BAB VI Pendekatan Phytochemical untuk Bioscreening Produk Alami A

Douglas Kinghorn, Ph.D. Associate Professor Farmakognosi College of

Pharmacy University of Illinois di Chicago Chicago, Illinois 60612
Produk alami berkembang, merangkul tanaman darat dan laut, hewan dan budaya mikroba, disesuaikan
untuk aktivitas biologis di banyak laboratorium industri, laboratorium dan universitas di seluruh dunia.
Ekstrak dan isolat produk alami yang aktif secara biologis adalah penting secara ekonomi, dan merupakan
bahan penting dari obat-obatan Wexerm. Misalnya, di Amerika Serikat pada tahun 1973, ketika 1.332
miliar resep dibagikan dengan perkiraan biaya $ 6.327 miliar, 25,2% mengandung satu atau lebih
konstituen yang berasal dari pabrik yang lebih tinggi, 13,3% mengandung produk mikroba dan 2,7%
mengandung hewan. produk turunan (Farnsworth dan Morris, 1976). Negara-negara lain seperti Uni
Soviet dan Cina menekankan penggunaan produk alami dalam pengobatan jauh lebih banyak daripada
Amerika Siates (Chikov, 1976; Farnsworth, 1977) Daftar obat-obatan dari tanaman yang lebih tinggi juga
termasuk agen yang digunakan secara luas digoxin, digitoxin, reserpin, codeine, atropine, hyoscyamine,
scopolamine, quinine, quinidine, pilocarpine dan physostigmine. Tanaman digunakan dalam pengobatan
Westem dalam bentuk ekstrak yang aktif secara farmakokimia, seperti yang dicontohkan oleh obat resmi
Belladonna, Ipecac, Opium, Rauwolfia dan Digitalis.

Institut Kanker Nasional di Bethesda, Maryland, dihasut dalam 1/4 Pendekatan Phyocbemical untuk
Biesereening of Naural Products 1950-an rencana yang sangat ambisius untuk menyaring ekstrak produk
alami untuk aktivitas anti-tinkoplastik Pada tahun 1975, lebih dari 67-500 ekstruet dari 20.00 spesies
tanaman yang lebih tinggi telah diputar untuk antikanker dan atau aktivitas sitototik (Barelay dan Perdue.
Jr. 1976) Selain itu, lebih dari 8.000 katarak dari 2.500 krat inverte laut, dan lebih dari 800 kutu anthrupod,
dan lebih dari 40.000 bir fermentasi mikroba telah diacak dalam program ini (Pettit, 1977). Sekarang
diketahui bahwa 2-5% dari spoik tanaman dan 8 10% dari spesiik hewan mensintesis zat antineoplastik
dan / atau cytatoxic (Peiti dan Crags, 1978). Alkaloid tumbuhan via cristinc dan vinblastine, dan antibiotik
mikroba adriamycin bieomycin, dactinomycin, mithramycin, dan mitomycia C, semuanya merupakan
obat-obat terapi rantai kanker yang dikembangkan dengan baik (Carter dan Livingston, 1976). Sementara
National Cancer Institute mendanai proyek penelitian anten ses anten dari produk alami adalah program
yang paling intensif dari jenisnya sampai saat ini, hanya sebagian kecil dari tanaman tinggi dan spesies
hewan yang telah dipelajari (Peitit dan Cagg, 1978). melarutkan anti-kanker dan jenis-jenis bioscreening
lain pada produk-produk alami hampir tanpa batas.

Meskipun secara luas diasumsikan bahwa lebih ekonomis untuk mensintesis buangan precsaripsi di
Amerika Serikat pada tahun 1973 berasal dari sintetis (Farnsworth dan Morris, 1976). Metabolit sekunder
tanaman dapat mengalami semi-sintesis siodifikasi untuk menghasilkan obat yang bermanfaat, seperti
halnya diosgenin dalam pembuatan obat steroid (Fairbairn, 1976). Produk alami lainnya, meskipun tanpa
potensi yang jelas sebagai obat pada saat ini, berguna sebagai alat farmakologis. Contohnya termasuk
ester phorbol yang diturunkan dari tumbuhan, yang merupakan promotor tumor paling kuat yang dikenal
(Hecker, 1968) dan neurotoksin yang diturunkan dari hewan. bairachotoxin, bungarotoxin dan
tetrodotoxin (Bowman, 1973).
Penapisan exiracts produet alami memungkinkan hingga beberapa ribu komponen yang ada dalam suatu
cxtract untuk diuji secara simultan secara farmasi. Setelah aktivitas ditemukan, ia dapat digunakan untuk
memandu isolasi dari senyawa atau senyawa yang bertanggung jawab untuk aktivitas dari saluran minyak
mentah yang awalnya disaring. Namun demikian, senyawa sintetik walike yang biasanya dapat disaring
secara langsung setelah dilepaskan sesuai kebutuhan, ada beberapa aspek penapisan produk alami yang
aktif secara biologis yang memerlukan perhatian khusus, dan ini akan dibahas pada bagian selanjutnya
dari bab ini. Penekanan khusus akan diberikan pada metabolit sekunder tanaman yang lebih tinggi karena
kepentingan ekonomi dan Pemilihan Bahan Reswor basis literatur hroad tersedia, Sementara bab ini
ditujukan untuk non-spesialis dalam arca ini, tidak ada pelatihan laboratorium disediakan karena area
subjek yang luas untuk dicakup. SEHINGGA, referensi yang sesuai dengan teknik eksperimen akan dikutip
bila memungkinkan

