In vitro dan in efek anti-kanker usus vivo dari Garcinia mangostana

xanthones ekstrak

Abstrak
latar belakang

Xanthone adalah sekelompok senyawa heterosiklik yang mengandung oksigen dengan efek
farmakologi yang luar biasa seperti anti-kanker, antioksidan, anti-inflamasi, dan aktivitas
antimikroba.

metode

Ekstrak xanthones (81% α-mangostin dan 16% γ-mangostin), disiapkan oleh kristalisasi dari
ekstrak toluena dari G. rinds buah mangostana dan dianalisis dengan LC-MS. efek anti-kanker
usus besar diselidiki pada HCT 116 sel karsinoma kolorektal manusia termasuk sitotoksisitas,
apoptosis, anti-tumorigenicity, dan efek pada jalur sinyal sel. Aktivitas anti-kanker usus besar in
vivo juga diselidiki pada tumor subkutan didirikan pada tikus telanjang.

hasil

Ekstrak menunjukkan sitotoksisitas kuat (median konsentrasi penghambatan 6,5 ± 1,0 ug / ml),
karena induksi dari jalur mitokondria apoptosis. Tiga langkah kunci dalam metastasis tumor
termasuk migrasi sel, invasi sel dan clonogenicity, juga terhambat. Ekstrak dan α-mangostin up-
mengatur MAPK / ERK, c-Myc / Max, dan jalur sel p53 signaling. Xanthones ekstrak, ketika
diberi makan ke tikus telanjang, disebabkan penghambatan pertumbuhan yang signifikan dari
tumor subkutan HCT 116 sel karsinoma kolorektal.

kesimpulan

Data kami menunjukkan mekanisme baru aksi α-mangostin dan G. xanthones mangostana, dan
menyarankan ekstrak xanthones sebagai calon kanker anti-usus potensial.

Go to:

latar belakang
Garcinia mangostana L. atau manggis adalah pohon tropis dari keluarga Clusiaceae. Pohon ini
dibudidayakan selama berabad-abad di Asia Tenggara hutan hujan, dan dapat ditemukan di
banyak negara di seluruh dunia [ 1 ]. Pericarps buah telah digunakan dalam obat rakyat untuk
pengobatan banyak penyakit manusia seperti infeksi kulit dan luka, dan penyakit inflamasi [ 2 ].
Manggis juga digunakan sebagai bahan dalam beberapa produk komersial termasuk suplemen
gizi, kosmetik herbal, dan produk farmasi [ 1 ].

rinds buah manggis mengandung konsentrasi tinggi xanthones. α-Mangostin (1,3,6-trihidroksi-7-

metoksi-2,8-bis (3-metil-2-butenil) -9 H-xanthen-9-satu), dan γ-mangostin (1,3, 6,7-
tetrahidroksi-2,8-bis (3-methylbut-2-enil) xanthen-9-satu) (Gambar (Gambar 1) 1 ) yang
xanthones utama terisolasi dari G. mangostana [ 3 , 4 ].

Gambar 1
Struktur kimia α-mangostin dan γ-mangostin, konstituen utama dari G. xanthones
mangostana ekstrak.

G. xanthones mangostana mendapatkan lebih banyak dan lebih tertarik karena efek farmakologis
yang luar biasa mereka termasuk analgesik [ 5 ], antioksidan [ 6 ], anti-inflamasi [ 7 ], anti-
kanker [ 8 - 11 ] anti-alergi [ 12 ], antibakteri [ 13 ], anti-tuberkulosis [ 14 ], antijamur [ 15 ],
antivirus [ 16 ], cardioprotective [ 17 ], saraf [ 18 ], dan immunomodulation [ 19 ] efek.

Kanker kolorektal adalah yang ketiga dalam kejadian setelah paru-paru dan kanker payudara dan
menyumbang hampir 10% dari total kasus kanker dan hampir 8% dari total kematian akibat
kanker [ 20 ]. Menurut Organisasi Kesehatan Dunia (WHO), lebih dari 70% dari semua kematian
akibat kanker terjadi di negara-negara dengan pendapatan rendah dan menengah, dan kematian
akibat kanker di seluruh dunia diproyeksikan akan terus meningkat menjadi lebih dari 11 juta
pada tahun 2030 [ 21 ]. Oleh karena itu, ada peningkatan permintaan untuk terapi hemat biaya
dan agen kemoprevensi untuk berbagai jenis kanker. Beberapa studi telah menunjukkan produk
alami, terutama tanaman obat potensial kemoprevensi dan anti-kanker kandidat.

