sumber airnya tidak
terkontaminasi dan memenuhi persyaratan sanitasi.
2.4 Simplisia
Simplisia atau herbal adalah bahan alam yang telah dikeringkan yang
digunakan untuk pengobatan dan belum mengalami pengolahan. Kecuali
dinyatakan lain suhu pengeringan simplisia tidak lebih dari 60 derajat (BPOM R.
I., 2012).
Pembuatan serbuk simplisia merupakan proses awal pembuatan ekstrak.
Serbuk simplisia dibuat dari simplisia utuh atau potongan-potongan halus simplisia
yang sudah dikeringkan melalui proses pembuatan serbuk dengan alat tanpa
menyebabkan kerusakan atau kehilangan kandungan kimia yang dibutuhkan dan
diayak hingga diperoleh serbuk dengan derajat kehalusan tertentu. Derajat
kehalusan serbuk simplisia terdiri dari serbuk sangat kasar, kasar, agak kasar,
halus, dan sangat halus (Kemenkes R. I., 2010).
Penyiapan simplisia kering dapat dilakukan dari bahan segar yang telah
melalui proses tersebut di atas atau dari bahan kering yang diperoleh dari pemasok.
11
Sortasi kering dilakukan untuk memisahkan kotoran, bahan organik asing, dan
simplisia yang rusak akibat proses sebelumnya. Sortasi kering ini juga dilakukan
untuk memilih simplisia kering yang bermutu baik (BPOM R. I., 2012).
Simplisia dibuat serbuk simplisia dengan peralatan tertentu sampai derajat
kehalusan tertentu. Proses ini mempengaruhi mutu ekstrak, makin halus serbuk
simplisia, proses ekstraksi makin efektif dan efisien. Namun makin halus serbuk
maka makin rumit secara teknologi peralatan untuk tahapan filtrasi (BPOM R. I.,
2012).
2.5 Sterilisasi
Bahan atau peralatan yang dipergunakan dalam bidang mikrobiologi harus
dan dalam keadaan steril. Steril artinya tidak didapatkan mikroba yang tidak
diharapkan kehadirannya, baik yang mengganggu atau merusak media atau
mengganggu kehidupan dan proses yang sedang dikerjakan. Setiap
proses baik fisika, kimia, dan mekanik yang membunuh semua bentuk hidup
terutama mikroorganisme disebut dengan sterilisasi (Waluyo, 2007).
Metode sterilisasi dibagi menjadi dua, yaitu metode fisik dan metode
kimia. Metode sterilisasi kimia dilakukan dengan menggunakan bahan-bahan
kimia, sedangkan metode sterilisasi fisik dapat dilakukan dengan cara panas baik
panas kering maupun panas basah, radiasi dan filtrasi (Pratiwi, 2008).
Metode sterilisasi panas merupakan metode yang paling dapat dipercaya
dan banyak digunakan. Metode sterilisasi ini digunakan untuk bahan yang tahan
panas. Metode sterilisasi panas dengan penggunaan uap air disebut metode
sterilisasi panas lembab atau sterilisasi basah. Metode sterilisasi panas tanpa
12
kelembapan (tanpa penggunaan uap air) disebut metode sterilisasi panas kering
atau sterlisasi kering (Pratiwi, 2008).
2.5.1 Sterilisasi panas kering
Umumnya bahan yang sensitif terhadap kelembapan digunakan metode
sterilisasi panas kering pada temperatur 160-180 0C. Metode ini tidak dapat
digunakan untuk bahan yang terbuat dari karet atau plastik, waktu sterilisasinya
lama dan berdaya penetrasi rendah. Metode sterilisasi kering ini tidak memerlukan
air sehingga tidak ada uap air yang membasahi alat atau bahan yang disterilkan.
Sterilisasi panas kering berfungsi untuk mematikan mikroorganisme dengan cara
mengoksidasi komponen sel ataupun mendenaturasi enzim (Pratiwi, 2008).
Menurut Pratiwi, (2008), metode sterilisasi panas kering terbagi 2, yaitu:
a. Insinerasi (incineration) merupakan metode sterilisasi dengan pembakaran
menggunakan api dari Bunsen dengan temperatur sekitar 350 0C.
b. Udara panas oven yang lebih sederhana dan murah dengan temperatur sekitar
160-170 0C
2.5.2 Sterilisasi panas basah
Metode ini biasanya digunakan untuk bahan yang sensitif panas, dengan
pemanasan pada temperatur 100 0C selama 5-10 menit. Tingkat sterilisasi panas
basah pada temperatur kurang dari 100 0C tergantung pada temperatur dan/ atau
waktu sterilisasi (Pratiwi, 2008).
Menurut Pratiwi, (2008), metode sterilisasi panas basah dibagi 2, yaitu:
a. Dengan perebusan menggunakan air mendidih selama 10 menit pada temperatur
100 0C
13
b. Menggunakan autoklaf, alat serupa pressure cooker dengan pengatur
tekanan dan klep pengaman dengan temperatur di atas 100 ºC yang
dilakukan dengan uap. Prinsip autoklaf adalah terjadinya koagulasi yang
lebih cepat dalam keadaan basah dibandingkan dengan kering.
Proses sterilisasi dengan autoklaf dengan cara mendenaturasi atau
mengkoagulasi protein pada enzim dan membran sel mikroorganisme.
2.6 Bakteri
2.6.1 Uraian umum
Spesies bakteri dapat dibedakan berdasarkan morfologi (bentuk),
komposisi kimia (umumnya dideteksi dengan reaksi kimia), kebutuhan nutrisi,
aktivitas biokimia dan sumber energi (Pratiwi, 2008).
Pertumbuhan dan perkembangan bakteri dipengaruhi oleh:
a. Zat makanan (nutrisi)
Sumber zat makanan bagi bakteri diperoleh dari senyawa karbon, nitrogen,
sulfur, fosfor, unsur logam, vitamin dan air untuk fungsi metabolik dan
pertumbuhannya (Pelczar dan Chan, 1988).
b. Temperatur
Menurut Pelczar dan Chan, (1988), proses pertumbuhan bakteri tergantung
pada reaksi kimiawi dan laju reaksi kimia yang dipengaruhi oleh temperatur.
Berdasarkan hal tersebut maka bakteri dapat diklasifikasikan sebagai berikut:
 Bakteri psikofil, yaitu bakteri yang dapat hidup pada temperatur 0-30 0C,
dengan temperatur optimum adalah 10-20 0C.
14
 Bakteri mesofil, yaitu bakteri yang dapat hidup pada temperatur 5-60 0C,
dengan temperatur optimum adalah 25-40 0C.
 Bakteri termofil, yaitu bakteri yang dapat hidup pada temperatur optimum yaitu
55-65 0C.
c. Keasaman dan kebasaan (pH)
Kebanyakan bakteri patogen mempunyai pH optimum pertumbuhan antara
7,2-7,6.
d. Oksigen
Menurut Pratiwi, (2008), Oksigen dapat mempengaruhi pertumbuhan
mikroorganisme, berdasarkan kebutuhan oksigen, bakteri dapat dibedakan menjadi
4 kelompok antara lain:
 Aerob yaitu bakteri yang membutuhkan oksigen dalam pertumbuhannya.
 Anaerob yaitu bakteri yang dapat tumbuh tanpa oksigen.
 Anaerob fakultatif yaitu bakteri yang dapat tumbuh dengan atau tanpa adanya
oksigen.
 Mikroaerofilik yaitu bakteri yang dapat tumbuh baik dengan adanya sedikit
oksigen.
e. Tekanan osmosa
Medium yang baik bagi pertumbuhan bakteri adalah medium isotonis
terhadap isi sel bakteri (Pelczar dan Chan, 1988).
f. Kelembapan
Secara umum bakteri tumbuh dan berkembang biak dengan baik pada
lingkungan yang lembab. Kebutuhan akan air tergantung dari jenis bakterinya
(Pelczar dan Chan, 1988).
15
2.6.2. Escherichia coli
Penentuan kualitas air secara mikrobiologis menurut APHA (American
Public Health Association) dan WHO (World Health Organization) dilakukan
