LAPORAN PRAKTIKUM HEMATOLOGI

HITUNG RETIKULOSIT

OLEH:

NI KADEK ARI DWIYANTI P07134017003

KEMENTERIAN KESEHATAN RI

POLITEKNIK KESEHATAN DENPASAR

JURUSAN ANALIS KESEHATAN

2018
I. Judul : Hitung Retikulosit

II. Tujuan
a. Tujuan Intstruksional Umum
1. Mahasiswa dapat mengetahui cara menghitung Retikulosit darah probandus.
2. Mahasiswa dapat menjelaskan cara hitung Retikulosit darah probandus.
b. Tujuan Instruksional Khusus
1. Mahasiswa dapat melakukan hitung Retikulosit darah probandus.
2. Mahasiswa dapat mengetahui jumlah Retikulosit dalam %.
3. Mahasiswa dapat menginterpretasikan hasil hitung Retikulosit darah probandus.

III. Metode
Metode yang digunakan adalah sediaan basah dan sediaan kering.

IV. Prinsip
Sel – sel Retikulosit adalah eritrosit muda mengandung sisa dari RNA yang basophilic
(berwarna biru). Materi yang berwarna biru ini akan tercat secara supervital oleh cat
tertentu seperti New Methylene Blue atau Briliant Cresyl Blue untuk membentuk suatu
granula yang berwarna biru.

V. Dasar Teori
Retikulosit adalah sel darah merah yang belum matang yang biasanya
menghasilkan sekitar 1% dari sel darah merah dalam tubuh manusia. Ini juga
merupakan sel darah merah berinti anon-nukleasi di dalam darah perifer, mengandung
sisa RNA. Seperti darah merah matang, retikulosit tidak memiliki inti sel. Mereka juga
disebut retikulosit karena jaringan retikularis RNA orbital yang menjadi terlihat di
bawah mikroskop dengan noda tertentu seperti new methylene blue. Retikulosit
berbeda dari sel darah merah lainnya karena memiliki bentuk yang lebih berbelit-belit,
dan sekitar 8% lebih besar dari sel yang lebih matang (Okoroiwu,I.L. 2015).
Retikulosit berkembang dan matang di sumsum tulang merah dan kemudian
beredar sekitar satu hari di aliran darah sebelum berkembang menjadi sel darah merah
yang matang. Jumlah retikulosit digunakan untuk memperkirakan derajat eritropoiesis
yang efektif. Ini dapat dilaporkan sebagai jumlah retikulosit absolut atau sebagai
 persentase retikulosit. Rentang referensi dari persentase retikulosit pada orang dewasa
adalah 0,5% -1,5% (Y, Abdulrahaman. 2013).
Hitung jumlah retikulosit adalah jumlah retikulosit dalam spesimen darah utuh,
digunakan dalam menentukan aktivitas sumsum tulang. Hitung retikulosit adalah tes
darah dilakukan untuk menilai produksi sel darah merah yang belum matang. Jumlah
retikulosit biasanya dilakukan ketika pasien dievaluasi untuk anemia dan respon
terhadap pengobatannya. Kadang-kadang disebut hitungan retika. Ini juga memberikan
informasi tentang tingkat di mana tulang sumsum memproduksi sel darah merah.
Jumlah normal berarti bahwa produksi memadai, jumlah menurun berarti itu
membantu diagnosa apakah kekurangan sel darah merah pada orang yang menderita
anemia disebabkan oleh masalah sumsum tulang, oleh berlebihan pendarahan, atau
oleh penghancuran sel darah merah (Okoroiwu,I.L. 2015).
Metode yang paling banyak digunakan untuk menghitung retikulosit adalah
prosedur mikroskopis manual. Meskipun ini relatif murah dan mudah dilakukan,
metode ini membutuhkan waktu penyelesaian yang lama, keterampilan teknisi yang
ahli diperlukan dan kurangnya objektivitas yang relatif. Di sebagian besar
laboratorium yang masih dilakukan secara mikroskopis dan standard metode untuk
menghitung retikulosit tidak berubah bertahun-tahun dan tetap tidak tepat dan tidak
dapat diandalkan (Ho-Sung, Hyun. 2017).

