BAB III

METODE PENELITIAN

Metode penelitian yang digunakan adalah metode eksperimental. Tahap

penelitian meliputi pengambilan bahan tumbuhan, identifikasi bahan tumbuhan,

pembuatan simplisia, karakterisasi simplisia, skrining fitokimia, pembuatan

ekstrak etanol dan fraksi kulit buah sawo manila, kemudian dilakukan uji aktivitas

antibakteri menggunakan metode difusi agar dengan cakram kertas. Parameter

yang diamati yaitu besarnya diameter daya hambat pertumbuhan bakteri.

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakognosi dan Mikrobiologi

Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, Medan.

3.1 Alat

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat-alat gelas

laboratorium, aluminium foil, autoklaf (Fisons), benang, blender (Panasonic), bola

karet, deck glass, desikator, hair dryer (Panasonic), hot plate (Fisons), inkubator

(Fiber Scientific), jangka sorong, jarum ose, kamera digital (Canon), kapas

(Swallow), karet, kasa (Swallow), kertas label, kertas perkamen, kertas saring,

krus porselin, laminar air flow cabinet (Astec HLF 1200L), lampu spiritus, lemari

pendingin (Glacio), mikroskop (Olympus), neraca listrik (Mettler Tolledo), objek

glass, oven (Memmert), penangas air (Yenaco), perkolator, penjepit tabung,

pinset, pipet mikro (Eppendorf), plastik, rotary evaporator (Haake D),

spektrofotometer visible (Dinamica), seperangkat alat penetapan kadar air, spatula

dan tanur (Nabertherm).

19
3.2 Bahan

Bahan yang digunakan adalah kulit buah sawo manila (Manilkara zapota

(L.) P. Royen), nutrient agar (NA), nutrient broth (NB), bakteri Staphylococcus

aureus dan Escherichia coli, air suling. Bahan kimia yang digunakan berkualitas

pro analisis, kecuali dinyatakan lain yaitu alfa naftol, alkohol 70%, amil alkohol,

asam klorida pekat, asam asetat anhidrida, asam nitrat, asam sulfat pekat, besi (III)

klorida, bismuth (III) nitrat, dimetilsulfoksida (DMSO), etanol 96%, etilasetat,

iodium, isopropanol, kalium iodida, kloralhidrat, kloroform, metanol, natrium

hidroksida, natrium klorida, natrium sulfat anhidrida, n-heksana, raksa (II)

klorida, serbuk magnesium, serbuk zinkum, timbal (II) asetat dan toluena.

3.3 Penyiapan Bahan Tumbuhan

Penyiapan bahan tumbuhan meliputi pengambilan bahan tumbuhan,

identifikasi bahan tumbuhan dan pembuatan simplisia kulit buah sawo manila

(Manilkara zapota (L.) P. Royen).

3.3.1 Pengumpulan bahan tumbuhan

Pengambilan bahan tumbuhan dilakukan secara purposif yaitu tanpa

membandingkan dengan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Bahan yang

diambil adalah buah sawo manila matang yang diperoleh dari pasar buah Setia

Budi Tanjung Sari Medan, Provinsi Sumatera Utara. Sampel yang digunakan

adalah kulit buah sawo manila (Manilkara zapota (L.) P. Royen).

3.3.2 Identifikasi tumbuhan

Identifikasi bahan tumbuhan dilakukan di Herbarium Bogoriense, Bidang

Botani Pusat Penelitian dan Pengembangan Biologi-LIPI, Cibinong Bogor. Hasil

identifikasi tumbuhan dapat dilihat pada Lampiran 1, halaman 45.

20
3.3.3 Pembuatan simplisia

Pembuatan simplisia dilakukan dengan cara buah sawo manila (segar yang

telah dikumpulkan, dibersihkan dari pengotor yang melekat, lalu dicuci dengan air

sampai bersih dan ditiriskan. Kulit buah sawo manila dikupas dengan pisau

sehingga terpisah antara kulit buah dengan daging buah. Gambar kulit buah sawo

manila dapat dilihat pada Lampiran 3, halaman 47. Kulit buah sawo manila

kemudian dikeringkan di dalam lemari pengering sampai simplisia rapuh ketika

diremas. Gambar simplisia kulit buah sawo manila dapat dilihat pada Lampiran 4,

halaman 48. Simplisia yang sudah kering selanjutnya diblender menjadi serbuk

dan disimpan dalam wadah plastik yang tertutup rapat. Gambar serbuk simplisia

kulit buah sawo manila dapat dilihat pada Lampiran 5, halaman 49.

3.4 Pembuatan Pereaksi

3.4.1 Pereaksi Mayer

Larutan raksa (II) klorida P 2,26% b/v sebanyak 60 ml dicampur dengan

10 ml larutan kalium iodida P 50% b/v, kemudian ditambahkan air secukupnya

hingga 100 ml (Depkes RI, 1995).

