Buku Spermatozoa PDF

Spermatologi
Spermatologi
Prof. Dr. Ir. Trinil Susilawati, M.S.
Press
Perpustakaan Nasional RI: Katalog Dalam Terbitan (KDT)
Spermatologi
 UB Press
Cetakan Pertama, April 2011

Hak Cipta dilindungi Undang-Undang
All Right Reserved
Penulis : Prof. Dr. Ir. Trinil Susilawati, M.S.

Perancang Sampul : Donny Yudhia Hersanjaya, S.T. (UB Press)
Penata Letak : Ali Manshur, S.Sos. (UB Press)
Penerbit:
Universitas Brawijaya Press (UB Press)
Anggota IKAPI No. 017/JTI/94
Jl. Veteran (Universitas Brawijaya)
Malang 65145 Indonesia
Telp.: +62341-551611-Pswt 376
Fax. : +62341-565420
Email: ubpress@gmail.com
http://www.ubpress.ub.ac.id
Penerbitan Elektronik Pertama & Terbesar di Indonesia
ISBN: 978-602-8960-04-5
xviii+176 hal, 15.5 cm x 23.5 cm
Dilarang keras memfotokopi atau memperbanyak sebagian atau seluruh

buku ini tanpa seizin tertulis dari penerbit
KATA PENGANTAR
Alhamdulillahhirrobil alamin, buku yang berjudul SPERMATOLOGI
yang berisikan tentang kajian yang mendasar tentang isiologi spermatozoa
yang meliputi: Kapasitasi, Reaksi Akrosom dan Fertilisasi, Selain itu di dalam
buku ini dilengkapi dengan Inseminasi Buatan yang merupakan pengembangan
teknologi yang berdasar pada Fisiologi spermatozoa.
Buku ini dibuat banyak berasal dari buku “Farm animal reproduct-
ion” diedit oleh ESE Hafez dan buku “Mammalian Fertilization“ karangan
Yanagimachi 1988, dengan tujuan untuk dapat membantu mahasiswa S1, S2,
dan S3, serta peneliti yang mendalami tentang proses fertilisasi ataupun yang
berkaitan dengan proses fertilisas serta peneliti atau praktisi yang mendalami
teknik Inseminasi Buatan
Pada kesempatan ini saya mengucapkan terimakasih kepada Mayang
Adelia Puspita, S.P., yang bersedia membantu untuk melakukan editing serta
Prof. Dr. Drh. Aulani’am, yang bersedia membaca dan memberikan kritik dan
saran sehingga lebih mudah difahami dan bermanfaat untuk pembaca.
Besar harapan saya buku ini dapat bermanfaat bagi pembaca, dan kami
mengetahui bahwa buku ini masih jauh dari kesempurnaan, maka kritik dan
saran untuk perbaikan edisi selanjutnya sangat diharapkan.
Penulis
v
DAFTAR ISI
Kata Pengantar ...................................................................................................v
Daftar Isi .................................................................................................vii
Daftar Tabel ..................................................................................................xi
Daftar Gambar ................................................................................................xiii
Pendahuluan ...................................................................................................1
Bab I. Sel Spermatozoa ....................................................................................3
1.1. Morfologi Spermaozoa ...............................................................3
1. Kepala spermatozoa ..............................................................5
2. Akrosom ..................................................................................5
3. Ekor spermatozoa ..................................................................6
1.2. Komposisi Kimia Spermatozoa .................................................7
1. Unsur Inorganik .....................................................................8
2. Komponen Biokimiawi .........................................................8
3. Kromosom sex X dan Y pada spermatozoa. .....................9
4. Spermatozoa X dan Y pada Unggas .................................10
1.3. Seminal Plasma ...........................................................................11
1. Penghasil seminal plasma (kelenjar assesories) ................12
2. Unsur Biokimia dari seminal plasma .................................14
1.4. Metabolisme Spermatozoa .......................................................15
1.5. Respirasi Spermatozoa ..............................................................18
BAB II. Spermatogenesis ..................................................................................21
2.1. Spermatositogenesis ..................................................................24
2.2. Spermiogenesis. ..........................................................................26
2.3. Peran Hormon pada proses spermatogenesis .......................30
vii
viii Daftar Isi
2.4. Fungsi Steroidogenic .................................................................32

2.5. Faktor-faktor yang mempengaruhi spermatogenensis .........34
2.6. Peran skrotum dalam termoregulasi........................................36
BAB III. Kapasitasi Spermatozoa .....................................................................37
3.1. Kapasitasi Spermatozoa Secara In Vivo .................................40
3.2. Kapasitasi Spermatozoa Secara In Vitro ................................41
3.3. Faktor-faktor yang Mempengaruhi Kapasitasi .....................42
1. Variasi Individu .....................................................................42
2. Asal spermatozoa .................................................................42
3. Terdapatnya Kumulus Oophorus. .....................................43
3.4 Peristiwa-peristiwa yang Terjadi Pada Spermatozoa
Selama Kapasitasi .......................................................................44
1. Perubahan-perubahan dalam adenylate cyclase ...............44
2. Perubahan pada metabolisme.............................................45
3. Perubahan dalam ion-ion intraselluler ..............................46
4. Perubahan pada akrosom ....................................................48
5. Perubahan pada Inti .............................................................48
6. Perubahan pada selaput Plasma .........................................48
BAB IV. Reaksi Akrosom ...................................................................................51
4.1. Enzim-enzim Akrosom.............................................................51
4.2. Arti Fungsional Reaksi Akrosom ............................................53
4.3. Morfologi dan Kinetika Reaksi Akrosom .............................54
1. Perbedaan Nyata antara Reaksi Akrosom “True”
dan “False”. ...........................................................................54
2. Sifat Alamiah Exocytotic pada Reaksi Akrosom .............56
3. Waktu Reaksi Akrosom .......................................................56
4. Faktor penyebab alami reaksi akrosom.............................57
4.4. Mekanisme Reaksi Akrosom ....................................................58
4.5. Hiperaktifasi Spermatozoa ......................................................61
Prof. Dr. Ir. Trinil Susilawati, M.S. ix
BAB V. Pembuahan (Fertilisasi) .......................................................................65
5.1. Penetrasi Spermatozoa Pada Sel Telur ....................................66
5.2. Penetrasi Spermatozoa Dalam Menembus Kumulus
Oophorus ....................................................................................67
5.3. Penetrasi Spermatozoa ke Dalam Zona Pellusida.................68
1. Karakteristik Kimia Zona Pellusida ..................................68
2. Penyerangan Spermatozoa Pada Zona .............................69
3. Bagaimana reseptor-reseptor spermatozoa pada zona
dan reseptor-reseptor zona saling berinteraksi satu
dengan lainnya?.....................................................................72
4. Penetrasi spermatozoa dalam Menembus Zona
Pellusida .................................................................................72
5. Penggabungan Spermatozoa dengan Zona. ....................75
5.4. tempat-tempat inisiasi fusi spermatozoa dan telur ..............76
5.5. kejadian-kejadian sesudah fusi..................................................77
5.6 aktivitas sel telur .........................................................................78
5.7 exocytosis granula-granula cortical dan hambatan
polysperma ..................................................................................81
5.8 dekondensasi nukleus spermatozoa dalam sitoplasma
telur ..............................................................................................88
BAB VI. Uji Kualitas Semen ............................................................................91
6.1. Uji Makroskopis (Volume, Warna dan pH)............................92
6.2. Uji Mikroskopis .........................................................................93
1. Uji Motilitas Massa ...............................................................93
2. Motilitas Individu .................................................................95
3. Persentase Hidup Mati (Viabilitas) ....................................96
4. Konsentrasi Spermatozoa ...................................................98
5. Abnormalitas Spermatozoa ............................................. 103
6. Kualitas semen pada ternak ............................................. 106
x Daftar Isi
7. Teknik Pemeriksaan kerusakan membran

spermatozoa ....................................................................... 106
8. Pengamatan membran spermatozoa dengan
mikroskop elektron ........................................................... 108
6.3 Pengamatan kapasitasi spermatozoa dengan pewarnaan
Chlortetracycline (CTC) ......................................................... 112
6.4 Evaluasi status akrosom dengan FITC- Con A dan
Methilen Blue........................................................................... 113
6.5 Hypoosmotic swelling Test (HOS TES). ............................ 114
6.6. Uji Biokimia ............................................................................. 116
6.7. Uji Biologis............................................................................... 117
6.8 CASA ........................................................................................ 117
6.9. Uji Kualitas spermatozoa yang lain ...................................... 122
6.10. Produksi Semen....................................................................... 122
BAB VII. Pengenceran, Pendinginan dan Pembekuan Semen ................... 125
7.1. Media Pengenceran ................................................................ 125
1. Pengencer Tris Aminomethan Kuning telur ................. 128
2. AndroMed®....................................................................... 130
3. Pengencer TCM 199 Kuning Telur ................................ 131
4. Pengencer Alternatif ....................................................... 133
7.2. Prosesing semen .................................................................... 134
7.3. Prinsip-prinsip pembekuan sel ( Cryobiologi) .................... 135
7.4. Banyaknya pengenceran ........................................................ 138
7.5. Pembekuan semen sapi ......................................................... 139
7.6. Thawing semen ...................................................................... 140
7.7. Kebijakan didalam menggunakan teknik Inseminasi
Buatan ...................................................................................... 140
BAB VIII. Inseminasi Buatan ........................................................................... 143
8.1. Penampungan semen ............................................................. 143
Prof. Dr. Ir. Trinil Susilawati, M.S. xi
8.2. Libido dan kualitas semen .................................................... 146
8.3. Teknik Inseminasi Buatan .................................................... 149
8.4. Teknik Inseminasi Buatan pada Kambing ......................... 150
BAB IX. Faktor-Faktor Yang Mempengaruhi Inseminasi Buatan .......... 153
9.1. Kualitas semen......................................................................... 153
9.2. Sumber Daya Manusia............................................................ 155
9.3. Fisiologi Sapi Betina ............................................................... 158
9.4. Evaluasi keberhasilan Inseminasi Buatan ........................... 160
Daftar Pustaka .............................................................................................. 163
Indeks .............................................................................................. 171
DAFTAR TABEL
1.1. Karakteristik dan komponen kimia dalam semen ternak .......................12
1.2. Kelenjar asesoris pada hewan domestik ....................................................14
1.3 Umur, Berat dan karakteristik kualitas Semen saat pertama kali
dikawinkan......................................................................................................15
1.4 Manipulasi in vitro pada spermatozoa .........................................................19
2.1. Lama siklus epithel seminiferus dan spermatogenesis pada
beberapa spesies mammalia .........................................................................25
2.2. Sekresi dan fungsi Sel sertoli .......................................................................32
2.3. Waktu Migrasi didalam epididimis..............................................................35
3.1. Kondisi kapasitasi pada spermatozoa yang diejakulasikan ....................38
4.1 Enzim-enzim yang terdapat pada Akrosom ............................................52
6.1. Score berdasar gerak massa .........................................................................94
6.2. Faktor-faktor endogenous yang mempengaruhi motilitas
spermatozoa ...................................................................................................94
6.3. Faktor-faktor eksogenous yang mempengaruhi motilitas
spermatozoa ...................................................................................................95
6.4. Nomenklatur dari semen analisis ............................................................. 102
6.5. Konsentrasi semen domba hubungan dengan konsistensi .................. 102
6.6. Standar parameter motilitas menggunakan CASA pada beberapa
hewan ........................................................................................................... 121
7.1. Jumlah straw yang dihasilkan, penyimpanan dan hasil IB dengan
menggunakan semen beku dalam kondisi rata-rata .............................. 128
7.2 Komposisi kimia pengencer tris aminomethan dalam 100 ml ............ 129
7.3 Komposisi kimia pengencer tris aminomethan pada domba .............. 130
xiii
xiv Daftar Tabel
7.4 Karakteristik bioisika dari beberapa krioprotektan ............................ 138

