KIMIA MEDISINAL

PARAMETER HUBUNGAN KUALITATIF DAN

KUANTITATF OBAT

DOSEN PENGAMPU:
YULIANIS, M. FARM, APT

DISUSUN OLEH :
BELIA DESTAMA PUTRI
1648201023
4 A FARMASI

SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN HARAPAN IBU

JAMBI
2017/2018
 HUBUNGAN ANTARA AKTIVITAS NARKOBA DI NCI PRAKLINIS IN VITRO
DAN IN VIVO MODEL DAN UJI KLINIS AWAL

ABSTRAK

Analisis aktivitas senyawa yang diuji dalam pra-klinis in vivo dan in vitro tes oleh
Program Therapeutics Developmental Cancer Institute National dilakukan. Untuk 39 agen
dengan baik data xenograft dan Tahap II uji klinis hasil yang tersedia, in vivo aktivitas dalam
histologi tertentu dalam model tumor tidak erat berkorelasi dengan aktivitas dihistologi kanker
manusia sama, keraguan pada korespondensi model pra-klinis hasil klinis. Namun, untuk
senyawa dengan aktivitas in vivo dalam setidaknya satu-sepertiga dari model xenograft diuji,
ada korelasi dengan aktivitas paling dalam setidaknya beberapa uji coba klinis Fase II. Dengan
demikian, cara yang efisien memprediksi aktivitas dalam model vivo tetap diinginkan untuk
senyawa dengan aktivitas anti-proliferasi in vitro. Untuk 564 senyawa yang diuji dalam uji
serat berongga yang juga diuji terhadap model tumor in vivo, kemungkinan menemukan
aktivitas xenograft dalam setidaknya satu-sepertiga dari model in vivo diuji naik dengan
meningkatnya aktivitas serat berongga intraperitoneal, dari 8% untuk semua senyawa diuji
untuk 20% di agen dengan bukti respon di lebih dari 6 serat intraperitoneal ( P < 0,0001).
Kegiatan serat berongga intraperitoneal juga ditemukan menjadi prediktor yang lebih baik dari
aktivitas xenograft dari salah satu kegiatan subkutan berongga serat atau intraperitoneal
ditambah aktivitas subkutan gabungan. Karena aktivitas serat berongga adalah indikator yang
berguna potensi dalam menanggapi vivo, berkorelasi dengan aktivitas serat berongga diperiksa
untuk 2304 senyawa yang diuji di kedua garis sel NCI 60 di layar obat kanker vitro dan
berongga uji serat. Sebuah korelasi positif yang ditemukan untuk selektivitas histologis antara
in vitro dan tanggapan serat berongga. Korelasi yang paling mencolok adalah antara potensi di
layar garis 60 sel dan aktivitas serat berongga; 56% senyawa dengan rata 50% pertumbuhan
penghambatan di bawah 10 -7,5 M yang aktif di lebih dari 6 serat intraperitoneal sedangkan
hanya 4% dari senyawa dengan potensi 10 -4 M mencapai tingkat yang sama aktivitas serat
berongga ( P < 0,0001). Parameter struktural dari obat dianalisis termasuk berat molekul dan
ikatan hidrogen faktor majemuk, yang keduanya ditemukan prediksi aktivitas serat berongga.

PENDAHULUAN
 Sejak awal tahun 1955, (NCI) Developmental Program Therapeutics Cancer Institute

Nasional (DTP) telah memanfaatkan berbagai model skrining eksperimental untuk memilih
agen untuk evaluasi sebagai calon klinis. Posisi filosofis dari mana upaya ini dilanjutkan adalah
bahwa penjelasan aktivitas anti-tumor didefinisikan secara empiris dalam model akan
diterjemahkan ke dalam beberapa kemungkinan aktivitas pada kanker manusia. Pilihan model
screening tertentu didasarkan terutama pada respon dari model untuk agen sudah diidentifikasi
sebagai aktif secara klinis (Gellhorn dan Hirschberg, 1955; Zubrod et al, 1966). Awalnya, 3
model tikus ditransplantasikan digunakan: Sarkoma 180, Carcinoma 755 dan Leukemia L1210.
Spektrum model kemudian diperluas, mempertahankan L1210, yang dibedakan menjadi yang
paling prediktif aktivitas klinis, dan menambahkan serangkaian model tikus ditransplantasikan.
Skema ini digantikan pada tahun 1975 oleh murine Model P388 leukemia, yang dimanfaatkan
sebagai pra-layar dan diikuti oleh panel tumor. Panel ini pertama termasuk hanya tumor tikus
namun kemudian ditingkatkan untuk menyertakan xenografts tumor manusia.