3.4.2 Pereaksi Dragendorff

Larutan bismuth (III) nitrat P 40% b/v dalam asam nitrat P sebanyak 20 ml

dicampur dengan 50 ml kalium iodida P 54,4% b/v, didiamkan sampai memisah

sempurna, lalu diambil lapisan jernihnya dan diencerkan dengan air secukupnya

hingga 100 ml (Depkes RI, 1995).

3.4.3 Pereaksi Bouchardat

Sebanyak 4 g kalium iodida P dilarutkan dalam air suling secukupnya

kemudian ditambahkan 2 g iodida P sedikit demi sedikit, cukupkan dengan air

21
suling sampai 100 ml (Depkes RI, 1995).

3.4.4 Pereaksi Molish

Sebanyak3 g α-naftol P dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N hingga

diperoleh larutan 100 ml (Depkes RI, 1995).

3.4.5 Pereaksi Liebermann-Burchard

Campurkan 5 ml asam sulfat pekat dengan 50 ml etanol. Tambahkan hati-

hati 5 ml asam asetat anhidrida ke dalam campuran tersebut dan didinginkan

(Depkes RI, 1995).

3.4.6 Pereaksi besi (III) klorida 1% b/v

Sebanyak 1 g besi (III) klorida dilarutkan dalam air suling sampai 100 ml

(Depkes RI, 1995).

3.4.7 Pereaksi timbal (II) asetat 0,4 M

Sebanyak 15,17 g timbal (II) asetat P dilarutkan dalam air suling bebas

CO2 hingga 100 ml (Depkes RI, 1995).

3.4.8 Pereaksi asam klorida 2 N

Sebanyak 17 ml asam klorida pekat diencerkan dengan air suling sampai

100 ml (Depkes RI, 1995).

3.4.9 Pereaksi natrium hidroksida 2 N

Sebanyak 8,001 g natrium hidroksida ditimbang, kemudian dilarutkan

dalam air suling hingga 100 ml (Depkes RI, 1995).

3.4.10 Larutan asam sulfat 2 N

Larutan asam sulfat pekat sebanyak 9,8 ml ditambahan air suling sampai

100 ml (Depkes RI, 1995).

3.4.11 Larutan kloralhidrat

Sebanyak 50 g kristal kloralhidrat ditimbang lalu dilarutkan dalam 20 ml

22
air suling (Depkes RI, 1995).

3.5 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia

Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik,

mikroskopik, penetapan kadar air, penetapan kadar sari yang larut dalam air,

penetapan kadar sari yang larut dalam etanol, penetapan kadar abu total dan

penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam.

3.5.1 Pemeriksaan makroskopik

Pemeriksan makroskopik dilakukan dengan mengamati morfologi luar

tumbuhan yaitu bentuk, ukuran dan permukaan kulit sedangkan pemeriksaan

organoleptis meliputi bau, rasa dan warna dari kulit buah sawo manila.

3.5.2 Pemeriksaan mikroskopik

Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia kulit buah

sawo manila. Serbuk simplisia ditaburkan diatas kaca objek yang telah ditetesi

dengan kloralhidrat dan ditutup dengan kaca penutup, kemudian dilihat dibawah

mikroskop. Gambar mikroskopik serbuk simplisia dapat dilihat pada Lampiran 6,

halaman 50.

3.5.3 Penetapan kadar air

Penetapan kadar air dilakukan dengan metode Azeotropi (destilasi

toluena). Sebanyak 200 ml toluen dan 2 ml air suling dimasukkan ke dalam labu

alas bulat, dipasang alat penampung dan pendingin, kemudian didestilasi selama 2

jam. Destilasi dihentikan dan dibiarkan dingin selama 30 menit, kemudian volume

air dalam tabung penerima dibaca dengan ketelitian 0,05 ml. Sebanyak 5 g serbuk

simplisia yang telah ditimbang seksama dimasukkan ke dalam labu yang berisi

toluen jenuh tersebut, dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Kecepatan tetesan

23
diatur lebih kurang 2 tetes tiap detik setelah toluen mendidih, hingga sebagian air

tersuling, kemudian naikkan kecepatan penyulingan hingga 4 tetes tiap detik.

Bagian dalam pendingin dibilas dengan toluen setelah semua air tersuling.

Penyulingan dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan

mendingin sampai suhu kamar. Volume dibaca dengan ketelitian 0,05 ml setelah

air dan toluen memisah sempurna. Selisih kedua volume air dibaca sesuai dengan

kandungan air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa (WHO, 1998).

Perhitungan kadar air dapat dilihat pada Lampiran 8, halaman 55.

3.5.4 Penetapan kadar sari yang larut dalam air

Sebanyak 5 g serbuk simplisia, dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml

air-kloroform (2,5 ml kloroform dalam air suling sampai 1 liter) dalam labu

bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan

selama 18 jam, lalu disaring. Uapkan 20 ml filtrat sampai kering dalam cawan

penguap yang berdasar rata yang telah ditara dan sisa dipanaskan pada suhu

105°C sampai diperoleh bobot tetap. Kadar sari yang larut dalam air dihitung

terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995). Perhitungan kadar sari

yang larut dalam air dapat dilihat pada Lampiran 9, halaman 56.