VI. Alat dan Bahan

a. Alat :
Nama alat Jumlah Fungsi
Objek glass 2 buah Untuk tempat membuat sediaan basah dan
kering
Cover glass 2 buah Untuk menutup sediaan basah dan kering
Tabung serologis
Mikroskop binokuler 1 buah Untuk mengamati Retikulosit
Mikropipet
Tisu secukupnya Untuk membersihkan objek glass
Tisu lensa secukupnya Untuk membersihkan lensa mikroskop
 b. Bahan :
1. Darah kapiler atau darah vena dengan antikoagulan (EDTA).
c. Reagen :
Brilliant Cresyl Blue atau
New Methylene Blue (Colour Index 52030).................................. 1g
Larutan sitrat salin .......................................................................... 100 ml
Larutan sitrat salin dibuat dengan mencampur :
1 bagian natrium sitrat 30g/l
4 bagian larutan NaCl 9,0 g/l

VII. Prosedur Kerja

A. Sediaan Basah
1. a. Satu tetes larutan briliant cresyl blue dalam alcohol ditengah kaca obyek dan
biarkan sampai kering (kaca dengan bercak zat itu boleh disimpan untuk menjadi
persediaan yang dapat dipakai).
Kalau akan menggunakan larutan brilliant cresyl blue dalam garam, langkah 1.a
diganti dengan langkah 2.
2. Setetes kecil darah ditaruh pada bercak kering atau kea rah tetes zat warna, dan
segera campur darah dan zat warna itu dengan memakai sudut kaca obyek lain.
3. Tetes darah itu ditutup dengan kaca penutup. Lapisan darah dalam sediaan basah
harus tipis benar.
4. Biarkan beberapa menit atau masukkan dalam cawan petri yang berisi cawan
petri basah jika pemeriksaan ditunda.
5. Tentukan berapa banyak retikulosit didapat antara 1000 eritrosit.

B. Sediaan Kering
1. Kedalam tabung reaksi kecil teteskan 3 tetes larutan Briliant Cresyl Blue atau
New Methylene Blue.
2. Tambahkan 3 tetes darah, campurkan baik – baik dan biarkan pada suhu ruangan
selama 15 menit agar pewarnaan sempurna.
Cara yang lain : Setelah ditambahkan 3 tetes darah, campurkan baik-baik, tabung
ditutup dengan parafilm dan diinkubasi pada suhu 370C selama 30-60 menit.
3. Setelah inkubasi, tabung dihomogenkan lagi dan ambil 1 tetes untuk membuat
sediaan apus. Keringkan di udara dan diperiksa di bawah mikroskop.
 4. Periksalah dengan perbesaran obyektif 100 kali.
5. Dicari daerah yang baik yaitu eritrosit tidak tumpang tindih. Retikulosit tampak
sebagai sel yang lebih besar dari eritrosit. Dan mengandung filamen atau
granula. Dengan BCB, eritrosit berwarna biru keunguan dengan filamen atau
granula berwarna ungu.
6. Bila menggunakan NMB, retikulosit berwarna biru dengan filamen atau granula
berwarna biru tua.
7. Hitung jumlah retikulosit dapat dinyatakan persen / per mil terhadap jumlah
eritrosit total atau dilaporkan dalam jumlah mutlak.

VIII. Interpretasi Hasil

Jumlah retikulosit biasanya dihitung dengan % atau per seribu eritrosit. Nilai normal
retikulosit adalah 0,5 – 1,5 % dari jumlah eritrosit. Dapat menyebut jumlah eritrosit per
µl darah. Nilai normal 25.000 – 75.000 retikulosit per µl darah.

IX. Hasil Pengamatan

 Pemeriksaan : Hitung Leukosit (WBC Count)
 Metode : Manual (menggunakan kamar hitung)
 Probandus : Ni Kadek Wiraningsih
 Umur : 19 tahun
 Jenis Kelamin : Perempuan
 Hasil Pemeriksaan :
 Satuan Konvensional = 4700 /mm3
 Satuan Internasional Unit = 4,7 x 109/ L
 Perhitungan
 Jumlah leukosit pada sudut kiri atas kamar hitung sebanyak 23 sel
 Jumlah leukosit pada sudut kanan atas kamar hitung sebanyak 23 sel
 Jumlah leukosit pada sudut kiri bawah kamar hitung sebanyak 35sel
 Jumlah leukosit pada sudut kanan bawah kamar hitung sebanyak 13 sel
 Jumlah total leukosit yang ditemukan pada 4 bidang sedang yang masing-masing
tersusun atas 16 kotak kecil adalah 94
𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑙𝑒𝑢𝑘𝑜𝑠𝑖𝑡 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑒𝑚𝑢𝑘𝑎𝑛 𝑥 10 𝑥 20
Jumlah leukosit per liter = x 106
4
94 𝑥 10 𝑥 20
= x 106
4
 = 94x 50 x 106
= 94 x 0,05 x 109
=4,7 x 109/ L (SI Unit)
= 4700/ mm3(Konvensional)