Sifat anti-kanker G. ekstrak mangostana atau xanthones murni telah dipelajari secara ekstensif in
vitro, namun beberapa laporan efek anti-kanker in vivo bisa dilacak. Ekstrak xanthone dari G.
mangostana telah dilaporkan dengan efek kemoprevensi melawan kanker usus kimiawi [ 8 ],
penekanan pertumbuhan tumor dan metastasis pada model tikus kanker payudara [ 9 ], dan
laporan terbaru menunjukkan penghambatan pertumbuhan kanker prostat oleh α-mangostin,
konstituen utama dari G. xanthones mangostana [ 22 ].

Penelitian ini bertujuan untuk menyelidiki in vitro sifat anti-kanker usus dari G. xanthones
mangostana ekstrak (81% α-mangostin dan 16% γ-mangostin) dari HCT 116 karsinoma
kolorektal manusia. Efek anti-kanker in vitro meliputi sitotoksisitas, apoptosis, migrasi sel, invasi
sel, dan clonogenicity. Mekanisme kerja ekstrak xanthone dan α-mangostin pada tingkat faktor
transkripsi dari 10 jalur sinyal yang terlibat dalam karsinogenesis kolon juga diselidiki.
Penelitian ini juga bertujuan untuk menyelidiki in vivo efek anti-kanker usus besar pada tumor
subkutan pra-mapan HCT 116 sel pada tikus telanjang NCR.

Go to:
metode
baris sel dan reagen

Manusia kolorektal garis sel karsinoma HCT 116; nomor katalog (CCL-247) dan CCD-18Co
fibroblast kolon normal; nomor katalog (CRL-1459) yang dibeli dari Amerika Type Culture
Collection (ATCC; Manassas, Virginia). RPMI 1640, Opti-MEM® dan media DMEM kultur sel,
panas tidak aktif janin bovine serum (HI-FBS), dan fosfat buffered saline (PBS) tanpa kalsium
dan magnesium yang dibeli dari Bio-Diagnostics (Petaling Jaya, Selangor, Malaysia). Cignal
finder ™ 10-jalur sistem reporter-array, dan matrigel matriks (10 mg / ml) yang dibeli dari
SABiosciences (Frederick, Maryland). Wizard® SV genomik sistem pemurnian DNA, caspases-
3/7, -8 dan -9 reagen, trans liposom cepat, dan sistem reporter ganda luciferase yang dibeli dari
Promega (Petaling Jaya, Selangor, Malaysia). Cisplatin, Hoechst 33258, Rhodamine 123,
agarosa, ethidium bromide, penisilin / streptomisin (PS) solusi, dimetilsulfoksida (DMSO),
phenazine metosulfat (PMS), dan 2,3-Bis (2-metoksi-4-nitro-5-sulfofenil ) -2 H -tetrazolium-5-
carboxanilide garam dalam (XTT) yang dibeli dari Sigma-Aldrich (Kuala Lumpur, Malaysia).
Pelarut yang analitis atau HPLC grade dan diperoleh dari Avantor Performance Materials
(Petaling Jaya, Selangor, Malaysia).

bahan tanaman dan ekstraksi

Matang G. buah mangostana dikumpulkan dari sebuah peternakan buah lokal di Pulau Penang,
Malaysia. Sebuah spesimen voucher (11.155) diendapkan di Herbarium dari School of Biological
Sciences, USM. Kulit buah buah cincang dan dikeringkan pada 45-50 ° C selama 24 jam.
Ekstrak toluena disiapkan dengan metode maserasi pada 1: 5 tanaman: rasio pelarut (wt / v),
pada 60 ° C selama 48 jam. Ekstrak disaring, terkonsentrasi pada 60 ° C dengan rotavapor
sampai sekitar 150 ml, dan mengkristal pada 2-8 ° C selama 24 jam. Sebuah padat kuning
dibentuk, yang dikumpulkan dan dikeringkan pada 50 ° C.

hewan

Athymic NCR nu / nu tikus telanjang diperoleh dari Taconic Farms Inc (Hudson, New York).
Mencit bertempat di gratis (SPF) kandang patogen tertentu disertakan dengan partikulat udara
(HEPA) filter efisiensi tinggi. Akses gratis ke makanan diautoklaf dan air disediakan dan tempat
tidur diautoklaf berubah dua kali seminggu. Prosedur telah disetujui oleh Komite Etik Hewan
USM dengan nomor referensi PPSG / 07 (A) / 044 / (2010) (59).