3.5.5 Penetapan kadar sari yang larut dalam etanol

Sebanyak 5 g serbuk simplisia, dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml

etanol 96% dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama,

kemudian dibiarkan selama 18 jam lalu disaring cepat untuk menghindari

penguapan etanol. Uapkan 20 ml filtrat sampai kering dalam cawan penguap yang

berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan pada suhu 105°C

sampai diperoleh bobot tetap. Kadar sari yang larut dalam etanol 96% dihitung

terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995). Perhitungan kadar sari

24
yang larut dalam etanol dapat dilihat pada Lampiran 10, halaman 57.

3.5.6 Penetapan kadar abu total

Sebanyak 2 g serbuk yang telah digerus dan ditimbang seksama

dimasukkan dalam krus porselin yang telah dipijar dan ditara, kemudian

diratakan. Krus dipijar perlahan-lahan sampai arang habis, pijaran dilakukan pada

suhu 600°C selama 3 jam kemudian didinginkan dan ditimbang sampai diperoleh

bobot tetap. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes

RI, 1995). Perhitungan kadar abu total dapat dilihat pada Lampiran 11, halaman

58.

3.5.7 Penetapan kadar abu tidak larut dalam asam

Abu yang diperoleh dalam penetapan kadar abu dididihkan dalam 25 ml

asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam

dikumpulkan, disaring melalui kertas saring, dipijarkan, kemudian didinginkan

dan ditimbang sampai bobot tetap. Kadar abu yang tidak larut dalam asam

dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995). Perhitungan

kadar abu yang tidak larut dalam asam dapat dilihat pada Lampiran 12, halaman

59.

3.6 Skrining Fitokimia

3.6.1 Pemeriksaan alkaloida

Serbuk simplisia ditimbang 0,5 g kemudian ditambahkan 1 ml asam

klorida 2 N dan 9 ml air suling, dipanaskan diatas penangas air selama 2 menit,

didinginkan dan disaring. Filtrat yang diperoleh dipakai untuk uji alkaloida

sebagai berikut:

a. Filtrat 3 tetes ditambah 2 tetes larutan pereaksi Mayer, maka akan terbentuk

25
endapan menggumpal berwarna putih atau putih kekuningan.

b. Filtrat 3 tetes ditambah 2 tetes larutan pereaksi Bouchardat, maka akan

terbentuk endapan berwarna coklat.

c. Filtrat 3 tetes ditambah 2 tetes larutan pereaksi Dragendorff, maka akan

terbentuk endapan warna merah atau jingga.

Alkaloida disebut positif jika terjadi endapan atau kekeruhan paling sedikit dua

dari tiga percobaan diatas (Depkes RI, 1995).

3.6.2 Pemeriksaan flavonoida

Sebanyak 10 g serbuk simplisia ditambahkan 10 ml air panas, dididihkan

selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas, ke dalam 5 ml filtrat

ditambahkan 0,1 g serbuk magnesium dan 1 ml asam klorida pekat dan 2 ml amil

alkohol, dikocok dan dibiarkan memisah. Flavonoida positif jika terjadi warna

merah atau kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol (Farnsworth, 1966).

3.6.3 Pemeriksaan glikosida

Sebanyak 3 g serbuk simplisia ditimbang, lalu disari dengan 30 ml

campuran dari 7 bagian etanol 95% dan 3 bagian air suling, kemudian

ditambahkan 10 ml HCl 2 N dan direfluks selama 10 menit, didinginkan, lalu

disaring. Sebanyak 20 ml filtrat, ditambahkan 25 ml air suling dan 25 ml timbal

(II) asetat 0,4 M, dikocok, didiamkan 5 menit lalu disaring. Filtrat disari dengan

20 ml campuran 2 bagian isopropanol dan 3 bagian kloroform, perlakuan ini

diulangi sebanyak 3 kali. Sari air dikumpulkan dan ditambahkan Na2SO4 anhidrat,

disaring kemudian diuapkan pada temperatur tidak lebih dari 50°C, sisanya

dilarutkan dalam 2 ml metanol. Larutan sisa digunakan untuk percobaan berikut:

sepersepuluh ml larutan percobaan dimasukkan dalam tabung reaksi, kemudian

diuapkan di atas penangas air. Sisa penguapan ditambahkan 2 ml air dan 5 tetes

26
larutan pereaksi Molish, lalu ditambahkan dengan hati-hati 2 ml asam sulfat

pekat, terbentuk cincin ungu pada batas kedua cairan (Depkes RI, 1995).

3.6.4 Pemeriksaan tanin

Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia disari dengan 10 ml air suling lalu

disaring, filtratnya diencerkan dengan air sampai tidak berwarna. Larutan diambil

sebanyak 2 ml dan ditambahkan 1-2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1 %.

Terbentuknya warna biru atau kehitaman menunjukkan adanya tanin (Farnsworth,

1966).