berdasarkan analisis kehadiran jasad indikator, yaitu bakteri golongan Coli Fecal
yang selalu ditemukan didalam tinja atau hewan berdarah panas, baik yang sehat
maupun yang sakit. Selain itu, prosedur pengujian kualitas air menggunakan Coli
Fecal bersifat spesifik, artinya pengujian tidak memberikan hasil positif yang salah
dan bersifat sangat sensitif, yang artinya kualitas air dapat ditentukan meskipun
Coli Fecal tersebut terdapat dalam jumlah yang sangat kecil, misalnya hanya
ditemukan 1 sel per milliliter sampel air (Nugroho, 2006).
Gambar 2.1 Escherichia coli (Nugroho, 2006)
Golongan bakteri Coli merupakan indikator alami baik di dalam air yang
tampak jernih maupun air kotor, yang memiliki karakteristik sebagai berikut:
berbentuk batang, gram negatif, tidak membentuk spora, pada temperature 37 0C
dapat memfermentasikan laktosa dengan membentuk asam dan dalam 48 jam dapat
membentuk gas (Nugroho, 2006).
Menurut Nugroho, (2006), bakteri Coli terdiri dari 3 kelompok, yaitu:
16
a. Kelompok Escherichia, misalnya Escherichia coli, Escherichia freundii dan
Escherichia intermedia
b. Kelompok Aerobacter, misalnya Aerobacter aerogenes, A. cloacae.
c. Kelompok Klebsiela, misalnya Klebsiela pneumonia
Dari ketiga kelompok tersebut, kelompok Escherichia khususnya
Escherichia coli merupakan bakteri yang paling tidak dikehendakinya di dalam
air minum maupun makanan. Aerobachter dan Klebsiela yang biasa
disebut golongan perantara, mempunyai sifat seperti Coli Fecal, tetapi tidak
dapat hidup pada suhu di atas 37 0C dan lebih sering dijumpai di dalam
tanah dan air daripada di dalam saluran pencernaan makanan manusia.
Umumnya genus-genus tersebut tidak patogen. Oleh karena itu kelompok
Aerobacter dan Klebsiela disebut kelompok bakteri Coli Non-Fecal
(Non-Fecal Coliform Bacterial/Non-FCB) (Nugroho, 2006).
Escherichia mula-mula ditemukan oleh Escherich pada 1885 dari feses
seorang bayi. Hasil penelitiannya membuktikan bahwa Escherichia juga
banyak ditemukan pada saluran pencernaan makanan manusia dewasa dan
hewan-hewan berdarah panas. Bakteri ini dapat hidup pada suhu 42 0C. Dari
sekitar 100-150 gram feses yang setiap hari dikeluarkan oleh seorang
manusia, ternyata di dalamnya mengandung sekitar 3 x 10 11(300 milyar) sel bakteri
Coli. Oleh karena itu, kelompok Escherichia lebih dikenal dengan sebutan
kelompok bakteri Coli Fecal (Fecal Coliform Bacterial/ FCB). Sejak saat itu,
bila dalam sumber air ditemukan bakteri Coli Fecal maka hal ini dapat
menjadi indikasi bahwa air tersebut telah mengalami pencemaran oleh feses
manusia dewasa atau hewan-hewan berdarah panas (Nugroho, 2006).
17
Pencemaran materi fekal sangat tidak diharapkan, bakteri E. coli terbukti
dapat menyebabkan berbagai infeksi, antara lain diare, infeksi pada saluran kencing
dan meningitis (Nugroho, 2006).
2.7 Metode uji angka lempeng total
Pemeriksaan mikrobiologi paling sensitif, meskipun bukan yang paling
cepat, terhadap indikasi pencemaran persediaan air minum. Tidak seperti analisis
kimia atau fisik, namun ini adalah mencari jumlah yang sangat kecil dari ogamisme
layak dan tidak. Karena media pertumbuhan dan kondisi inkubasi, serta sifat dan
usia sampel air, dapat mempengaruhi spesies terisolasi dan jumlah dalam
pemeriksaan mikrobiologi (WHO, 1993).
Pengukuran kuantitatif populasi mikroba sering diperlakukan dalam
berbagai penelaahan mikrobilogi. Pada umumnya pengukuran dasar populasi
mikroba dengan penentuan jumlah sel dan penentuan massa sel. Pengukuran
jumlah sel biasanya dilakukan untuk mikroba bersel tunggal; sedangkan penentuan
massa sel dapat dilakukan tidak hanya pada mikroba bersel satu tetapi juga untuk
mikroba berfilamen (misalnya jamur) (Waluyo, 2004).
Perhitungan jumlah mikroorganisme dengan cara viable count atau disebut
juga sebagai standard plate count didasarkan pada asumsi bahwa setiap sel
mikroorganisme hidup dalam suspense akan tumbuh menjadi satu koloni setelah
diinkubasikan dalam media biakan dan lingkungan yang sesuai. Setelah masa
inkubasi, jumlah koloni yang tumbuh dihitung dan merupakan perkiraan atau
18
dugaan dari jumlah mikroorganisme dalam suspensi tersebut (Lay dan Hastowo,
1994).
Metode hitungan cawan didasarkan pada pada anggapan bahwa setiap sel
yang dapat hidup akan berkembang menjadi suatu koloni. Jumlah koloni yang
muncul pada cawan merupakan suatu indeks jumlah mikroba yang hidup
terkandung dalam sampel. Hal yang perlu dikuasai dalam hal ini adalah teknik
pengenceran. Setelah inkubasi, jumlah koloni masing-masing cawan diamati.
Untuk memenuhi persyaratan statistik, cawan yang dipilih untuk dihitung
mengandung 30-300 koloni. Untuk memenuhi syarat tersebut harus dilakukan
sederetan pengenceran dan pencawanan. Jumlah mikroba dalam sampel ditentukan
dengan mengalikan jumlah koloni dengan faktor pengenceran pada cawan yang
bersangkutan (Waluyo, 2004).
Prinsip dari metode hitungan cawan adalah bila sel mikroba yang masih
hidup ditumbuhkan pada medium, maka mikroba tersebut akan berkembang biak
dan membentuk koloni yang dapat dilihat langsung, dan kemudian dihitung tanpa
menggunakan mikroskop (Waluyo, 2004).
Menurut Waluyo, (2004), metode ini merupakan cara paling sensitif untuk
menentukan jumlah jasad renik, dengan alasan:
 Hanya sel mikroba yang hidup yang dapat dihitung.
 Beberapa jasad renik dapat dihitung sekaligus.
 Dapat digunakan untuk isolasi dan identifikasi mikroba, karena koloni yang
terbentuk mungkin berasal dari mikroba yang mempunyai penampakan
spesifik.
19
Selain keuntungan-keuntungan tersebut di atas, mikroba hitungan cawan
juga mempunyai kelemahan sebagai berikut:
 Hasil perhitungan tidak menunjukkan jumlah sel yang sebenarnya, karena
beberapa sel yang berdekatan mungkin membentuk koloni.
 Mikroba yang ditumbuhkan harus dapat tumbuh pada medium padat dan
membentuk koloni yang kompak, jelas, tidak menyebar.
 Memerlukan persiapan dan waktu inkubasi relatif lama sehingga pertumbuhan
koloni dapat dihitung.
20
BAB III
METODE PENELITIAN
Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode penelitian
eksperimental yaitu meliputi pengambilan sampel, identifikasi sampel, pengolahan
sampel, uji mikrobiologi.
3.1 Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian dilakukan di Laboratorium Fitokimia dan Laboratorium
Mikrobiologi, Fakultas Farmasi, Universitas Sumatera Utara. Penelitian ini
dilakukan pada bulan maret hingga juni 2017.
3.2 Metode Pengambilan Sampel
Metode pengambilan sampel dilakukan secara purposive yang dikenal juga
sebagai sampling pertimbangan dimana sampel ditentukan atas dasar pertimbangan
bahwa sampel yang diambil dapat mewakili populasi atau pengambilan sampel
