BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Konsumsi tahunan pestisida di seluruh dunia telah mencapai 2,7 × 106 ton
dalam beberapa tahun terakhir (FAO, 2017) dan dapat semakin meningkat karena
meningkatnya populasi manusia, perubahan iklim, dan meningkatnya tekanan hama
(Network, 2016). Telah dilaporkan bahwa sisa pestisida dapat muncul di daerah
murni seperti air tanah, hutan pegunungan air laut dan area kutub (Morris et al.,
2016). Selain itu, banyak pestisida yang digunakan saat ini telah dilaporkan sebagai
senyawa persisten, bioakumulasi, dan beracun dan terdaftar sebagai kandidat
potensial untuk substitusi dan / atau sebagai polutan prioritas (Komisi Eropa, 2015).
Ini menunjukkan bahwa pestisida harus dipantau secara sistematis di lingkungan
dan risiko mereka terhadap organisme non-target harus dipertimbangkan dengan
cermat.

Pada 2015, tujuh puluh lima tanah subur Ceko dianalisis untuk kehadiran
53 pestisida yang baru-baru ini digunakan dan 15 produk transformasi (Hvězdová
et al., 2018). Pestisida yang paling sering ditemukan adalah herbisida triazine yang
diwakili terutama oleh produk transformasi atrazin (dilarang selama satu dekade
terakhir), yaitu, 2-hydroxyatrazine (39% dari tanah, kadarnya hingga 0,123 mg/kg),
dan fungisida conazole, yaitu epoxiconazole (48% dari tanah, hingga 0,031 mg/kg),
tebuconazole (36% dari tanah, hingga 0,028 mg/kg), flilazazole (23% dari tanah,
hingga 0,019 mg/kg), dan prochloraz (21% dari tanah, hingga 0,028 mg/kg). Dari
pestisida yang diteliti, pendimethalin disajikan pada konsentrasi tertinggi (0,139
mg / kg) (Hvězdová et al., 2018). Meskipun temuan ini mungkin mengkhawatirkan
sendiri (Hvězdová et al., 2018), mereka tidak memberikan gambaran lengkap
tentang risiko nyata yang terkait dengan keberadaan residu pestisida di tanah.
1.2 Rumusan Masalah

1. Apakah sisa pestisida kimia akan semakin menghilang dari tanah untuk
menurunkan isinya,
2. Apa tingkat paparan aktual sisa pestisida lapangan ini ke non-target,
3. Apakah sisa pestisida menimbulkan potensi yang signifikan untuk
bioakumulasi dalam biota tanah dan jaring makanan.

Untuk menjawab rumusan masalah diatas, tanah yang paling terkontaminasi

dari Hvězdová et al. (2018) menjadi sasaran studi mikrokosmos laboratorium untuk
mengukur penyebaran sisa pestisisa jangka panjang, penyerapannya ke tanaman
selada dan cacing tanah serta tingkat eksposurnya dalam air melalui Solid –Phase
Microextraction (SPME) atau fasa padatan mikro ekstraksi. Secara paralel, skenario
terburuk yang terdiri dari pemaparan titik akhir biologis dan serat SPME ke pasir
yang terkontaminasi laboratorium (untuk cacing tanah) dan tanah (untuk tanaman)
dilakukan. Hal ini memungkinkan perbandingan antara nasib, partisi dan
ketersediaan hayati bahan kimia yang baru ditambahkan dan yang sudah tua
(bidang), yang dari sudut pandang penilaian risiko merupakan contoh dari skenario
terburuk dan skenario nyata, masing-masing. .

1.3 Tujuan

Secara umum tujuan adalah untuk penelitian ini meningkatkan pemahaman

kita tentang ancaman yang terkait dengan penggunaan pestisida sebelumnya
(misalnya, melalui penilaian sistematis tentang perilaku 2-hydroxyatrazine) dan
penggunaan pestisida saat ini yang diperiksa oleh UE untuk bahaya (misalnya,
fungisida conazole). Ini juga berkontribusi pada kuantifikasi tingkat residu pestisida
yang dapat diterima di tanah yang tidak mungkin menimbulkan risiko bagi spesies
non-target dan kontaminasi jaringan makanan pada musim tanam berikutnya.
BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

BAB III
METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Sampel dan Bahan Kimia

Pasir (partikel N50% berukuran 0,05-0,2 mm) dibeli dari Filtrační Písky,
sro (Hornbach, Chlum). Standar kimia pestisida (epoxiconazole, tebuconazole,
flililazole, prochloraz, pendimethalin, dan 2-hydroxyatrazine) dibeli dari Pestanal®
(Sigma Aldrich, Jerman). Sifat-sifat bahan kimia yang diuji dirangkum dalam Tabel
S1. Asetonitril dan metanol (kemurnian ≥99,9%) dibeli dari Chromasolv® (Sigma
Aldrich, Jerman).