3.6.5 Pemeriksaan saponin

Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia dimasukan ke dalam tabung reaksi, lalu

ditambahkan 10 ml air panas, dinginkan kemudian dikocok kuat-kuat selama 10

detik. Saponin positif jika terbentuk busa setinggi 1-10 cm yang stabil tidak

kurang dari 10 menit dan tidak hilang dengan penambahan 1 tetes asam klorida 2

N (Depkes RI, 1995).

3.6.6 Pemeriksaan steroid/triterpenoid

Sebanyak 1 g serbuk simplisia dimaserasi dengan 20 ml eter selama 2 jam,

lalu disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap. Sisa pengupan ditambahkan

20 tetes asam asetat anhidrida dan 1 tetes asam sulfat pekat (pereaksi Liebermann-

Burchard), diteteskan pada saat akan mereaksikan sampel uji. Terbentuknya

warna biru atau biru hijau menunjukkan adanya steroid, sedangkan warna merah,

merah muda atau ungu menunjukkan adanya triterpenoid (Harborne, 1987).

3.7 Pembuatan Ekstrak Etanol Kulit Buah Sawo Manila

Sebanyak 300 g serbuk simplisia dimasukkan kedalam wadah kaca yang

bertutup, cairan penyari (etanol 96%) dituangi sampai semua simplisia terendam,

27
biarkan sekurang-kurangnya selama 3 jam. Pindahkan massa sedikit demi sedikit

ke dalam perkolator sambil tiap kali di tekan hati-hati, tuangi cairan penyari

secukupnya sampai cairan mulai menetes dan di atas simplisia masih terdapat

selapis cairan penyari, perkolator ditutup dan dibiarkan selama 24 jam. Cairan

dibiarkan menetes dengan kecepatan 1 ml tiap menit, cairan penyari ditambahkan

berulang-ulang secukupnya hingga selalu terdapat selapis cairan penyari diatas

simplisia. Perkolasi dihentikan hingga 500 mg perkolat yang keluar terakhir

diuapkan tidak meninggalkan sisa. Perkolat yang diperoleh dipekatkan dengan

alat penguap rotary evaporator (Depkes RI, a.2000). Bagan pembuatan ekstrak

etanol dapat dilihat pada Lampiran 7, halaman 52.

3.7.1 Pembuatan fraksi-fraksi dari ekstrak etanol

Sebanyak 30 g ekstrak etanol dilarutkan dengan 60 ml etanol dan

ditambahkan 150 ml air suling, dimasukkan ke dalam corong pisah, ditambahkan

150 ml n-heksana, dikocok, didiamkan sampai lapisan terpisah, pisahkan, diambil

lapisan n-heksana dan diuapkan. Lapisan air ditambahkan 150 ml etilasetat,

dikocok, didiamkan sampai lapisan terpisah, pisahkan, diambil lapisan etilasetat,

diuapkan, selanjutnya diambil fraksi air dan diuapkan. Masing-masing fraksi di uji

aktivitas antibakteri. Bagan pembuatan fraksi dapat dilihat pada Lampiran 7,

halaman 53.

3.8 Sterilisasi Alat

Alat-alat yang digunakan dalam uji aktivitas antibakteri ini, disterilkan

terlebih dahulu sebelum dipakai. Alat-alat gelas disterilkan di dalam oven pada

suhu 170°C selama 1 jam. Media disterilkan di autoklaf pada suhu 121°C selama

15 menit. Jarum ose dan pinset disterilkan dengan lampu bunsen (Lay, 1994).

28
3.9 Pembuatan Media

3.9.1 Media nutrient agar (NA)

Komposisi: Lab-Lemco Powder 1 g/L

Yeast Extract 2 g/L

Peptone 5 g/L

Sodium Chloride 5 g/L

Agar 15 g/L

Cara pembuatan: Sebanyak 28 g nutrien agar (NA) disuspensikan kedalam air

suling 1000 ml, lalu dipanaskan sampai bahan larut sempurna dan disterilkan di

dalam autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit (Oxoid, 1982).

3.9.2 Media nutrient broth (NB)

Komposisi: Lab-Lemco Powder 1 g/L

Yeast Extract 2 g/L

Peptone 5 g/L

Sodium Chloride 5 g/L

Cara pembuatan : Sebanyak 13 g media nutrient broth (NB) dilarutkan dengan air

suling 1000 ml, lalu dipanaskan sampai larut sempurna, kemudian media

dimasukkan dalam erlenmeyer steril yang bertutup dan disterilkan dalam autoklaf

pada suhu 121oC selama 15 menit (Oxoid, 1982).

3.10 Pembuatan Media Agar Miring

Tabung reaksi yang steril dimasukkan 3 ml media nutrient agar steril yang

sebelumnya sudah dicairkan, kemudian didiamkan sampai memadat pada posisi

miring membentuk sudut 30-45º dan disimpan dalam lemari pendingin pada suhu

5ºC.