Kromatografi cair-spektrometri massa (LC-MS)

Xanthones ekstrak dianalisis oleh Dionex-Ultimate® 3000 Cepat sistem Pemisahan LC (Dionex,
Sunnyvale, California), terhubung dengan spektrometer massa Micro TOF-Q (Bruker, Madison,
Wisconsin). pemisahan kromatografi dilakukan dengan menggunakan Nucleosil C18 kolom (5
m, 4,6 × 250 mm) (Macherey-Nagel, Bethlehem, Pennsylvania), pada 30 ° C, fase mobile yang
terdiri dari 95% asetonitril dan 5% dari 0,1% asam format di air. Laju aliran ditetapkan pada 0,5
ml / menit selama 15 menit, dan data spektral dikumpulkan pada 244 nm. analisis massa
dilakukan di kisaran 50-1.000 m / z, di bawah mode ion negatif, dan nebulizer yang ditetapkan
pada 3,0 bar dan dipanaskan sampai 150 ° C. Tegangan kapiler diatur pada 3000 V menggunakan
nitrogen gas kering pada 8,0 L / menit. Pelat ujung mengimbangi dipertahankan pada -500 V.

Budaya sel

HCT 116 sel dipertahankan dalam RPMI 1640 medium dengan 10% HI-FBS dan 1% PS, dan
sel-sel CCD-18Co dipertahankan dalam medium DMEM dilengkapi dengan 10% HI-FBS dan
1% PS. Sel dikultur dalam 5% CO 2 dalam suasana lembab pada 37 ° C.

viabilitas sel

Viabilitas sel ditentukan dengan tes XTT seperti yang dijelaskan sebelumnya [ 23 ]. Secara
singkat, sel-sel diobati selama 48 jam, media kultur telah dihapus dan diganti dengan yang segar
mengandung XTT dan PMS pada 100 ug / ml dan 1 mg / ml, masing-masing. Setelah inkubasi
selama 4 jam, densitas optik diukur pada panjang gelombang 450 nm, menggunakan microplate
reader (Thermo Fisher Scientific, Ratastie, Vantaa, Finlandia). Hasil disajikan sebagai persentase
penghambatan terhadap kontrol negatif (0,5% DMSO) sebagai berikut:

penghambatan persentase = ( 1 - OD sampel - OD Kosong OD Kendaraan - OD Kosong ) × 100

(1)

Konsentrasi hambat median (IC 50) dihitung dari kurva respon dosis (n = 3).

Caspases-3/7, -8 dan -9

HCT 116 sel dirawat di piring 96-baik putih selama 90 menit. Selanjutnya, aktivitas caspases
diukur dengan caspase Glo 3/7, Glo 8 dan Glo 9 seperti yang dijelaskan sebelumnya [ 24 ].
Pendaran diukur dengan lempeng pembaca (Hidex, Mustionkatu, Turku, Finlandia), dan hasilnya
disajikan sebagai rata-rata unit cahaya relatif (RLU) ± SD (n = 4).

potensial membran mitokondria dan kondensasi kromatin

Rhodamine 123 dan Hoechst 33258 digunakan sebagai probe untuk mempelajari efek pada
potensial membran mitokondria dan kromatin kondensasi [ 25 , 26 ]. Secara singkat, HCT 116
sel diperlakukan dengan α-mangostin atau ekstrak xanthone pada konsentrasi yang berbeda
selama 2 jam. Selanjutnya, sel-sel tetap dalam paraformaldehyde 4% selama 20 menit, secara
bersamaan diwarnai dengan rhodamine 123 pada 1 mg / ml dan Hoechst 33.258 di 10 ug / ml
selama 20 menit, dicuci secara menyeluruh dengan PBS, dan diperiksa segera menggunakan
IX71 terbalik mikroskop fluorescent (Olympus , Shinjuku, Tokyo, Jepang). Sel morfologi
dievaluasi dengan mempelajari 5 bidang mikroskopis yang dipilih secara acak dan indeks
apoptosis dihitung.

fragmentasi DNA
HCT 116 (2 × 10 6) sel diobati selama 48 jam. Selanjutnya, sel-sel mengambang dan melekat
dikumpulkan dengan sentrifugasi pada 3000 rpm selama 10 menit, total DNA genom diekstraksi
menggunakan Wizard® SV sistem pemurnian DNA genomik, dan dianalisis dengan
elektroforesis pada 1,2% gel agarosa diwarnai dengan 0,5 mg / ml ethidium bromide .