3.2. Tanah dan pasir penelitian

Pengambilan sampel tanah dilakukan dalam survei besar terhadap 75 tanah

subur (Hvězdová et al., 2018) yang semuanya disaring untuk residu pestisida.
Metodologi pengambilan sampel dan pemrosesan sampel dijelaskan secara rinci
dalam Hv inzdová et al. (2018). Karena periode pengambilan sampel pada bulan
Februari dan aplikasi pestisida terakhir yang diharapkan pada bulan November,
residu pestisida di tanah sampel setidaknya berumur 5 bulan. Dari tanah sampel,
empat model tanah digunakan dalam penelitian saat ini yang berisi tingkat tertinggi
fungisida conazole (FC01), pendimethalin (FC02), dan 2-hydroxyatrazine (FC03
dan FC04). Selain senyawa yang disebutkan di atas, FC02 juga mengandung
epoxiconazole, FC03 prochloraz dan FC04 tebuconazole. Sifat-sifat tanah termasuk
konsentrasi awal bahan kimia dirangkum dalam Tabel S2. Sebelum percobaan,
tanah dicampur dengan pupuk NPK (1 g per kg berat kering, dw) dan dibasahi
hingga 50% dari kapasitas penampung air (WHC).
Bersama dengan empat bidang tanah, pasir dibubuhi konsentrasi 0,1 mg / kgdw
(mirip dengan tingkat lapangan tertinggi) digunakan (CS - pasir terkontaminasi)
sebagai kontrol positif (skenario kasus terburuk) dalam cacing tanah uji
bioakumulasi. Untuk uji bioakumulasi tanaman, pasir diganti dengan tanah berpasir
karena selada tidak dapat tumbuh di pasir. Tanah kontrol ini terkontaminasi pada
tingkat 0,1 mg / kgdw dan disebut sebagai tanah yang terkontaminasi laboratorium
(LC). Sifat-sifat pasir dan tanah bersama dengan konsentrasi awal bahan kimia yang
diuji disediakan pada Tabel S2.

Pembentukan pasir dan tanah kontrol dilakukan sebagai berikut:

1700 g pasir kering / tanah dibasahi hingga 50% WHC dan dibagi menjadi setengah.
Kemudian, 50 mL larutan stok aseton yang mengandung 0,17 mg epoxiconazole,
tebuconazole, flililazole, prochloraz, pendimethalin, dan 2-hydroxyatrazine
masing-masing ditambahkan masing-masing ke satu bagian pasir dan tanah. Pasir /
tanah ini serta setara bebas pelarut dicampur secara menyeluruh. Tingkat
penguapan pelarut dari matriks berduri pelarut diukur sebagai perbedaan antara
penurunan berat pelarut berduri pelarut dan varian bebas pelarut. Berat yang
sebanding antara varian diperoleh setelah 2 jam pencampuran dan menunjukkan
penguapan lengkap dari pelarut pembawa. Kemudian, varian pasir dan tanah
berduri dan tidak berduri dicampur bersama, dibiarkan selama tiga hari dalam
lemari asam untuk membiarkan senyawa bergabung dengan padatan, dan kemudian
digunakan dalam percobaan lebih lanjut.

3.3. Pembuangan

Total kandungan bahan kimia dalam tanah dan pasir diukur pada awal uji
akumulasi tanaman (hari 0 percobaan) dan pada hari ke 12, 40, dan 90. Percobaan
dilakukan di rumah kaca di bawah kondisi suhu yang terkendali (15-22 °C) dan
kelembaban udara (85%). Kurva pembuangan menunjukkan perubahan temporal
dalam total isi pestisida yang diterapkan untuk mengendalikan tanah / pasir
serta residu pestisida berumur lapangan selama uji akumulasi tanaman dibangun
dan digunakan untuk memperoleh waktu paruh pestisida (lihat Bagian 3.8 (Evaluasi
Data dan Analisis Statistik)).