SELEKSI MATERI PENELITIAN

Sekitar 300.000-500.000 spesies tanaman yang lebih tinggi tersedia untuk penelitian, dan karenanya
beberapa pendekatan pengaturan menuju pembuatan program studi harus dilakukan. Fansworth,
Bederks, Jr. dan Moses (1974) dan Far nsworth and Bingel (1977) telah mengkaji berbagai pendekatan
terhadap pemilihan malerial untuk pengembangan phytochemical. Banyak poin yang diajukan, berlaku
untuk jenis-jenis produk alami lain selain dari piens, dirangkum di sini

Seleksi Acak

Dalam program yang disponsori National Cancer Institute terhadap isolasi agen antikanker produk
alami, yang baru-baru ini dikurangi. bahan produk alami dipilih secara acak. Ekstrak disaring dalam vino
untuk aktivitas antikanker dan in viiro untuk sitotoksisitas. Yang terakhir direvisi pada tahun 1972 (Ceran
et al., 1972) dan metode ini telah dijelaskan oleh Pettit dan Cragg (1978). Dari plantr yang lebih tinggi
dipelajari. *% dari spesies yang dikenal. 39% dari genera dan g 3% dari keluarga telah diselidiki (Rarclay
dan Perdue, Ir, 1976). Pendekatan acak yang digunakan dalam proyek khusus ini tampaknya adalah
vindicsted, karena telah ditemukan bahwa spesies yang menunjukkan antikanker dan eytotexic
aktivitasnya adalah dari distribusi botani yang luas dan senyawa aktif yang diisolasi sejauh ini bioassay
memiliki struktur molekul yang sangat bervariasi (Haatwell, 1976).

Laporan Cerita Rakyat

Obat-obatan seperti atropin (dari Airopr ieliadonna digiloxin (dari Digitalit purmurra) dan reserpin
(dari Rauvolfia serpentina)) dalam penyelidikan laboratorium yang distimulasi oleh deskripsi folkloric
(Famsworth, Bederka. Ir, dan Moses, 1974) .Selain itu, penelitian eksperimental yang terus-menerus
dilakukan pada beberapa 3.000 "kanker cutes" yang terdaftar oleh Hartwell (Philipson, 1979) telah .
Pendekatan Phyochemical untuk BiscPenelitian Produk Alami untuk isolasi senyawa antikanker atau
sitotoksik. Sebagai contoh Ogura dan rekan kerja (1978) memperoleh ester phorbol antileukemic sevcral
dari Baliaspermum montanin, sebuah tanaman yang telah digunakan di India selama bertahun-tahun
dalam pengobatan kanker kanker. Sebaliknya, ctudies tanaman yang diminta oleh laporan folklom belum
menghasilkan senyawa bioaktif (Nilai Farns, Bederka, Jr. dan Moses, 1974).

Chemotaxonomie Studles

Diketahui bahwa metatolit sekunder tanaman sering merupakan karakteristik dari genus atau
kelaparan tertentu. Spesies T yang diketahui mengandung senyawa atau senyawa dengan aktivitas adalah
studiod, dengan harapan memperoleh senyawa bantuan yang memperlihatkan aktivitas biologis yang
meningkat. Metodologi ini telah sangat berhasil dalam penemuan agen antibakteri dari tanaman kwer
dalam genus Singmomyexs (Dourox, 1976.)

Geographkal Studles.

Karena banyak spesies dari fakes andlor fauna, yang terjadi pada suatu wilayah nasional sapi lokal
tertentu, yang dapat dikumpulkan dalam jumlah yang cukup untuk phar. makulogical teating, diperoleh
dalam metode pemilihan bahan recarch. Untuk cxampk, Evans dan Kinghom, Jr (1915) mempelajari ruang
Euphorbla yang dipinjamkan di Nigeria.