secara sengaja sesuai dengan persyaratan sampel yang diperlukan.
3.3 Alat dan Bahan
3.3.1 Alat
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah alat-alat gelas,
aluminium foil, alat tanur, seperangkat alat destilasi penetapan kadar air, autoklaf
(Fisons), blender (Philips), benang wol, blender (Philips), botol kaca, inkubator
(Fiber Scientific), cawan petri, jarum ose, kasa, kamera digital (Samsung), kaca
21
objek, kapas, kertas perkamen, kompor gas (Rinnai), laminar air flow cabinet
(Astec HLF 1200L), lampu bunsen, lemari pendingin (Toshiba), mikroskop
(Olympus), oven (Memmert), penangas air, pinset, pipet mikro (Eppendorf), pipet
tetes, spidol (Snowman).
3.3.2 Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah serbuk biji kelor,
air sumur, air suling, alkohol 70%, eosin methylene blue agar (Oxoid), kloralhidrat,
lactosa broth (Merck), plate count agar (Merck), triphenyltetrazolium chloride 1%.
3.4 Pengumpulan Sampel dan Pengolahan Bahan Tumbuhan
3.4.1 Identifikasi tumbuhan
Identifikasi biji kelor dilakukan di Herbarium Medanense, Departemen
Biologi FMIPA USU.
3.4.2 Pengumpulan bahan tumbuhan
Pengambilan bahan tumbuhan dilakukan secara purposif yaitu tanpa
membandingkan tumbuhan yang sama pada daerah lain. Bahan yang digunakan
adalah biji kelor tua yang berasal dari Padangsidimpuan, Provinsi Sumatera Utara.
3.4.3 Pembuatan serbuk biji kelor
Prosedur kerja dari pembuatan serbuk biji kelor menurut Khasanah (2008)
adalah sebagai berikut: diambil buah kelor yang sudah tua dan kering, dikupas kulit
luarnya, sehingga diperoleh biji kelor yang masih terbungkus kulit luar yang
bewarna cokelat. Biji kelor yang terbungkus kulit tersebut dikupas lagi, sehingga
diperoleh biji kelor yang bewarna putih, biji kelor dikeringkan pada lemari
pengering selama 8 hari (biji menjadi keras), kemudian biji kelor dibungkus
22
dengan menggunakan alumanium foil, lalu dikeringkan dengan menggunakan oven
selama ± 48 jam pada suhu 50 0C. Setelah biji kelor kering, dihaluskan dengan
menggunakan mortal dan diayak dengan menggunakan ayakan mesh 40 sehingga
diperoleh serbuk yang bewarna putih, serbuk biji kelor dikeringkan dalam oven
selama ± 24 jam. Dapat dilihat pada Lampiran 6 halaman 48.
3.4.4 Pengambilan air sumur gali
Pengambilan air sumur gali di Jl. Bunga Teratai Pasar 2 Padang Bulan,
Medan. Dengan kriteria air sumur yang diambil adalah :
a. Letak sumur dekat dengan sumber pengotoran (MCK kurang dari 10 m).
b. Sumur digunakan dalam berbagai aktivitas masyarakat disekitarnya.
c. Tidak memenuhi syarat fisik (berwarna dan berbau).
d. Tidak memenuhi syarat konstruksi (tidak memiliki saluran pembuangan air
kotor).
Diambil air dengan menggunakan botol kaca yang sudah disterilkan
(Latif, 2014).
3.4.5 Pengolahan sampel
Serbuk biji kelor ditimbang sebanyak 0,00125%; 0,0025%; 0,005%; 0,01%.
Kemudian masing-masing ditambahkan sedikit air sampai membentuk pasta.
Kemudian ditambahkan 10 ml air, lalu diaduk dan disaring dengan menggunakan
kain kasa. Setelah itu filtratnya dicukupkan kedalam 1 liter air, diaduk selama 15
menit, lalu didiamkan selama 2 jam. Air bersih yang diperoleh kemudian
diambahkan masing-masing 100 ml untuk uji mikrobiologi di laboratorium. Dapat
dilihat pada Lampiran 7 halaman 49.
23
3.5 Pembuatan Media
3.5.1 Media lactose broth
Media lactose broth adalah media yang digunakan untuk memfermentasi
laktosa oleh bakteri dengan konsistensi cair, terdiri dari:
- gelatin pancreatic digest 5 g
- lactose monohidrat 5g
- beef extract 3g
- akuades add 1L
cara pembuatan: 8 gr serbuk lactose broth dicampur dengan 5 gr
laktosa monohidrat. Campuran ini kemudian dilarutkan dalam 1 L akuades, diaduk
hingga larut. Disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 0C selama 15 menit
(Anonim, 2009).
3.5.2 Media plate count agar
Media plate count agar adalah media pertumbuhan mikroorganisme yang
umum digunakan untuk menghitung jumlah bakteri total pada sampel dengan
konsistensi padat, terdiri dari:
- kasein pancreatic digest 5,0 g
- yeast extract 2,5 g
- desxtrose 1,0 g
- agar 15 g
- akuades add 1L
cara pembuatan: 23,5 g serbuk plate count agar disuspensikan dalam 1 L akuades
dengan memanaskannya dalam air mendidih. Media disterilkan dalam autoklaf
pada suhu 121 0C selama 15 menit (Anonim, 2009).
24
3.5.3 Media eosin methylene blue agar
Media eosin methylene blue agar adalah media selektif untuk bakteri
dengan konsistensi padat, terdiri dari:
- peptone 10 g
- lactose 10 g
- dipotassium hidrogen fosfat 2g
- eosin 0.4 g
- methylene blue 0.065 g
- agar 15 g
- akuades add 1L
cara pembuatan: 36 gr serbuk eosin methylene blue agar disuspensikan dalam 1 L
akuades dengan memanaskannya dalam air mendidih. Media disterilkan
dalam autoklaf pada suhu 121 0C selama 15 menit (Anonim, 2009).
3.6 Sterilisasi Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini, disterilkan terlebih dahulu
sebelum dipakai. Alat-alat gelas disterilkan di dalam oven pada suhu 170 0C selama
1 jam. Media disterilkan di autoklaf pada suhu 121 0C selama 15 menit. Jarum ose
dan pinset dipijar dengan lampu Bunsen (Lay dan Hastowo, 1994).
3.7 Karakterisasi Simplisia
3.7.1 Pemeriksaan makroskopik
Pemeriksaan makroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia biji kelor
dengan mengamati bentuk, bau, rasa dan warna (Depkes R. I., 1989).
25
3.7.2 Pemeriksaan mikroskopik
Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia biji kelor.
Serbuk simplisia ditaburkan di atas kaca objek yang telah ditetesi larutan
kloralhidrat dan ditutup dengan kaca penutup, lalu diamati di bawah mikroskop
(Depkes R. I., 1989).
3.7.3 Penetapan kadar air
Penetapan kadar air dilakukan dengan metode azeotropi (destilasi toluen).
Cara penetapan : ke dalam labu alas bulat dimasukkan 200 ml toluena dan 2 ml
akuades, didestilasi selama 2 jam. Toluena didinginkan dan volume air pada tabung
penerima dibaca, kemudian kedalam labu dimasukkan 5 g serbuk simplisia yang
telah ditimbang seksama, dipanaskan hati-hati selama 15 menit, setelah toluena
mendidih, kecepatan tetesan diatur kurang lebih 2 tetes tiap detik, hingga sebagian
air tersuling, kemudian naikkan kecepatan penyulingan hingga 4 tetes tiap detik
lalu bagian dalam pendingin dibilas dengan toluena yang telah jenuh. Penyulingan
dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan mendingin
sampai suhu kamar, setelah air dan toluena memisah sempurna, volume dibaca.
Selisih kedua volume air dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam
bahan yang diperiksa (WHO, 1998).
volume air ml)