3.4. Penyerapan tanaman

Sebagian setara dengan 1500 gdw dari setiap tanah dimasukkan ke dalam
kotak (20 × 30 cm) yang ditambahkan enam biji selada Lactuca sativa (pra-
budidaya pada kapas yang dilembabkan selama 24 jam). Kotak ditempatkan ke
dalam rumah kaca di mana eksperimen berjalan di bawah suhu terkendali (15-22 °
C), kelembaban udara (85%), dan penyinaran 10 jam cahaya / 14 jam gelap.
Pertumbuhan selada diperiksa dan kadar air (kehilangan dikendalikan oleh bobot
kotak) diisi ulang setiap hari. Pada hari ke 90, selada diambil sampelnya, dicuci
dalam air ledeng, dikeringkan dengan lembut, diliofilisasi, dan dianalisis untuk
kandungan bahan kimia target dalam daun dan akar secara terpisah

sebagaimana dijelaskan dalam Bagian 3.7 (Contoh Ekstraksi dan Analisis).

3.5. Solid –Phase Microextraction (SPME)

Serat SPME dilapisi dengan polydimethylsiloxane (PDMS, ketebalan 30

μm, 13,55 ± 0,02 μL PDMS serat per meter) dibeli dari Polymicro Technologies
Inc. (AS) dan dipotong-potong sepanjang 4 cm. Sebelum pemaparan, serat
dibersihkan dengan metanol (2 × 24 jam) dan air deionisasi (2 × 24 jam). Dua belas
serat terkubur di setiap tanah yang digunakan dalam uji akumulasi tanaman. Setelah
12, 40 dan 90 hari, 4 serat dikeluarkan dengan hati-hati dari tanah, dibersihkan
dengan lembut dengan tisu basah untuk menghilangkan partikel tanah yang
melekat, direndam dalam 20 mL metanol yang diubah dengan standar pengganti
(metolachlor, 500 ng per sampel), dan diekstraksi dengan mengocok selama 48 jam.
Kemudian, volume ekstrak disesuaikan menjadi 0,5 mL di bawah nitrogen dan
dianalisis seperti yang ditunjukkan dalam Informasi Tambahan (SI, Analisis sampel
dan Tabel S3).

3.6. Serapan cacing

Uji bioakumulasi dilakukan dengan cacing tanah Eisenia andrei dalam botol
kaca 0,5 L. Sepuluh orang dewasa (dengan clitellum yang berkembang baik) cacing
tanah (dalam rangkap tiga) ditimbang dan ditempatkan di tanah atau pasir yang
lembab (50% WHC) setara dengan 150 gdw. Stoples ditutup dengan tutup
berlubang (untuk memungkinkan aerasi) dan disimpan dalam gelap pada 20 ± 2 °
C. Setiap hari, kehilangan air diperiksa dengan menimbang guci dan, jika perlu,
kadar air disesuaikan dengan tingkat aslinya. Pengalaman dilakukan selama 14 hari
dan selama 21 hari. Periode paparan 14 hari dipilih berdasarkan hasil percobaan
kinetik pendahuluan kami (Svobodová et al., 2018) di mana keadaan mantap dari
dua pestisida yang digunakan saat ini di cacing tanah tercapai dalam 14 hari.
Periode paparan ini juga direkomendasikan oleh OECD Guideline 207 tentang uji
toksisitas akut dengan cacing tanah (OECD, 1984). Periode paparan 21 hari
mengikuti rekomendasi OECD Guideline 317 pada tes bioakumulasi dengan cacing
tanah (OECD, 2010). Pada akhir paparan, cacing tanah diambil dari tanah dan
ditempatkan di atas kertas serat yang dibasahi dalam cawan Petri selama 24 jam
untuk mengosongkan isi perut mereka. Setelah itu, cacing tanah dibilas dengan air,
dikeringkan, ditimbang, diliofilisasi, ditimbang lagi dan dianalisis untuk kandungan
bahan kimia target seperti yang dijelaskan dalam Bagian 3.7 (Contoh Ekstraksi dan
Analisis).