Pada awal 1990, P388 pra-layar digantikan oleh assay garis in vitro manusia sel tumor
terdiri dari 60 jenis sel. Agen dipilih berdasarkan potensi, aktivitas selektif terhadap kategori
penyakit tertentu, dan / atau kegiatan diferensial terhadap beberapa baris sel tertentu kemudian
dievaluasi terhadap sejumlah kecil tumor manusia sensitif dalam model xenograft tikus
telanjang (Dykes et al, 1992 ; Ploughman et al, 1997) sebagai dasar untuk memilih senyawa
untuk pengembangan praklinis lanjut. Karena sejumlah besar molekul yang muncul dari layar
in vitro sebagai kandidat untuk pengujian xenograft, pada tahun 1995 pembangunan jalan ini
selanjutnya dimodifikasi untuk menyertakan serat berongga (HF) assay (Hollingshead et al,
1999), aktivitas di yang prasyarat untuk studi di model xenograft klasik. Model HF, di mana
sel-sel diperkenalkan dari kultur jaringan menjadi serat semi-permeabel pada tikus
intraperitoneal (ip) atau subkutan (sc) ruang dan terkena agen tes, merupakan sarana yang cepat
dan efisien memilih senyawa dengan potensi untuk kegiatan in vivo di xenografts konvensional
dalam pilot dan set 'pelatihan' senyawa. Ini skrining obat dan skema pembangunan tetap
merupakan salah satu empiris, seperti senyawa diprioritaskan untuk pembangunan berdasarkan
definisi anti-proliferasi in vitro dan in vivo tanggapan. Karena pemahaman yang muncul dari
molekul dasar untuk kanker manusia, minat yang besar ada di transisi dari empiris untuk
berpotensi lebih rasional, pendekatan molekuler-ditargetkan untuk penemuan dan
pengembangan terapi kanker baru (Sausville dan Feigal, 1999). Yang menarik akan menjadi
desain model untuk mendeteksi aksi senyawa pada target yang telah ditetapkan tertentu. The
'fitur kinerja' senyawa yang telah dievaluasi dalam skema pembangunan 'empiris' mungkin nilai
dalam melayani sebagai dasar terhadap yang senyawa yang lebih baru dan model dapat
dibandingkan. Untuk tujuan ini, kami hadir di sini pengalaman mencoba untuk
mengkorelasikan aktivitas di klinik dengan aktivitas yg dalam model praklinis. Selain itu, kami
menyajikan pengalaman kumulatif NCI dengan kinerja assay HF dalam kaitannya dengan
aktivitas in vitro dan karakteristik kimia tertentu dari senyawa.

BAHAN DAN METODE

Agen yag digunakan

Data untuk 39 agen yang telah menyelesaikan tahap percobaan II (Tabel 1) dan yang
juga telah dievaluasi terhadap in vivo model tumor disusun. 13 dari senyawa ini adalah 'standar'
agen dan sisanya 26 berada senyawa yang NCI INDS diajukan antara tahun 1980 dan 1996.
Untuk analisis faktor yang mempengaruhi hasil xenograft, 1228 senyawa yang baik xenograft
data saat ini dan aktivitas sejalan 60 sel NCI di layar obat anti-kanker vitro yang tersedia.
Senyawa-senyawa yang diuji dalam median dari 5 percobaan xenograft (kisaran 1-131) dan
rata-rata 4 histologis yang berbeda (kisaran 1-14). Selain itu, 564 di antaranya telah dievaluasi
dalam pengujian HF. Senyawa dipilih untuk pengujian xenograft setidaknya sebagian atas
dasar kinerja di garis uji 60 sel dan / atau uji HF. Dari jumlah tersebut, 756 terbuka, senyawa
tersedia untuk umum dan 472 bijaksana, struktur rahasia. Satu set 2304 senyawa yang
dievaluasi dalam pengujian garis 60 sel (1252 terbuka, 1052 bijaksana) dan dirujuk untuk
evaluasi dan pengujian dalam uji HF dianalisis. Senyawa mewakili berbagai jenis struktur, dan
berkisar di dalam potensi vitro dari GI 50 s (konsentrasi obat yang mencapai 50% hambatan
pertumbuhan rata-rata lebih semua baris 60 sel) 100 μ M kurang dari 10 nM. Alasan untuk
merujuk senyawa untuk evaluasi HF termasuk aktivitas selektif terhadap garis sel dari jenis
histologis tertentu, 'non-standar' mekanisme kerja yang ditentukan oleh algoritma pengenalan
pola MEMBANDINGKAN (Paull et al, 1989), serta senyawa yang secara struktural novel dan
mungkin mewakili chemotypes Novel ditujukan terhadap mekanisme yang ditetapkan
(misalnya topoisomerase penghambatan).

Respon klinis

Tingkat respon klinis jenis tumor histologis khusus pada 26 agen NCI IND ditinjau
pada pasien dari semua fase menyelesaikan percobaan II dengan setidaknya 9 pasien uji coba
dilakukan di bawah NCI sponsor atau termasuk dalam catatan. Kanker Program Evaluasi
Terapi, dan dilakukan dengan persetujuan komite etika yang sesuai. Fase II uji coba 'positif'
terlibat pengurangan 50% obyektif dalam ukuran tumor dalam setidaknya 20% dari pasien.
Untuk 13 agen standar, tingkat respons diambil dari Devita (De Vita et al, 1982, 1985, 1989,
1993, 1997). Semua abstraksi yang dilakukan oleh abstractors profesional dari EMMES
Corporation.