Studles of Restricled Compounds

Kelas khusus senyawa hanya dapat diubah menjadi bioscreening Far nsworth aod Bingel (1977)
mengutip satu studi yang dilakukan secara acak di mana hanya menanam

Ranking Studles

Fanswonth, Dederka, Ir. Dan Moscs (1974) serangkaian kriteria desain yang ditetapkan.
berdasarkan peringkat tanaman yang dapat digunakan untuk mengerahkan aktivitas depresan CTNS pada
tikus, alkabid diuji untuk sctivity, pada laporan litcrature dan fofkiore untuk berfungsi seperti dalam sistem
penilaian acak tem Sejak data eksperimental diperoleh lakukan kembali. naik peringkat awal dari tanaman
dipelajari, metode sekarang ini coukl juga memiliki aplikasi yang lebih luas dalam pemilihan bahan produet
alami untuk bioscreening.

KOLEKSI, PERSIAPAN DAN OTENTIKASI MATERI PENELITIAN

Bahan rescarch produk alami untuk hiosercening dapat dikumpulkan di mana saja, asalkan ada
banyak matcrial, dan izin sppropriasi untuk pengumpulan diperoleh jika diperlukan. Ofen adalah mungkin
untuk masuk ke dalam pengaturan kolaboratif dengan ilmuwan lain atau organisasi ilmiah untuk
menyediakan bahan. Namun, pertimbangan poin-poin berikut disarankan ketika mengumpulkan materi
sendiri. (a) Hindari penghancuran semua koloni material tertentu untuk mencegah efek ayat tambahan
pada lingkungan, dan untuk menimbulkan pasokan furture jika diperlukan untuk mengkonfirmasi
identifikasi tazonomis atau untuk mendapatkan lebih banyak isolat. (B) Label semua bahan yang
dikumpulkan menunjukkan datc, waktu dan tempat pengumpulan, organ atau bagian dari hewan atau
tanaman, dan identifikasi tentatif; jangan gunakan nama sehari-hari dalam licu binortial Latin. (e)
Dapatkan otentikasi matcrias oleh ahli taksonomi dimanapun possiblc. Dcposit voucher spesimen esch
spocies di daerah atau universitas bariumnya. Perhatikan bahwa identifikasi lebih mudah jika bagian acrial
dari suatu spesies dikumpulkan dalam tahap pembungaan atau pembuahan. Simpan spesimen hewan
dalam botol yang berisi bahan pelengkap seperti formalin, untuk pemeriksaan di masa mendatang. (d)
Keringkan, timbang, dan masukkan bahan tanaman sebelum ekstraksi pelarut. Tyler, Brady dan Robbcrs
(1976) telah menjelaskan metode untuk pengeringan, pengelompokan (penghilangan kotoran yang tidak
ada), pengemasan, penyimpanan dan pengawetan obat-obatan mentah botani setelah pengumpulan. Hal
ini diperlukan untuk menimbang bahan tanaman driod di orde untuk menghitung% b / b hasil konstituen
biologis yang akhirnya diperoleh Comminution dapat dipengaruhi oleh penggilingan dalam palu atau ball
mill. Partikel-partikel yang melewati a3 mm sicve secara terpisah cukup memadai tanah untuk ekstraksi
pelarut subscquent. Jika seseorang berurusan dengan konstituen yang aktif secara biologis dari suatu
tanaman yang kebetulan ada molabile, tahap penggilingan dapat dihilangkan untuk menghindari efek
buruk oleh penyembuhan yang dihasilkan selama kominusi.

Ekstrak tumbuhan tertentu seperti lateks (getah) dapat dikumpulkan langsung ke dalam pelarut
seperti metanol (Evans dan Kinghom, Ir., 1975). Pettit dan Cragg (1978) merekomendasikan bahwa
organisme laut dikumpulkan langsung menjadi 2- propanol

EKSTRAKSI, PEMURNIAN, DAN IDENTIFIKASI SENYAWA AKTIF BIOLOGIS

Isolasi senyawa aktif biologis dari tanaman atau hewan agak mirip dengan pengelompokan untuk nccdle
di tumpukan jerami. Hanya satu senyawa dalam ekstrak produk alami yang dapat aktif, dan, dalam kasus
seperti itu, diencerkan dalam ekstrak yang awalnya diuji oleh ribuan konstituen plani lainnya. Jika senyawa
aktif tidak stabil, tindakan pencegahan khusus diperlukan untuk mencegah dekomposisi selama prosedur
isolasi. Robinson (1967) dan Nakanishi et al (1974 dan 1975) telah memberikan ulasan singkat dan diskusi
terperinci tentang kisaran dan klasifikasi metabotitas tanaman. Jenis-jenis manipulasi yang meminjamkan
pada isolasi dan identifikasi senyawa aktif biologis purc dari ekstrak produk alami, menyediakan jumlah
yang cukup tersedia dan metode yang sesuai dapat ditemukan untuk solubilasinya, akan dibahas pada
gilirannya.