adar air simplisia
berat sampel g)
3.7.4 Penetapan kadar sari larut dalam air
Sebanyak 5 g serbuk simplisia dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml air-
kloroform (2,5 ml kloroform dalam aquadest sampai 100 ml) dengan menggunakan
botol bersumbat sambil sesekali dikocok selama 6 jam pertama, kemudian
26
dibiarkan 18 jam dan disaring. Sebanyak 20 ml filtrat diuapkan hingga kering
dalam cawan berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Residu dipanaskan
dalam oven pada suhu 105 oC sampai diperoleh bobot tetap. Kadar sari yang larut
dalam air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes R. I., 1989).
berat sari g)
adar sari larut dalam air
berat sampel g)
3.7.5 Penetapan kadar sari larut dalam etanol
Sebanyak 5 g serbuk simplisia dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml
etanol 96 % dengan menggunakan botol bersumbat sambil sesekali
dikocok selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam dan
disaring. Sebanyak 20 ml filtrat diuapkan hingga kering dalam cawan yang
berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Residu dipanaskan dalam
oven pada suhu 105oC sampai diperoleh bobot tetap. Kadar sari yang larut dalam
air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes R. I., 1989).
berat sari g)
adar sari larut dalam etanol
berat sampel g)
3.7.6 Penetapan kadar abu total
Sebanyak 2,5 g serbuk simplisia yang telah digerus dan ditimbang seksama,
dimasukkan ke dalam krus porselin yang telah dipijar dan
ditara, kemudian diratakan. Kurs porselin bersama isinya dipijarkan perlahan
hingga arang habis, didinginkan, ditimbang sampai diperoleh bobot yang tetap.
Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Depkes R. I.,
1989).
berat abu g)
adar abu total
berat sampel g)
27
3.7.7 Penetapan kadar abu yang tidak larut asam
Abu yang diperoleh pada penetapan kadar abu total dididihkan dengan 25
ml asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut asam dikumpulkan,
disaring dengan kertas saring, lalu cuci dengan air panas. Residu dan kertas saring
dipijarkan sampai diperoleh bobot yang tetap, dinginkan, dan ditimbang beratnya.
Kadar abu yang tidak larut asam dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di
udara (Depkes R. I., 1989).
berat abu g)
adar abu tidak larut dalam asam
berat sampel g)
3.8 Metode Uji Angka Lempeng Total
3.8.1 Pengenceran sampel untuk uji angka lempeng total
a. Sebelum penambahan serbuk biji kelor
Larutan pengencer LB dimasukkan ke dalam tabung reaksi sebanyak 90 mL
dan ditambahkan air sumur gali sebanyak 10 mL secara aseptis, kemudian
dihomogenkan (pengenceran 10-1). Larutan pengencer LB dimasukkan ke dalam 5
buah tabung reaksi masing-masing 9 mL. Pengenceran 10-1 dipipet sebanyak 1 mL
lalu dimasukkan secara aseptis kedalam tabung reaksi pertama dan
dihomogenkan hingga diperoleh pengenceran 10-2. Selanjutnya dilakukan hingga
diperoleh pengenceran 10-6 dapat dilihat pada Lampiran 8 halaman 50 (Purlianto,
2015).
b. Setelah penambahan serbuk biji kelor
Larutan pengencer lactose broth dimasukkan ke dalam tabung reaksi
sebanyak 90 mL dan ditambahkan sampel dengan konsentrasi 0,00125%; 0,0025%;
0,005%; dan 0,01% masing-masing sebanyak 10 mL secara
28
aseptis, kemudian dihomogenkan (pengenceran 10 -1). Larutan pengencer
lactose broth dimasukkan ke dalam 5 buah tabung reaksi masing-masing
9 mL. Pengenceran 10-1 dipipet sebanyak 1 mL lalu dimasukkan secara
aseptis kedalam tabung reaksi pertama dan dihomogenkan hingga
diperoleh pengenceran 10-2. Selanjutnya dilakukan hingga diperoleh
pengenceran 10-6. Dapat dilihat pada Lampiran 8 halaman 50 (Purlianto,
2015).
3.8.2 Uji angka lempeng total
Dipipet masing-masing 1 mL dari pengenceran yang telah dilakukan secara
aseptis kedalam cawan petri dan dibuat duplo. Media plate count agar (PCA) yang
telah ditambahkan 1% triphenyltetrazolium chloride, dituang 15 mL kedalam
setiap cawan petri. Dihomogenkan hingga tersebar merata dan dibiarkan hingga
memadat. Dibuat blanko untuk mengetahui sterilitas
dari pengencer dan media dengan cara menuang pengencer lactose broth (LB)
sebanyak 1mL dan ditambahkan media plate count agar (PCA)
sebanyak 15 mL ke dalam cawan petri dan biarkan memadat. Seluruh
cawan petri diinkubasi terbalik pada suhu 37 0C selama 24 jam hingga
48 jam. Jumlah koloni yang tumbuh diamati dan dihitung, dengan
mengalikan jumlah rata-rata koloni pada cawan dengan faktor
pengenceran yang digunakan. Dapat dilihat pada Lampiran 9 halaman 51
(Purlianto, 2015).
Koloni per gram = jumlah koloni x faktor pengenceran
29
3.8.2 Identifikasi Escherichia coli
Pengenceran 10-1 diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0C lalu diambil 1
sengkelit biakan menggunakan jarum ose. Digoreskan kedalam media EMBA dan
diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0C. Amati hasil koloni warna hijau logam
(metalik) dapat dilihat pada Lampiran 10 halaman 52 (Latif, 2014).
3.8.3 Pengecatan Gram
Objek glas dicuci dengan alkohol 70% lalu difiksasi. Satu tetes akuades
steril diteteskan pada objek glas lalu kedalamnya dimasukkan satu ose biakan dari
media EMBA kemudian dihomogenkan. Ditambahkan satu tetes gentian violet lalu
ditambahkan satu tetes larutan lugol didiamkan 1 menit, diratakan dan difiksasi.
Dicuci objek glas dengan alkohol 70% sampai tetesan terakhir tidak berwarna,
kemudian difiksasi. Diteteskan satu tetes safranin, dibiarkan 1 menit lalu dicuci
dengan akuades steril, kemudian difiksasi. Diteteskan 1-2 tetes minyak imersi.
Diamati dibawah mikroskop perbesaran 40x. Dapat dilihat pada Lampiran 10
halaman 53 (Mansauda dkk, 2014).
30
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Identitas Tumbuhan
Identifikasi tumbuhan biji kelor dilakukan di Herbarium Medanense
Universitas Sumatera Utara. Tumbuhan yang digunakan adalah biji kelor (Moringa
oleifera Lam), suku Moringaceae. Hasil identifikasi tumbuhan dapat dilihat pada
Lampiran 1 halaman 38.
4.2 Karakteristik Simplisia
Pemeriksaan makroskopik pada simplisia biji diperoleh bentuknya yang
menciut, berwarna putih kecoklatan, tidak berbau dan berasa kelat. Simplisia biji
kelor ditunjukkan pada Lampiran 2 halaman 42. Pemeriksaan mikroskopik pada
serbuk biji menunjukkan adanya sel-sel parenkim dengan minyak atsiri,
sklerenkim, parenkim dengan minyak atsiri, berkas pembuluh dengan penebalan
spiral, amilum dan serabut sklerenkim dapat dilihat pada Lampiran 3 halaman 43.
Hasil penetapan kadar air, kadar sari yang larut dalam air, kadar sari yang
larut dalam etanol, kadar abu total dan kadar abu yang tidak larut dalam asam dari
simplisia biji kelor dapat dilihat pada Tabel 4.1 berikut:
Tabel 4.1 Karakterisasi serbuk simplisia serbuk biji kelor (Moringa oleifera
Lam)
No. Penetapan Hasil (%)