Model praklinis

Senyawa diuji dalam berbagai model xenograft menurut metode yang dijelaskan oleh
Dykes dan Ploughman (Dykes et al, 1992; Ploughman et al, 1997). Dua tingkat respon
dianggap. Untuk model 'survival', 2 ambang batas meningkat selama 25% atau 50%. Dalam
model xenograft subkutan lainnya, estimasi berat tumor diperbolehkan perhitungan
diperlakukan / kontrol rasio berat (T / C), dengan ambang batas 40% dan 10% menunjukkan
tingkat atau derajat kegiatan dalam analisis ini. Agen berada di semua kasus yang diteliti pada
atau di bawah dosis maksimum ditoleransi, didefinisikan sebagai jumlah terbesar dari agen tes
yang diberikan sebagai dosis akut yang mouse mampu bertahan selama 11 hari. Agen diuji
dalam uji HF seperti yang dijelaskan oleh Hollingshead (Hollingshead et al, 1999). Sebuah
panel standar garis sel 12 tumor digunakan untuk skrining HF rutin, termasuk non-kecil garis
karsinoma paru sel NCI-H23 dan NCI-H522, garis karsinoma payudara MDA-MB-231 dan
MDA-MB-435, usus garis sarkoma SW -620 dan COLO 205, garis melanoma LOX dan
UACC-62, garis karsinoma ovarium OVCAR-3 dan OVCAR-5, dan garis glioma U251 dan
SF-295. Sel-sel, dengan kepadatan 2-10 × 10 6 sel ml, -1 memerah menjadi serat fluoride
polyvinylidine memiliki diameter internal 1 mm. Serat yang panas-disegel pada interval 2 cm,
dan sampel ditempatkan ke dalam media kultur jaringan dan diinkubasi selama 24 sampai 48
jam sebelum implantasi. Pada hari implantasi, sampel dari setiap persiapan garis sel tumor
kuantitatif menilai untuk massa sel yang layak oleh assay endpoint MTT stabil sehingga massa
sel waktu nol dikenal. Mouse masing-masing menerima 3 implan ip mewakili 3 dari sel tumor,
dan 3 implan sc dari 3 sel tumor yang sama.

Tikus diobati dengan agen eksperimental, yang telah dilarutkan dengan menggunakan
10% DMSO dalam garam dan tween 80 (0,05%), pada hari ke 3 atau 4 berikut implantasi serat
dan terus setiap hari selama 4 hari. Setiap agen diberikan melalui suntikan ip pada 2 tingkat
dosis. Tingkat dosis ditentukan dari satu ip dosis toleransi maksimal dosis (MTD) untuk setiap
agen uji; dosis tinggi menjadi MTD × 0,375 dan dosis rendah menjadi MTD × 0.25. Serat
dikumpulkan dari tikus pada hari setelah pengobatan keempat dan sel-sel yang layak
diperkirakan oleh assay MTT. Penurunan 50% atau lebih besar dalam pertumbuhan net persen
pada sampel diperlakukan dibandingkan dengan sampel kontrol kendaraan dianggap hasil yang
positif. Sebanyak 48 serat diperlakukan dalam percobaan standar (12 baris sel × 2 situs implan
× 2 tingkat dosis). Setiap serat diperlakukan menunjukkan setidaknya penurunan bersih 50%
dalam pertumbuhan sel ditugaskan skor sewenang-wenang 2 poin, dan jumlah serat mencapai
tingkat ini di ip dan sc kompartemen dicatat secara terpisah. Setiap baris sel yang membunuh
sel diamati juga dicatat. Kriteria awalnya didirikan untuk kegiatan senyawa menggunakan satu
set pelatihan dari 80 senyawa yang dipilih secara acak yang dievaluasi baik di HF dan tes
xenograft.

Tujuan dari training set adalah untuk menentukan sistem penilaian yang
memungkinkan bias dalam mendukung mendeteksi semua senyawa dengan aktivitas xenograft,
yang didefinisikan sebagai ≤ 40% T / C dalam setidaknya satu xenograft tumor. Kriteria untuk
kegiatan di uji HF yang mencapai tujuan ini dengan demikian: 20 atau lebih poin total
(kombinasi dari poin di ip dan sc serat), 8 atau lebih poin dalam serat sc, atau pengamatan
membunuh sel serat apapun dalam baik ip atau sc kompartemen. NCI in vitro anti-kanker layar
narkoba telah dijelaskan secara rinci sebelumnya (Alley et al, 1988; Monks et al, 1991). Ini
menggunakan 60 sel tumor manusia yang berbeda mewakili leukemia, melanoma, paru-paru,
usus, otak, ovarium, payudara, prostat dan ginjal kanker. Untuk percobaan skrining khas, sel-
sel diinokulasi ke dalam 96-baik piring microtitre dan diizinkan untuk menetaskan selama 24
jam. obat eksperimental dilarutkan dalam dimetil sulfoksida dan disimpan beku sebelum
digunakan. Pada saat penambahan obat, sebuah aliquot konsentrat beku dicairkan dan
diencerkan dengan medium lengkap. 4,10 kali lipat atau 1/2 log pengenceran serial tambahan
yang dibuat untuk memberikan total 5 konsentrasi obat ditambah kontrol. Berikut Selain obat,
piring diinkubasi untuk tambahan 48 jam. solusi sulforhodamine B ditambahkan ke masing-
masing dengan baik, dan noda terikat adalah dilarutkan dan absorbansi dibaca. Persentase
pertumbuhan dihitung pada masing-masing tingkat konsentrasi obat. parameter respon 3 dosis
dihitung untuk setiap agen eksperimental: penghambatan pertumbuhan 50% (GI 50), Total
hambatan pertumbuhan (TGI), dan konsentrasi obat menghasilkan penurunan 50% protein
diukur (LC 50).

Karakteristik struktural

Chem-X, produk Kimia Desain, Ltd (Oxfordshire, UK), digunakan untuk quantitate
aspek karakteristik struktural seperti jumlah ikatan hidrogen, donor ikatan hidrogen dan
akseptor. berat molekul diambil sebagai dihitung dari rumus molekul dari Sistem Informasi
Obat DTP.