8.1 Frekuensi koleksi semen dan persiapan vagina buatan ....................... 189
8.2 Rata-rata lama ejakulasi, jumlah fals mounting dan lama libido pada
berbagai bangsa sapi potong ................................................................... 147
8.3 Kualitas semen pada berbagai bangsa sapi potong .............................. 147
8.4 Deteksi berahi dan prosedur Inseminasi Buatan................................... 149
DAFTAR GAMBAR
1.1 Perbandingan berbagai spermatozoa ternak dan vertebrata lainnya .......3
1.2 Spermatozoa sapi diamati dengan mikroskop Differensial Inferens
Contras (Nomarschi) ......................................................................................4
1.3 Struktur internal spermatozoa sapi ..............................................................4
1.4 Potongan sagital pada kepala spermatozoa yang Terdapat
beberapa bagian ...............................................................................................5
1.5 Axonema spermatozoa...................................................................................7
1.6 Mitokondria pada bagian leher spermatozoa Diamati dengan
Transmisi Elektron Mikroskop (TEM) ........................................................7
1.7 Kelenjar-kelenjar penghasil seminal plasma .............................................16
1.8 Jaringan kelenjar asesoris yang sebagai penghasil seminal plasma.........13
1.9 Jaringan epididimis tempat pematangan spermatozoa ............................13
2.1 Skematis testis dan aluran reproduksi jantan ............................................21
2.2 Spermatozoa danbagian sel didalam tubuli seminiferi ...........................22
2.3 Sel-sel di dalam tubuli seminiferi ................................................................23
2.4 Histologi Testis ..............................................................................................23
2.5 Pembelahan spermatogenesis......................................................................25
2.6 Tahapan Miosis 1 .........................................................................................26
2.7 Tahapan Miosis II .........................................................................................26
2.8 Perubahan sel dari spermatid hingga spermatozoa .................................26
2.9 Tahapan pembelahan spermiogenesis........................................................27
2.10 Proses spermatogenesis pada setiap siklus...............................................29
2.11 Hubungan kontrol fungsi hormon dalam testis .......................................31
2.12 Fungsi isiologis gonadocrinin pada sel sertoli, leydig dan sel
granulosa.........................................................................................................33
xv
xvi Daftar Gambar
2.13 Interaksi paracrine antara sel leydig dan sel sertoli ..................................33
2.14 Sistesis dan produksi testosteron oleh sel leydig ......................................34
3.1 Gambaran spermatozoa yang belum kapasitasi, ......................................39
3.2 Photomicrographs yang menunjukkan kumulus oophorus yang
menyelimuti sel telur (Atas), dan bawah adalah setelah terjadi
fertilisasi pada Chinese hamster. .................................................................44
3.3 Mekanisme molekuler pada proses kapasitasi...........................................45
3.4 Mekanisme molekuler pada peristiwa kapasitasi spermatozoa ..............47
3.5 Mekanisme molekuler yang terjadi pada membran Spermatozoa
selama kapasitasi ............................................................................................47
4.1 Terjadinya reaksi akrosom pada saat spermatozoa menempel pada
jelli di luar sel telur. .......................................................................................52
4.2 Spermatozoa yang telah mengalami reaksi acrosom dengan
pewarnaan FITC Concanavalin A ..............................................................53
4.3 Diagram yang menunjukkan tahapan reaksi akrosom. (Ac)
Acrosomal cap;(Eg)Equatorial Segment of the acrosome;(IAM)
inner acrosomal membrane .........................................................................54
4.4 Proses reaksi akrosom pada manusia ........................................................55
4.5 Skematis dari proses reaksi Akrosom ........................................................56
4.6 Tahapan hilangkan ion kalsium selama proses kapasitasi dan reaksi
akrosom menggunakan pewarnaan CTC ................................................59
4.7 Mekanisme molekuler pada proses reaksi akrosom .................................60
4.8 Scanning Electron Microscop spermatozoa tanpa Akrosom ................61
4.9 Pola gerak hiperaktifasi pada spermatozoa ...............................................62
4.10 Mekanisme molekuler kapasitasi dan hiperaktifasi ..................................63
5.1 Ilustrasi perjalanan spermatozoa sampai fertilisasi ..................................66
5.2 Ilustrasi proses penembusan sel-sel kumulus dan oosit oleh
spermatozoa ......................................................................................68
5.3 Masuknya spermatozoa ke Zona dengan adanya pergerakan ................75
5.4 Proses masuknya inti spermatozoa ............................................................75
Prof. Dr. Ir. Trinil Susilawati, M.S. xvii
5.5 Diagaram reaksi akrosom dan fusi antara sel telur dan spermatozoa
pada tikus. (Ac) Acrosome; (IAM) Inner acrosomal membrane; (MV)
Egg microvilli; (PA) post acrosomal region; (PM) Sperm plasma
membrane; (N) Nucleus; (Z) Zona pellucida ...........................................76
5.6 Diagram tahapan fusi spermatozoa selama fertilisasi dan
penggabungan dengan vittelin. (Eg) Equatorial segment of
the acrosome ..................................................................................................77
5.7 Mekanisme masuknya spermatozoa kedalam sel telur ............................78
5.8 Diagram aktivasi sel telur dan perkembangan pronuclear pada Tikus .......79
5.9 Secara seri gambaran micrograph menunjukkan keluarnya
intracellular Ca++ saat fusi antara spermatozoa dengan sel telur
pada hamster ..................................................................................................81
5.10 Mekanisme molekuler saat terjadinya fertilisasi dan block
Polyspermi ......................................................................................................83
5.11 Reaksi molekuler didalam oosit saat spermatozoa menempel pada
zona pellusida.................................................................................................84
5.12 Sel telur yang telah difertilisasi pada kelinci(A) dan manusia (B)...........86
5.13 Proses masuknya spermatozoa dalam oosit pada proses fertilisasi .......87
5.14 Tahapan proses masuknya spermatozoa ke dalam oosit.........................87
5.15 Pembelahan sel Setelah terjadinya pertemuan pronuclei jantan
dan betina .......................................................................................................90
6.1 Pola gerak spermatozoa ...............................................................................96
6.2 Viabilitas spermatozoa .................................................................................97
6.3 Penghitungan spermatozoa dengan haemositometer..............................99
6.4 Posisi spermatozoa yang dihitungmenggunakan haemositometer ..... 100
6.5 Penghitungan spermatozoa dengan chamber makler ........................... 101
6.6 Gambar Abnormalitas Spermatozoa ...................................................... 104
6.7 Spermatozoa mengalami kelainan ........................................................... 105
6.8 Spermatozoa Normal dan abnormal pada membrannya mengguna-
kan pewarnaan CTC dan diamati dengan mikroskop epi luoresen ... 107
xviii Daftar Gambar
6.9 Spermatozoa Normal dan abnormal pada membrannya ..................... 107

6.10 Spermatozoa yang mengalami kerusakan akrosom pewarnaan
eosin negrosin dengan pembesaran 1000X ........................................... 108
6.11 Spermatozoa Normal dan abnormal pada membrannya diamati
dengan scanning electrone microscope .................................................. 108
6.12 Kerusakan mambran spermatozoa.......................................................... 109
6.13 Flow cart peparasi spermatozoa untuk pengamatan mikroskop
elektron transmisi ....................................................................................... 109
6.14 Hasil pengamatan status ekrosom dengan methileen Blue ................. 114
6.15 Spermatozoa Normal dan abnormal pada Integritas membrannya ... 115
6.16 Hasil uji integritas membran babi ............................................................ 116
6.17 Kecepatan dan Gerak Spermatozoa........................................................ 118
7.1 Melanisme masuknya cryoprotectan di dalam sel ................................ 137
7.2 Prosedur pembekuan semen hasil sexing menggunakan
pengencer tris Aminomethan Kuning Telur .......................................... 141
7.3 Prosedur pembekuan semen hasil sexing menggunakan
pengencer Andromed® ............................................................................ 142
8.1 Penampungan semen menggunakan vagina buatan ............................. 144
8.2 Penampungan semen babi dengan menggunkan pantom ................... 145
8.3 Penampungan semen dengan menggunakan metode massage ........... 145
8.4 Berbagai alat yang digunakan untuk IB kambing ................................. 150
8.5 Tahapan IB pada kambing ........................................................................ 152
9.1 Faktor-faktor yang mempengaruhi keberhasilan IB ............................. 154
9.2 Peralatan penyimpanan semen beku dalan nitrogen cair ..................... 154
9.3 Waktu yang tepat untuk Inseminasi Buatan .......................................... 156
9.4 Waktu yang tepat untuk IB pada sapi .................................................... 156
9.5 Teknik Inseminasi Buatan ........................................................................ 157
9.6 Posisi Deposisi IB ...................................................................................... 157
PENDAHULUAN
Spermatozoa sebelum mengalami fertilisasi atau pembuahan mengalami
perubahan struktur dan fungsinya. Perubahan struktur dan fungsi spermatozoa
ini mulai terjadi pada saat spermatogenesis, di dalam saluran reproduksi jantan
dan saluran reproduksi betina, hingga sampai terjadinya proses fertilisasi di
dalam ampulla. Perubahan struktur dan fungsi spermatozoa saat di dalam salu-
ran reproduksi betina di sebut dengan kapasitasi spermatozoa yang dilanjutkan
dengan reaksi akrosom.
Kapasitasi spermatozoa pada dasarnya adalah perubahan isiologis
yang di dalam buku ini mulai dibahas proses kapasitasi spermatozoa secara in
vivo dan in vitro, faktor-faktor yang mempengaruhi kapasitasi yang dijelaskan
secara in vitro serta peristiwa-peristiwa yang terjadi pada spermatozoa selama
mengalami kapasitasi.
Setelah proses kapasitasi dilanjutkan dengan reaksi akrosom, sehingga
spermatozoa mampu membuahi sel telur. Untuk lebih jelasnya tentang peristiwa
reaksi akrosom ini ,maka di mulai dengan penjelasan tentang enzim-enzim yang
ada di dalam akrosom, arti fungsional terjadinya akrosom, morfologi dan kine-
tika reaksi akrosom, mekanisme reaksi akrosom, serta terjadinya hiperaktivasi
spermatozoa yang bersamaan dengan proses reaksi akrosom.
Proses fertilisasi dimulai dari penetrasi spermatozoa pada lapisan terluar
oosit yaitu kumulus oophorus yang melibatkan proses enzimatis, selanjutnya
adalah penetrasi spermatozoa ke dalam lapisan terluar dari oosit yaitu zona
pellusida, peristiwa penyerangan spermatozoa pada zona pellusida, Reseptor-
reseptor spermatozoa pada zona dan reseptor-reseptor zona saling berinteraksi
satu dengan yang lainnya. Proses penetrasi spermatozoa dalam menembus
zona pellusida dan kejadian-kejadian setelah terjadinya fusi antara spermatozoa
dengan sel telur.
1
2 Pendahuluan
Spermatozoa setelah melakukan penetrasi oosit, menyebabkan aktivasi

dari oosit, selanjutnya terjadi proses exocytosis granula-granula cortical dan terjadi
proses penghambatan polisperma, Sedangkan proses fertilisasi tersebut diakhiri
dengan terjadinya dekondensasi nukleus spermatozoa dalam sitoplasma.
Fisiologi spermatozoa hingga terjadinya fertilisasi mendasari perkem-
bangan bioteknologi reproduksi meliputi Inseminasi Buatan (IB), Transfer
Embrio, Fertilisasi In Vitro dan Manipulasi Embrio, sedangkan tujuan dari
Bioteknologi Reproduksi pada ternak bertujuan untuk memperbaiki Mutu
Genetik ternak, sedangkan pada manusia adalah untuk membantu pasangan
suami istri untuk mendapatkan anak secara bantuan. Hingga saat ini IB yang
telah terbukti dapat meningkatkan mutu genetik ternak dan dapat diterima oleh
masyarakat, sehingga saat ini IB telah dilaksanakan secara swadaya masyarakat.
Selain itu IB merupakan cara yang ampuh untuk meningkatkan populasi ternak
dan produksi ternak baik secara kualitatif maupun kuantitatif, sehingga dapat
meningkatkan pendapatan baik petani maupun pemerintah daerah.
BAB I
SEL SPERMATOZOA
Spermatozoa dibentuk dalam tubuliseminiferi yang berada di dalam
testes. Tubulus ini berisi rangkaian sel yang kompleks, yaitu perkembangan atau
pembelahan sel dari sel germinal sampai dengan terbentuknya spermatozoa atau
gamet jantan. Bentuk spermatozoa yang sempurna adalah merupakan sel yang
memanjang, yang terdiri dari kepala yang tumpul yang di dalamnya terdapat
nucleus atau inti, dan ekor yang mengandung apparatus untuk bergerakan sel.
Pada kepala terdapat akrosom yang memiliki struktur dinding yang rangkap yang
terletak diantara membran plasma bagian anterior nucleus, Leher menghubung-
kan kepala dan ekornya (lagela) yang dibagi lagi menjadi bagian tengah, pokok
dan akhir yang bagian–bagian tersebut mempunyai struktur yang berbeda.
1.1. MORFOLOGI SPERMATOZOA

Spermatozoa pada masing-masing spesies mempunyai ukuran yang
berbeda-beda akan tetapi bentuknya hampir sama. Perbedaan relatif ukuran
dan bentuk spermatozoa pada berbagai hewan seperti pada gambar 1.1.
Gambar 1.1. Perbandingan berbagai spermatozoa ternak dan verte-

brata lainnya (Garner and Hafez, 2008)
3
4 Sel Spermatozoa
Gambar 1.2. Spermatozoa sapi diamati dengan mikroskop Differensial

Inferens Contras (Nomarschi) (Susilawati, 2000)
1. Plasma membran 7. Rest of the distal centriole A. Kepala

2. membran akrosom luar 8. Thick outer longitudinal ibers B. Leher
3. Akrosom 9. Mitokondria C. Mid piece
4. membran akrosom dalam 10. Aksoneme D. Principal piece
5. Nukleus 11. Anulus E. Endpiece
6. sentriol proksimal 12. Ring ibers
Gambar 1.3. Struktur internal spermatozoa sapi.