Anti-tumorigenicity

Studi Anti-tumorigenicity termasuk clonogenicity, migrasi sel, dan invasi sel diselidiki pada HCT
116 sel. Efek pada clonogenicity yang dievaluasi dengan uji pembentukan koloni seperti yang
dijelaskan sebelumnya [ 27 ]. Lima ratus sel unggulan di piring 6-baik dalam 2,5 ml RPMI 1640
media, dan diinkubasi untuk memungkinkan lampiran. Setelah pengobatan 48 jam, obat itu
dihapus dan sel diinkubasi dalam media segar selama 12 hari. Koloni tetap di 4%
paraformaldehyde, diwarnai dengan 0,5% kristal violet, dan dihitung di bawah mikroskop stereo.
Efisiensi plating (PE) dari sel-sel yang tidak diobati dan fraksi kelangsungan hidup (SF) dari sel
diperlakukan kemudian ditentukan (n = 3).

Efek pada migrasi sel dipelajari oleh uji penyembuhan luka seperti yang dijelaskan sebelumnya [
28 ]. monolayer sel tergores menggunakan mikropipet tip 200-ml, sel-sel terpisah dicuci off, dan
sel-sel diperlakukan dalam medium yang mengandung 2% serum. Luka-luka itu kemudian difoto
pada waktu nol dan diinkubasi selama 24 jam. Jarak dari luka bebas sel itu kemudian diukur
menggunakan Leica QWin software analisis citra (Leica Microsystems Inc., Buffalo Grove,
Illinois), dan persentase penutupan luka dihitung relatif terhadap waktu nol.

Efek pada invasi sel dipelajari oleh modifikasi dari Boyden ruang uji menggunakan matrigel
matrix [ 29 ]. Pada dasarnya, 50 ml matrigel (5 mg / ml) dimasukkan ke piring 96-baik dan
diizinkan untuk memantapkan selama 45 menit. Sel diperlakukan (5 × 10 3 di 150 ml RPMI
menengah) ditambahkan ke masing-masing dengan baik dan diinkubasi selama 48 jam.
Selanjutnya, sel dicuci dengan PBS dan jumlah sel menyerang ditentukan di bawah mikroskop
cahaya terbalik. Hasil disajikan sebagai persentase penghambatan sel yang tidak diobati (n = 3).

Efek pada jalur sinyal sel

Uji ini dilakukan di 96-baik Format piring sesuai dengan instruksi produsen. Secara singkat,
HCT 116 sel transfected oleh transfeksi terbalik dengan konstruksi DNA dari 10 jalur sinyal,
kontrol positif, dan kontrol negatif. Setelah inkubasi semalam, sel-sel diperlakukan selama 6 jam
dalam media RPMI lengkap. Selanjutnya, aktivitas Firefly dan Renilla mengeluarkan enzim
diukur dengan menggunakan uji dual-luciferase. Hasilnya ditampilkan sebagai unit luciferase
relatif, yang dihasilkan dengan membagi rasio Firefly / Renilla transkripsi faktor-responsif
transfections reporter dengan rasio Firefly / Renilla dari transfections kontrol negatif (n = 3).
Perubahan kali lipat dalam aktivitas faktor transkripsi kemudian dihitung dengan membagi hasil
sel diperlakukan dengan itu dari sel yang tidak diobati.

Dalam Vivo aktivitas anti-tumor

Dua puluh empat tikus telanjang berusia 6-8 minggu dengan berat rata-rata 25 g disuntikkan
subkutan di sayap kanan dengan 5 × 10 6 sel dalam 150 ml RPMI. Setelah 7-10 hari, hewan
dengan ukuran tumor seragam dibagi menjadi 3 kelompok 6 hewan. ukuran tumor dan berat
badan dicatat sebelum memulai pengobatan dan pada interval 5-hari selama 20 hari. Hewan
diperlakukan dengan mencampur ekstrak dengan makanan hewan di 0,25% dan ekstrak 0,5%:
rasio makanan (wt / wt). Dimensi tumor diukur dengan kaliber di 2 sudut, panjang dan lebar [
30 ]. Ukuran tumor kemudian dihitung seperti yang dijelaskan sebelumnya [ 30 - 32 ], dengan
menerapkan rumus (((W + L) / 2) ^ 3) × 2, di mana W adalah lebar dan L adalah panjang.
Ukuran tumor pada tumor dengan lebih dari satu lobus dihitung dengan penjumlahan dari ukuran
lobus individu [ 30 ]. penampang dari tumor kemudian disiapkan, diwarnai dengan Eosin /
Hematoxylin, dan dipelajari untuk kehadiran sel nekrotik dan untuk jumlah pembuluh darah
intratumor. pembuluh darah dihitung pada 20 x pembesaran di 25 bidang mikroskopis per tumor,
dan hasilnya disajikan sebagai rata-rata jumlah pembuluh darah per tumor ± SD.