X. Pembahasan
Retikulosit adalah sel darah merah yang belum matang yang biasanya
menghasilkan sekitar 1% dari sel darah merah dalam tubuh manusia. Ini juga
merupakan sel darah merah berinti anon-nukleasi di dalam darah perifer, mengandung
sisa RNA. Seperti darah merah matang, retikulosit tidak memiliki inti sel. Mereka juga
disebut retikulosit karena jaringan retikularis RNA orbital yang menjadi terlihat di
bawah mikroskop dengan noda tertentu seperti new methylene blue. Retikulosit
berbeda dari sel darah merah lainnya karena memiliki bentuk yang lebih berbelit-belit,
dan sekitar 8% lebih besar dari sel yang lebih matang (Okoroiwu, I.L. 2015). Menurut
Parodi, Emilia (2016).Retikulosit adalah eritrosit termuda yang dilepaskan dari sumsum
tulang ke dalam darah yang bersirkulasi. Dalam kondisi normal, setelah 1-3 hari di
dalam sumsum tulang, kemudian dilepaskan ke darah perifer yang beredar selama 1-2
hari sebelum menjadi eritrosit matang
Retikulosit berkembang dan matang di sumsum tulang merah dan kemudian
beredar sekitar satu hari di aliran darah sebelum berkembang menjadi sel darah merah
yang matang. Jumlah retikulosit digunakan untuk memperkirakan derajat eritropoiesis
yang efektif. Ini dapat dilaporkan sebagai jumlah retikulosit absolut atau sebagai
persentase retikulosit. Rentang referensi dari persentase retikulosit pada orang dewasa
adalah 0,5% -1,5% (Y,Abdulrahaman. 2013).
Hitung jumlah retikulosit adalah jumlah retikulosit dalam spesimen darah utuh,
digunakan dalam menentukan aktivitas sumsum tulang. Hitung retikulosit adalah tes
darah dilakukan untuk menilai produksi sel darah merah yang belum matang. Jumlah
retikulosit biasanya dilakukan ketika pasien dievaluasi untuk anemia dan respon
terhadap pengobatannya. Kadang-kadang disebut hitungan retika. Ini juga memberikan
informasi tentang tingkat di mana sumsum tulang memproduksi sel darah merah.
Jumlah normal berarti bahwa produksi memadai, jumlah menurun berarti itu membantu
diagnosa apakah kekurangan sel darah merah pada orang yang menderita anemia
disebabkan oleh masalah sumsum tulang, oleh berlebihan pendarahan, atau oleh
penghancuran sel darah merah (Okoroiwu, I.L. 2015).
Hitung jumlah retikulosit memungkinkan untuk menggunakan informasi yang
berguna secara klinis, tidak hanya dalam diagnosis dan klasifikasi anemia, tetapi juga
dalam memantau replikasi terapeutik. Parameter retikulosit tersedia untuk penilaian
realtime dari aktivitas erythropoietic sumsum dan secara klinis akan membantu dalam
diagnosis dan pengobatan berbagai anemia. Retikulosit adalah eritrosit yang belum
matang yang segera meninggalkan sumsum tulang tetapi masih termasuk RNA
intraseluler. Ketersediaan klinis dari produksi eritrosit dapat diukur dengan pewarnaan
darah dengan pewarna supravital dan menentukan jumlah eritrosit yang mengandung
sisa RNA ini (Ho-Sung, Hyun. 2017).
Pada praktikum hitung jumlah retikulosit yang dilakukan hari Jumat tanggal 15
November 2018 di Laboratorium Hematologi Poltekkes Denpasar menggunakan
sediaan basah dan sediaan kering. Hitung jumlah retikulosit secara konvensional
dengan menggunakan mikroskop binokuler dilakukan sesuai dengan protokol standar
yang secara rutin digunakan pada laboratorium dan sampel darah vena yang
dikumpulkan dalam etilena diamina tetra asam asetat K3 (EDTA-K3) sebagai
antikoagulan dari 3 ml (Ho Sung, Hyun. 2017). Dimasukkan larutan isotonis dan
beberapa darah ke dalam tabung reaksi. Campuran dihomogenisasi dan diinkubasi
selama 15 menit dalam water bath, pada 37°C, terlindung dari cahaya. Selanjutnya,
darah film disiapkan dalam slide kaca untuk mikroskopi. Penghitungan dilakukan
dengan menggunakan mikroskop dengan objektif 100x perendaman lensa, dan jumlah
retikulosit dihitung mempertimbangkan jumlah sel-sel ini dalam 1.000 eritrosit yang
dinilai. Hasil dinyatakan sebagai nilai persentase retikulosit (Viana, KA. 2014).
METODE SEDIAAN BASAH
Suatu larutan isotonik dari noda supravital seperti baru biru metilen atau brilian
biru cresyl diinkubasi dengan beberapa tetes darah. Untuk mendeteksi RNA ribosom di
retikulosit, sel-sel merah harus ternoda saat mereka masih hidup. Persiapan yang tipis
dibuat dan retikulosit dihitung secara mikroskopis. Reticulocyte adalah diakui oleh
granula biru bernoda ungu RNA ribosom (reticulin) yang dikandungnya jumlah
retikulosit diekspresikan sebagai persentase, sebagai suatu indeks (RI) (Okoroiwu, I.L.
2015).
HASIL PENGAMATAN
 Sumber :
http://www.ijpmonline.org/article.asp?issn=03774929;year=2017;volume=60;issue=4;spage=
623;epage=624;aulast=Adhya