Uji statistik

χ 2 analisis dilakukan untuk menguji pengaruh berbagai faktor pada hasil in vivo di
mana data yang cukup yang tersedia untuk χ 2 analisis, uji eksak Fisher ini dipekerjakan. The
koefisien korelasi rank digunakan untuk mengkorelasikan dalam kegiatan vivo dengan
tanggapan klinis; statistik ini didefinisikan sebagai korelasi. Pearson lebih akrab dari data,
setelah nilai data untuk setiap ukuran aktivitas telah digantikan oleh jajaran masing-masing.
The Spearman rank correlation lebih tepat daripada korelasi Pearson dalam situasi di mana data
tidak terdistribusi normal. Mahasiswa t test digunakan dalam membandingkan rata MW dan
berarti untuk karakteristik ikatan hidrogen. Statistik signifikansi ditetapkan pada tingkat
kepercayaan 99% (P < 0,01).

HASIL

Indikator aktivitas klinis

Untuk 39 agen klinis, hubungan antara tingkat respon xenograft, rata-rata oleh
histologi, dan tingkat respons fase II diselidiki. Koefisien korelasi Spearman rank (r) untuk
semua histologis diplot pada Gambar 1. paru-paru sel Hanya non-kecil (NSCL) xenografts
adalah prediksi dari aktivitas klinis dalam histologi yang sama (r = 0,814, P = 0,004). model
xenograft payudara adalah paling berguna untuk memprediksi respon klinis terhadap penyakit
apapun, berhubungan dengan aktivitas klinis terhadap NSCL (r = 0,565, P = 0,008), melanoma
(r = 0,540, P = 0,007) dan ovarium (r = 0,611, P = 0,003) kanker, tetapi menariknya, tidak
dengan kanker payudara klinis. Aktivitas di xenografts usus diperkirakan untuk respon
melanoma klinis (r = 0,532, P = 0,005). Tidak ada korelasi lainnya yang memenuhi kriteria
untuk signifikansi statistik. Jumlah model xenograft dengan T / C ≤ 40% atau ILS ≥ 25%
dibandingkan dengan adanya aktivitas klinis. Aktivitas klinis ditemukan hanya 2/6 agen (33%)
dengan aktivitas di kurang dari sepertiga atau lebih dari model xenograft diuji, tetapi ditemukan
pada 21/33 agen (64%) dengan aktivitas di sepertiga atau lebih dari model xenograft diuji.
diragukan lagi karena jumlah kecil dari agen, perbedaan ini tidak signifikan secara statistik ( P
= 0,14). Itu perbandingan juga diulang menggunakan definisi yang lebih ketat aktivitas klinis,
menuntut bahwa agen diuji pada penyakit multiple menunjukkan respon dalam setidaknya 2
penyakit. Menerapkan definisi yang lebih strigent ini, aktivitas klinis ditemukan pada 0/6 agen
(0%) yang memiliki aktivitas di kurang dari sepertiga dari diuji model xenograft pra-klinis,
sedangkan 15/33 agen (45%) dengan aktivitas di satusepertiga atau lebih dari diuji model
xenograft pra-klinis memiliki aktivitas klinis ( P = 0,04). Analisis diulang, meningkatkan
ambang batas untuk kegiatan xenograft ke T / C ≤ 10% atau ILS ≥ 50%, perbandingan yang
tidak menghasilkan korelasi yang berguna antara aktivitas xenograft secara keseluruhan dan
baik definisi aktivitas klinis.

Indikator aktivitas xenograft

Untuk menilai bagaimana aktivitas HF mungkin berkaitan dengan memprediksi

aktivitas dalam beberapa model :

Gambar 1 Dalam kegiatan vivo dan aktivitas klinis dengan jenis penyakit Jumlah rata-rata
agen per korelasi adalah 12 (kisaran 2-27).

Untuk korelasi yang signifikan secara statistik, median adalah 21 (kisaran 10-26).
Jumlah sistem xenograft per histologi berkisar antara 7 dan 9 untuk semua histologis kecuali
sarkoma yang termasuk hanya satu model xenograft. Korelasi yang signifikan secara statistik

relevan hanya untuk xenografts intraperitoneal. Tabel 2B tidak sebenarnya menunjukkan

bahwa aktivitas di ≥ 10 serat peritoneal tidak, mungkin tidak mengherankan, aktivitas acara di
45% dari xenografts peritoneal. Namun, memperkuat korelasi aktivitas di serat peritoneal
aktivitas di setiap model xenograft, termasuk model subkutan. Perhatikan bahwa untuk
perbandingan ini, jika ambang batas untuk kegiatan HF dinaikkan ke lebih dari 6 serat,
setidaknya dua-pertiga dari xenograft senyawa aktif menjadi negatif palsu. Menariknya,
kegiatan subkutan ditempatkan serat tidak berkorelasi dengan aktivitas kemungkinan di
xenografts baik peritoneal atau subkutan (data tidak ditampilkan). Karena respon HF tidak
memperhitungkan semua agen aktif xenograft, sifat senyawa dan kondisi tes untuk agen ini
diperiksa. Dalam semua senyawa ini, aktivitas xenograft diperoleh dengan menggunakan rute,
jadwal atau kondisi eksperimental lain tidak tersedia atau tidak secara rutin digunakan dalam
uji HF (data tidak ditampilkan); dalam kasus beberapa tumor padat tumbuh lebih lambat,
misalnya, aktivitas diperoleh dengan menggunakan Q4Dx3 atau Q7Dx3 jadwal yang tidak
tersedia dalam standar 4-hari assay HF dan 3B menunjukkan bahwa senyawa dengan bukti
kegiatan selektif untuk nomor berturut-turut lebih besar dari paru-paru atau karsinoma
payudara baris sel telah berturut-turut meningkat kemungkinan menunjukkan aktivitas di paru-
paru atau xenograft payudara model. Senyawa dengan bukti in vitro selektivitas dalam 6 atau
lebih baris sel paru-paru menunjukkan aktivitas di 33% (dibandingkan dengan 17,5% secara
keseluruhan) dari xenografts yang sesuai. Senyawa dengan bukti selektivitas in vitro di lini sel
payudara bahkan lebih mungkin (44%) untuk aktif dalam xenografts sesuai (dibandingkan
dengan 21% secara keseluruhan). Ketika upaya ini diperpanjang sampai histologis lainnya,
tidak ada korelasi yang signifikan lainnya muncul (data tidak ditampilkan).