Analisis statistik

Hasil disajikan sebagai mean ± SD. Perbedaan antara kelompok dibandingkan dengan One-way
ANOVA, dan dianggap signifikan pada P <0,05. Analisis data dilakukan dengan menggunakan
SSPS 16.0 software.

Go to:

hasil
analisis fitokimia

Ekstrak diperoleh pada 5% yield (wt / wt) relatif terhadap bahan tanaman kering. analisis LC-MS
menunjukkan adanya 5 senyawa; α-mangostin, adalah 81%, γ-mangostin adalah 16%, dan 3
senyawa lain 3%, persentase senyawa dihitung berdasarkan luas puncak (Tabel (Table1 1 ).

Tabel 1
Spektrometri massa G. ekstrak xanthones mangostana

sitotoksisitas

Xanthones ekstrak, α-mangostin, dan γ-mangostin menyebabkan dosis tergantung pembunuhan

sel kanker usus besar (Gambar (Figure2a), 2 a), menunjukkan IC 50-an dari 6,5 ± 1,0 ug / ml, 5,1 ±
0,2 mg / ml, dan 7,2 ± 0,4 mg / ml, masing-masing. Sel normal CCD-18Co, tidak seperti HCT
116 sel, yang 2 lipatan kurang sensitif menunjukkan IC 50 dari 11,1 ± 0,4 mg / ml (α-mangostin),
dan 13,0 ± 0,6 mg / ml (xanthones ekstrak). Cisplatin, sebagai kontrol positif, juga menunjukkan
dosis sitotoksisitas tergantung pada sel-sel kanker usus besar memberikan IC 50 sebesar 6,1 ± 0,2
mg / ml.

Gambar 2
Sitotoksik dan efek apoptosis α-mangostin dan xanthones ekstrak pada HCT 116 sel kurva
respon dosis yang xanthones ekstrak pada HCT 116 dan sel CCD-18Co pada rentang konsentrasi
2,5 -. 30 ug / ml (a). Efek ...

Efek pada caspases-3/7, -8 dan -9

α-Mangostin dan xanthones ekstrak pada 10 dan 20 mg / ml, menunjukkan peningkatan yang
cepat dari caspases-3/7 aktivitas setelah pengobatan selama 90 menit (Gambar (Figure2b). 2 b).
Pada konsentrasi 5 ug / ml, sedikit peningkatan tapi tidak signifikan dalam aktivitas yang dicapai
(P> 0,05). Senyawa pengobatan juga menyebabkan peningkatan signifikan dari aktivitas caspase-
9 di HCT 116 sel, tetapi tidak caspase-8 aktivitas (Gambar (Figure2c). 2 c). Peningkatan caspase-
9 aktivitas hampir 8-lipatan lebih dari itu dari caspase-8.

Efek pada fragmentasi DNA

Analisis dari total DNA genom dengan elektroforesis gel agarosa mengungkapkan fragmentasi
DNA jelas dalam HCT 116 sel (Gambar (Figure2d). 2 d). Hasil menunjukkan bahwa caspases
efektor dieksekusi sinyal apoptosis dirangsang oleh senyawa pengobatan.

Efek pada potensial membran mitokondria dari HCT 116 sel

The rhodamine pewarnaan menunjukkan morfologi yang berbeda dari sel apoptosis, yang
bernoda lebih terang dari sel-sel non-apoptosis (Gambar (Figure3a). 3 a). Hasilnya menunjukkan
konsentrasi yang lebih rendah dari rhodamine 123 karena hilangnya potensial membran
mitokondria. Indeks apoptosis sel α-mangostin-dirawat di 20 ug / ml adalah (55 ± 9)%, dan
ekstrak xanthones adalah (13,2 ± 2,4)%, (38 ± 4,5)%, (47 ± 4,5)% , dan (68 ± 9)% 7,5, 10, 15
dan 20 mg / ml, masing-masing. induksi yang signifikan dari apoptosis, dibandingkan dengan
sel-sel yang tidak diobati (5,1 ± 2,3)%, diperoleh pada 3 konsentrasi terakhir (P = 0,0),
sedangkan tidak ada pengaruh yang signifikan diamati pada konsentrasi 7,5 mg / ml (P = 0,2).