Pada kepala spermatozoa terdapat akrosom, sedangkan dan pada ekor
secara anatomis terdapat bagian midle piece, principal piece dan bagian ekor yang
terdapat central axonemal yang terdapat 9+2 mikrotubulus, dan di balut dengan
outer ibril, lapisan mitochondria yang membentuk kolom longitudinal pada
dorsal dan ventral dan circumferial ribs.
Prof. Dr. Ir. Trinil Susilawati, M.S. 5
1.1.1. Kepala spermatozoa
Bentuk utama dari kepala spermatozoa adalah oval, tumpul mengandung
nukleus dengan kromatin yang padat sekali. Kromatin terdiri dari DNA yang
kompleks dari protein dasar yang dikenal sebagai protamine sperma. Jumlah
kromosom spermatozoa adalah haploid atau setengah dari sel somatik, Sel
spermatozoa yang haploid ini dihasilkan dari pembelahan secara meiosis sel
yang terjadi selama pembentukan spermatozoa atau proses spermatogenesis.
1.1.2. Akrosom
Bagian anterior akhir dari inti spermatozoa dibungkus oleh akrosom
tipis, lapisan membran yang menutup ini terbentuk pada saat proses pemben-
tukan spermatozoa. Pada akrosom berisi beberapa enzim hidrolitik antara lain
proacrosin, hyaluronidase, esterase dan asam hidrolase yang dibutuhkan pada proses
fertilisasi.
Bagian equator akrosom ini merupakan bagian yang penting pada
spermatozoa, hal ini karena bagian anterior post akrosom ini yang mengawali
penggabungan dengan membran oosit pada proses fertilisasi.
Gambar 1.4. Potongan sagital pada kepala spermatozoa yang terdapat

beberapa bagian
6 Sel Spermatozoa
Akrosom terdiri dari apical (apical ridge), Principal dan bagian equatorial.
Membran bagian luar pada bagial apical dan principal segments disebut dengan
akrosom luar. Juga terdapat hubungan dalam akrosom, yaitu membran dalam
dan membran luar dengan inti dan plasma membran.
1.1.3. Ekor spermatozoa

Ekor spermatozoa dibagi menjadi leher, bagian tengah, pokok dan akhir.
Leher menghubungkan potongan bagian basal plate bagian posterior dan bagian
terbawah dari nukleus. Bagian basal plate pada bagian leher berlanjut sampai akhir,
dengan sembilan serabut kasar yang mengeras pada seluruh bagian ekor.
Inti bagian tengah pada ekor bersama dengan seluruh bagian ekor mem-
bentuk aksonema. Aksonema ini terdiri dari sembilan pasang mikrotubulus yang
tersusun di sekitar pusat ilamen. Pada bagian tengah, susunan mikrotubulusnya
adalah 9+2 yang dikelilingi oleh sembilan serabut kasar padat yang berhubungan
dengan sembilan pasang aksonema. Aksonema dan iber yang padat pada bagian
tengah, sekelilingnya dibungkus oleh mitokondria. Pembungkus mitokondria ini
tersusun berupa pilinan yang mengelilingi serabut longitudinal ekor, Mitokon-
dria menghasilkan energi yang dibutuhkan untuk pergerakan spermatozoa.
Pembungkus mitokondria berakhir pada annulus.
Bagian pokok yang merupakan lanjutan dari annulus dan memanjang
mendekati bagian akhir ekor, terdiri dari aksonema yang terpusat dan bergabung
dengan serabut kasar. Lapisan ibrous diperkirakan memberikan stabilitas untuk
gerakan ekor. Bagian akhir, merupakan batas posterior dari lapisan ibrous yang
hanya berisi aksonema yang dilapisi membran plasma.
Aksonema bertanggung jawab pada pergerakan spermatozoa. Sepasang
mikrotubulus tersusun dari 9 + 2, umumnya dinding ekor melipat seperti gelom-
bang dengan gerakan menggeser antara sepasang daerah yang berdekatan.
Droplet protoplasmic atau sitoplasmik biasanya tidak terdapat spermato-
zoa yang diejakulasikan, tersusun dari residu sitoplasmik. Meskipun termasuk
spermatozoa abnormal yang diejakulasikan dari berbagai spesies, droplet yang
terdapat di daerah leher, yang diketahui sebagai “Droplet Proximal”, sedangkan
yang dekat annulus, disebut “Droplet Distal”.
Gambar 1. 5. Axonema spermatozoa
Gambar 1.6. Mitokondria pada bagian leher spermatozoa Diamati dengan

Transmisi Elektron Mikroskop (TEM)
1.2. KOMPOSISI KIMIA SPERMATOZOA

Komponen kimia spermatozoa adalah asam nukleat, protein dan lemak.
Kurang lebih sepertiga dan berat kering sel spermatozoa adalah intinya kro-
matin inti terdiri dari kira-kira setengah DNA dan ½ protein. Topi akrosom
mengandung berbagai protein enzim. Beberapa struktur protein enzim dan
lemak ditemukan di ekor.
8 Sel Spermatozoa
1. Unsur Inorganik
Spermatozoa mengandung phospor, nitrogen, dan sulfur yang banyak.
Sebagian phospor berhubungan dengan DNA, sedangkan sulfur berasal dari
komponen protein inti dan keratinoid pada bagian ekor.
2. Komponen Biokimiawi
Inti spermatozoa terdiri dari kromatin yang DNA-nya distabilkan dengan
konjugasi menggunakan protein khusus yaitu sebagai “Spermatozoa Histone”. Inti
spermatozoa pada beberapa spesies mengandung sebagian kecil spermatozoa
histone dengan berat molekul rendah, yang diketahui sebagai “Protamin”, se-
dangkan spermatozoa pada spesies lain mengandung jumlah yang bervariasi
pada arginin yang kaya histone. Protein dasar inti penting untuk kondensasi
dan stabilisasi DNA dengan ikatan sulfhidril. Peningkatan ikatan sulfhydryl
berperanan pada perjalanan spermatozoa saat diepididimis selama perjalanan
menuju ke fertilisasi.
Saat spermatozoa mengalami reaksi akrosom yang sebagian besar
bahan dalam akrosom dikeluarkan yang disebabkan penggabungan plasma
dan membran akrosom bagian luar. Fungsi dari masing-masing enzim adalah
sebagai berikut: Hialuronidase menyebabkan menyebarnya sel kumulus yang
mengelilingi ovum yang baru diovulasikan menyebar. Proakrosin adalah pre-
cursor enzim proteolitik akrosin, yang dapat membantu dalam mempersingkat
penetrasi spermatozoa melalui zona pellusida. Namun secara bioisika, peng-
induksian spermatozoa dapat secara mekanik menetrasi zona pellusida dengan
cara gerakannya (gerakan spermatozoa).
Lapisan mitokondria spermatozoa, yang kaya fosfolipid, dengan berbagai
ukuran mitrokondria pada beberapa spesies dan dalam cairan kimia yang dibuat.
Spermatozoa mengandung enzim cytochrome oksidase pada system pernafasan
dan tahap glikosis. Metabolisme enzim lain, khususnya laktat dehidrogenase
yang dikenal sebagai LDH-X, juga terdapat energi yang kaya nukleotida ade-
nin dan guanin adalah komponen penting dalam energi spermatozoa sebagai
protein aksonema, tubulin dan dynein. dynein merupakan protein dasar dalam
mikrotubulus aksonema yang ditunjukkan oleh ikatan divalent ATP-ase yang
diaktifkan.
3. Kromosom sex X dan Y pada spermatozoa mammalia.
Pejantan pada mammalia menentukan jenis kelamin anak yang dila-
hirkan. Sebagai hasil pembelahan reduksi selama spermatogenesis, spermatozoa
hanya mengandung setengah jumlah DNA pada sel-sel somatik dari spesies
yang sama dan terbentuklah dua macam spermatozoa yaitu spermatozoa yang
berkromosom X dan spermatozoa yang berkromosom Y. Meskipun diduga
kandungan DNA antara kromosom X dan Y pada spermatozoa hanya sekitar
4% untuk ternak, perbedaan kecil ini dapat diketahui dengan cara menggunakan
pewarnaan luoresen dan Flow cytometer. Spermatozoa yang mengandung
kromosom X (spermatozoa X) jika terjadi fertilisasi akan menghasilkan embrio
betina, sedangkan spermatozoa yang mengandung kromosom Y (spermato-
zoa Y) akan menghasilkan embrio jantan, karena pada kromosom Y terdapat
sex determining Region Y gen (SRY) yang menentukan terbentuknya testis pada
hewan jantan (Bianchi, 1991; Graves, 1994 dan Koopman,1995). Panjang dan
lebar spermatozoa sapi kira-kira 8-10 x 4-4,50 mikron, tebal kepala 0,50 – 1,50
mikron, bagian tengah spermatozoa mempunyai panjang 10 – 15 mikron dan
diameternya sekitar 1 mikron, panjang ekor spermatozoa adalah 35-45 mikron
dengan diameter 0,4-0,8 mikron, sedang panjang keseluruhan mencapai 50-70
mikron (Toelihere, 1985).
Susilawati dkk (1999) Hasil pengukuran kepala spermatozoa sapi sebanyak
2000 spermatozoa didapatkan rata-rata panjang kepala 8,75 ± 0,25 µm, dan rata-
rata lebar kepala 4,12 ± 0,22 µm. Hasil pengukuran besar kepala spermatozoa
(panjang x lebar) pada semen segar diperoleh rata-rata 32,75 ± 2,36 µm2.
Flow cytometer dimodiikasikan untuk mendapatkan jenis spermatozoa
dengan populasi yang murni (seleksi jenis kelamin). Ketika spermatozoa yang
telah diseleksi mendekati kemurnian 90% diinseminasikan ke betina. Sehingga
rasio sex keturunan hampir sama dengan prediksi rasio spermatozoa X ke Y
hasil identiikasinya . Penemuan ini penting untuk perkembangan selanjutnya
untuk mengontrol jenis kelamin ternak (Garner dan Hafez, 2008)
Spermatozoa X mengandung kromatin lebih banyak di kepalanya, se-
hingga mengakibatkan ukuran kepala spermatozoa X lebih besar (Garner dan
Hafez, 2008), maka Susilawati dkk (1998) melakukan identiikasi spermatozoa
X dan Y berdasarkan pada ukuran kepala yaitu panjang kali lebar, apabila lebih
besar dari rata-rata maka dianggap spermatozoa X, sedangkan bila lebih kecil
10 Sel Spermatozoa
adalah spermatozoa Y. Berdasarkan cara penentuan tersebut diperoleh hasil

persentase spermatozoa yang diprediksi sebagai spermatozoa X sebanyak
52,10% dan spermatozoa yang diprediksi sebagai spermatozoa Y sebanyak
47,9%.
4. Spermatozoa X dan Y pada Unggas

Jenis kelamin ternak ditentukan oleh gen yang terdapat pada salah satu
sex chromosom. Pada mammalia yang menentukan jenis kelamin adalah kro-
mosom Y, sedangkan pada kelompok burung pada jantan berkromosom ZZ
(homogametik), sedangkan betina ZW (hetero gemetik) (Ellegren, 2001 ; Hafez
and Hafez, 2008; Froman, Kirby and Proudman, 2000). Gen yang menentukan
jenis kelamin pada ternak jantan adalah gen SRY (Grifiths, 1991) Sedangkan
pada bangsa burung yang menentukan jenis kelamin ada gen yang berada di
dalam lokus yang belum diketahui fungsi pengaturannya (Ellegren, 2001).
Hingga saat ini belum diketahui dengan jelas gen mana yang mengatur
jenis kelamin, di lain ihak telah berhasil diidentiikan protein pada kelompok
burung betina yaitu W – linked PKCIW gene yang dapat mengekspresikan
pembentukan gonad betina. Akan tetapi belum jelas pengaturan pertumbuhan
gonad oleh gen DMRT1 dan PKC1W (Ellegren, 2001).
Gen DMRT1 mengexpresikan genital ridge dan saluran Wolfian per-
tumbuhan alat reproduksi jantan pada tahap ke 25 (Reymon et al ;1999), DMRT
diexpresikan pada burung jantan yang telah dewasa (Shan et al, 2000).
Biosintesis dan sekresi hormon gonadal berpengaruh terhadap diffe-
rensiasi gonad. Pembentukan gonad (gonadogenesis) dipengaruhi oleh hor-
mon exogenous. Pertumbuhan gonad pada burung lebih labil, sehingga dapat
dipengaruhi oleh manipulasi hormon. Perubahan jenis kelamin dapat dilakukan
dengan injeksi telur dengan estrogen atau oleh produksi estrogen. Experimen
banyak dilakukan pada critical role untuk sintesis estrogen dalam sex determinasi
(Scheib et al, 1983). Sinthetic inhibitors pada ensim sintetis estrogen, aromatase,
dapat menyebabkan betina menjadi jantan secara permanen (Elbrecht et al ,
1992). Gonad sebelah kanan untuk pembentukan jantan dan gonad sebelah
kiri akan membentuk testis (Vaillant et al, 2001) dan (Smith et al, 2003). Unggas
jantan yang berkromosom ZZ diberi perlakuan estrogen akan menjadi betina
akan tetapi tidak permanan. Terdapat 2 akhir suatu sintesis estrogen adalah
P-450 aromatase dan 17β HSD diexpresikan hanya pada ZW yang mempunyai
gonad betina yang mengalami defferensiasi morfologi (hari ke 6-6, 5, stage 29-
30) (Kabayashi et al,1998); (Smith et al, 1997) dan Nishikimi et al (2000). Enzym
ini diexpresikan oleh modulary cord pada gonad betina, enzim yang lain pada
pathway steroidogenic yang di expresikan pada medula pada kedua jenis kelamin
(Nishikimi et al, 2000). Aromatase dan 17 βHSD adalah kunci dari komponen
sexual dimorphic. Secara logis bahwa gen W linked pada penentuan jenis kelamin
betina yang mengaktivasi aromatase dan 17 βHSD yang diexpresikan secara awal
pada pembentukan alat kelamin betina. Akan tetapi tidak konsisten pada peran
hormon androgen pada awal pembentukan jatan. Testosteson dan DHT tidak
berpengaruh pada pembentukan telur dan reseptor androgen diekspresikan
pada akhir dalam pembentukan gonad.
Estradiol berpengaruh selama perkembangan gonad dan terdapat re-
septor. Yang menarik estrogen receptor alpha (Erα) diexpresikan pada kedua jenis
kelamin untuk differensiasi sex dalam embrio ayam (smith et al, 1997) Tampaknya
ekspresi dimulai dari gonadal cortex Ekspresinya adalah pengaturan di dalam
proses pertumbuhan jantan, pada betina juga di didalam gonad sebelah kiri
(smith et al, 1997 dan Andrew et al, 1995). Pertumbuhan gonad selama proses
embryogenesis tampaknya resisten terhadap sex steroid akan tetapi deferensiasi
dapat terjadi tanpa adanya steroidogenesis (Jost , 1970) dan (Hu et al, 2002)
1.3. SEMINAL PLASMA