29
3.11 Pembuatan Stok Kultur

Biakan bakteri Staphylococcus aureus diambil dengan jarum ose steril lalu

diinokulasikan pada permukaan media nutrient agar miring dengan cara

menggores, kemudian diinkubasi dalam inkubator pada suhu 35 ± 2°C selama 18-

24 jam. Prosedur yang sama juga dilakukan pada biakan bakteri Escherichia coli.

Bagan pembuatan stok kultur dapat dilihat pada Lampiran 7, halaman 54.

3.12 Penyiapan Inokulum Bakteri

Koloni bakteri Staphylococcus aureus diambil dari stok kultur

menggunakan jarum ose steril kemudian disuspensikan ke dalam 10 ml media

nutrient broth steril lalu diinkubasikan pada suhu 35 ± 2°C sampai didapat

kekeruhan dengan transmitan 25% menggunakan alat spektrofotometer UV

panjang gelombang 580 nm (Ditjen POM, 1995). Prosedur yang sama juga

dilakukan untuk koloni bakteri Escherichia coli. Bagan pembuatan inokulum

bakteri dapat dilihat pada Lampiran 7, halaman 54.

3.13 Pembuatan Larutan Uji Ekstrak Etanol, Fraksi n-Heksana, Fraksi

Etilasetat dan Fraksi Air Kulit Buah Sawo Manila dengan Berbagai
Konsentrasi

Ekstrak etanol dan fraksi air masing-masing ditimbang sebanyak 1 g,

kemudian dilarutkan dalam dimetilsulfoksida (DMSO) sebanyak 2 ml sedangkan

fraksi n-heksana dan fraksi etilasetat masing-masing ditimbang sebanyak 0,5 g,

kemudian dilarutkan dalam dimetilsulfoksida (DMSO) sebanyak 1 ml. Masing-

masing diaduk hingga larut dan didapat konsentrasi 500 mg/ml, kemudian dibuat

pengenceran dengan konsentrasi 400 mg/ml, 300 mg/ml, 200 mg/ml, 100 mg/ml

dan 50 mg/ml.

30
3.14 Pengujian Aktivitas Antibakteri Secara In Vitro

Sebanyak 0,1 ml inokulum (Staphylococcus aureus) dimasukkan ke dalam

cawan petri steril, setelah itu dituang media Nutrient Agar (NA) yang telah

dicairkan sebanyak 15 ml dengan suhu 45-50°C dihomogenkan sampai media dan

bakteri tercampur rata, kemudian dibiarkan sampai media memadat. Cakram

kertas yang telah direndam dengan ekstrak/fraksi dengan berbagai konsentrasi dan

pelarut DMSO sebagai blanko diletakkan pada media yang telah padat, kemudian

diinkubasi dalam inkubator pada suhu 35 ± 2°C selama 18-24 jam. Diameter

daerah hambat di sekitar larutan penguji diukur dengan menggunakan jangka

sorong (Ditjen POM, 1995). Prosedur yang sama juga dilakukan terhadap

Escherichia coli. Bagan pengujian aktivitas antibakteri dapat dilihat pada

Lampiran 7, halaman 54.

31
 BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan

Hasil identifikasi tumbuhan yang dilakukan di Herbarium Bogoriense

Bidang Botani Pusat Penelitian dan Pengembangan Biologi–LIPI Bogor, di

Cibinong menunjukkan bahwa bahan tumbuhan adalah buah sawo manila, jenis

Manilkara zapota (L.) P. Royen, suku Sapotaceae.

4.2 Hasil Karakterisasi Simplisia

4.2.1 Pemeriksaan makroskopik

Hasil pemeriksaan makroskopik morfologi luar kulit buah sawo manila

segar yaitu permukaan kulitnya sedikit kasar, panjangnya ± 3 cm dan lebarnya ± 2

cm. Pemeriksaan organoleptis kulit buah sawo manila segar yaitu berwarna coklat

muda, rasanya kelat dan agak pahit serta berbau khas. Hasil pemeriksaan

makroskopik morfologi luar simplisia kulit buah sawo manila yaitu permukaan

kulitnya sedikit kasar, panjangnya ± 2,5 cm dan lebarnya ± 1,5 cm. Pemeriksaan

organoleptis simplisia kulit buah sawo manila yaitu kulitnya berwarna coklat tua

dan berkeriput, rasanya kelat dan agak pahit serta berbau khas.

4.2.2 Pemeriksaan mikroskopik

Hasil pemeriksaan mikroskopik dari serbuk simplisia kulit buah sawo

manila (Manilkara zapota (L.) P. Royen) menunjukkan adanya parenkim berisi

sel minyak, serabut sklerenkim dan berkas pembuluh berbentuk spiral.

4.2.3 Hasil pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia

Hasil karakteristik serbuk simplisia kulit buah sawo manila dapat dilihat

32
pada Tabel 4.1 berikut.