Sumber :
http://www.kau.edu.sa/Files/0007058/Files/60658_Reticulocytes%20Count.pdf

NILAI NORMAL
HIGH COUNT
LOW COUNT
Metode yang paling banyak digunakan untuk menghitung retikulosit adalah
prosedur mikroskopis manual. Meskipun ini relatif murah dan mudah dilakukan,
metode ini membutuhkan waktu penyelesaian yang lama, keterampilan teknisi yang
ahli diperlukan dan kurangnya objektivitas yang relatif. Di sebagian besar
laboratorium yang masih dilakukan secara mikroskopis dan standard metode untuk
 menghitung retikulosit tidak berubah bertahun-tahun dan tetap tidak tepat dan tidak
dapat diandalkan (Ho-Sung, Hyun. 2017).
Selain itu, menurut Viana, KA (2014) metode penghitungan retikulosit di
laboratorium klinis saat ini dibagi menjadi manual dan otomatis. Manual penghitungan
retikulosit dengan mikroskopi menjadi tradisional dan memiliki telah dianggap sebagai
metode standar sejak 1940, karena kesederhanaannya dan biaya rendah. Namun, ini
menghadirkan beberapa ketidaknyamanan dan keterbatasan, seperti kurangnya akurasi,
reproduktifitas rendah, menghabiskan waktu di laboratorium rutin, kurangnya kualitas
noda yang digunakan, film darah yang tidak pantas. Ketajaman visual pengamat dan
kesabaran, pengalaman teknisi untuk membedakan retikulasi sel-sel dari sel-sel lain
dengan inklusi yang juga diwarnai dengan pewarna, selain kualitas dan kekuatan
resolusi dari mikroskop tersebut faktor penting lainnya yang mempengaruhi
keakuratan manual jumlah retikulosit.

XI. Simpulan
Berdasarkan hasil praktikum penghitungan nilai leukosit menggunakan metode manual
(bilik hitung) yang dilakukan pada hari Jumat tanggal 12 Oktober 2018 di Laboratorium
Hematologi Politeknik Kesehatan Denpasar, dapat ditarik beberapa kesimpulan sebagai
berikut:
1. Probandus Ni Kadek Wiraningsih yang berjenis kelamin perempuan dan berumur 19
tahun memiliki jumlah leukosit 4700/ mm3. Berdasarkan landasan teori dan interpretasi
hasil, jumlah tersebut berada dalamrentang nilai normal jumlah leukosit untuk
peremuan dewasa. Sehinngga, dapat disimpulkan bahwa probandus Ni Kadek
Wiraningsih memiliki jumlah leukosit di batas normal.
2. Sumber kesalahan yang dapat terjadi saat pemeriksaan jumlah leukosit menggunakan
metode manual antara lain:
a. Pencampuran yang tidak homogen (Frank, 2013)
b. Pengenceran yang kurang tepat (Frank, 2013)
c. Penanganan, dan pengisian kamar hitung Improved Neubauer yang tidak tepat
(Frank, 2013)
d. Kurangnya keterampilan praktikan dalam menggunakan mikroskop (Carawey et
al., 2013)
e. Proses pemipetan yang salah (Carawey et al., 2013)
f. Terjadinya penggumpalan sel (Carawey et al., 2013)
 3. Adapun beberapa kelemahan dari penghitungan sel menggunakan metode manual
antara lain:
a) Ini memakan waktu dan melelahkan (Akshaya, 2016)
b) Menghitung overlapping (tumpang tindih) sel darah merupakan masalah utama
(Akshaya, 2016)
c) Mengarah pada hasil yang tidak akurat karena kesalahan manusia. Sehingga, sulit
untuk mendapatkan hasil akurat dari penghitungan secara visual (Akshaya, 2016)
d) Metode ini membutuhkan sebuahkeahlian dalam mengklasifikasikan sel-sel secara
manual dan bersifat kualitatif (Venkatalakshmi, 2013)