Indikator aktivitas HF

Mengingat bahwa respon HF dapat, sampai batas tertentu, memprediksi beberapa

tingkat aktivitas xenograft, menjadi menarik untuk menanyakan apakah prediktor aktivitas
dalam model HF bisa dipetik dari in vitro Data screening atau sifat struktur molekul. Tabel 4
menunjukkan bahwa dalam kasus payudara, paru-paru, ovarium, CNS dan baris sel melanoma,
aktivitas selektif dalam khususnya panel in vitro tidak menunjukkan kecenderungan
berhubungan dengan munculnya aktivitas di jenis sel yang sesuai di panel HF. Sebagai contoh,
48% dari agen yang selektif untuk kegiatan garis sel payudara in vitro juga menunjukkan
aktivitas (penghambatan pertumbuhan 50%) di HF karsinoma payudara, dibandingkan dengan
39% dari senyawa yang dipilih untuk studi di serat berongga untuk alasan apapun. Karsinoma
Colon aktivitas garis sel tidak berkorelasi dengan aktivitas sel kanker HF usus. potensi lebih
besar dalam uji baris 60 sel, seperti yang ditunjukkan oleh GI 50, berkorelasi sangat baik
dengan peningkatan aktivitas dalam model HF dengan serat peritoneal (P < 0,0001). Misalnya,
37% senyawa dengan log 10 prajurit 50 minimal -7.5 menunjukkan aktivitas dalam setidaknya
10 dari 24 serat ip, sedangkan fraksi semua senyawa dengan tingkat aktivitas di uji HF hanya
6%. analisis serupa dilakukan memanfaatkan aktivitas dalam serat sc dan ip ditambah sc serat.
Seperti dengan perbandingan HF-to-xenograft, analisis ini menunjukkan bahwa aktivitas dalam
serat sc tidak berkorelasi dengan in vitro 60 sel potensi line, dan bahwa aktivitas di ip ditambah
sc serat kurang korelatif dari respon serat ip sendiri (data tidak ditampilkan). Mean GI 50 hanya
garis sel 12 yang digunakan dalam uji HF juga diperiksa untuk menentukan apakah ukuran ini
lebih korelatif dari potensi rata-rata disemua 60 baris sel. Meskipun garis 12 sel dalam potensi
vitro masih berkorelasi positif dengan aktivitas HF, korelasi ini tidak mencolok seperti yang
diperoleh dengan menggunakan garis 60 sel GI 50 ( data tidak ditampilkan). Kegiatan
'Differential' dari senyawa antara jenis sel yang berbeda di layar in vitro mungkin merupakan
indikasi dari dasar untuk mengharapkan efek anti-proliferasi selektif in vivo dan akhirnya.
Memang, potensi ini muncul adalah alasan utama untuk memulai paradigma screening baris
60 sel (Alley et al, 1988). Perbedaan GI 50 untuk setiap baris sel dan GI rata-rata 50 untuk
semua 60 baris sel dihitung untuk senyawa dipelajari dalam serat peritoneal. Diferensial
terbesar atau ' Δ'Selama 60 sel garis dicatat oleh tipe sel dan nilai masing-masing senyawa.
Peningkatan Δ sebenarnya berkorelasi negatif dengan meningkatkan kemungkinan ketaatan
aktivitas dalam model HF ( P < 0,0001). Misalnya, persentase senyawa yang merespon
setidaknya 4 serat ip lebih besardengan Δ dari ≤ 0,5 (45%) dari persentase dengan Δ > 2 (26%).
Kecenderungan yang sama ditampilkan ketika membandingkan Δ dengan aktivitas xenograft,
tetapi korelasi tidak signifikan secara statistik (data tidak ditampilkan). Pengaruh berat molekul
dan jumlah ikatan hidrogen potensial dalam struktur senyawa pada aktivitas di uji HF juga
diperiksa. Senyawa dalam rentang MW rendah (160 ke 480) umumnya dianggap lebih 'obat-
seperti' daripada di rentang yang lebih tinggi (Ghose et al, 1999). Menariknya, jumlah serat ip
responsif umumnya meningkat dengan meningkatnya MW hingga MW 1000 (Tabel 6). Untuk
MW lebih besar dari 1000 kegiatan tampaknya menurun, tetapi ada terlalu sedikit senyawa
tingkat ukuran ini untuk menggeneralisasi. Dalam molekul dengan 7 sampai 10 ikatan hidrogen
potensial, 35% senyawa menanggapi dengan minimal 6 serat ip vs 30% secara keseluruhan (P
< 0,0001) (Tabel 7). Persentase ini meningkat menjadi 43% dalam senyawa dengan 11 atau
lebih ikatan hidrogen potensial. Karena, bagaimanapun, jumlah heteroatom kontribusi baik
jumlah ikatan hidrogen dan MW, saling ketergantungan MW dan jumlah ikatan hidrogen
diperiksa dan hasil yang ditunjukkan pada Tabel 8. Menggunakan konstanta berbagai ikatan
hidrogen dari 4 sampai 6, korelasi antara MW dan aktivitas HF tidak lagi signifikan secara
statistik (P = 0,0895). Namun, dengan menggunakan MW konstan kisaran 250 sampai 500,
parameter ikatan hidrogen, sekarang independen dari pengaruh MW, masih berkorelasi kuat
dengan respon HF ( P < 0,0001) (Tabel 9). Baik MW atau jumlah ikatan hidrogen memiliki
pengaruh pada aktivitas dalam serat sc. hubungan antara sifat-sifat fisiologis dan aktivitas
xenograft juga telah diperiksa meskipun kesimpulan yang sama dapat ditarik, korelasi yang
tidak kuat (data tidak ditampilkan).