Pelarut Ekstraksi

pelarut ekstraksi adalah langkah awal dalam isolasi konstituen yang aktif secara biologis dari
produk alami. Proses ini menyediakan ekstrak produk alami pertama yang dapat diuji secara biologis.
Faktor-faktor yang menentukan pilihan pelarut, dan jenis peralatan yang digunakan dalam prosedur
ekstraksi ekstraksi adalah sebagai berikut:

Pilihan Solweau

Pemilihan pelarut yang bijak untuk ekstraksi awal tergantung pada kombinasi beberapa
pertimbangan, yang paling penting adalah polaritas pelarut.

Polaritas suatu senyawa meningkat dengan jumlah gugus fungsi, dan docrcases dengan
bertambahnya berat molekul (Bobbitt, Sch warting dan Griicr, 1968). Senyawa-senyawa polar
membutuhkan pelarut poar morr untuk ekstraksi mereka. Polaritas olveot yang umum digunakan Untuk
caurtion pelarut dan untuk elusi kromatografi telah dihitung (Bobbit, Schwaning dan Gritter. (1968) Secara
umum pelarut alooholic berair berasal dari scem untuk memiliki karakteristik kelarutan optimal untuk
ekstraksi awal. Fong et al, (1977) digunakan 80% etanol atau metanol untuk ekstraksi awal alkaloid, sterol,
saponon, flavonoid, antrakuinon, dan tanaman glikon sisi jantung dan sianogenetik glikol.

Pertimbangan utama kedua adalah reaktivitas sotvent, telah ditemukan bahwa dalam larutan
chkroform terhadap garam choromethobromide karena keberadaan chkorobrvomethanc sebagai
pengotor kloroform (Phillipson dan Handa, 1978). Sebagai ruk umum, ekstrak produk nalural tidak boleh
disimpan untuk waktu yang lama dalam pelarut organie, terutama di bawah sinar matahari atau pada
suhu kamar, untuk meminimalkan pembentukan artefak, dan untuk mencegah dekomposisi alkaloid
Strychnor, brucinc dan strychnine, memenuhi syarat dengan reaksi dengan pelarut atau kotorannya. Ada
pertimbangan tambahan dalam pemilihan pelarut untuk tujuan cur dan ion. Pelarut tingkat reagen,
terutama setelah disimpan dalam gelas, dari dalam gelas, memiliki kemurnian yang cukup untuk ekstraksi
pelarut. Pelarut harus cukup mudah menguap untuk memudahkan pemindahan dari ekstrak
menggunakan rotary (lash) evaporator, tetapi sangat mudah terbakar atau mudah meledak, seperti
halnya dicthyl ether harus dihindari sejauh tidak bisa dicacar. Sangat direkomendasikan bahwa pelarut
toksik benren (karsinogen yang menyebabkan leukemia myeloid) dan carbou teurachloridk (racun reaal
dan lepatic) tidak digunakan untuk tujuan ini

Peralatan

Peralatan purpos ini karena ekstraksi produk-produk alami dapat mengekstraksi produk-produk
alami baik kecil atau besar. skala. Untuk pengujian farmakologis percobaan adalah praktik umum untuk
mengekstrak hanya sejumlah kecil bahan produk alami (misalnya, 1 lb sampel tanaman). Setelah aktivitas
biokgikal dilakukan, jumlah yang lebih besar dapat dikontrak. Beberapa jenis peralatan skala kecil tersedia
untuk ekstraksi awal dari susu atau sampel produk yang dibagi secara maserasi. Maserasi dalam
Erlenneyer (cnical) fask (Gambar 29). Ini adalah metode sederhana di mana bahan produk alami bubuk
ditutupi dengan beberapa perubahan pelarut, dengan masing-masing dikumpulkan pada interval. Jumlah
dosis penambahan pelarut tergantung pada sifat senyawa yang diekstraksi. Sebagai contoh, telah
ditemukan bahwa hanya jumlah jejak ginsenosida yang tersisa di marc setelah triplk exuraction ginscng
Amerika (Funax quinquefolius) dalam air metanol (S1) (Kinghorn, 1980, pengamatan tidak dipublikasikan).
Laju ekstraksi dapat ditingkatkan dengan menggunakan pengocok mekanis, pengarah magnet atau
dengan pemanasan ringan pada hot-plate. Keterlibatan dalam menolator (Gambar 30). Proses perkolasi
memiliki r maserasi dalam bahwa itu adalah operasi yang berkelanjutan. Tingkat kelarutan pelarut
ditentukan oleh keran di dasar peralatan. Pelarut hangat dapat digunakan untuk ekstraksi yang lebih
efisien.