Gambar 3
Efek ekstrak xanthone pada mitokondria membran potensial dan kromatin kondensasi The
mitokondria membran potensial (a):. Kontrol negatif (1), α-mangostin pada 20 ug / (2) ml dan
xanthones ekstrak pada 20 ug / ml ...
Efek pada kromatin kondensasi dan fragmentasi nuklir

α-Mangostin pada 20 ug / ml, dan ekstrak xanthones yang disebabkan induksi bergantung
signifikan dan dosis kondensasi kromatin dan fragmentasi nuklir di HCT 116 sel setelah 2
pengobatan h. Pewarnaan dengan probe DNA Hoechst 33258 menghasilkan morfologi nuklir
berbeda dari sel apoptosis, yang bernoda lebih cerah, dengan atau tanpa fragmentasi nuklir,
sedangkan sel-sel non-apoptosis menunjukkan inti seragam patri di bawah intens (Gambar
(Figure3b). The 3 b). Indeks apoptosis α-mangostin-diperlakukan sel adalah (47 ± 5,5)%, dan
ekstrak itu (4,4 ± 3)%, (37 ± 7)%, (39 ± 10)%, dan (52 ± 9 )% 7,5, 10, 15 dan 20 mg / ml,
masing-masing. Dibandingkan dengan kendaraan sendiri (3,3 ± 3)%, induksi signifikan
apoptosis diperoleh pada 10, 15 dan 20 mg / ml (P = 0,0), sedangkan pengobatan di 7,5 ug / ml
tidak menunjukkan efek apoptosis, (P = 0.99).

Anti-tumorigenicity

Senyawa menghambat clonogenicity dari HCT 116 sel (Gambar (Figure4a). 4 a). PE adalah (54
± 2)%, dan SF di sel diperlakukan dengan ekstrak xanthones adalah 0% pada semua konsentrasi.
SF dalam sel diperlakukan α-mangostin adalah 0% pada 20, 15, 10 dan 7,5 mg / ml, dan (7,8 ±
0,3)% pada 5 ug / ml.

Gambar 4
Efek anti-tumorigenicity dari xanthones ekstrak pada HCT 116 sel Clonogenicity (a):.
Kontrol negatif (1), α-mangostin pada 5 ug / ml (2) dan xanthones ekstrak pada 5 ug / ml (3). Sel
migrasi (b): luka difoto ...

Migrasi sel juga terhambat di kedua perawatan (Gambar (Figure4b). 4 b). Persentase penutupan
luka pada sel-sel yang tidak diobati adalah (65 ± 4,3)%. α-Mangostin, pada 5 ug / ml,
mengurangi persentase penutupan luka ke (41 ± 2,7)%, (P = 0,0). Demikian juga, ekstrak
xanthones, pada 3 dan 5 mg / ml, mengurangi persentase luka penutupan untuk (42 ± 4,2)% dan
(56 ± 3,4)%, (P <0,05). Invasi sel matrigel juga dihambat oleh α-mangostin pada 6 mg / ml (78 ±
6)%, dan oleh santon ekstrak pada 6 mg / ml (78 ± 8)% dan 4,5 ug / ml (57 ± 8) %. Selain
mengurangi jumlah sel matrigel-menyerang, senyawa pengobatan juga menyebabkan perubahan
morfologi sel yang diperlakukan ditandai dengan penyusutan sitoplasma dan kontraksi polypodia
seluler (Gambar (Figure4 4 c).

Efek pada jalur sinyal sel

transfected HCT 116 sel yang dirawat di 2 konsentrasi 7,5 dan 10 ug / ml selama 6 jam, dan
hasilnya dalam sel diperlakukan dibandingkan dengan mereka yang dirawat dengan kendaraan
sendiri (0,5% DMSO). Aktivitas faktor transkripsi dari 10 jalur berkurang dengan
memperlakukan sel-sel dengan 10 ug / ml ekstrak xanthone dan α-mangostin. Namun, sel-sel
diperlakukan menunjukkan morfologi apoptosis, yang menunjukkan downregulation dari jalur
sinyal terjadi sebagai konsekuensi dari apoptosis. Perawatan di 7,5 ug / ml tidak menyebabkan
perubahan apoptosis pada sel-sel diobati, tetapi mengakibatkan efek diferensial pada jalur sinyal.
Perubahan kali lipat dalam aktivitas faktor transkripsi dalam sel dirawat di 7,5 ug / ml
ditampilkan pada Gambar 5 . Aktivitas faktor transkripsi dari MAPK / ERK jalur meningkat
sebesar 71% dalam sel α-mangostin yang diobati dan 97% di xanthones sel ekstrak-diobati.
Aktivitas Myc / Max jalur sinyal juga meningkat sebesar 48% pada α-mangostin dan 60% di
xanthones sel ekstrak-diobati. Selain itu, aktivitas jalur p53 signaling meningkat sebesar 30%
dalam sel α-mangostin yang diobati dan 50% di xanthones sel ekstrak-diobati. Sebaliknya,
aktivitas jalur NFkB dihambat oleh 30% dalam pengobatan α-mangostin dan 13% dalam sel
ekstrak-diobati. Di sisi lain, senyawa pengobatan tidak menyebabkan perubahan signifikan
dalam Wnt, Notch, TGFb, siklus sel, hipoksia dan / JNK jalur sinyal MAPK.