Menurut Lipinski Aturan untuk Lima (Lipinski et al, 1997), senyawa dengan lebih dari
5 donor ikatan hidrogen (HBD) atau lebih dari 10 akseptor ikatan hidrogen (HBA) lebih
mungkin untuk memiliki penyerapan mulut yang buruk. Di antara senyawa yang diuji dalam
uji HF, 95% memiliki kurang dari 5 HBD dan 95% kurang dari 10 HBA karena persentase
senyawa dengan menguntungkan HBD dan HBA jumlah begitu besar, analisis pengaruh
parameter ini tidak dilakukan. Bahkan, parameter ini identik dengan senyawa memasuki in
vitro sistem penyaringan. Sayangnya, hanya sekitar 75% dari senyawa yang dipilih untuk uji
HF diuji dalam sistem itu, terutama karena masalah dengan kekurangan pasokan senyawa. 25%
dari senyawa yang diuji dipilih tapi tidak mewakili potensi sumber bias dalam analisis ini,
terutama karena senyawa yang tidak mungkin untuk mendapatkan jumlah yang diperlukan
untuk pengujian in vitro mungkin mewakili kompleksitas struktural yang lebih besar. Bahkan,
rata-rata MW senyawa nontested adalah 485 (vs 420 untuk senyawa yang diuji), dengan hanya
sekitar 1,3 tambahan situs ikatan H per molekul (data tidak ditampilkan).

DISKUSI

Analisis xenograft terhadap hasil klinis menggambarkan bahwa histologi untuk

histologi perbandingan model ini aktivitas di klinik tidak dapat diandalkan dilihat untuk
senyawa 'empiris' yang dipilih bertindak melawan tumor ditandai non-molekuler. Meskipun,
dengan pengecualian paru-paru, pertandingan histologis tidak ditemukan antara model in vivo
dan respon klinis, aktivitas di beberapa model xenograft tidak muncul untuk memprediksi
untuk beberapa derajat aktivitas klinis. Menariknya, meningkatkan ambang kegiatan untuk T /
C dari ≤10 tidak meningkatkan kemungkinan hasil klinis yang positif, menunjukkan bahwa
ambang kegiatan ini mungkin terlalu ketat. Membutuhkan aktivitas klinis yang lebih besar
(aktivitas di 2 atau lebih penyakit) tidak meningkatkan korelasi antara aktivitas xenograft dan
aktivitas klinis. Meskipun definisi yang lebih ketat aktivitas klinis mungkin tidak cocok untuk
membuat keputusan tentang apakah untuk maju agen dari fase II ke fase uji coba III, sebagai
latihan murni statistik, itu tidak mendukung kesimpulan bahwa aktivitas di beberapa model
xenograft adalah prediktor yang berguna aktivitas klinis. Berbeda dengan hasil yang dicapai
dengan sistem xenograft DTP, Fiebig (Scholz et al, 1990) telah mengembangkan tumor
xenograft yang mempertahankan karakteristik mirip dengan spesimen klinis, yang telah
tumbuh dari tumbuh lambat dan garis sel berdiferensiasi baik. Fiebig melaporkan bahwa ketika
merawat tumor ini xenograft dengan agen standar yang sama seperti yang digunakan di klinik
untuk tumor pasien yang sesuai, respon dari xenografts ini dibandingkan dengan tumor pasien
adalah 90% (19/21) untuk sensitif dan 97% (57 / 59) untuk non-menanggapi tumor masing-
masing. Sementara gelar ini dari korespondensi antara aktivitas agen klinis digunakan dalam
xenografts dan klinik yang memuaskan, tidak pasti bagaimana menerjemahkan bahwa
pengalaman untuk evaluasi agen baru tanpa aktivitas klinis didefinisikan sebelumnya. Sebagai
agen standar klinis digunakan memiliki dalam semua kasus yang terbukti aktif dalam banyak
model xenograft, hasil ini di satu tingkat mungkin sesuai dengan temuan kami bahwa jumlah
xenografts di mana agen adalah berkorelasi aktif dengan aktivitas mungkin dalam pengaturan
klinis.