Gambar 120

Bahan non-lignifikasi seperti daun plaat dapat dipotong dengan gunting dan diekstraksi menjadi pelarut
dalam blender Waring atau similas. Ini adalah jenis prosedur ekstraksi yang cepat dan efisien. Aparat
Saxhlet adalah alat ekstraksi kontinu yang cocok untuk sejumlah kecil material. Proses ini dibahas oleh
Tyler, Brady and Robbers (1976).

Metode Penyaringan Pytochemical

Setelah aktivitas biologis ditemukan dalam ekstrak produk alami, penting untuk menentukan kelas kimia
senyawa aktif sebagai bahan sementara.

GAMBAR 121

langkah menuju penilaian terakhirnya di sana tentang terjadinya kelompok konstituen tanaman yang
sebelumnya telah terbukti tidak aktif secara biologis. Metode-metode ini juga berguna ketika seseorang
mencari secara khusus untuk golongan senyawa dalam exiract tanaman yang mungkin diharapkan
memiliki aktivitas biokogis, misalnya, alkaloid dan flavonoid. Farnsworth (1966) telah menjelaskan secara
terperinci metode untuk deteksi alkaloid, dalam ekstrak tanaman mentah, (termasuk komunikasi. Sejauh
menyangkut pabrik yang lebih tinggi, terdapat sejumlah metode skrining fitokimia yang memberikan hasil
yang cepat.

sactioa pretiensive pada atkalord-deiecting ragenis), sapassn, slycosides jantung, flavonoid, tanam tanam,
anthragainones, elweosida sianogenetik, glikosida isothioc yanate, dan minyak essentiat. Sebagian besar
sederhana, cepat, cukup selektif, dan dirancang untuk menggunakan peralatan minimun. Fong ct al (1977)
telah memprioritaskan prosedur srtening bertahap untuk slkalid, sterat tak jenuh, cannabinoid, antin
kuinon, dan glikosida jantung dan sianagenetik yang terjadi pada tanaman.

Fraksinasi Pelarut dan Kromatografi

Metode pemecahan fraksi memungkinkan pemurnian parsial senyawa aktif secara biolaks dari
ekstrak kasar awal. Proses ini bergantung pada kelarutan istimewa dari senyawa-senyawa yang
memancarkan ragam biologis dalam salah satu dari dua pelarut yang tidak larut. Untuk mendeteksi di
mana dari dua lapisan biokimia aktivitas samudera, bagian dari kedua ekstrak diuji untuk aktivitas, Dalam
desain skema fraksinasi pelarut, penggunaan dibuat dari kelarutan senyawa non-polar dalam pelarut non-
polas, dan senyawa morc polar dalam lebih banyak pelarut polar. Dengan demikian, dalam partisi nuktanil
heksana-aqucous, lipid dan asam lemak akan berada dalam lapisan lexane, sementara senyawa yang lebih
teroksigenasi seperti glikosida akan terjadi pada lapisan metanol berair. Skema fraksinasi pelarut yang
terencana dengan baik dapat menghemat banyak waktu dan efek pada bijak isolasi berikutnya, ramely,
kromatografi. Sebuah metode umum yang digunakan oleh Pettit dan rekan kerja (Pettit dan Cracz. 1978)
untuk mengekstrak fraksinasi dengan aktivitas antikanker dan sitotoksik ditunjukkan pada Gambar 31. Hal
ini berlaku untuk ekstrak hewan laut dan hewan, dan untuk setiap spesies yang sedang diselidiki, eter
minyak, etanol, metanol chkxuform, dan residu encer berair yang semuanya akan diuji. Statr dan Coos
(1976) juga telah merinci sejumlah skema ekstraksi untuk tanaman tingkat tinggi yang mengandung
snticances sgents.

Senyawa asam, ptenolik dan basa yang berasal dari produk alami dapat dipartisi menggunakan
pergantian asam basa. Isolasi mereka dengan demikian adalah masalah daripada thosc senyawa netral.
Atakoids, yang merupakan dasar, disebutkan secara sosial karena mereka secara non-aktif mengerahkan
beberapa jenis aktivitas farmakokgis, dan, pada kenyataannya, banyaknya produk alami di dalam alkaold
obat-obatan. Gambar 32 dirancang oleh Doskotch dan Knapp (197t) untuk pemisahan awal alkaloid tersier
dan kuaterner dari saluran etanol dari bagian-bagian di atas tanah dari Menispermum canadense.

