1.

ditimbang TSIA dengan timbangan elektrik

2. dimasukkan ke dalam tabung Erlenmeyer yang bersih dan kering

3. ditambahkan 100 ml aquades ke dalam tabung Erlenmeyer yang berisi serbuk TSIA

4. sabuk dicampur dan dipanaskan serta aduk

5. ditambahkan phenol red beberapa ml

6. didihkan selama 1 menit untuk melarutkan media secara sempurna

7. disterilisasi media pada autoklaf dengan suhu 121 C selama 15 menit

8. setelah di sterilisasi dalam oven cawan cawan petri steril dan tabung reaksi steril diletakkan di meja di
dekat kawat tersebut disiapkan pembakar Spiritus atau pembakar bunsen yang sudah dinyalakan

9. dinginkan hingga suhu 40-45 C dan tuang dalam cawan petri. saat penuangan media dapat dilakukan
di dalam lemari inokulasi atau laminar air flow aparatus (BSC). saat menuang media ke dalam cawan
petri dan tabung reaksi harus dilakukan secara aseptik.

10. Teknik ini dapat dilakukan dengan mengikuti tahap-tahap sebagai berikut :

EllenMeyer yang berisi media steril yang telah cair dikeluarkan dari autoklaf dan suhunya dibiarkan
menurun sampai mencapai kurang lebih 45 C. pada suhu ini botol dipegang tanpa menggunakan lap atau
alat bantu. sumbat botol atau tabung diangkat dengan tangan kiri.

kapas penutup tabung reaksi dibuka dengan menggunakan sisa jari tangan kiri dan media sebanyak 5-10
ml dituang secara aseptik. tabung reaksi ditutup dan tabung dimiringkan 45. media di dalam tabung
reaksi dibiarkan menjadi dingin dan padat media ini dinamakan media agar miring.

setelah didinginkan medium dapat dibungkus dengan kantong plastik (media agar-agar cawan dan
media agar padat dan disimpan dalam refrigenerator sampai waktu untuk digunakan.