3.7. Ekstraksi dan analisis sampel Sampel

tanah, pasir, tanaman, dan cacing tanah dianalisis untuk total kandungan
bahan kimia menggunakan metode ekstraksi QuEChERS dan kit ekstraksi
komersial (Agilent Technologies, USA). Metode ini telah berhasil digunakan
sebelumnya untuk ekstraksi senyawa yang diteliti (Anastassiades et al., 2003;
Bruzzoniti et al., 2014; Lesueur et al., 2008; Sivaperumal et al., 2015; Yu et al.,
2006) . Prosedur ekstraksi dilakukan sebagai berikut: 5,0 ± 0,1 gdw tanah / pasir,
0,55 ± 0,01 gdw selada atau 0,45-0,75 gdw cacing tanah diguncang dengan 5 mL,
9,45 mL atau 9,25-9,55 mL, masing-masing, dari deionisasi air dan 10 mL
asetonitril diubah dengan metolachlor sebagai standar pengganti (500 ng per
sampel). Sampel selanjutnya diubah dengan 6,5 g KECEPATAN Ekstrak Kantong
(MgSO4, NaCl, HOC (COONa) (CH2COONa) 2 • 2H2O, HOC (COOH)
(CH2COONa) 2 • 1.5H2O). Campuran dikocok dengan tangan selama 1 menit dan
kemudian disonikasi selama 15 menit. Setelah pengocokan,tanaman dan sampel
cacing tanah dibersihkan dengan ekstraksi mikro fase padat dispersif (PSA - bahan
pertukaran amina primer dan sekunder, MgSO4). Kemudian, sampel disentrifugasi
(5 menit, 3000 rpm) dan alikuot 1 mL asetonitril diambil untuk analisis
menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi tandem spektrometri massa (HPLC-
MS / MS). Rincian tentang analisis disediakan dalam Informasi Tambahan (SI,
analisis Sampel dan Tabel S3). Efisiensi ekstraksi rata-rata 97% ± 14% untuk
sampel tanah, 79% ± 6,9% untuk serat SPME, 88% ± 15% untuk sampel selada,
dan 98% ± 6,0% untuk sampel cacing tanah. Semua hasil diperbaiki untuk itu.

3.8. Evaluasi data dan analisis statistik

bahan kimia dimodelkan menggunakan regresi non-linear di mana data

dilengkapi dengan persamaan peluruhan eksponensial satu fase: C = C0 • e (Kt)
(GraphPad Prism 5, GraphPad Software, Inc., USA), di mana C adalah konsentrasi
dalam tanah (ng / gdw) pada hari pengambilan sampel masing-masing (hari), C0
adalah konsentrasi tanah awal (ng / gdw), dan K adalah konstanta laju degradasi
(hari − 1). Dari kurva disipasi, waktu paruh (DT50) dari senyawa yang diuji berasal.
Mereka memberikan ukuran kuantitatif dari persistensi senyawa. Signifikansi
perbedaan antara varian tes dinilai menggunakan perangkat lunak STATISTICA
(uji-t, p = 0,05). Biokonsentrasi (BCF) dan faktor bioakumulasi (BAF) dihitung
sebagai konsentrasi dalam jaringan (ng / gww) dibagi dengan konsentrasi dalam
tanah (ng / gdw) pada titik waktu pengambilan sampel tertentu. Nilai ambang (akar
selada 3.0 ng / gww, tunas selada 1.3 ng / gww, 1.5 pMg / mL PDMS) yang
disediakan dalam Tabel 2 dan 3 mewakili konsentrasi terendah pada akar selada,
tunas selada, dan serat SPME, masing-masing, yang dapat diukur dengan andal
dengan metode HPLC-MS / MS berdasarkan batas kuantifikasi (1 ng / mL ekstrak)
dan bobot matriks yang diekstraksi per sampel. Dengan demikian, nilai ambang
untuk faktor biokonsentrasi dan bioakumulasi (1,5, 0,65 dan masing-masing1,6)
masing-masing dalam Tabel 2 dan 4, dihitung sebagai nilai ambang untuk
konsentrasi dalam jaringan dibagi dengan nilai ambang untuk konsentrasi dalam
tanah. Oleh karena itu, jika nilai ambang disajikan dalam sel tabel, itu berarti bahwa
senyawa tersebut hadir di tanah di atas ambang batas tetapi tidak terakumulasi
dalam jaringan ke tingkat yang terkuantifikasi. Sel-sel kosong menunjukkan bahwa
senyawa tersebut tidak dipertimbangkan dalam percobaan karena berdasarkan
penyaringan sebelumnya (Hvězdová et al., 2018), konsentrasi dalam tanah di bawah
ambang batas yang diberikan oleh batas kuantifikasi.