Hasil yang disajikan pada Gambar 1 dan 2 dapat diambil untuk membantah penggunaan
aktivitas dalam model xenograft yang dipilih secara empiris untukmemprediksi aktivitas dalam
jenis histologis yang sama kanker di klinik, dan memang hasil yang telah mempengaruhi
filsafat saat ini yang mendasari obat NCI penemuan dan program pembangunan (Sausville dan
Feigal, 1999). Meskipun demikian, definisi agen aktif dalam xenografts akan memungkinkan
optimalisasi jadwal, penilaian endpoint target molekuler, dan meningkatkan kemungkinan
aktivitas klinis. Oleh karena itu bermanfaat untuk memiliki kemampuan untuk memilih agen
dengan kemungkinanaktivitas xenograft menggunakan rapid test dan murah. Uji HF
dikembangkan untuk melayani sebagai diskriminator untuk senyawa yang muncul dari empiris
di layar garis sel vitro. analisis kami menunjukkan bahwa tingkat yang lebih besar dari respon
dalam serat ip berkorelasi dengan kemungkinan yang lebih besar dari aktivitas xenograft. Yang
sama tidak dapat dinyatakan tanggapan dalam serat sc. Ganda (Phillips et al, 1998) melaporkan
bahwa protokol NCI untuk HF tidak memberikan waktu yang cukup untuk angiogenesis terjadi,
dan hipotesis bahwa respon sc dapat diremehkan dengan protokol NCI. Folkman (Hahnfeldt et
al, 1999), bagaimanapun, mengklaim bahwa tumor tidak memerlukan pembuluh sampai 3-4
mm; serat polyvinylidene hanya 1 mm. Respon subkutan tergantung pada konsentrasi obat
ekstravaskular, sehingga kurangnya korelasi antara respon serat sc dan aktivitas xenograft
mungkin spekulatif terkait dengan faktor-faktor seperti dosis, rute, jadwal, tekanan hidrostatik
dan negara hidrasi dari tuan rumah. Seperti xenograft untuk perbandingan klinis, aktivitas
terhadap histologi HF tunggal tertentu itu umumnya tidak berguna untuk memprediksi aktivitas
xenograft di histologi yang sama. Kurangnya korelasi histologis dalam hal ini mungkin bisa
dijelaskan de ngan jumlah minimal (2 dari masing-masing histologi) di assay HF. Sebaliknya,
sebagian besar panel di garis 60 sel dalam uji in vitro terdiri dari minimal 6 jenis sel yang
berbeda, sehingga spesifisitas panel sel lebih mudah didefinisikan. Perhatikan bahwa korelasi
antara in vitro dan baik HF atauxenografts hanya jelas ketika 4 atau baris sel lebih merespon.
Pemeriksaan data screening in vitro menunjukkan korelasi histologis yang kuat dengan
aktivitas HF untuk semua panel tetapi usus, sedangkan indikasi aktivitas diferensial (tinggi '
Δ'), Tidak correakhir dengan aktivitas HF. Pengamatan ini dikombinasikan dengan korelasi
respon HF dengan peningkatan potensi vitro dapat menunjukkan bahwa standar uji HF sensitif
terhadap kuat sitotoksik sebagai lawan agen 'berbeda-beda' bertindak. Hal ini juga dapat
diambil untuk menunjukkan bahwa jika aktivitas diferensial benar-benar disarankan dari in
vitro hasil, percobaan HF pengalamatan yang set tertentu dari jenis sel mungkin perlu
dirancang atau manipulasi target khusus harus dipertimbangkan.

Analisis kami MW dan faktor hydrogenbonding mengungkapkan korelasi antara

peningkatan MW, serta situs hydrogenbonding lebih besar dan aktivitas HF. Hal ini
menunjukkan bahwa dalam memilih agen uji untuk pengembangan lebih lanjut, kompromi
harus dibuat antara MW rendah untuk tujuan pengembangan obat dan jumlah situs ikatan
hidrogen untuk keberhasilan. HBA dan HBD jumlah tidak mengungkapkan, 95% dari input ke
in vitro layar berada di kisaran menguntungkan bagi faktor-faktor ini. Hasil ini dapat dianggap
untuk menentukan 'peta jalan' untuk memetakan transisi dari senyawa dari hasil screening in
vitro untuk calon klinis. Jika strategi pengembangan senyawa adalah tetap empiris,
pertimbangan sifat heterogen model in vivo korelasi klinis mungkin memerlukan strategi untuk
menentukan kemungkinan aktivitas klinis, dan potensi lagi keseluruhan dan aktivitas di
sejumlah besar serat HF mungkin mengizinkan penggambaran terbaik senyawa
mempertimbangkan untuk lebih lanjut pengembangan. Dapat dikatakan dari pengalaman ini
bahwa senyawa dengan efek anti-proliferasi pada 10 - 6s Meb muaehmiliki eratnya
kemungkinan tively lebih tinggi dari yang mempengaruhi semua pertumbuhan tumor responsif.
Senyawa masa depan kemungkinan akan maju ke uji klinis dengan mata ke arah mengatasi
kelainan molekul ditentukan atau target dalam sel tumor. jumlah yang lebih besar ( n ≥ 4) jenis
sel berlebihan mengekspresikan target, apakah dalam uji in vitro seperti layar garis 60 sel, atau
uji in vivo seperti uji HF, mungkin diharapkan memiliki efek sesuai dalam xenografts bantalan
target yang sama. Akhirnya, sebagai upaya konsolidasi untuk memperoleh strain hewan
rekayasa untuk menyediakan model biologi tumor dan patofisiologi. Pertimbangan 'dasar'
pengalaman seorang berorientasi empiris Program penemuan obat mungkin berguna
benchmark jenis senyawa yang sesuai untuk kemajuan untuk model tersebut.

UCAPAN TERIMA KASIH

Penelitian laboratorium yang mendukung analisis yang dilaporkan dilakukan secara

keseluruhan atau sebagian dengan dana Federal dari National Cancer Institute, National
Institutes of Health, di bawah Kontrak NO1-CO-5600 dan NO1-CM-47000. Menyebutkan
nama dagang atau produk komersial dalam publikasi ini tidak menyiratkan pengesahan oleh
Pemerintah AS.