1 Penetapan kadar air 2,46
2 Penetapan kadar sari larut air 21,77
3 Penetapan kadar sari larut etanol 13,07
4 Penetapan kadar abu total 2,05
5 Penetapan kadar abu tidak larut dalam asam 0,79
31
Monografi simplisia biji kelor tidak terdaftar di buku Farmakope Herbal
Indonesia (FHI) dan (MMI). Syarat kadar air untuk simplisia pada umumnya
<10%, pada pemeriksaan ini kadar air simplisia biji kelor adalah 2,45%. Apabila
kadar air simplisia lebih besar 10% maka simplisia tersebut akan mudah ditumbuhi
kapang pada saat penyimpanan sehingga mutu simplisia akan menurun.
4.3 Analisis Angka Lempeng Total
Pemeriksaan parameter mikrobiologi untuk mengetahui derajat kontaminasi
air oleh bahan buangan yang berasal dari manusia, hewan, maupun buangan rumah
tangga. Bakteri golongan Coli Fecal merupakan parameter mikrobiologi terpeting
bagi kualitas air bersih. Keberadaan bakteri ini menunjukkan tingkat hygiene yang
rendah yang membahayakan kesehatan . Hasil pengujian air sumur gali
sebelum dan sesudah ditambahkan serbuk biji kelor dapat dilihat pada Tabel 4.2
pada Lampiran 12 halaman 57.
Hasil yang didapat bahwa sebelum penambahan serbuk biji kelor, nilai
angka lempeng total yang diperoleh yaitu lebih tinggi dari angka lempeng total
setelah ditambahkan serbuk biji kelor, kecuali pada konsentrasi 0,00125%.
dapat dilihat pada Lampiran 4 halaman 44. Jumlah koloni yang
didapat pada air sumur gali sebelum penambahan dan setelah penambahan serbuk
biji kelor yaitu dapat dilihat pada Tabel dibawah ini:
Tabel 4.3 Nilai ALT sebelum (0%) dan sesudah (0,00125; 0,0025; 0,005;
0,01%) penambahan serbuk biji kelor
Konsentrasi (%) serbuk biji kelor Nilai ALT (koloni/g)