Pengertian fungsional dari seminal masih diragukan, hal ini karena selama
proses perjalanan spermatozoa pada uterus dan proses fertilisasi tidak ada peran
dari seminal plasma. Seminal plasma, adalah suatu komponen essensial yang
berfungsi pembawa (Carier) dan pelindung spermatozoa.
Seminal plasma berperan penting pada spesies babi betina dan kuda betina, hal
ini karena seminal plasma bersama dengan spermatozoa sampai ke uterus, karena
diejakulasikan hingga uterus. Pada sapi dan Domba seminal plasma dibutuhkan
oleh spermatozoa, saat spermatozoa di ejakulasikan dan disimpan dalam vagina
(komposisi semen dan karakteristik semen terdapat pada tabel 1.1).
12 Sel Spermatozoa
Tabel 1.1. Karakteristik dan komponen kimia dalam semen ternak

Karakteristik Sapi Domba Babi Kuda Ayam
Volume ejakulasi (ml) 5-8 0,8– 1,2 150-200 60-100 60-100
Konsentrasi spermatozoa (juta/ml) 800-2000 2000-3000 200-300 150-300 150-300
Spermatozoa/ejakulasi (Bilion) 5-15 1,6-3,6 30-60 5-15 5-15
Spermatozoa motil (%) 40-75 60-80 50-80 40-75 40-75
Morfologi spermatozoa normal (%) 665- 95 80-95 70-90 60-90 60-90
Protein (g/100 ml) 6,8 5,0 3,7 1,0 1,0
pH 6,4-7,8 5,9-7,3 7,3-7,8 7,2-78 7,2-78
Fruktosa 460-600 250 9 2 2
Sorbitol 10-140 26-170 6-18 20-60 20-60
Citric acid 620-806 110-260 173 8-53 8-53
Inositol 25-46 7-14 380-630 20-47 20-47
Glyceryl Phosphoril cholin (GPC) 100-500 1100-2100 110-240 40-100 40-100
Ergothioneine 0 0 17 40-110 40-110
Sodium 225+13 178+11 587 257 257
Potasium 155+ 6 89+4 197 103 103
Calcium 40+2 6+2 6 26 26
Magnesium 8 + 0,3 6+0,8 5-14 9 9
Chloride 174-320 86 260-430 448 448
(Garner and Hafez, 2008)
1.3.1. Penghasil seminal plasma (kelenjar assesories)

Seminal plasma merupakan suatau cairan yang bermacam-macam yang
dihasilkan oleh beberapa kelenjar yaitu Prostat, vesicular seminalis dan kelenjar
bulbouretralis yang dituangkan kedalam uretra, saat ejakulasi mereka dicampur
dengan cairan spermatozoa dan sekresi ampula dan duktus deferens. Selain itu
juga cairan yang berasal dari epididimis.
Gambar 1.7. Kelenjar-kelenjar penghasil seminal plasma

Gambar 1.8. Jaringan kelenjar asesoris yang sebagai penghasil seminal plasma
Gambar 1.9. Jaringan epididimis tempat pematangan Spermatozoa

14 Sel Spermatozoa
Tabel 1.2 Kelenjar asesoris pada hewan domestik

Spesies Kelenjar vesikularis Prostata Cowper
Bovine + + +
Kucing - + -
Kuda + + +
Ovine + + +
Procine + + +
Pineda (2005b)
1.3.2. Unsur Biokimia dari seminal plasma

Seminal plasma biasanya berisi asam sitrat kadar tinggi, ergotionine, fruc-
tose, glyseryphosphorylcholine dan sorbitol. Sebagian berupa asam askorbik,
asam amino, peptida, protein, lemak, asam lemak dan beberapa enzim yang turut
berperan (white, 1980). Anti mikroba dan imunoglobulin, terutama kelas Ig A
(Shivaji, 1984 dan Ablin, 1974) terdapat juga substansi hormon yaitu androgen,
estrogen, prostaglandin, FSH, LH, materi seperti chorionic gonadotropin, juga
terdapat dalam kadar rendah insulin, glukagon, prolaktin, relaksin, hormon
pembentuk thyroid (Garner dan Hafez, 2008).
Selain sebagai media transportasi, fungsi seminal plasma tidak begitu jelas,
hal ini bisa dilihat pada Spermatozoa yang berasal dari kauda epididimis dapat
membuahi telur tanpa penambahan hasil eksresi kelenjar asesoris. Kandungan
biokimia pada semen, dapat digunakan sebagai indikator penunjuk fungsi khu-
sus kelenjar asesoris yang menghasilkannya, misalnya Fruktosa dihasilkan oleh
vesikula seminalis.
Fruktosa dan asam sitrat merupakan komponen penting kelenjar veskula
pada ruminansia. Asam sitrat sendiri tersusun dalam kelenjar vesikula kuda
jantan, pada kelenjar vesikula babi hutan berisi sedikit fruktosa tetapi ditandai
dengan tingginya kandungan ergothioniene dan inositol. Glycerylphosphorylcholine
merupakan sebuah komponen khusus dari epididimis. Ergothioniene adalah
sebuah keunikan tersendiri pada kelenjar ampula kuda.
Kelenjar asesori pada banteng dan kuda jantan dapat digetarkan melalui
rektum. Pada banteng gelembung vesika seminalis dan kelenjar prostatnya tidak
dapat diketahui lewat rektum. Kelenjar bulbourethal bangsa sapi, umumnya
tidak dapat diidentiikasikan karena tertutup oleh otot. Pada babi hutan, ukuran
kelenjar bulbourethalis dapat dipergunakan untuk membedakan pengebirian
pada criptorchid babi hutan. Babi hutan sebelum pubertas memiliki kelenjar
bulbourethalis kecil, panjangnya 5 cm, beratnya kurang dari 1 gram. Cryptor-
chid babi hutan umumnya mempunyai ukuran kelenjar yang normal, kira-kira
panjangnya 10 cm dan beratnya 45 gram.
Tabel 1.3. Umur, Berat dan karakteristik kualitas Semen saat pertama kali
dikawinkan (Garner dan Hafez, 2008)
Mulai dapat mengawini Volume Konsentrasi
Spesies Ejakulasi spermatozoa
Bulan Berat badan (Kg) (ml) (108/ml)
Babi 5-8 250 100-150 0,1-0,2
Sapi 12-14 500 3-5 0,8 – 1,2
Domba 6-8 Bervariasi 0,3-1 1,2 – 1,5
Kuda 20-24 500 50-100 0,1- 1,5
Ayam 4-6 Bervariasi 0,10- 0,3 50-90
Kucing 9 3,5 0,01-0,3 1,5- 28
Anjing 10-12 Bervariasi 2-25 0,6-5,4
Marmut 3-5 0,450 0,4-0,8 0,05-0,2
Kelinci 4-12 Bervariasi 0,4-0,6 0,5 – 3,5
Kualitas semen saat ejakulasi pada sebagian besar ternak adalah berubah-
ubah, hal ini karena bervariasinya sekresi dari beberapa organ asesoris termasuk
epididimis (caput, corpus epididimis dan caudal epididimis), kelenjar ampular
(AMP), kelenjar vesicular, kelenjar prostat dan kelenjar bulbourethal. Besarnya
sekresi dari kelenjar assesori bervariasi tidak hanya diantara spesies, tetapi juga
diantara individu pada spesies yang sama dan diantara ejakulasi dari individu
yang sama.
1.4. METABOLISME SPERMATOZOA

Karakter motilitas (pergerakan) dari spermatozoa memudahkan dalam
melihat kondisi isiologis spermatozoa. Tetapi motilitas dengan sendirinya bukan
identik dengan kemampuan dalam memfertilisasi. Energi yang dibutuhkan untuk
motilitas diperoleh dari persediaan intraseluler dari ATP. Penggunaan ATP ter-
lihat diatur oleh tingkat endogenous dan siklus Adenosine Monophosphate (cAMP).
cAMP tidak hanya mengatur pelepasan ATP tetapi juga mempunyai pengaruh
pada motilitas spermatozoa. Pengaruh cAMP ini kompleks pada pergerakan
16 Sel Spermatozoa
spermatozoa yang ditunjukkan secara in vitro dengan menambahkan dibutyryl

cAMP atau inhibitor methyl xanthines yang menghalangi degradasi intraseluler
normal dari cAMP pada spermatozoa.
Meskipun banyak kehilangan organel pada spermatozoa yang berhu-
bungan dengan proses metabolisme pada proses pembentukan spermatozoa,
spermatozoa tetap aktif dalam metabolisme karena mempunyai enzim yang
penting untuk reaksi biokimia dari glikolisis, siklus asam trikarboksilat, oksidasi
asam lemak, transport electron, dan mungkin heksosa monophospat.
Energi yang langsung digunakan untuk pergerakan spermatozoa dihasi-
lkan oleh serabut ekor berasal dari uraian ATP, yang diduga terdapat di dalam
serbuk spiral yang mengikat berkas serabut. Nucleotid ini tersusun dari basa
adenosin, yaitu ikatan lingkaran dari karbon ribose dan tiga ikatan fosfat, kedua
dari yang terakhir mengandung banyak energi (P-P) dan hanya dapat tersusun
menjadi suatu kelompok dengan tambahan energi yang sangat banyak. Jika
ATP diaktifkan oleh enzim tertentu, maka ikatan fosfat terutama yang banyak
mengandung banyak energi akan terurai, dilepaskan energi, tersisa ADP dan
terbentuk fosfat anorganik.
Selanjutnya ADP (ikatan kaya energi kedua) terurai, melepaskan energi
untuk kontraksi ibril, tersisa AMP (Adenosin mono phosphat) serta terbentuk
fosfat anorganik lagi. Bila ATP dan ADP telah habis, kontraksi ibril sperma-
tozoa akan terhenti. Supaya motilitas masih dapat berlangsung, maka ADP
dan ATP harus dibangun kembali. Karena reaksi ini dapat berbalik, maka
pembentukan ADP dari AMP dengan menambahkan kelompok fosfat, yang
berasal sumber energi dari luar. Kebanyakan aktiitas isiologi disertai dengan
pelepasan energi dari reaksi bahan organik seperti karbohidrat dan lemak.
Metabolisme spermatozoa tidak selalu membutuhkan oksigen. Oksigen
hanya diperlukan bila aktiitas metabolisme tidak dapat terjadi tanpa adanya
oksigen. Faktor lain dapat mengatur kebutuhan derajat kebutuhan oksigen un-
tuk menghasilkan energi untuk gerak. Jadi meskipun produksi energi tiap unit
karbon jauh lebih eisien bila disertai dengan oksidasi daripada hanya dengan
glikolisis, tetapi ternyata hasil percobaan dalam kondisi tertentu menghasilkan
produksi energi dari glikolisis sama cepatnya di bawah pengaruh oksigen atau
tanpa oksigen. Jalur pertukaran energi dan penyimpanan energi melewati sistim
adenil, sesudah dihasilkan oleh proses glikolisis maupun respirasi.
Glikolisis terjadi pada kondisi an aerob, dengan tidak adanya oksigen,
spermatozoa memecah glukosa, fruktosa atau mannosa menjadi asam laktat.
Pada proses kegiatan fruktolisis lebih baik dari pada glukolisis, sebab fruktosa
adalah gula dasar dari seminal. Spermatozoa dapat hidup dalam kondisi an aerob.
Karakteristik ini penting selama penyimpanan saat proses Inseminasi Buatan.
Jalur metabolisme glikolisis dengan dua bahan baku yaitu fruktosa dan
glukosa. Pertama, Fruktosa-1,6-difosfat diuraikan enzim aldolase menjadi
dua molekul dari 3 karbon triofosfat, yaitu 3-fosfo-glyserin aldehid (G-3-P) dan
dygydroxyaceton fosfat. Dalam proses oksidasi G-3-P dengan pemindahan unsur
hydrogen yang diikuti dengan pernyenyawaan fosfat anorganik, terbentuklah
asam 1,3 difosfoglycerin. Dehidrogenase G-3-P membutuhkan suatu enzim (di-
fosforidin nucleotid,DPN) yang akan bereaksi dengan ion hydrogen dan merubah
aldehid menjadi asam dan mereduksi DPN menjadi DPNH2. Penguraian dari
asam difosfat glyserin menjadi asam monofosfat glyserin menghasilkan energi
yang terpakai untuk membangun ADP dan ATP.
Selanjutnya fosfoglyceromutase, memisahkan fosfat dari satu atom karbon
lainnya untuk membentuk asam 2-fosfoglycerat yang diaktiisir dengan katali-
sator enolase, melepaskan air dan menjadi asam fosfopiruvat. Enzim transfos-
forylase sebagai katalisator reaksi yang lebih lanjut dan ikatan fosfat kaya energi
dari asam fosfopiruvat. Enzim transfosforilase sebagai katalisator reaksi yang
lebih lanjut dan ikatan fosfat kaya energi dari asam fosfopiruvat memerlukan
unsur magnesium dan kalium. Enzim ini akan memindahkan fosfat ke AMP
atau ADP membentuk ADP atau ATP dan mengisi kembali substansi energi
dengan pembentukan asam piruvat. Jadi dalam lingkungan an aerob asam piruvat
mengikat dua ion hydrogen dari DPNH2 dengan katalisator enzim, asam laktat
dehydrogenase membentuk produk akhir anaerob asam laktat. Selanjutnya
DPN menjadi bebas untuk mengikat hydrogen baru dari proses oksidasi G-3-P,
sehingga memungkinkan keseimbangan proses fruktolisis.
Kedua, dengan menggunakan glukose sebagai bahan baku dikemukakan
bahwa reaksi pertama menghasilkan pembentukan glukose 6-fosfat (G-6-P) dari
glukosa 6 –fosfat (G-6-P) dari glukosa dan ATP. Spermatozoa merubah G-6-P
menjadi fruktosa-6-P dan dengan batuan ATP dirubah menjadi fruktose –6-P
dan dengan bantuan ATP dirubah menjadi fruktose –6-P dan dengan bantuan
ATP dirubah menjadi fruktose –1-6-difosfat. Selanjutnya mengikuti proses dari
18 Sel Spermatozoa
bahan pertama (Fruktose).