REFERENSI

Alley MC, Scudiero DA, Monks A, Hursey ML, Czerwinski MJ, Fine DL, Abbott

BJ, Mayo JG, Shoemaker RH dan Boyd MR (1988) Kelayakan skrining obat dengan panel sel
tumor manusia menggunakan alat tes microculture tetrazolium. kanker Res 48: 589-601

Devita VT, Hellmann S dan Rosenberg SA (1982) Prinsip kanker dan Praktek Onkologi,
Lippincott-Raven: Philadelphia Devita VT,

Hellmann S dan Rosenberg SA (1985) Prinsip kanker dan Praktek Onkologi, Lippincott-
Raven: Philadelphia Devita VT,

Hellmann S dan Rosenberg SA (1989) Prinsip kanker dan Praktek Onkologi, Lippincott-
Raven: Philadelphia Devita VT,

Hellmann S dan Rosenberg SA (1993) Prinsip kanker dan Praktek Onkologi, Lippincott-
Raven: Philadelphia Devita VT,

Hellmann S dan Rosenberg SA (1997) Prinsip kanker dan Praktek Onkologi, Lippincott-
Raven: Philadelphia

Dykes DJ, Abbott BJ, Mayo JG, Harrison Jr SD, Laster Jr WR, Simpson-Herren L dan
Griswold Jr DP (1992) Pengembangan model tumor xenograft manusia untuk evaluasi in vivo
obat antitumor baru. contrib Oncol 42: 1-22
Gellhorn A dan Hirschberg E (1955) Investigasi beragam sistem untuk kanker screening
kemoterapi. Kanker Res Suppl 3: 1-125

Ghose AK, Viswanadhan VN dan Wendoloski JJ (1999) Sebuah berbasis pengetahuan

Pendekatan dalam merancang kombinasi atau obat perpustakaan kimia untuk penemuan obat.
1. karakterisasi kualitatif dan kuantitatif dari database obat yang dikenal. J Sisir Chem 1: 55-
68

Hahnfeldt P, Panigrahy D, Folkman J dan Hlatky L (1999) pengembangan Tumor di bawah

signaling angiogenik: teori dinamika pertumbuhan tumor, respon pengobatan, dan dormansi
postvasular. kanker Res 59: 4770-4775

Hollingshead M, Ploughman J, Alley M, Mayo J dan Sausville E (1999) The berongga serat
assay. Di: Kontribusi untuk Onkologi, Volume 54: Relevansi Tumor

Model untuk Antikanker Obat Pembangunan , Fiebig H dan Burger AM (eds) pp 109-120.
Karger: Freiburg

Lipinski CA, Lombardo F, Dominy BW dan Feeney PJ (1997) Eksperimental dan pendekatan
komputasi untuk memperkirakan kelarutan dan permeabilitas dalam pengaturan penemuan dan
pengembangan obat. Adv Pengiriman obat Rev 23: 3-25

Monks A, Scudiero D, Skehan P, Shoemaker R, Paull K, Vistica D, Hose C, Langley J, Cronise

P, Vaigro-Wolff A, Gray-Goodrich M, Campbell H, Mayo J dan Boyd M (1991) Kelayakan
layar obat antikanker tinggi-fluks menggunakan panel beragam sel tumor manusia berbudaya.
J Natl Cancer Inst 83: 757-766

Paull KD, Shoemaker RH, Hodes L, Monks A, Scudiero DA, Rubinstein L, Pembajak J dan
Boyd MR (1989) Tampilan dan analisis pola aktivitas diferensial obat terhadap sel tumor
manusia: pengembangan grafik mean dan BANDINGKAN algoritma. J Natl Cancer Inst 81:
1088-1092

Paull KD, Hamel E dan Malspeis L (1995) Prediksi mekanisme biokimia tindakan dari in vitro
layar antitumor dari National Cancer Institute. Di: Kanker kemoterapi Agen . Foye WO (ed)
pp 9-45. Americal Kimia Masyarakat: Washington, DC

Phillips RM, Pearce J, Loadman PM, Bibby MC, Cooper PA, Swaine DJ dan Double JA
(1998). Angiogenesis dalam model tumor serat berongga mempengaruhi pengiriman obat ke
sel-sel tumor: implikasi untuk program skrining obat antikanker.kanker Res 58: 5263-5266
Pembajak J, Dykes DJ, Hollingshead M, Simpson-Herren L dan Alley MC (1997) model tumor
xenograft manusia. Di: Antikanker Pengembangan Obat Panduan: Screening praklinis, Clinical
Trials, dan Persetujuan , Teicher B (ed) pp 101-125. Humana Press: Totowa, NJ

Sausville EA dan Feigal E (1999) Berkembang pendekatan untuk penemuan obat kanker dan
pengembangan di National Cancer Institute, Amerika Serikat. Annals Oncol 10: 1287-1291

Scholz CC, Berger DP, WINTERHALTER BR, Henss H dan Fiebig HH (1990) Korelasi
respon obat pada pasien dan dalam uji clonogenic dengan xenografts tumor manusia yang solid.
Eur Kanker J 26: 901-905

Venditti JM (1981) pengembangan obat praklinis: pemikiran dan metode. Seminar Oncol 8:
349-361

Venditti JM, Wesley RA dan Ploughman J (1984) sekarang NCI antitumor praklinis skrining
in vivo: hasil skrining tumor panel, 1976-1982, dan arah masa depan. Adv Pharmacol
Chemother 20: 1-19

Zubrod CG, Schepartz S, Leiter J, Endicott KM, Carrese LM dan Baker CG (1966) Kemoterapi
program dari National Cancer Institute: sejarah, analisis dan rencana.