Partisi yang mengandung pelarut dengan menggunakan campuran pelarut immisciblk dari
polaritas yang berbeda diurai dalam corong terpisah. Fraksinasi dengan cara ini

GAMBAR

Ada dua yang lebih canggih yang digunakan untuk pemurnian awal dari metode fraksinasi pelarut
pelarut alami biokogically aktif yang menghasilkan distribusi arus balik (CCD) dan kromalografi tetesan
kontra-curment (DCC atau DCCC). teknik ini dalam fraksinasi agen antaluor tanaman telah dibahas oleh
Wall, Wani dan Taylor (1976) DCC semakin banyak diterapkan untuk produk alami dan khususnya cocok
untuk pemisahan mokculat polar. Dalam partisi terlarut DCC dilakukan oleh melewati tetesan fase gerak
melalui fase diam (Hostettmann, Hostettmann-Kaldas dan Sticher, 1979. Marshall dan Kinghon, 1981).

Fraksinasi Komatografi

Chomatography adalah teknik pemisahan yang banyak diterapkan pada isolasi produk alami dari
ekstrak aktif murni atau sebagian. Mungkin untuk mendapatkan senyawa murni yang menunjukkan
keaktifan biokogis hanya dengan manipulasi kromalografi setelah factiooation pelarut, perlu dilakukan
penggabungan beberapa tahap kromalografie veveral untuk mendapatkan senyawa aktif o senyawa
dalam stiate kemurnian yang diinginkan. Definisi dasar, teori dan perbedaan antara absorptige dan
kromatografi partisi, dan deskripsi teknik kolom, kromatografi lapis tipis dan gas-cair telah dirinci oleh
Bobbit, Schwar- ting dan Gritter (1968). Sysiem kromatografi yang paling sederhana yang dapat
diterapkan pada pemurnian produk alami yang aktif secara biologis adalah kromatografi kolom
absoxrption aliran-aliran gravitasi (Gambar 33). Dalam metode ini, kolom gelas dikemas dengan adsorben,
seperti silika gel, Flowisil atau alumina. Ekstrak aktif biologis semi murni, diperoleh dari fraksi pelarut,
dilarutkan dalam minimun pelarut dan ditambahkan ke bagian atas kolom. Kehati-hatian harus diambil
untuk tidak melebihi kapasitas pemuatan zat terlarut yang direkomendasikan untuk aderbent wsed
elution Solusion tertentu dapat dilakukan seluruhnya dengan satu campuran solat atau olrcat (elusi
socratie) atau dengan sol. ventilasi yang diperkenalkan keluar kolom agar semakin polaritas (eradient
elution). Komponen yang berbeda dari muatan rample melewati kolom pada berbagai rales yang berbeda
pada koefisien adsoxpsi masing-masing. Untuk pertemuan, direkomendasikan bahwa fraksi yang dielusi
dari kolom dikumpulkan dalam kolektor fraksi otomatis.

GAMBAR 33

Fraksi dengan profil kromatografi lapis tipis yang serupa digabungkan dan diestimasi untuk
aktivitas biologis. Stahl (1969) telah menyediakan kompilasi komprehensif sistem pelarut kromatografi
lapis tipis dan reagen kromogenik dari kolom, apakah dikombinasikan atau tidak, diuji aktivitasnya untuk
berbagai kelas produk alami. Adalah penting bahwa semua fraksi tersedia untuk fraksi kromatografi dari
produk alami yang sering mengarah pada pemisahan yang lebih cepat dan lebih efisien daripada yang
dicapai oleh kolom adsorpsi gravitasi kromasografi. Waill, Wani dan Taytor (1976) telah membahas
penggunaan kromalografi colume partisi, preparatif preparatif kromatografi cair tekanan tinggi, dan
penggunaan resin penyaringan gel, Sephadex LH-20, dalam isolasi agen antikanker dari tanaman. Metode
yang digunakan adalah senyawa aktif biologis dari sumber alami, termasuk kertas, kromatografi tipis
persiapan preparatif yang disusun oleh Heftmann (1967), Banyak metode yang disebutkan dalam paragraf
ini memerlukan penggunaan peralatan yang cukup mahal bukan laboratorium yang tersedia. melakukan
penelitian phytochemical, tetapi dimasukkan di sini demi kepuasan diri. atografi, pertukaran ion
kromalografi, dan elektroforesis, telah tersedia di semua pemisahan kromstografi yang dapat mengarah
langsung ke isolat murni untuk melakukan pengukuran fisik dan spektroskopi fisik, maka penting untuk
memurnikan senyawa dengan kristalisasi. Pelarut yang umum digunakan untuk rekristalisasi senyawa
organik, dan rincian eksperimental yang dilibatkan adalah prosedur ini, telah dirinci oleh Vogel (1956).