Setelah proses glikolisis selesai dilanjutkan dengan siklus kreb asam sitrat.
Sesuai dengan hasil-hasil penelitian mengenai sistem prima ketergantungan
oksigen metabolisme sel dan jaringan adalah siklus kreb asam sitrat. Jalur meta-
bolisme ini merupakan jalan reaksi utama proses oksidasi bahan pokok normal
spermatozoa. Bahan pokok ini merupakan produksi akhir glikolisis, asam laktat
dan produksi dehidrogenase adalah asam piruvat. Reaksi keseimbangan, asam
piruvat dan asam laktat, lebih berat berjalan ke arah asam laktat bila tanpa
oksigen. Dalam lingkungan oksigen asam laktat diteruskan melewati piruvat
ke acetil koenzim A (Acetyl Co A) yang akhirnya bersenyawa dengan oxaliasetat
membentuk sitrat. Reaksi ini berkesinambungan melewati siklus krebs.
Faktor-faktor yang mempengaruhi metabolisme spermatozoa antara lain
temperatur, konsentrasi semen, fosfat an organic, pH, kation dan anion, tekanan
osmose, hormon, zat anti bakteri dan gas. Spermatozoa yang didinginkan di
bawah temperatur badan menunjukkan motilitas menurun dan berhenti sama
sekali bila temperatur berada beberapa derajat di atas titik beku. Walaupun
motilitas berhenti sama sekali, metabolisme berlangsung terus secara perlahan-
lahan.
Pengaruh kepadatan sel tidaklah merupakan suatu yang pasti, karena
konsentrasi sel tidak memiliki arti penting dalam proses pernafasan dan gliko-
lisis. Pengaruh konsentrasi sel terhadap konsumsi oksigen tidaklah disebabkan
oleh jumlah oksigen yang terbatas dalam konsentrasi lebih padat, tetapi karena
konsentrasi ion kalium yang lebih tinggi yang merupakan penghambat alamiah
dan terdapat dalam pengatur metabolisme.
1.5. RESPIRASI SPERMATOZOA

Spermatozoa menggunakan berbagai substrat sebagai sumber oksigen.
Respirasi menggunakan asam laktat dan piruvat yang berasal dari break down
fruktosa untuk menghasilkan CO2 dan air. Jalur oksidasi (Oxidatif Path Ways)
berada di mitokondria yang lebih eisien menghasilkan energi dibandingkan
pada proses fruktolisis. Proses katabolisme ini spermatozoa merubah menjadi
ATP dan digunakan untuk bergerak yang sebagian untuk memelihara proses
transport aktif dari membran. Transport aktif ini vital dibutuhkan untuk trans-
port ion di dalam sel. Tanpa subtrat luar, spermatozoa dapat menggunakan
Dr. Tjahjanulin Domai, M.S. 19
penyimpanan intraseluler pada plasmalogen yang dapat digunakan anergi dalam
waktu pendek.
Tabel 1.4. Manipulasi in vitro pada spermatozoa (Garner dan Hafez, 2008)
Teknik Prosedur Penyebab
Pencucian Spermatozoa Percoll@, isolat sperma@, Me- - Ejakulasi jelek (retrogard)
dium modiied Ham’s F 10, - Semen beku
Larutan garam Tyrodes atau - Oligozoosperma, motilitas
media isotonis lain, sebelumya spermatozoz rendah.
dihangatkan dan di ilter sebe- - Menghilangkan antibodi
lum digunakan anti sperma
- Persiapan IB uterus
Spermatozoa Swim up -Seleksi spermatozoa - Motilitas menurun
-Meningkatkatkan kualitas - Menghilangkan potensi
spermatozoa patogen dan leucosit
S p e r m a t o z o a s w i m - Meningkatkan kualitas sper- - Oligospermia
down matozoa
Manipulasi semen untuk - Swim up dan swim down Mengurangi bahan-bahan
IVF - Kapasitasi in vitro di dalam media cryopre-
servasi
Manipulasi Semen dan Mikrofertilisasi Spermatozoa dimasukkan

oosit untuk keberhasilan ke dalam oosit
fertilisasi
Mikromanipulasi sper- Intrasitoplasmic Sperm Inser- Micromanipulator diguna-
matozoa tion (ISCI) kan untuk mengawali 1 sper-
matozoa ke dalam oosit
Semen Sexing Flow Cytometric Sorting Memisahkan spermatozoa
X dan Y
BAB II
SPERMATOGENESIS
Spermatogenesis adalah suatu proses pembentukan spermatozoa (sel
gamet jantan) yang terjadi hanya di Tubuli seminiferi yang terletak di Testes.
Testes 90 % tersusun oleh tubuli seminiferi, sedangkan yang 10% adalah sel
intertitiel dan jaringan ikat.
Gambar 2.1. Skematis testis dan aluran reproduksi jantan (Hafez, 2008a)
Spermatozoa yang dihasilkan oleh tubuli seminiferi dikeluarkan ke sa-

luran reproduksi jantan yang terdapat silia dan muskulernya yang dapat meng-
gerakan spermatozoa dalam proses transportasi, saluran reproduksi jantan
tersebut adalah retetestes, vas defferens epididimis, vas efferens dan terakhir
di uretra, gambar silia dan muskuler pada saluran reproduksi jantan terdapat
pada gambar 2.1.
21
22 Spermatogenesis
Gambar 2.2. Saluran transportasi spermatozoa dan bagian sel di dalam tubuli
seminiferi (Garner dan Hafez, 2008).
Epithel seminiferi adalah bagian terluar dari tubuli seminiferi, yang
terdiri dari 2 tipe sel yaitu sel sertoli dan sel germinal yang tumbuh dan ber-
kembang. Sel germinal mengalami pembelahan secara berseri dan mengalami
perkembangan, dimulai dari arah tepi menuju ke lumen. Spermatogonia adalah
sistem sel yang membelah beberapa kali sebelum terbentuknya spermatosit.
Spermatosit mengalami miosis dengan berkurangnya kandungan DNA menjadi
setelah dari sel tubuh.
Tubuli seminiferi adalah tempat untuk proses spermatogenesis atau
pembelahan sel gamet. Proses spermatogenesis merupakan 2 proses pembe-
lahan 1) pembelahan mitosis dan miosis disebut dengan spermatositogenesis
(Dari 2 n menjadi 2n), yaitu pembelahan dari spermatogonium sampai dengan
spermatosit primer. Miosis I adalah pembelahan dari spermatosit primer ke sper-
matosit sekunder (Dari 2n menjadi n), sedangkan Miosis II adalah pembelahan
dari spermatosit sekunder menjadi spermatid (Dari n menjadi n). 2) Perubahan
spermatid menjadi spermatozoa disebut dengan spermiogenesis
Gambar 2.3. Sel-sel di dalam tubuli seminiferi
Gambar 2.4. Histologi Testes

24 Spermatogenesis
Di dalam tubuli seminiferi terdapat sel-sel mulai spermatogonium hingga sper-

matozoa, selain itu juga terdapat sel sertoli yang secara umum disebut berfungsi
memberi makan spermatozoa akan tetapi sebetulnya berfungsi sebagai blood
testes barier, penghasil hormon in hibin dan aromatisasi hormon testosteron
menjadi estradiol 17β (estrogen), sedangkan di antara tubulus terdapat sel in-
tertitiel yang diantaranya terdapat sel leydig. Sel leydig berfungsi menghasilkan
hormon testosteron yang selain berfungsi untuk proses spermatogenesis juga
berfungsi didalam pematangan spermatozoa dalam epididimis (dalam bentuk
dihidro testosteron) dan meningkatkan libido untuk mengawini betina.
2.1. Spermatositogenesis
Selama perkembangan embrio, sel khusus germinal primordial berpindah
dari bagian kantong kuning telur pada gonad embrio yang tidak terdeferensiasi.
Setelah fetus sel primordial berubah menjadi gonosit pada ternak jantan dan
terus mengalami deferensiasi (garner dan Hafez, 2008)
Sebelum pubertas sudah terbentuk spermatogonia type Ao yang berasal
dari germ layer. Spermatogonia type A1 secara progresif membelah menjadi A2,
A3 dan A4. Kemudian membentuk type intermediate dan selanjutnya membelah
menjadi spermatosit. Proses pembelahan diatas adalah pembelahan mitosis
(2N menjadi 2N). Selanjutnya spermatosit primer membelah miosis menjadi
spermatosit sekunder disebut dengan miosis I, sedangkan miosis II adalah
pembelahan dari spermatosit sekunder menjadi spermatid.
Menurut Garner dan Hafez (2008) sel tipe A4 membelah membentuk
intermediate spermatogonia (tipe In) dan selanjutnya membentuk spermatogo-
nia tipe B. Variasi bentuk spermatogonia ini dapat dilihat engan membuat irisan
histologi epithel seminiferi yang berbasis proliferasi dari lapisan germ sel. Sel
tipe A2 tidak hanya membelah yang akhirnya menjadi spermatozoa kan tetapi
juga membentuk stem sel yaitu spermatogonia tipe A1, walau masih tetap ada
spermatogonia tipe Ao yang merupakan cadangan dan populasi dari stem sel
(Garner dan Hafez, 2008).
Spermatogonia tipe B membelah menjadi lebih kecil dan mejadi 2
spermatosit primer. Spermatosit primer mengalami pembelahan miosis yaitu
profase yang terdapat tahapan pre leptotene, laptotene, Zygotene, pachytene
dan diplotene sebelum menjadi spermatosit sekunder tanpa sintesa lebih lanjut,
sehingga hasilnya adalah spermatosit sekunder yang membelah menjadi sel
haploid yaitu spermatid.
Tabel 2.1. Lama siklus epithel seminiferus dan spermatogenesis pada bebera-
pa mammalia
Lamanya hari
Spesies
Siklus Spermatogenesis
Babi 8,6 34,4
Sapi 13,5 54
Anjing 13,6 54,4
Manusia 13,6 54,4
Kera (Macaca fasicularis) 9,3 37,2
Kera (Macaca malata) 10,5 42
Domba 10,4 49
Tikus (spraque-dawley) 12,9 51,9
Tiskus (Wistar) 13 52
Kuda 12,2 48,8
(Pineda, 2005 b)
Gambar 2.5. Pembelahan spermatogenesis

26 Spermatogenesis
Gambar 2.6. Tahapan Miosis 1
Gambar 2.7. Tahapan Miosis II
2.2. Spermiogenesis.
Round spermatid yang berubah menjadi spermatoza yang melalui peruba-
han secara seri yang bersama-sama disebut dengan spermiogenesis. Perubahan
meliputi kondensasi kromatin inti, pembentukan ekor spermatozoa atau lagear
apparatus dan perkembangan acrosome cap, seperti pada gambar 2,8 dan 2,9
Gambar 2.8. Perubahan sel dari spermatid hingga spermatozoa.