XII. Daftar Pustaka

Brun, Atle. 2018. A New Method for Isolation of Reticulocytes: Positive Selection
of Human Reticulocytes by Immunomagnetic Separation. Tersedia pada
http://www.bloodjournal.org/content/bloodjournal/76/11/2397.full.pdf.
Diakses pada tanggal 13 November 2018.
Karagülle, Mustafa. 2013. Clinical Signifi cance of Reticulocyte Hemoglobin Content
in the Diagnosis of Iron Defi ciency Anemia. Tersedia pada
https://www.researchgate.net/publication/259567289_Clinical_Significance_
of_Reticulocyte_Hemoglobin_Content_in_the_Diagnosis_of_Iron_Deficiency
_Anemia. Diakses pada tanggal 13 November 2018.
Ali, Afsheen Farzand. 2010. Is manual reticulocyte count a reliable option for under
resourced countries. Tersedia pada
https://ecommons.aku.edu/cgi/viewcontent.cgi?referer=https://www.google.co.id/
&httpsredir=1&article=1024&context=pakistan_fhs_mc_pathol_microbiol.
Diakses pada tanggal 14 November 2018.
Okoroiwu,I.L dkk 2015. Reticulocyte count in healthy male and female students of imo
state university,owerri. Teredia pada
https://www.researchgate.net/publication/323074381_Reticulocyte_count_in_hea
lthy_male_and_female_students_of_imo_state_universityowerri. Diakses pada
tanggal 14 November 2018.
Viana, KA. 2014. Reticulocyte count: comparison among methods. Tersedia pada
http://www.scielo.br/pdf/jbpml/v50n5/1676-2444-jbpml-50-05-0339.pdf.
Diakses pada tanggal 14 November 2018
Parodi, Emilia. 2016. Absolute Reticulocyte Count and Reticulocyte Hemoglobin
Content as Predictors of Early Response to Exclusive Oral Iron in Children with
Iron Deficiency Anemia tersedia pada
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4820635/. Diakses pada tanggal
14 November 2018.
Nobes, P R. 2014. Reticulocyte counting using flow cytometry tersedia pada
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC502653/pdf/jclinpath00398-
0063.pdf. Diakses pada tanggal 14 November 2018.
Agarwal, MB. 2017. Reticulocyte Hemoglobin Content (CHr): The Gold Standard for
Diagnosing Iron Deficiency. Tersedia pada
http://www.japi.org/october_2017/01_editorial_reticulocyte_hemoglobin.pdf.
Diakses pada tanggal 14 November 2018.
Ho-Sung, Hyun. 2017. Experience of Reticulocytes Measurement at 720 nm Using
Spectrophotometer. Tersedia pada
http://www.kjcls.org/journal/download_pdf.php?doi=10.15324/kjcls.2017.49.4.3
82. Diakses pada tanggal 14 November 2018.
Adhya, Amit Kumar. 2017. An easy way of performing reticulocyte count by manual
method. Tersedia pada
http://www.ijpmonline.org/article.asp?issn=03774929;year=2017;volume=60;issu
e=4;spage=623;epage=624;aulast=Adhya. Diakses pada tanggal 14 November
2018.
Y, Abdulrahaman. 2013. Packed Cell Volume, Reticulocyte Count and Index among
Patients with Chronic Kidney Disease in Sokoto, North Western, Nigeria.
Tersedia pada http://www.rroij.com/open-access/packed-cell-volume-
reticulocyte-count-and-index-among-patients-with-chronic-kidney-disease-in-
sokoto-north-western-nigeria.php?aid=34765. Diakses pada tanggal 14 November
2018.