0 2,1 x 102 ± 2,82
0,00125 4,7 x 102 ± 5,56
0,0025 2,0 x 102 ± 1,41
0,005 3,5 x 101 ± 1,41
0,01 0
32
Pada blanko tidak ditumbuhi koloni bakteri hal ini menandakan bahwa
media dan pereaksi yang digunakan dalam penelitian sudah steril. Pada tabel diatas
dapat dilihat bahwa konsentrasi 0.01% yaitu 0 koloni/g maka efektif menurunkan
jumlah koloni bakteri. Pada konsentrasi 0.00125% pertumbuhan koloni meningkat
dikarenakan konsentrasi yang digunakan terlalu kecil, sehingga menyebabkan
pertumbuhan bakteri. Biji kelor mengandung protein dengan konsentrasi tinggi
yang merupakan sumber karbon senyawa organik sebagai nutrisi untuk
pertumbuhan mikroba (Pelczar dan Chan, 1988).
Pada konsentrasi 0,0025% masih menunjukkan adanya bakteri yang tumbuh
sehingga dianggap tidak efektif, sedangkan pada konsentrasi 0,005% dapat
menurunkan jumlah bakteri yaitu 3,5 x 10 1 koloni/g tapi tidak efektif. Dapat dilihat
pada Gambar berikut:
600
500
Nilai ALT (koloni/g)
400
300
200
100
0
0 0.00125 0.0025 0.005 0.01
Konsentrasi (%) serbuk biji kelor
Gambar 4.1 Nilai ALT koloni Escherichia coli sebelum (0%) dan sesudah
(0,00125; 0,0025; 0,005; 0,01%) penambahan serbuk biji kelor
Biji kelor mengandung protein dengan konsentrasi yang tinggi. Protein biji
kelor penting untuk diketahui dalam proses penjernihan air (Khasanah, 2008).
Beberapa faktor yang menyebabkan kurang efektifnya biji kelor
33
dalam membunuh bakteri adalah penumbukan biji kelor yang dilakukan
secara manual, hasilnya tidak terlalu halus, sehingga perlu dilakukan
pengolahan khusus untuk biji kelor agar hasilnya lebih halus. Apabila
serbuk kelor lebih halus, maka akan mudah larut dalam air (Latif,
2014).
Pengolahan air dengan biji kelor sangat efektif karena air tidak berwarna,
tidak berasa dan tidak berbau dapat dilihat pada Lampiran 2
halaman 39. Namun kekurangannya adalah pengolahan air dengan
biji kelor harus langsung digunakan untuk kebutuhan harian
karena penyimpanan dapat menyebabkan air menjadi berbau
busuk.
Kelor bermanfaat karena memiliki sifat antimikroba, khususnya
terhadap bakteri. Sifat antimikroba inilah yang mampu menghancurkan
bakteri, sehingga meskipun di dalam air terdapat bakteri Escherichia coli
(salah satu bakteri yang terdapat di dalam air minum), itu bisa tereduksi atau mati
(Tilong, 2012).
Biji kelor merupakan bagian dari tanaman kelor yang memiliki
protein dengan konsentrasi tinggi. Protein biji kelor penting untuk
diketahui dalam proses penjernihan air, protein inilah yang berperan
sebagai koagualan partikel-partikel penyebab kekeruhan. Biji kelor juga
berperan sebagai koagulan yang efektif karena adanya zat aktif
4-alfa-4-rhamnosyloxy-benzil-isothiocynate yang terkandung dalam biji kelor
(Khasanah, 2008).
34
4.4 Identifikasi Escherichia coli
Untuk memberikan data yang valid maka dilakukan pengujian Escherichia
coli pada media Eosin Methylen Blue Agar (EMBA). Setelah 24 jam ditemukan
adanya koloni E.coli, yang ditandai dengan warna hijau metalik. Selanjutnya
dilakukan pengecatan gram yang dilanjutkan pada pengamatan dengan
menggunakan mikroskop. Dapat dilihat pada Lampiran 5 halaman 47.
EMB (Eosin Methylene Blue) Agar adalah medium selektif untuk isolasi
dan pertumbuhan dari bakteri enteric mikroorganisme coliform, selain itu juga
digunakan untuk identifikasi Candida albicans. Formula ini telah umum digunakan
untuk meneliti coliform dengan prosedur yang direkomendasikan oleh APHA di
Amerika serikat. Escherichia coli dengan morfologi koloni biru kehitaman dengan
diameter 2-3 mm, tepian jelas, berkilau hijau metalik (Safitri dan Novel, 2010).
Kompleks crystal violet-iodin yang masuk ke dalam sel bakteri gram positif
tidak dapat larut oleh alkohol karena adanya lapisan peptidoglikan yang kokoh
pada dinding sel; sedangkan pada bakteri gram negatif, alkohol akan merusak
lapisan lipopolisakarida. Kompleks crystal violet-iodin pada bakteri gram negatif
dapat terlarut dan menyebabkan sel bakteri tampak transparan, yang akan berwarna
merah setelah diberi safranin (Pratiwi, 2008).
35
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Hasil penelitian yang dilakukan terhadap simplisia biji kelor (Moringa
oleifera Lam) diperoleh kesimpulan:
a. Karakteristik simplisia biji kelor meliputi pemeriksaan mikroskopik sel-sel
parenkim dengan minyak atsiri, sklerenkim, sel parenkim dengan minyak atsiri,
berkas pembuluh dengan penebalan spiral, amilum dan serabut sklerenkim.
kadar air 2,46%; kadar sari larut air 21,77%; kadar sari larut etanol 13,07%;
kadar abu total 2,05% dan kadar abu tidak larut dalam asam 0,80%.
b. Serbuk biji kelor efektif dalam membunuh koloni Escherichia coli yaitu pada
konsentrasi 0,01%.
5.2 Saran
Disarankan kepada peneliti selanjutnya untuk mengolah serbuk biji kelor ke
dalam bentuk nano partikel sehingga hasil yang di dapat lebih optimum.
36
DAFTAR PUSTAKA
Anonim. (2009). Difco dan BBL Manual Manual of Microbiological Culture