Gambar 2.9. Tahapan Spermiogenesis
Tahapan perubahan bentuk spermatid dibagi menjadi 4 fase yaitu fase

golgi, Cap, Akrosom dan fase maturasi.
1. Fase Golgi
Fase golgi pada tahap spermiogenesis adalah ditandai dengan pem-
bentukan granul (butiran) proakrosomal dengan golgiaparatus, peleburan
granul kedalam single granule acrosome sehingga menghasilkan penutup inti
(nuclear envelope) dan tahap awal pertumbuhan ekor pada bagian ujung lain
dari akrosom. Sentriol bagian proksimal menghilang dari inti sebagai dasar
pembentukan ekor dari kepala.
2. Fase Cap
Fase ‘cap’ ditandai dengan menyebarnya granul ke permukaan nukleus
spermatid, proses dilanjutkan menuju ke bagian 2/3 bagian enterior pada
masing-masing inti spermatid tertutup oleh lapisan tipis doble layer.
Selama fase ‘cap’ ini terjadi perkembangan komponen axonema pada
bagian ekor yang dibentuk dari elemen-elemen pada distal sentriol men-
galami pemanjangan di bagian sitoplasma sel. Selama awal perkembangan
struktur axonema irip dengan silia yang didalamnya terdapat 2 tubulus di
tengah yang dikelilingi bagian tepinya dengan 9 pasang tubulus.
28 Spermatogenesis
3. Fase akrosom
Fase akrosom pada proses spermiogenesis secara umum ditandai den-
gan perubahan inti, akrosom dan pertumbuhan ekor spermatid. Pertum-
buhan difasilitasi oleh pemutaran pada masing-masing spermatid, akroom
menuju ke bagian ujung sedangkan ekornya menuju ke bagian lumen.
Perubahan inti meliputi kondensasi kromosom pada butiran tebal dibagian
kepala menjadi pipih, saat ini terjadi pertumbuhan histon secara progresif
diganti dengan protein yang bentuknya ikut memanjang. Modiikasi bentuk
kepala dan akrosom ini berada di sekitar sel sertoli. Proses ini berbeda-beda
pada masing-masing spesies.
Perubahan morfologi inti seiring dengan menghilangnya sitoplasma
di bagian kepala juga bagian cauda dan bagian proximal tumbuh ekor yang
bagian sitoplasmanya tumbuh silinder sheat. Metochondria yang awalnya
terdistribusi di spermatid mulai terkonsentrasi di bagian axonema yang
membentuk sheat di bagian midle piace pada ekor.
4. Fase Maturasi
Fase maturasi pada spermiogenesis ini adalah suatu tahap akhir dari
proses peanjangan dan menuju lumen tubulus seminiferus. Pemanjangan
spermatid ini mempunyai proses yang bervariasi sehingga bentuk pada ber-
bagai spesies menjadi berbeda. Di dalam intinya terdapat granula kromatin
yang secara progressif mengalami kondensasi merubah protein menjadi
protamin dan membentuk materi homogenous yang seragam pada inti
spermatozoa.
Selama fase maturasi ibrous sheeth dan 9 course iber (serabut kasar) memben-
tuk lingkaran axonema dan terus menerus kolom ini mejadi leher. 9 serabut kasar
yang dikelilingi axonema terbentuk mulai leher sampai ujung ekor. Mitokondria
secara kuat dan terus menerus berkembang di bagian ekor.
Pada sel spermatid yang berbentuk bulat terdapat organel-organel an-
tara lain apparatus golgi, mitokondria, sentriol dan nukleus (inti), di dalam
proses pembentukan spermatozoa terjadi perubahan bantuk dari sel dan
juga terjadi perpindahan lokasi dari masing-masing organel-organel tersebut,
sehingga terbentuk spermatozoa yang lengkap. Aparatus golgi terletak di
dalam akrosom, inti terletak pada kepala spermatozoa, mitokondria terle-
tak di bagian leher sedangkan sentriol berkembang membentuk lagelum
pada ekor, sehingga fungsi dan bagian-bagian tersebut masih sama dengan
penyusunnya.
Lamanya Spermatogenesis
Pada irisan melintang tubuli seminiferi terdapat sel yang bervarasi dan
bergabung membetuk perubahan berupa siklus terdapat 14 macam. Sel yang
bergabung atau tahapan (stage) yang diidentiikasi pada spesies yang sama dan
pada manusia terdapat 12 stage pada suatu siklus (Gambar 2.11). Secara me-
nyeluruh waktu yang dibutuhkan dalam satu siklus dapat diketahui, satu siklus
adalah satu seri perubahan epithel seminiferi antara tahapan perubahan.
Setiap tahapan spermiogenesis ini digunakan untuk mengklasiikasi taha-
pan sikus yang bervariasi. Waktu siklus seminiferi bervariasi di masing-masing
spesies. Pada Babi lamanya 9 hari, domba 10 hari, Kuda 12 hari dan Sapi 14 hari
dan terdapat 4-5 siklus bervariasi pada spesies yang berbeda, sebelum terbentuk
spermatozoa pada satu siklus mengalami metamorfosa selama spermatogenesis.
Setia siklus epithel seminiferi diibaratkan sistem pendidikan SD mulai kelas 1
sampai lulus, dilanjut SMP mulai kelas 1 sampai lulus dan seterusnya hingga lulus
setelah semua kurikulum dilaluinya dan waktu yang dibutuhkan pada masing-
masing spesies berbeda untuk menyelesaikan perkembangannya.
Gambar 2.10. Proses spermatogenesis pada setiap siklus

30 Spermatogenesis
Pada gambar di atas terdapat tabel di tengah mengindikasikan terdapat 12

tahapan (stage) dalam setiap siklus epithel seminiferi. Variasi tipe selnya adalah
A,I,B adalah tahap keberuntuhan spermatogonia, PL pre leptotene spermatocyte,
L, leptotene spermatocyt, Z, zygotene spermatocyte, P, Pachitene spermatocyte dari tage 1,5
dan X. II, Secondary spermatocyte. Step 1-14 suatu tahapan spermiogenesis yang
ditunjukkan pada fase golgi (step 1-3), fase cap (step 4-7), fase akrosom (step
8- 12) dan fase maturasi (step 13-14) diadaptasi dari Bearnrson WE, Desjardins
C,Am.J. Anat :1974 :140 ; 167- 180 (Garner dan Hafez, 2008)
2.3. Peran Hormon pada proses spermatogenesis

Proses pembentukan spermatozoa dan fungsi hormon steroid diatur
oleh gonadotropin yang disekresi oleh sel adenohipoisa yang dikeluarkan
secara pulsatif. Fungsi tersebut telah dibuktikan dengan metode hipoisektomi
dan replecement terapi.
Pada saat masih bayi (juvenil), ternak janan tidak respon terhadap gonado-
tropin. Setelah dewasa terdapat respon, peristiwa ini belum jelas diketahui apakah
yang menyebabkan sel-sel germinal sensitif terhadap stimulasi gonadotropin.
Spermatogenesis yang normal sinergis dengan aktiitas Luteinizing
Hormaon (LH, pada jantan juga disebut dengan Instertitiel Cell Stimualting
Hormoe, ICSH), Folikel stimulating Hormon (FSH), prolaktin, Androgen dan
hormon yang lain. Hal ini seperi penjelasan di gambar 2.13.
Fungsi masing-masing hormon FSH dan LH terhadap proses spermato-
genesis masih dipertanyakan, karena tambak fungsi yang bersamaan keduanya.
Hasil percobaan menunjukkan bahwa LH berfungsi untuk menstimulasi aktivitas
steroidogenesis dan fungsi pembentukan sel gamet. LH berfungsi langsung
pada sel leydig didalam menghasilkan hormon testosteron. FSH berfungsi di
dalam spermiogenesis yang aktiitasnya hasil sekresi dari sel sertoli. Lebih lanjut
IGF-1 juga diproduksi oleh sel sertoli yang berperanan penting dan tidak dapat
keluar darii blood testis barier. Sehingga IGF-1 diproduksi secara lokal yang
menstimulasi terjadinya pembelahan miosis pada ephitel seminiferi.
Pada sel sertoli dan sel germinal terdapat reseptor IGF-1 dan untuk
insulin Like Growth Factor-2 (IGF-2) walau ekspresinya masih belum ditemu-
kan didalam sel sertoli. Unilateral kastrasi pada jantan di beberapa spesies
meningkatkan level LH dan FSH dalam darah dan menstimulasi kompensasi
hipertropi pada testis.
Aktiitas gonadotropin hormon pada testis, pembentukan spermatozoa
dan steroidogenic di bawah kontrol interaktif paracrine di dalam testes meru-
pakan faktor pertumbuhan.
Gambar 2.11. Hubungan kontrol fungsi hormon dalam testis
Luteinizing hormon (LH) menstimulasi (+) sel leydig untuk sekresi

testosteron, sedangkan FSH menstimulasi (+) pembelahan sel germinal. FSH
juga menstimulasi sel sertoli untuk meningkatkan metabolisme Androgen
pada organ jantan dan feed back negatif (-) pada hipothalamus, menurunkan
keluarnya GnRH (FSH/LH-RH). Konsentrasi testosteron secara lokal tinggi
menstimulasi pertumbuhan germinal epithelium. FSH menstimulasi sintesa
Androgen Binding Protein (ABP). Inhibin disekresi sel sertoli untuk menekan level
FSH.
32 Spermatogenesis
Tabel 2.2. Sekresi dari fungsi sel sertoli

Produk Fungsi
ABP, Androgen Binding Protein Transport Androgen ke organ reproduksi
jantan
Estrogen, Estradiol 17β Kontrol sekresi FSH, menghambat sekreasi
androgen oleh sel leydig
Koponen nutrisi esensial, termasuk Kebutuhan untuk metabolisme dan hidupnya
enzim dan asam amino tidak dapat sel germinal dan memfasilitasi terjadinya mio-
melintasi Blood testis barier sis pada epithel seminiferi
Gonadocrinin Mengatur sekresi LH, penurunan reseptor LH
dan mengikat LH pada sel leydig
Inhibin Kontrol sekreasi FSH
IGF-1, insulin – like growth factor 1 Pertumbuhan dan deferensiasi sel germinal,
kemungkinan interaksi sel leydig untuk pro-
duksi steroid.
IGF2, insulin- like growth factor 2 Androgen diterima oleh sel sertoli
MIH, Mullerian Inhibiting Hormon, Menghalangi pertumbuhan organ muller pada
diproduksi oleh sel sertoli fetus fetus jantan
Diambil dari MK Skinner, Endocrine Rev 12:45, 1991; and B.P Bullaney and
M.K. Skinner Bailliere’s clin. Endocrinol metab 5 :771.1009 (Pineda, 2005a).
2.4. Fungsi Steroidogenic

Sel leydig pada instertitiel menghasilkan androgen, termasuk di dalamnya
adalah testosteron adalah respon dari stimulasi LH (ACSH) yang bersinergi
dengan FSH dan kemungkinan prolaktin. Prolaksi berfungsi mengatur sekresi
testosteron yaitu dengan meningkatkan jumlah dan meningkatkan ainitas
reseptor LH di sel leydig.
Interaksi antara LH dengan sel leydig karena aktiitas adenil siklase,
termasuk aktiitas protein kinase dan sintesa RNA menghasilkan peningkat-
an produksi pregnelolon dari kolesterol oleh mitokondria didalam sel leydig
(Gambar 2.14).
Enzim didalam sel menyebabkan mitochondria mensintesa pregnenolon
sampai akhirnya dikeluarkan testesteron oleh sel leydig. Hanya sel leydig yang
dapat mensintesa cholesterol menjadi testosteron.
Testosteron yang dihasilkan sel leydig oleh parachin sel sertoli dirubah
menjadi estradiol 17β kaena pengaruh FSH, hal ini terjadi pada banyak spesies
(Gambar 2.15)
Perubahan testosteron menjadi estrogen karena adanya reseptor spesiik
dapa sel sertoli. Pada proses spermatogenesis yang normal terdapat interaksi
yang komplex antara sel germinal epithelium, sel leydig dan sekresi testosteron,
sel sertoli dan sekresi estrogen dan gonadotropin dari pituitary.
Faktor pertumbuhan IGF-1 & 2 dan regulasi lokal lain, merupakan kerja
autokrin dan juga kontrol sel leydig dan sekresi sel sertoli, adrenal cortex juga
mensekresi androgen dalam jumlah yang sedikit.
Gambar 2.12. Fungsi isiologi gonadocrinin pada sel sertoli, leydig dan sel
granulosa (didaptasi dari sumber yang berbeda-beda termasuk R.M. Sharp,
J.Reprod. Fertil. 64 : 517, 1982) (Pineda, 2005a)
Gambar 2.13. Interaksi paracrine antara sel leydig dengan sel sertoli (Pineda, 2005a)
34 Spermatogenesis
Gambar 2.14. Sistesis dan produksi Testosteron oleh Sel Leydig (diambil dari
A.H. Payne & Young Hood. Biol. Reprod, 52 :217, 1995) (Pineda, 2005a)
2.5. Faktor-faktor yang mempengaruhi spermatogenesis