Tabel 4.1. Data karakterisasi serbuk simplisia kulit buah sawo manila
No. Jenis karakterisasi Kadar (%)
1. Penetapan kadar air 2,31
2. Penetapan kadar sari larut air 64,48
3. Penetapan kadar sari larut etanol 59,60
4. Penetapan kadar abu 6,32
5. Penetapan kadar abu tidak larut asam 0,49

Berdasarkan tabel di atas diperoleh kadar air sebesar 2,31 %. Kadar air

yang diperoleh telah memenuhi persyaratan MMI yakni tidak melebihi 10%.

Penetapan kadar air pada simplisia dilakukan untuk mengetahui jumlah air yang

terkandung dalam simplisia yang digunakan. Kadar air simplisia ditetapkan untuk

menjaga kualitas simplisia karena kadar air berkaitan dengan kemungkinan

pertumbuhan jamur/kapang (Depkes RI, b.2000).

Hasil karakterisasi kadar sari larut air diperoleh sebesar 64,48 % dan kadar

sari larut dalam etanol diperoleh sebesar 59,60 %. Penetapan kadar sari dapat

dilihat bahwa kadar sari yang larut dalam air lebih tinggi daripada kadar sari yang

larut dalam etanol, hal ini menunjukkan bahwa senyawa yang terlarut dalam air

lebih besar daripada senyawa yang terlarut dalam etanol. Senyawa-senyawa yang

dapat larut dalam air adalah glikosida, tanin dan flavonoid sedangkan senyawa-

senyawa yang dapat larut dalam etanol adalah glikosida, steroid/triterpenoid dan

flavonoid (Depkes RI, b.2000).

Hasil karakterisasi kadar abu total diperoleh sebesar 6,32% dan kadar abu

yang tidak larut asam diperoleh sebesar 0,49%. Penetapan kadar abu total

dilakukan untuk memberikan gambaran kandungan mineral internal dan eksternal

dari proses awal sampai terbentuknya ekstrak sedangkan penetapan kadar abu

33
tidak larut dalam asam dilakukan untuk mengetahui kadar senyawa yang tidak

larut dalam asam, misalnya silika dan pasir (Depkes RI, b.2000).

4.3 Hasil Skrining Fitokimia

Hasil skrining fitokimia terhadap simplisia, ekstrak etanol, fraksi n-

heksana, fraksi etilasetat dan fraksi air kulit buah sawo manila (Manilkara zapota

(L.) P. Royen) dapat dilihat pada Tabel 4.2 sebagai berikut.

Tabel 4.2 Hasil skrining fitokimia kulit buah sawo manila

No. Skrining Serbuk Ekstrak Fraksi n- Fraksi Fraksi
simplisia etanol heksana etilasetat air
1. Alkaloid - - - - -
2. Flavonoid + + - + +
3. Glikosida + + - + +
4. Saponin - - - - -
5. Tanin + + - + -
6. Steroid/triterpenoid + + + - -
Keterangan: (+) positif : mengandung golongan senyawa
(-) negatif : tidak mengandung golongan senyawa

Serbuk simplisia dan ekstrak etanol kulit buah sawo manila yang

ditambahkan pereaksi Molish dan asam sulfat pekat, terbentuk cincin berwarna

ungu pada batas cairan hal ini menunjukkan adanya glikosida. Penambahan

serbuk Mg, asam klorida pekat dan amil alkohol kemudian dibiarkan memisah

memberikan warna kuning jingga hal ini menunjukkan adanya senyawa flavonoid.

Penambahan FeCl3 1% memberikan warna hijau kebiruan yang menunjukkan

adanya senyawa tanin. Penambahan pereaksi Liebermann-Burchard memberikan

warna ungu menunjukkan adanya steroid/triterpenoid. Fraksi n-heksana yang

ditambahkan pereaksi Liebermann-Burchard memberikan warna ungu

menunjukkan adanya steroid/triterpenoid. Fraksi etilasetat yang ditambahkan

pereaksi Molish dan asam sulfat pekat, terbentuk cincin berwarna ungu pada batas

34
cairan hal ini menunjukkan adanya glikosida. Penambahan serbuk Mg, asam

klorida pekat dan amil alkohol kemudian dibiarkan memisah memberikan warna

kuning jingga hal ini menunjukkan adanya senyawa flavonoid. Penambahan

FeCl3 1% memberikan warna hijau kebiruan yang menunjukkan adanya senyawa

tanin. Fraksi air yang ditambahkan pereaksi Molish dan asam sulfat pekat,

terbentuk cincin berwarna ungu pada batas cairan hal ini menunjukkan adanya

glikosida. Penambahan serbuk Mg, asam klorida pekat dan amil alkohol kemudian

dibiarkan memisah memberikan warna kuning jingga hal ini menunjukkan adanya

senyawa flavonoid.

4.4 Hasil Ekstraksi Kulit Buah Sawo Manila

Hasil perkolasi 300 g serbuk kulit buah sawo manila (Manilkara zapota

(L.) P. Royen) dengan pelarut etanol 96% yaitu sebanyak 85 g, kemudian

dilakukan fraksinasi dari 30 g ekstrak etanol diperoleh hasil fraksi n-heksana 0,78

g, fraksi etilasetat 0,92 g dan fraksi air 24,47 g.