Media. Second edition. Sparks: Becton, Dickinson and Company 7 Loveton
Circle. Halaman 223, 290, 441.
BPOM, R. I. (2012). Pedoman Teknologi Formulasi Berbasis Ekstrak. Volume II.

Jakarta: Direktorat Obat Asli Badan POM. Halaman 5, 10-11.
Chandra, B. (2007). Pengantar Kesehatan Lingkungan. Jakarta: Penerbit Buku

Kedokteran EGC. Halaman 45.
Depkes, R. I. (1995). Materia Medika Indonesia. Jilid Kelima. Jakarta: Departemen

Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 537-541.
Ditjen POM. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta:
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 4-5.
Effendi, H. (2003). Telaah Kualitas Air: Bagi Pengelolaan Sumber Daya dan
Lingkungan Perairan. Yogyakarta: Kanisius. Halaman 11, 14.
Herbarium Medanense. (2017). Identifikasi Tumbuhan. Medan: Herbarium

Medanense Sumatera Utara.
Kemenkes, R. I. (2010). Suplemen I Farmakope Herbal Indonesia. Jakarta:

Kementrian Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 140.
Khasanah, U. (2008) Efektifitas Biji Kelor Moringa oleifera Lamk sebagai

Koagulan Fosfat dalam Limbah Cair Rumah Sakit. Studi Kasus di RSU Dr.
Saiful Anwar Malang. Skripsi. Jurusan Kimia Fakultas Sains dan Teknologi
Universitas Negeri Malang. Halaman 11,13,46.
Latif, U. T. A. (2014). Efektifitas Biji Kelor (Moringa oleifera Lamk) Untuk

Penanggulangan Bakteri Coli Pada Air Sumur. Makassar: Jurusan Biologi
Fakultas Sains dan Teknologi UIN Alauddin. Jurnal Teknosains. Vol. 8.
No. 1. Halaman 51 – 60.
Lay, B. W., dan Hastowo, S. (1994). Analisis Mikroba di Laboratorium. Jakarta :

PT. Raja Grafindo Persada. Halaman 34, 48,72-73.
Mansauda, K. L. R., Fatimawali., dan Kojong, N. (2014). Analisis Cemaran Bakteri

Coliform Pada Saus Tomat Jajanan Bakso Tusuk Yang Beredar Di Manado.
Manado: Program Studi Farmasi FMIPAUNSRAT. Jurnal Ilmiah Farmasi.
Vol. 3. No. 2. Halaman 40.
37
Nugroho, A. (2006). Bioindikator Kualitas Air. Jakarta: Penerbit Universitas
Trisakti. Halaman 9-14, 19-21.
Pelczar, M. J. Dan Chan, E.C.S. (1986). Elements of Microbiology. Penerjemah:
Hadioetomo, R. S., Imas, T., Tjitrosomo , S. S., dan Angka, S. L. (1988).
Dasar - Dasar mikrobiologi. Jilid 2. Jakarta: UI-Press. Halaman 461-471.
Pratiwi, S. T. (2008). Mikrobiologi Farmasi. Jakarta: Penerbit Erlangga. Halaman

18, 32.
Purlianto, N. A. I. (2015). Uji Lempeng Total Dan Identifikasi Escherichia coli

Pada Jamu Pahitan Brotowali Yang Diproduksi Oleh Penjual Jamu
Gendong Keliling Di Wilayah Tonggalan Klaten Tengah. Skripsi. Fakultas
Farmasi. Universitas Sanata Dharma. Yogyakarta. Halaman 27-29.
Safitri, R., dan Novel, S. S. (2010). Medium Analisis Mikroorganisme. Jakarta:

Trans Info Media. Hal: 63.
Sutrisno, C. T., dan Eni, S. (1996). Teknologi Penyediaan Air Bersih. Jakarta:
Penerbit Rineka Cipta. Halaman 1-4, 30.
Tilong, A. D. ( 2012). Ternyata Kelor Penakluk Diabetes. DIVA Press (Anggota

IKAPI). Yogyakarta. Halaman 10-15, 33-35.
Waluyo, L. (2004). Mikrobiologi Umum Edisi Revisi. Malang: UMM Press.

Halaman 214-215.
Waluyo, L. (2007). Mikrobiologi Umum Edisi Revisi. Malang: UMM Press.

Halaman 39.
Widyati, R., dan Yuliarsih. (2002). Higiene dan Sanitasi Umum dan Perhotelan.
Jakarta: Penerbit PT Gramedia Widiasarana Indonesia. Halaman 4-5.
WHO. (1993). Guidelines for Drinking-Water Qualiy. Second Edition. Geneva:

WHO. Halaman 14.
WHO. (1998). Quality Control Methods for Medicinal Plant Material.

Switherland: WHO.
38
Lampiran 1. Hasil identifikasi tumbuhan
39
Lampiran 2. Sampel yang digunakan
A B C D E
Air sumur gali sebelum dan sesudah penambahan serbuk biji kelor
Keterangan:
A = 0,01%;
B = 0,005%;
C = 0,0025%;
D = 0,00125%;
E=0
40
Lampiran 2. (Lanjutan)
Tumbuhan kelor
Buah kelor
41
3 cm
Buah kelor tua
1 cm
Biji kelor tua dengan kulit biji
42
1 cm
Simplisia biji kelor tua
Serbuk biji kelor

Lampiran 3. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk biji kelor (perbesaran 10x40)
43
1.
2.
5.
6.
3.
4.
Keterangan :
1. Sel-sel Parenkim
2. Sklerenkim
3. Sel parenkim dengan minyak atsiri
4. Serabut sklerenkim
5. Berkas pembuluh dengan penebalan spiral
6. Amilum
Lampiran 4. Analisis angka lempeng total
44
Blanko (1 mL lactose broth + 15 mL plate count agar)
Koloni Escherichia coli sebelum penambahan serbuk biji kelor

45
Koloni Escherichia coli sesudah penambahan 0,00125% serbuk biji kelor
Koloni Escherichia coli setelah penambahan 0,0025% serbuk biji kelor

46

Lampiran 5. Identifikasi Escherichia coli
47
Koloni E. coli berwarna hijau metalik dalam media eosin methylen blue agar
Pengecatan Gram
48
Lampiran 6. Bagan alir penelitian
Buah yang sudah tua dan kering

Dikupas kulit luarnya sampai diperoleh
biji kelor yang berwarna putih
Dikeringkan biji kelor pada lemari
pengering selama 8 hari (biji menjadi
keras)
Dibungkus biji kelor menggukanan
aluminium foil, lalu dikeringkan dengan
menggunakan oven selama ± 48 jam
pada suhu 500C.
Dihaluskan dengan menggunakan
blender
Diayak dengan menggunakan mesh 40
dikeringkan dalam oven selama ± 24
jam pada suhu 500C.