1. Bahan beracun
Pada umumnya, sel germinal epithelium sensitif terhadap kondisi
panas terutama pada perkembangan spermatid, sedangkan pengaruh
radiasi panas selain pada perkembangan spermatid juga pada pem-
belahan spermatogonia. Apabila testis rusak masih ada spermatozoa
yang berada pada epididimis, waktu spermatozoa berada di epididimis
selama 2-5 hari. Sebagian besar spesies waktu maturasi di epididimus
kurang dari 5 hari. Jika spermatozoa abnormal bukannya dipengaruhi
saat di epididimis tetapi saat spermatozoa yang merupakan akibat dari
stress beberapa minggu yang lalu.
Tabel 2.3. Waktu migrasi di dalam spididimis pada berbagai
spesies
Spesies Waktu migrasi (Hari)
Babi 9-14
Sapi 8-11
Domba 13
Kuda 3-7
2. Pengaruh Nutrisi
Deisiensi makanan yang spesiik berpengaruh pada eisiensi
reproduksi yang meliputi siklus estrus, kebuntingan, produksi susu
dan sifat keibuan adalah dampak panjang dari kekurangan energi pada
betina, sedangkan pada jantan adalah kemampuan didalam mengawini,
juga penurunan berat badannya berdampak besar apabila sebelum
pubertas dibandingkan setelah pubertas, yaitu hipoplasia pada testis,
kelenjar asesoris dan keterlambatan pubertas.
Kekurangan energi dalam makanan berpengaruh terhadap sekresi
gonadotropin, pendewasaan jadi tertunda (berat badan turun 25 –
35%) penurunan libido, epithel seminiferus tahan terhadap kerusakan,
volume dan kualitas semen yang jelek.
Kekurangan Vitamin A berpengaruh terhadap Germinal epithel
dan sel leydig yang menyebabkan rendahnya kualitas spermatozoa,
atropi testis, pengecilan kelenjar asesoris dan pubertas terhambat.
Kekurangan vitamin E menyebabkan kerusakan testis pada
tikus, tetapi tidak pernah ada kasus infertility pada ternak yang di-
sebabkan oleh kekurangan vitamin E. Kekurangan vitamin E lebih
banyak mempengaruhi metabolisme terutama bila terjadi sebelum
pubertas. Kekurangan mineral atau mengkonsumsi yang berlebihan
itoestrogen,goitrogen dan nitrat secara bersam-sama berpengaruh
terhadap penampilan reproduksi jantan dan bila terjadi dalam waktu
yang lama akan menyebabkan testis degeneratif (mengecil).
Eksogenous sex steroid dapat berpengaruh terhadap fungsi testis
atau sekresi gonadotropin oleh pituitry, akan tetapi bila diberikan dalam
jumlah yang tinggi dan jangka waktu yang lama, justru akan menekan
36 Spermatogenesis
gonadotropin dan testosterin yang diinjesikan akan menekan kualitas

semen hingga 11 minggu.
2.6. Peran skrotum dalam termoregulasi

Proses spermatogenesis bisa berjalan dengan baik apabila suhu dalam
testis 5oC di bawah suhu tubuh, oleh sebab itu pada bagian skrotum terdapat
suatu proses thermoregulasi yang diatur oleh sistem kerja:
1. Otot kremaster, pada saat panas akan menjauhkan dari tubuh, sedangkan
bila dingin mendekat ke tubuh.
2. Tunika dartos, Otot yang mengatur apabila panas akan merenggang,sedangkan
apabila dingin akan mengkerut.
3. Pleksus Pumpiniformis, yaitu vena dan arteri yang saling berbelit untuk
proses pengaturan suhu.
Proses termoregulasi ini tidak terjadi pada ternak sebelum pubertas, oleh sebab
itu untuk mengamati seekor ternak telah pubertas atau telah mengalami sper-
matogenesis dapat diamati pada fungsi-fungsi diatas.
BAB III
KAPASITASI SPERMATOZOA
Spermatozoa yang diejakulasikan ke dalam saluran reproduksi betina
bertujuan untuk dapat memfertilisasi oosit. Di dalam alat reproduksi betina
membutuhkan waktu agar dapat melakukan fertilisasi. Cairan uterus, bahan-
bahan dari oviduk dan cairan folikel saat ovulasi berperanan dalam proses
kapasitasi (Pineda, 2005).
Spermatozoa mammalia yang telah mengalami pemasakan di dalam epi-
didimis dan terejakulasi belum dapat membuahi sel telur. Spermatozoa tersebut
haruslah menetap di dalam saluran kelamin betina selama beberapa saat sebelum
membuahi sel telur. Spermatozoa mengalami beberapa perubahan isiologis
(fungsional) di dalam saluran kelamin betina, Perubahan-perubahan tersebut
menyebabkan spermatozoa mampu melakukan pembuahan, peristiwa ini yang
disebut dengan KAPASITASI.
Sejak penemuan kapasitasi oleh Chang, hingga saat ini para peneliti masih
menyimpan keraguan akan perlunya kapasitasi pada spermatozoa. Hal ini karena
spermatozoa yang baru terejakulasi, belum diketahui kemampuannya dalam
membuahi sel telur. Bila kapasitasi dideinisikan sebagai fenomena yang hanya
terjadi di dalam saluran betina, maka keraguan mereka dapat dibenarkan. Untuk
pembuktiannya lebih mudah bila digunakan media buatan yang menyerupai
disaluran kelamin betina untuk proses inseminasi sel telur.
Bila kapasitasi tidak dibutuhkan, maka spermatozoa yang baru terejakulasi
dapat membuahi sel telur sesegera mungkin. Dalam kenyataannya, selalu terjadi
selang waktu antara Inseminasi dan awal dari pembuahan. Selang waktu ini bisa
terjadi selama kurang dari 1 jam atau lebih dari beberapa jam, tergantung pada
spesiesnya, selang waktu ini dapat digunakan untuk menentukan waktunya
kapasitasi.
Waktu kapasitasi dapat ditentukan dengan bermacam metode. Salah
satunya adalah dengan mengawinkan atau melakukan Inseminasi Buatan pada
37
38 Kapasitasi Spermatozoa
betina yang baru berovulasi Misalnya terdapat selang waktu selama 2 jam di-
antara Inseminasi dan awal pembuahan, maka 2 jam adalah waktu minimum
untuk berkapasitasi. Waktu 2 jam tersebut merupakan waktu minimum dari
spermatozoa untuk berpindah menuju tempat pembuahan. Sedangkan proses
kapasitasi spermatozoa mungkin berlangsung lebih awal. Suatu pendekatan
alternatif adalah dengan menginkubasi terlebih dahulu spermatozoa di dalam
saluran kelamin betina atau media buatan dengan selang waktu yang berbeda,
kemudian oosit yang baru ovulasi dicampurkan secara in vitro, kemudian diten-
tukan waktu fertilisasinya.
Jika spermatozoa tidak kapasitasi sama sekali atau hanya sebagian saja,
maka akan terjadi kegagalan pembuahan atau terjadi pembuahan beberapa
jam kemudian. Sebaliknya bila spermatozoa berkapasitasi secara penuh, maka
mereka akan membuahi sel telur tanpa selang waktu (setidaknya dalam waktu
30-60 menit setelah inseminasi, atau waktu di diperlukan spermatozoa untuk
menembus sel telur).
Penting untuk dicatat bahwa waktu kapasitasi tiap-tiap spesies tidak dapat
ditentukan dengan pasti. Hal ini secara pasti dipengaruhi oleh berbagai hormon
reproduksi, macam dan komposisi medium di tempat pematangan spermato-
zoa dan terdapatnya seminal plasma pada spermatozoa mempengaruhi waktu
kapasitasi spermatozoa.
Kapasitasi adalah proses pelepasan bahan-bahan pelapis membran sper-
matozoa secara bertahap, terutama pada bagian akrosom. Hal ini menyebabkan
reseptor spermatozoa dapat berinteraksi dengan reseptor sel telur, atau Zona
pellusida.
Tabel 3.1. Kondisi kapasitasi pada spermatozoa yang diejakulasikan
Spesies Keadaan kapasitas Faktor dekapasitasi dalam semen
Babi Ya Ya
Sapi ya ya
Kucing ya ya
Anjing mungkin ya
Manusia mungkin ya
Domba mungkin ya
Kuda mungkin ya
(Pineda, 2005b)
Istilah kapasitasi pada dasarnya adalah perubahan isiologis spermatozoa
dan dilanjutkan dengan reaksi akrosom, sehingga mampu membuahi sel telur.
Ada yang menyebutkan bahwa reaksi akrosom adalah bagian dari kapasitasi,
akan tetapi sebetulnya kapasitasi dan reaksi akrosom merupakan fenomena yang
terpisah. Kapasitasi adalah serentetan perubahan yang membuat spermatozoa
mampu mengalami reaksi akrosom. Reaksi akrosom terjadi pada sebagian besar
binatang, sedangkan kapasitasi merupakan fenomena yang unik pada mammalia
dan sebagian pada non mammalia.
Gambaran spermatozoa yang mengalami kapasitasi dengan pewarnaan
Chlortetracycline dan diamati menggunakan mikroskop epi luoresen dengan
Exitation Blue Violet adalah seperti gambar 3.1.
Gambar 3.1. Gambaran spermatozoa yang belum kapasitasi, Kapasitasi dan

setelah reaksi akrosom pada sapi (Susilawati, 2000)
A. Spermatozoa yang utuh (Belum kapasitasi)
B. Spermatozoa kapasitasi
C. Spermatozoa telah selesai Reaksi akrosom
Gambaran tersebut juga terjadi pada Kambing, Domba, Kerbau dan juga
manusia. Pendaran warna kuning tersebut adalah karena chlortetracycline yang
bisa berpendar mengikat ion kalsium yang ada pada membran spermatozoa,
sehingga dengan menggunakan mikroskop epi luorescent terjadi pendaran
warna kuning pada bagian membran yang terdapat ion kalsium, semakin tinggi
konsentrasi ion kalsium maka pendarannya semakin jelas.

Spermatozoa yang belum kapasitasi menunjukkan pendaran kuning
(luoressen) pada seluruh kepala dan ekor spermatozoa. Hal ini karena ion
kalsium berada merata di kepala spermatozoa. Spermatozoa yang kapasitasi
ditunjukkan dengan pendaran pada bagian atas kepala atau bagian akrosomnya,
selain itu pendaran kuning juga terkonsentrasi pada bagian leher yang banyak
mitokondrianya. Peningkatan ion kalsium pada bagian akrosom menyebabkan
aktifnya pro enzim yang ada di akrosom menjadi enzim yang aktif sehingga
selanjutnya akan terjadi reaksi akrosom, sedangkan peningkatan konsentrasi ion
kalsium pada bagian leher yang banyak mengandung mitokondria menyebabkan
gerak progresif spermatozoa menjadi gerak hiperaktifasi. Perbedaan gerak
progresif dan hiperaktifasi adalah amplitudi geraknya lebih besar pada saat
hiperaktifasi. Kepastian gerak hiperaktifasi pada saat kapasitasi atau setelah
kapasitasi masih menjadi pertanyaan, akan tetapi yang pasti apabila spermatozoa
sudah hiperaktifasi dan tidak terjadi fertilisasi maka spermatozoa tersebut akan
segera mengalami kematian.
3.1. KAPASITASI SPERMATOZOA SECARA IN VIVO

Kapasitasi secara normal terjadi pada saluran reproduksi betina yang
sedang estrus dan kapasitasi mulai terjadi saat spermatozoa melalui servik atau
lendir servik, sedangkan pada kelinci adalah paling eisien, karena spermatozoa
mengalami pematangan di uterus dan oviduk.
Pada hewan mengerat dan babi, tempat utama kapasitasi adalah di oviduk,
kemudian berjalan ke arah ampulla yang merupakan tempat terjadinya pembua-
han. dan tidak diketahui kapan dan spermatozoa menyelesaikan kapasitasi.
Belum diketahui faktor-faktor yang secara langsung mengontrol kapasitasi
spermatozoa di dalam saluran kelamin betina. Ada beberapa substansi yang
diduga sebagai faktor yang menyebabkan kapasitasi yaitu beta-amylase dan beta
Glucoronidase, Protein dan Neuraminidase arysulfatase, fucodinase, acetylhexosaminidase
carbonic, anhydrose dan steroid, sulfatase, glikosaminoglican, catechlamine dan taurine
dan hypotaurine. Studi lebih lanjut mutlak diperlukan untuk menentukan apakah
zat-zat tersebut diatas benar-benar terlibat dalam proses kapasitasi spermatozoa
secara in vitro, karena faktor-faktor tersebut tidak spesiik spesies.
Pada pembuahan secara in vitro, kapasitasi terjadi tanpa adanya kontribusi
sistim saluran kelamin betina Akan tetapi tidak berarti bahwa kondisi-kondisi
yang menyebabkan kapasitasi in vitro identik dengan kapasitasi in vivo. Apa yang
terjadi pada in vitro dan in vivo bisa jadi berbeda. Terdapat beberapa pernyataan
bahwa spermatozoa yang berkapasitasi secara in vivo membuahi sel telur jauh
lebih eisien dari in vitro. Alam semesta telah bekerja selama jutaan tahun, se-
mentara para ilmuwan baru mulai mengikuti jejaknya, banyak hal yang masih
harus di pelajari dari alam ini.
3.2. KAPASITASI SPERMATOZOA SECARA IN VITRO