Gambar 5
Pengaruh ekstrak xanthone dan α-mangostin (7,5 mg / ml) pada aktivitas faktor
transkripsi dari jalur sinyal 10 sel. Perubahan kali lipat dalam aktivitas faktor transkripsi
dihitung dengan membagi cahaya relatif ...

Akibatnya kanker anti-usus Vivo

The in vivo efek anti-kanker usus dari ekstrak xanthones diselidiki pada model tumor subkutan
HCT 116 didirikan pada NCR nu / nu tikus telanjang. Hasil disajikan sebagai ukuran tumor rata-
rata ± SD (n = 6). Perlakuan dengan ekstrak α-mangostin menyebabkan nekrosis jelas dari tumor
pra-didirikan pada 2 hewan (Gambar (Figure6a), 6 ), dan menyebabkan penurunan yang
signifikan dalam ukuran tumor dibandingkan dengan kelompok yang tidak diobati. Analisis data
dilakukan dengan mempertimbangkan ukuran tumor pada 5-hari interval dan menunjukkan
bahwa penurunan yang signifikan dalam ukuran tumor dicapai setelah 15 hari (0,5% wt / wt),
dan 20 hari (0,25% wt / wt) pengobatan, P < 0,05, (Gambar (Figure6b). 6 b). Analisis penampang
tumor menunjukkan perbedaan nyata dalam tingkat daerah nekrotik antara diperlakukan terhadap
tumor diobati (Gambar (Figure6c). 6 c). Sel-sel apoptosis / nekrotik tumor diobati mendominasi
atas sel-sel tumor yang layak yang muncul sebagai pulau-pulau di tengah-tengah sel nekrotik.
Sebaliknya, tumor diobati lebih kompak dengan lebih banyaknya sel tumor yang layak.

Gambar 6
Tumor subkutan di NCR tikus telanjang (a): kelompok yang tidak diobati (1), dan
kelompok dirawat di 0,5% wt / wt dari ekstrak xanthones (2) Analisis ukuran tumor (b).
Analisis ukuran tumor terhadap waktu ( hari) setelah pengobatan dengan xanthones ekstrak pada
2 ...
Rata-rata jumlah pembuluh darah intratumor adalah 3,9 ± 0,6 / mikroskopis lapangan (0,5% wt /
wt) dan 4 ± 0,3 / bidang mikroskopis (0,25% wt / wt), secara signifikan lebih rendah
dibandingkan pada kelompok kontrol (7,8 ± 1,2) , P = 0,0.

Selain itu, efek pada berat badan hewan juga diselidiki dan hasilnya disajikan sebagai persentase
rata-rata berat badan atau berat. Data menunjukkan penurunan berat badan sedikit, tapi tidak
signifikan secara statistik dalam kelompok perlakuan -4,4 ± 10% (0,5% wt / wt) dan -1,5 ± 2,4%
(0,25% wt / wt), dibandingkan dengan 5,3 ± 6% (kontrol kelompok), P = 0,1 dan 0,4, masing-
masing.

Go to:

Diskusi
Xanthones ekstrak G. rinds buah mangostana mengandung terutama α-mangostin dan γ-
mangostin. Garis sel HCT 116 terpilih sebagai model karsinoma kolorektal manusia [ 33 ], dan
CCD-18Co fibroblast manusia normal terpilih sebagai garis sel kontrol. Sitotoksisitas ekstrak
xanthones, α-mangostin dan γ-mangostin adalah sebanding dengan cisplatin, dan ekstrak
xanthones hampir 2 kali lebih sitotoksik pada sel-sel kanker usus besar dari pada sel normal,
yang menunjukkan selektivitas tinggi terhadap kanker usus besar sel.