4.5 Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol, Fraksi n-Heksana,

Fraksi Etilasetat dan Fraksi Air Kulit Buah Sawo Manila terhadap
Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli

Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol, fraksi n-heksana, fraksi

etilasetat dan fraksi air kulit buah sawo manila dapat menghambat pertumbuhan

bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Konsentrasi ekstrak semakin

tinggi maka diameter hambat semakin besar, karena semakin banyak zat aktif

yang terkandung dalam ekstrak tersebut (Dwijoseputro, 1994). Hasil pengukuran

diameter daerah hambat ekstrak etanol, fraksi n-heksana, fraksi etilasetat dan

fraksi air kulit buah sawo manila terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan

35
Escherichia coli dapat dilihat pada Tabel 4.3 dan Tabel 4.4 berikut.

Tabel 4.3 Hasil pengukuran diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri

Staphylococcus aureus
No. Konsentrasi Diameter daerah hambat (mm)*
(mg/ml) Ekstrak Fraksi Fraksi Fraksi
Etanol n-heksana Etilasetat Air
1. 500 20,53 16,46 20,46 19,88
2. 400 19,73 14,76 19,58 18,18
3. 300 18,63 10,93 17,83 16,75
4. 200 17,3 7,78 16,53 15,01
5. 100 16,25 7,31 15,48 13,8
6. 50 14,41 7,05 13,43 12,63
7. Blanko - - - -

Tabel 4.4 Hasil pengukuran diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri

Escherichia coli
No. Konsentrasi Diameter daerah hambat (mm)*
(mg/ml) Ekstrak Fraksi Fraksi Fraksi
Etanol n-heksana Etilasetat Air
1. 500 20,11 9,03 18,73 10,03
2. 400 18,35 8,13 16,98 8,8
3. 300 17,26 7,75 15,9 8,36
4. 200 15,5 7,66 15,36 8,08
5. 100 14,25 7,5 15,11 7,53
6. 50 13,43 7,21 12,16 6,9
7. Blanko - - - -
Keterangan: (*) = Hasil rata-rata tiga kali pengukuran
(-) = Tidak ada hambatan
Blanko = DMSO

Berdasarkan Farmakope Indonesia (1995), batas daerah hambatan yang

efektif adalah dengan diameter lebih kurang dari 14 mm sampai 16 mm. Tabel 4.3

dan 4.4 di atas menunjukkan bahwa ekstrak etanol memberikan diameter daerah

hambat yang efektif terhadap Staphylococcus aureus yang diperoleh pada

konsentrasi 50 mg/ml dengan diameter daerah hambat 14,41 mm sedangkan pada

Escherichia coli diameter daerah hambat yang efektif pada konsentrasi 100 mg/ml

dengan diameter14,25 mm. Fraksi etilasetat memberikan diameter daerah hambat

yang efektif terhadap Staphylococcus aureus yang diperoleh pada konsentrasi 100

36
mg/ml dengan diameter daerah hambat 15,48 mm sedangkan pada Escherichia

coli diameter daerah hambat yang efektif pada konsentrasi 100 mg/ml dengan

diameter 15,11 mm. Fraksi air memberikan diameter daerah hambat yang efektif

terhadap bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi 200 mg/ml dengan

diameter daerah hambat 15,01 mm sedangkan pada Escherichia coli memberikan

diameter daerah hambat yang kurang efektif yang diperoleh pada konsentrasi 500

mg/ml dengan diameter 10,03 mm. Fraksi n-heksana memberikan diameter daerah

hambat yang efektif pada Staphylococcus aureus yang diperoleh pada konsentrasi

400 mg/ml dengan diameter daerah hambat 14,76 mm sedangkan pada

Escherichia coli memberikan diameter daerah hambat yang kurang efektif yang

diperoleh pada konsentrasi 500 mg/ml dengan diameter 9,03 mm.

Aktivitas antibakteri yang didapatkan dari ekstrak etanol merupakan

aktivitas antibakteri terkuat dalam menghambat pertumbuhan bakteri

Staphylococcus aureus dan Escherichia coli karena kandungan senyawa metabolit

sekunder yang terdapat dalam ekstrak etanol kulit buah sawo manila adalah

golongan senyawa yang memiliki aktivitas antibakteri yang kuat yaitu flavonoid,

glikosida, tanin dan steroid/triterpenoid.

Hasil uji aktivitas antibakteri fraksi n-heksana memberikan aktivitas

antibakteri terendah dibandingan ekstrak etanol, fraksi etilasetat dan fraksi air. Hal

ini disebabkan karena kandungan golongan senyawa yang terdapat dalam fraksi n-

heksana sangat sedikit yaitu hanya steroid/triterpenoid. Menurut Naufalin, dkk.,

(2005), adanya minyak dan lemak yang terkandung pada ekstrak n-heksana dapat

mengganggu aktivitas antibakteri. Minyak dan lemak mengganggu proses difusi

dan melindungi bakteri dari senyawa antibakteri sehingga tidak mampu

menghambat pertumbuhan bakteri.