Serbuk Putih
Karakterisasi Analisis
simplisia mikrobiologi
1. P. Makroskopik 1. Uji Angka Lempeng

2. P. Mikroskopik Total sebelum dan
3. Penetapan kadar air sesudah penambahan
4. Penetapan kadar sari larut etanol serbuk biji kelor
5. Penetapan kadar sari larut dalam 2. Identifikasi Escherichia
air coli
6. Penetapan kadar abu total
7. Penetapan kadar abu yang tidak
larut dalam asam
49
Lampiran 7. Pengolahan sampel untuk uji ALT
Serbuk biji kelor
ditimbang sebanyak 0,00125%;
0,0025%; 0,005%; 0,01%
masing-masing ditambahkan sedikit air
sumur hingga membentuk pasta
ditambahkan 10 ml air lalu diaduk dan
disaring dengan kain kasa
diaddkan ke dalam 1 L air sumur gali
dan diaduk selama 15 menit
didiamkan ± 2 jam
100 ml untuk uji

mikrobiologi
50
Lampiran 8. Pengenceran sampel untuk uji ALT
90 mL LB
Dimasukkan kedalam tabung reaksi dan
ditambahkan 10 mL air secara aseptis lalu
dihomogenkan (pengenceran 10-1).
Dimasukkan kedalam 5 tabung reaksi masing-
masing 9 mL lactose broth
Dipipet 1 mL dari 10-1 kedalam tabung reaksi
pertama secara aseptis dan dihomogenkan
(pengenceran 10-2).
Dilakukan hingga pengenceran 10-6
Selanjutnya dilakukan pengenceran untuk sampel
uji dengan konsentrasi masing-masing 0,00125%;
0,0025%; 0,0050%; 0,001% mulai dari 10-1
hingga 10-6
Pengenceran
51
Lampiran 9. Uji ALT sebelum dan sesudah penambahan serbuk biji kelor
Pengenceran
Dipipet masing-masing 1 mL secara aseptis
ke dalam cawan petri dan dibuat duplo
Dituang media PCA yang telah ditambahkan
1% TTC sebanyak 15 mL kedalam setiap
cawan petri, dihomogenkan hingga merata
dan dibiarkan hingga memadat
Dilakukan uji kontrol dengan cara menuang
1mL LB ditambah 15 mL media PCA
dihomogenkan dan biarkan memadat
Jumlah koloni yang tumbuh diamati dan
dihitung
Selanjutnya dilakukan hal yang sama pada
pengenceran sampel uji dengan konsentrasi
0,00125%; 0,0025%; 0,005% dan 0,01%
Seluruh cawan petri diinkubasi terbalik pada
suhu 37oC selama 24 jam hingga 48 jam
Jumlah koloni yang tumbuh diamati dan
dihitung
Koloni bakteri
52
Lampiran 10. Identifikasi Escherichia coli
a. Menggunakan media selektif
1 ml air sumur + 9 ml LB
Diinkubasi pada suhu 370C selama 24 jam
Diambil 1 sengkelit menggunakan jarum ose
Digoreskan pada media EMBA
Diinkubasi pada suhu 370C selama 24 jam
Koloni berwarna
hijau metalik
53
b. Pengecatan Gram
Objek glas
Dicuci dengan alkohol 70% lalu difiksasi
Diteteskan satu tetes akuades steril dan
kedalamnya dimasukkan satu ose biakan dari
media EMBA lalu dihomogenkan
Ditambahkan satu tetes gentian violet lalu
ditambahkan satu tetes larutan lugol didiamkan 1
menit diratakan dan difiksasi
Diteteskan larutan lugol satu tetes di atas kaca
preparat dan didiamkan 1 menit
Dibilas dengan alkohol 70% sampai tetesan
terakhir tidak berwarna lalu difiksasi
Diteteskan saru tetes safranin dibiarkan hingga 1
menit
Dibilas dengan akuades steril hingga warnanya
hilang kemudian difiksasi
Diteteskan 1-2 tetes minyak imersi
Diamati dibawah mikroskop perbesaran 40x
Batang warna merah
54
Lampiran 11. Perhitungan karakterisasi simplisia
1. Penetapan kadar air simplisia
volume air ml)

adar air simplisia
berat sampel g)
Berat Volume Volume Volume

No.
sampel (g) awal (ml) akhir (ml) air (ml)
1. 5,000 1,60 1,75 0,15
2. 5,002 1,70 1,80 0,10
3. 5,001 1,65 1,80 0,15
,
Kadar air sampel I = × 100 % = 3,00 %
,
,
Kadar air sampel II = × 100 % = 1,99 %
,
,
Kadar air sampel III = × 100 % = 2,99 %
,
, , ,
% Rata-rata kadar air serbuk biji kelor = = 2,66 %
2. Penetapan kadar sari yang larut dalam air
berat sari g)
adar sari larut dalam air
berat sampel g)
Berat sampel
No. Berat sari (g)
(g)
1. 5,006 0,223
2. 5,008 0,220
3. 5,006 0,212
,
Kadar sari larut dalam air sampel I = × × 100 % = 22,33 %
,
,
Kadar sari larut dalam air sampel II = × 100 % = 21,99 %
,
,
Kadar sari larut dalam air sampel III = × × 100 % = 21,17 %
,
55
,
% Rata-rata kadar sari larut dalam air = = 21,83%
3. Penetapan kadar sari larut etanol
berat sari g)
adar sari larut dalam etanol
berat sampel g)
Berat sampel
No. Berat sari (g)
(g)
1. 5,005 0,132
2. 5,005 0,129
3. 5,006 0,131
,
Kadar sari larut etanol sampel I = × × 100 % = 13,19 %
Kadar sari larut etanol sampel II = × × 100 % = 12,93 %

,
,
Kadar sari larut etanol sampel III = × × 100 % = 13,16 %
,
, , ,
%Rata-rata kadar sari larut etanol = = 13,09%
4. Penetapan kadar abu total
berat abu g)
adar abu total
berat sampel g)
Berat sampel
No. Berat abu (g)
(g)
1. 2,005 0,040
2. 2,005 0,060
3. 2,003 0,024
Kadar abu total sampel I = × 100 % = 1,99 %
56
Kadar abu total sampel II = × 100 % = 2,99 %
,
Kadar abu total sampel III = × 100 % = 1,19 %
,
,
%Rata-rata kadar abu total serbuk biji kelor = = 2,05%
5. Penetapan kadar abu total yang tidak larut asam
berat abu g)
adar abu tidak larut dalam asam
berat sampel g)
Berat sampel
No. Berat abu tidak larut asam (g)
(g)
1. 2,005 0,013
2. 2,005 0,020
3. 2,003 0,015
Kadar abu total tidak larut asam sampel I = × 100 % = 0,648 %
Kadar abu total tidak larut asam sampel II = × 100 % = 0,997 %
Kadar abu total tidak larut asam sampel III = × 100 % = 0,748 %
, , ,
% Rata-rata kadar abu total tidak larut asam =
= 0,797%
57
58

Universitas Sumatera Utara

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Universitas Sumatera Utara

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

ANALISIS Escherichia coli SEBELUM DAN SESUDAH

PENAMBAHAN SERBUK BIJI KELOR (Moringa oleifera Lam)

YUNI PUTRI RANGKUTI

PROGRAM STUDI EKSTENSI SARJANA FARMASI