Studi apoptosis mengungkapkan peningkatan algojo caspases-3/7, aktivasi inisiator caspase-9,

induksi fragmentasi DNA dan kromatin kondensasi, dan hilangnya potensial membran
mitokondria. Hasil ini menunjukkan peran jalur mitokondria apoptosis dalam memediasi
sitotoksisitas senyawa. Hasil kami konsisten dengan hasil sebelumnya peneliti lain [ 10 , 34 ],
dan memberikan bukti lebih lanjut tentang efek apoptosis G. mangostana, dan menunjukkan
xanthones buah ini sebagai calon anti-kanker yang potensial.

konsentrasi sub-sitotoksik α-mangostin dan ekstrak xanthones menghambat 3 langkah kunci

dalam metastasis tumor termasuk migrasi sel, invasi sel dan clonogenicity. Hasil ini, dalam
kombinasi hasil peneliti lain [ 9 , 35 ], menunjukkan efek anti-metastasis potensi G. xanthones
mangostana.

Dalam rangka untuk mendapatkan wawasan lebih dalam mekanisme kerja, alat tes reporter
berbasis sel digunakan untuk mempelajari pengaruh α-mangostin dan xanthones ekstrak pada
aktivitas faktor transkripsi Notch itu, Wnt / β-Catenin, TGFβ, p53 , HIF, Myc, E2F, NFkB,
MAPK / ERK (SRE), dan MAPK / JNK (AP-1) jalur sinyal. Senyawa meningkatkan aktivitas
faktor transkripsi MAPK / ERK, Myc / Max, dan kerusakan p53 / DNA jalur sinyal. Penelitian
sebelumnya menunjukkan bahwa ERK jalur diaktifkan dikaitkan dengan peningkatan stabilitas
dan aktivitas p53, dan meningkatkan stabilitas c-Myc yang pada gilirannya meningkatkan efek
proapoptotik gen tumor p53 penekan [ 36 , 37 ]. Studi terbaru menunjukkan bahwa aktivasi jalur
ERK yang terlibat dalam mendorong apoptosis, sebagai konsekuensi dari kerusakan DNA yang
disebabkan oleh cisplatin [ 38 ], etoposid [ 39 ], doxorubicin, dan pengion dan radiasi ultraviolet
[ 40 ]. Oleh karena itu, peningkatan regulasi jalur ERK dapat memberikan target terapi untuk
jenis kanker yang berbeda [ 41 - 43 ], namun penyelidikan lebih lanjut diperlukan untuk
mempelajari pengaruh dari ERK jalur diaktifkan pada ekspresi protein proapoptotic seperti p21
dan Bax. α-Mangostin juga menyebabkan penghambatan jalur NFkB. Downregulation dari jalur
ini dikaitkan dengan peningkatan sensitivitas sel chemoresistant [ 44 ], dan karenanya α-
mangostin dapat menyadarkan sel kanker usus besar dengan efek apoptosis kemoterapi.

Mekanisme yang berbeda dari tindakan mangostins telah dilaporkan termasuk peningkatan
regulasi dari ½ ERK di SLJJ 1-sel kanker usus besar [ 8 ], penghambatan TCF / β-catenin
aktivitas transkripsi pada sel kanker usus besar [ 11 ], dan penghambatan MAPK / ERK ,
MAPK / JNK dan Akt jalur sinyal pada sel chondrosarcoma manusia [ 45 ]. Temuan ini
menunjukkan bahwa mangostins dapat bekerja dengan mekanisme yang berbeda pada sel tumor
yang berbeda. konsentrasi obat dan lamanya pengobatan memiliki efek signifikan pada
kelangsungan hidup sel, dan karenanya ini mungkin memiliki pengaruh besar pada aktivitas jalur
sinyal.

Penelitian kanker anti-usus In vivo mengungkapkan penghambatan yang signifikan dari

pertumbuhan tumor. Efek Anti-tumor dari ekstrak dapat dijelaskan karena sitotoksisitas langsung
pada sel-sel tumor seperti terlihat dengan adanya nekrosis luas dalam tumor subkutan, atau
karena mengurangi suplai darah intratumor terbukti dari penurunan yang signifikan dalam
jumlah intratumor pembuluh darah, atau karena kombinasi keduanya mekanisme.

Go to:

kesimpulan
Secara bersama-sama, data kami menunjukkan mekanisme baru aksi α-mangostin dan
menyarankan ekstrak xanthones dari G. mangostana sebagai kandidat kanker anti-usus potensial.

Go to:

bersaing kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan yang terkait dengan pekerjaan ini.

Go to:

kontribusi penulis
AFA melakukan percobaan, dilakukan analisis statistik, dan disusun naskah. KM menafsirkan
hasil jalur sinyal sel dan membantu dalam mengedit naskah. ZI ditafsirkan data LC-MS. AMS
berpartisipasi dalam desain penelitian dan diedit naskah. Semua penulis membaca dan
menyetujui naskah akhir.