37
 Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada bakteri Staphylococcus aureus

memberikan diameter hambat lebih besar dibandingkan dengan bakteri

Escherichia coli. Menurut Volk (1992), perbedaan diameter daerah hambat pada

bakteri gram positif dengan bakteri gram negatif tersebut terjadi karena kedua

bakteri uji tersebut memilki komposisi dan struktur dinding sel yang berbeda

sehingga mengakibatkan bakteri gram positif lebih rentan terhadap senyawa-

senyawa kimia dibandingkan gram negatif. Struktur dinding sel bakteri gram

positif lebih sederhana, yaitu berlapis tunggal dengan kandungan lipid yang

rendah (1 - 4%) sehingga memudahkan bahan bioaktif masuk ke dalam sel.

Struktur dinding sel bakteri gram negatif lebih kompleks, yaitu berlapis tiga terdiri

dari lapisan luar lipoprotein, lapisan tengah lipopolisakarida yang berperan

sebagai penghalang masuknya bahan bioaktif antibakteri dan lapisan dalam

berupa peptidoglikan dengan kandungan lipid tinggi (11 - 12%).

Aktivitas antibakteri dari ekstrak etanol dan fraksi kulit buah sawo manila

disebabkan oleh adanya golongan senyawa kimia berupa flavonoid, glikosida,

tanin dan steroid/triterpenoid. Senyawa flavonoid memiliki aktivitas antibakteri

karena flavonoid merupakan golongan senyawa fenol. Tanin termasuk dalam

golongan senyawa polifenol sehingga tanin memiliki aktivitas antibakteri.

Senyawa fenol dan turunannya seperti flavonoid dan tanin merupakan salah satu

antibakteri yang bekerja dengan mengganggu fungsi membran sitoplasma.

Senyawa fenol pada konsentrasi rendah dapat merusak membran sitoplasma yang

menyebabkan bocornya metabolit penting yang menginaktifkan sistem enzim

bakteri sedangkan pada konsentrasi tinggi mampu merusak membran sitoplasma

dan mengendapkan protein sel. Senyawa steroid/triterpenoid menghambat

pertumbuhan bakteri dengan mekanisme penghambatan terhadap sintesis protein

38
karena terakumulasi dan menyebabkan perubahan komponen-komponen

penyusun sel bakteri itu sendiri (Azmi, 2013). Membran sitoplasma bakteri sendiri

berfungsi mengatur masuknya bahan-bahan makanan atau nutrisi, apabila

membran sitoplasma rusak maka metabolit penting dalam bakteri akan keluar dan

bahan makanan untuk menghasilkan energi tidak dapat masuk sehingga terjadi

ketidakmampuan sel bakteri untuk tumbuh dan pada akhirnya terjadi kematian

(Pelczar dan Chan, 1988).

39
 BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

a. Hasil pemeriksaan makroskopik morfologi luar kulit buah sawo manila segar

yaitu permukaan kulitnya sedikit kasar, panjangnya ± 3 cm dan lebarnya ± 2

cm. Pemeriksaan organoleptis kulit buah sawo manila segar yaitu berwarna

coklat muda, rasanya kelat dan agak pahit serta berbau khas. Hasil pemeriksaan

makroskopik morfologi luar simplisia kulit buah sawo manila yaitu permukaan

kulitnya sedikit kasar, panjangnya ± 2,5 cm dan lebarnya ± 1,5 cm.

Pemeriksaan organoleptis simplisia kulit buah sawo manila yaitu kulitnya

berwarna coklat tua dan berkeriput, rasanya kelat dan agak pahit serta berbau

khas. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia kulit buah sawo manila

memperlihatkan adanya parenkim berisi sel minyak, serabut sklerenkim dan

berkas pembuluh berbentuk spiral. Hasil karakterisasi simplisia diperoleh kadar

air sebesar 2,31%, kadar sari larut air sebesar 64,48%, kadar sari larut etanol

sebesar 59,60%, kadar abu total sebesar 6,32% dan kadar abu yang tidak larut

asam sebesar 0,49%.

b. Hasil skrining fitokimia menunjukkan bahwa simplisia dan ekstrak etanol kulit

buah sawo manila mengandung golongan senyawa kimia flavonoid, glikosida,

tanin dan steroid/triterpenoid; fraksi n-heksana mengandung senyawa

steroid/triterpenoid; fraksi etilasetat mengandung senyawa flavonoid, glikosida

dan tanin; fraksi air mengandung senyawa flavonoid dan glikosida.

c. Hasil uji aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa ekstrak etanol, fraksi n-

heksana, fraksi etilasetat dan fraksi air memiliki aktivitas sebagai antibakteri.

40
5.2 Saran

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengisolasi senyawa kimia

yang bertanggung jawab terhadap sifat antibakteri yang dimiliki oleh kulit buah

sawo manila.

41