DETERMINASI OF PURITY OF ISOLATES

Penentuan Purtty Isolat Sebelum dilakukan proses kulturisasi produk alami yang aktif secara
biologis, penting untuk menetapkan kemurnian. Munculnya senyawa sebagai erystals tidak selalu
menjamin kemurniannya. Sebaliknya, banyak senyawa amorf atau resin mungkin cukup murni. Kemurnian
isolat yang aktif secara biologis biasanya mudah diperiksa dengan menggunakan metode kromatografi
analitik (lapisan tipis, cairan bertekanan tinggi, dan kromatografi tas-cair) Senyawa murni menunjukkan
satu spor dengan cthromaiography lapisan tipis, dan satu prak dengan cairan bertekanan tinggi dan
kromatografi gas-cair. Selain itu, banyak senyawa kristal murni memiliki titik leleh yang tajam. Jika isolat
yang diteliti adalah produk alami yang sebelumnya diideatifkan, dan sampel referensi dapat diminta, studi
ko-kromalografi dan titik lebur campuran dapat dilakukan pada campuran dari dua sampel. Pengamatan
kromatogrephia dan titik leleh campuran harus sama dengan isolat saja.
 KARAKTERISASI COMPOUND

Clharacterization Senyawa Produk alami biologis aktif yang terisolasi secara rutin ditandai dengan
pengukuran G) data fisik (titik lebur, rotasi optik spesifik, analisis unsur), () data kromatografi (lapisan tipis,
tekanan tinggi kromatografi cair dan gas-cair) dan (ii) deterninasi utra-violet, infra red, resonansi magnetik
nsclear proton dan spektrum massa. Jika isolat dihilangkan dalam bentuk cair, pengukuran fisik tambahan
seperti indeks bias dan deteminasi gravitasi spasial dapat dilakukan. Cft en turunan seperti garam dan
ester dari isolat produk alami juga dicirikan. exteet dari karakterisasi senyawa sebagian besar tergantung
pada apakah te adalah senyawa yang dikenal atau baru. Dalam kasus sebelumnya, tingkat kompilasi
spektral isola mungkin relatif sedikit, terutama jika senyawa referensi dapat dihilangkan. Identifikasi
kemudian dilakukan dengan membandingkan langsung data fisik, kromatografi, dan spektral. Jika tidak
ada senyawa referensi yang tersedia, dimungkinkan untuk membandingkan data yang diperoleh di
laboratorium dengan yang diterbitkan oleh pekerja lain. Ketika sebuah novel terisolasi, perlu untuk
menginterpretasikan data spektral sehingga sarukturnya dapat clucidatod. Skekton karbon dari senyawa,
dan sifat, posisi dan steroid dari gugus fungsi harus ditentukan. Ini mungkin terbukti menjadi tugas yang
menakutkan, tetapi teknik yang lebih baru seperti dichroism melingkar, karbon-13 resonansi magnetik
magnetik resolusi tinggi spektrometri massa dan kristalografi sinar-X telah memberikan kontribusi besar
untuk solusi masalah ini. Degradasi kimia, konversi, dan sintesis mungkin diperlukan untuk membantu
membuktikan penugasan struktural.

MASALAH-MASALAH DALAM PRODUKSI BIOSCREENING PRODUK ALAMI

Menurut Pettit dan Cragg (1978) hanya beberapa persen dari tanaman dunia, dan kurang dari
0,5% hewan telah disaring untuk sensitivitas BC antikanker. Karena angka-angka ini mungkin tidak
terlampaui ketika semua jenis metode lainnya dipertimbangkan, penting untuk menanyakan mengapa
lebih banyak studi tentang aktivitas biologis ekstrak tanaman, hewan dan mikroorganisme tidak
dilakukan. Funsworth dan Bingel (1977) dan Fairbaira (1976) telah membahas beberapa masalah yang
terlibat dalam menghilangkan ganja baru dari pabrik yang lebih tinggi dengan pengujian farmakologis.
Poin-poin berikut didasarkan pada artikel mereka. Probleans tambahan khusus untuk studi farmakologis
kelautan akan dicantumkan. Masalah utama dalam bioscreening produk alami adalah:

(a) Apatis pada bagian organisasi untuk melakukan dan mendanai penelitian produk alami.
(b) Problegus dalam Natural Protscr Bioscrernineg 129 Ib) Hubungan yang buruk antara
kimiawan yang mendukung kerja isolasi pada nalural pro. saluran dan farmakologis yang
melakukan pengujian biolbgis. Adalah penting bahwa farmakologis harus menyadari bahwa
ekstrak produk alami mentah hanya dalam 0,1% b / b dari senyawa aktif, dan bahwa
organisme yang berbeda mungkin memerlukan pengencer pengujian yang berbeda mungkin
conta untuk mendapatkan pelarutan yang memadai untuk pengujian farmakologis secara
efektif, depe
(c) Konstituen tanaman dari spesies tertentu dapat bervariasi secara kualitatif dan kuantitatif
pada bagian tanaman yang dikumpulkan, iklim, habitat, nutrisi tanah dan waktu panen. Pluat
seperti Curnabis suie ac sangat berbeda ras chcmical. Salah satu dari faktor-faktor ini,
sendirian atau dalam kombinasi, dapat menyebabkan kegagalan untuk menduplikasi resapan
farmakologis yang diperoleh dari satu lx dari spesies tanaman yang sama ke yang lain
(d) Adalah mungkin untuk mendapatkan hasil palsu-negatif dalam skrining farmakologis sakan
yang mengandung senyawa aktif. Ini mungkin disebabkan oleh fakta bahwa konstituen aktif
 dari ekstrak dalam konsentrasi yang terlalu rendah untuk menimbulkan efek, atau bahwa
komponen lain dari cruk eatract menunjukkan efek antagoninsc pada senyawa aktif istere.
(e) Meskipun ekstrak awal mungkin memiliki aktivitas yang baik secara konsisten, aktivitas ini
mungkin hilang pada fraksinasi berikutnya. Untuk mencegah deformasi dan pembentukan
artefak, direkomendasikan bahwa evaporasi pelarut dengan tekanan rendah pada rotary
evaporator dilakukan pada bekow 50 ° C, dan kromatografi kolom pada gel silika tidak
diperpanjang, karena sifat asam dari penyerap ini.
(f) Metode skrining phamacolkgical harus cukup sensitif sehingga hanya sejumlah kecil (mg)
ekstrak diperlukan untuk pengujian. Banyak tes semacam itu membutuhkan jumlah gram
ekstrak, yang dapat menyebabkan tidak tersedianya jumlah isolasi yang cukup untuk studic
struktural
(g) Studi tentang aktivitas biologis dari kapak kehidupan mariak yang diperumit oleh kesulitan
pengambilan sampel abu-abu dan aktivitas yang tidak seimbang yang dikelompokkan oleh
satu spek sebenarnya mungkin disebabkan oleh senyawa yang disintesis oleh organisme yang
lebih rendah dalam rantai makanan. keracunan karena saxitoxin (Scheuer, 1975) dan
ciguatera, karena ciguatoxin (Bagnis et al, 19801

RINGKASAN
Tumbuhan, hewan, dan mikroorganisme melakukan biosintesis sejumlah besar molekul
organik aktif secara biologis. Banyak prmoduct tanaman adalah obat resep standar yang
digunakan di pengobatan barat dan orn, dan ada upaya berkelanjutan dalam laboratorium
penelitian di seluruh dunia untuk menemukan obat baru lebih lanjut dari sumber alami.
Karena sebagian besar dnug alami yang digunakan saat ini berasal dari tanaman tingkat
tinggi, chapler ini meneliti bioscreening produk alami dari aspek phytochemical. Sejumlah
besar bahan produk alami yang tersedia untuk penelitian menyajikan kebutuhan akan
pendekatan yang terorganisir dalam pemilihannya untuk penelitian. Spesimen dari produk
alami dapat dikumpulkan berdasarkan laporan folkiore, atau studi kemokatosomik, geografis,
atau peringkat. Pajak yang diketahui hanya mengandung kelas kimia tertentu dari kasus yang
diinginkan untuk mempelajari representasi flora atau fauna dalam kelompok taksonomi,
matcrial produk alami dapat dipilih secara sengaja. Materi yang dikumpulkan harus diberi
label dengan hati-hati, diautheasiskan oleh ahli taksonomi, dikeringkan, ditimbang, dan
dihaluskan. dapat dikumpulkan. Namun, dalam kegiatan gical dari bahkan bijak pertama
dalam isolasi konstituen aktif secara biolgik dari bahan produk alami adalah ekstraksi pelarut.
Beberapa faktor yang menentukan pilihan sotvent yang sesuai ditinjau. Ekstraksi skala kecil
tipikal sp. parntus digunakan dalam kolator laboratorium phytochenical dan peralatan
Soxket. Jika p dalam ekstrak awal produk alami, senyawa atau senyawa yang bertanggung
jawab dapat dimurnikan dengan pelarut berurutan dan fraksi kromatografi. Metode
penyaringan fitokimia ada untuk klasifikasi awal konstituen plaat menjadi salah satu dari
sejumlah kelas kimia, dan tahap akhir identifikasi senyawa biasanya melibatkan analisis fisik
analitik, termos labu, per aktivitas dapat dideteksi data phic dan spoctral. Sejumlah masalah
yang dialami dalam studi produk alami yang aktif secara biologis dibahas dalam bab ini