Chang pertama kali melaporkan bahwa spermatozoa mammalia dapat
berkapasitasi secara in vitro pada tahun 1963. Sel telur dikumpulkan dari tupai
bulu emas yang mandul dengan mengambil oviduk betina yang baru berovulasi.
Saat sel telur diinseminasikan dengan spermatozoa yang berasal dari epididimis,
55% sel telur dipenetrasi oleh spermatozoa. Keberhasilan pembuahan secara in
vitro tersebut mengindikasikan keberhasilan kapasitasi secara in vitro. Pada tahap
awal penelitian digunakan cairan oviduk, cairan folikular atau serum darah yang
mempunyai komposisi yang rumit. Pertama kali yang berhasil melakukan pem-
buahan secara in vitro dengan memakai bahan kimia tertentu adalah Toyoda dkk
(1971), sehingga kemudian proses pembuahan secara in vitro termasuk kapasitasi
in vitro menjadi semakin mudah dan mekanisme kapasitasi lebih mudah dari
pada sebelumnya. Media yang lazim digunakan untuk kapasitasi secara in vitro
adalah modiikasi larutan Tyrode dan Kreb-Ringer yang ditambahkan sumber
energi yang cukup ( misalnya Glukosa, laktat dan Piruvat ) dan albumin. Media
kultur jaringan yang tersedia di pasaran (Misalnya Ham F-10) yang disuplemen
dengan serum darah juga sering digunakan terutama pada manusia. Sampai
saat ini belum ada media yang dapat digunakan untuk semua spesies, karena
spermatozoa dan oosit tiap spesies mempunyai lingkungan yang tersendiri
untuk berfungsi secara eisien.
Tujuan utama mempelajari secara in vitro adalah melihat hasil pembua-
han secara in vitro bukannya menganalisa mekanisme kapasitasi spermatozoa.
Meskipun semua informasi itu bermanfaat, akan tetapi harus hati-hati dalam
menyimpulkan masalah kapasitasi. Misalnya beberapa peneliti menyimpulkan
adanya beberapa jenis reagen yang memblokir terjadinya kapasitasi spermatozoa
secara total, sehingga tidak bisa terjadi pembuahan secara in vitro. Kesimpulan
tersebut bisa benar atau salah, sebab kapasitasi bukanlah proses satu-satunya
yang menyebabkan keberhasilan pembuahan. Untuk pembuahan sel telur, sper-
matozoa harus mampu bergerak, sanggup menjalani reaksi akrosom, berpene-
trasi ke dalam sel telur dan penggabungan sel kelamin jantan dan betina dengan
baik. Bila pembuahan secara in vitro tidak berhasil, belum tentu disebabkan
spermatozoa gagal melakukan kapasitasi, karena masih terdapat faktor-faktor
lain yang mempengaruhi fertilisasi.
Sangat lazim menganggap reaksi akrosom sebagai lengkapnya proses
kapasitasi, sebab spermatozoa tidak akan mengalami reaksi akrosom kecuali
telah selesai kapasitasi secara penuh. Reaksi akrosom dapat digunakan sebagai
indikator yang layak dari keberhasilan kapasitasi. Akan tetapi kita mesti hati-
hati, sebab kondisi-kondisi yang tidak lazim atau reagen-reagen tertentu dapat
menyebabkan reaksi akrosom tanpa melewati proses kapasitasi. Tidak terjadinya
reaksi akrosom tidak berarti spermatozoa gagal dalam menjalani kapasitasi,
karena spermatozoa tersebut mungkin berkapasitasi namun tidak mampu
menjalani reaksi akrosom. Mengingat kenyataan ini dibuat rangkuman singkat
tentang faktor-faktor yang mempengaruhi kapasitasi secara in vitro.
3.3. FAKTOR-FAKTOR YANG MEMPENGARUHI KAPASITASI

(Dijelaskan secara in vitro)
Suhu mempunyai pengaruh yang besar pada proses kapasitasi, sehingga
hampir semua laboratorium menetapkan suhu inkubasi berkisar antara 37-38oC
untuk kapasitasi secara in vitro. Akan tetapi, pada babi dan domba lebih baik
pada temperatur yag lebih tinggi. Selain suhu juga terdapat faktor-faktor yang
mempengaruhi proses kapasitasi yaitu:
1. Variasi Individu
Spermatozoa dari beberapa pejantan berkapasitasi lebih cepat pada
spesies yang sama. Karena pada spesies yang sama terdapat variasi didalam
individu.
2. Asal spermatozoa
Spermatozoa dari epididimis dan spermatozoa hasil ejakulasi mempunyai
sifat yang tidak sama secara in vitro. Pada umumnya spermatozoa epididimis
lebih mudah membuahi sel telur secara in vitro dari pada spermatozoa hasil
ejakulasi. 71-75% sel telur babi dapat dibuahi secara in vitro oleh spermatozoa
yang berasal dari cauda epididimis, dan sebaliknya tak satu pun yang berhasil
dibuahi oleh spermatozoa hasil ejakulasi. Spermatozoa dari epididimis menjadi
infertil saat menempel atau masuk didalam seminal plasma.
Spermatozoa hasil ejakulasi lebih lama kapasitasinya dari pada sper-
matozoa dari epididimis secara in vitro. Hal ini karena plasma spermatozoa
epididimis cukup stabil setelah tingkatan absorbsi dan atau integrasi glikopro-
tein dari epididimis, cukup banyak bukti yang menyatakan bahwa komponen-
komponen seminal plasma (misalnya: glikoprotein, polipeptida dan protein
semacam ibronektin) menempel dengan kuat pada permukaan spermatozoa
terejakulasi. Ikatan tersebut begitu kuat, sehingga tidak bisa dilepas dengan
mudah dengan pencucian yang berulang-ulang dengan larutan isiologis biasa.
Pelepasan atau perubahan material lapisan permukaan spermatozoa merupakan
bagian terpenting dari proses kapasitasi. Tampaknya saluran kelamin betina
yang berahi dapat menyebabkan kapasitasi spermatozoa. Pada bagian tersebut
terdapat mekanisme yang sangat eisien untuk merubah material lapisan pelin-
dung spermatozoa yang berasal dari epididimis (lapisan permukaan primer)
dan dari seminal plasma (lapisan sekunder). Lapisan primer pada spermatozoa
yang berasal dari epididimis mudah diubah dengan menggunakan media yang
dinamakan “media kapasitasi sperma”., akan tetapi tidak efektif untuk melepas
lapisan sekunder, sehingga supaya terjadi kapasitasi secara in vitro, dilakukan
sentrifugasi terlebih dahulu.
3. Terdapatnya Kumulus Oophorus.
Sel-sel telur yang matang dikelilingi oleh kumulus oophorus. Kumulus
tetap berfungsi tidak hanya selama pembuahan, tapi juga beberapa saat sebelum
pembuahan. Adanya kumulus oophorus di sekeliling sel telur dapat membantu
proses pembuahan, terutama bila media yang ada kekurangan albumin, selain
itu beberapa komponen dari kumulus memicu terjadinya reaksi akrosom.
Secara in vitro sel kumulus mengkapasitasi spermatozoa, akan tetapi se-
cara in vivo tidak terjadi, hal ini ditunjukkan bahwa spermatozoa hamster yang
memasuki kumulus oophorus sudah mengalami kapasitasi, sehingga dapat
dikatakan bahwa yang menyebabkan kapasitasi adalah saluran kelamin betina
(Yanagimachi, 1988).
Gambar 3.2. Photomicrographs yang menunjukkan kumulus oophorus yang

menyelimuti sel telur (A), dan (B) setelah terjadi fertilisasi pada Chinese
hamster. (Gambar diambil dari Buku yanagimachi, 1988).
3.4 PERISTIWA-PERISTIWA YANG TERJADI PADA SPERMATOZOA

SELAMA KAPASITASI
Selama kapasitasi terjadi perubahan-perubahan pada adenylat cyclase, me-
tabolisme, ion-ion intra selluler, akrosom, Inti dan selaput plasma.
1. Perubahan-perubahan dalam adenylate cyclase
Tingkat fertilitas spermatozoa secara temporer berkurang atau hilang
pergerakannya saat berada pada bagian tertentu di saluran reproduksi betina.
Spermatozoa akan bergerak sangat cepat pada saat permulaan dan akhir kapasi-
tasi, hal ini menunjukan bahwa adenylate cyclase dan sistim protein kinase (pada fungsi
cAMP nya) berperanan penting dalam menjaga motilitas. Terdapat bukti tentang peningkatan
aktiitas adelylate cyclase selama kapasitasi, meningkatnya aktiitas adenilat seklase mungkin
karena meningkatnya jumlah cAMP. Selanjutnya protein kinase terstimulasi merubah struktur
tersier dan kuartener selaput spermatozoa melalui phosporilasi protein-protein membran yang
menghasilkan perubahan pada sifat isik selaput (Misalnya permeabilitas ion).
Gambar 3.3. Mekanisme molekuler pada proses kapasitasi
2. Perubahan pada metabolisme

Spermatozoa mengalami peningkatan metabolisme (Misal:aktiitas glikoli-
tik dan konsumsi oksigen) setelah inkubasi di dalam saluran kelamin betina
atau dalam media yang mengandung cairan yang berasal dari uterus, oviduk
atau cairan follikular yang berperanan dalam kapasitasi. Peningkatan respirasi
spermatozoa dalam media kapasitasi disebabkan adanya substrat-substrat yang
dapat teroksidasi dan merupakan suatu iring-iringan dari proses kapasitasi dan
bukan merupakan faktor pembawa, meskipun tampak pasti bahwa spermatozoa
tikus tidak merubah laju respirasinya sebelum dan sesudah kapasitasi. Kapasitasi
mungkin mengakibatkan perubahan pada selaput plasma (Phosporilasi) hingga
energi menjadi lebih dapat digunakan untuk perangkat motor spermatozoa.

Peningkatan laju metabolisme selama dan sesudah kapasitasi masih belum dapat
dijelaskan secara detil.
3. Perubahan dalam ion-ion intraselluler

Spermatozoa yang hidup, secara eisien menjaga gradien ion di sepanjang
selaput plasmanya. Konsentrasi K+ di dalam spermatozoa lebih tinggi dari pada
di luar, sementara Na+ sebaliknya. Gradien ionik ini diyakini diatur oleh pompa
penukaran Na+/ K+ yang bermedia ATP ase. Konsentrasi Na+dan K+ intra sel-
luler spermatozoa mammalia pada cauda epididimis adalah sekitar 20 dan 14
mM. Perubahan konsentrasi selama kapasitasi masih belum diketahui.
Arus masuk secara besar-besaran dari Ca2+ ekstraselluler melalui selaput
kepala spermatozoa menyebabkan terjadinya reaksi akrosom, akan tetapi ma-
sih sedikit diketahui tentang kinetika Ca2+ intraselluler selama kapasitasi. Pada
umumnya diterima anggapan bakwa konsentrasi Ca2+ intraselluler dalam sper-
matozoa adalah cukup rendah, baik pada kepala maupun ekornya, disebabkan
adanya mekanisme pemompa Ca2+ bermedia ATP ase dan pembuluh balik Na+/
K+ pada selaput plasma. Hilangnya ikatan Ca2+ pada permukaan spermatozoa,
bukan karena penetrasi ke dalam spermatozoa, dengan menggunakan queen2,
indikator luoresen yang selektif terhadap kalsium diketahui bahwa konsentrasi
ion Ca2+ intraselluler di dalam spermatozoa kelinci tidak berubah saat kapasitasi
secara in vitro. Teknik tersebut digunakan untuk menghitung kandungan ion
Ca2+ spermatozoa secara kelompok, bukan individu. Para peneliti menyebut-
kan bahwa konsentrasi ion Ca2+ mungkin berubah pada daerah tertentu atau
terlokalisir pada daerah tertentu. Hal ini merupakan hipotesa yang menarik,
karena peningkatan konsentrasi Ca2+ intraselluler selama kapasitasi menstimu-
lasi adenilate cyclase spermatozoa yang mendukung pentingnya cAMP yang pada
awal nya dibutuhkan untuk pembuahan. Seperti pada gambar 23, sedangkan
mekanisme molekuler yang lain terdapat pada gambar 24.
Gambar 3.4. Mekanisme molekuler pada peristiwa kapasitasi Spermatozoa
Gambar 3.5. Mekanisme molekuler yang terjadi pada membran Spermatozoa

selama kapasitasi
4. Perubahan pada akrosom

Struktur akrosom pada banyak spesies tidak berubah secara nyata
selama kapasitasi. Perkecualian dari tupai bulu emas, matriks akrosomnya
berubah segera setelah spermatozoa mengalami kapasitasi. Alasannya belum
jelas, namun mungkin disebabkan keluarnya beberapa molekul-molekul kecil
melalui plasma dan selaput akrosom terluar dan tidak diketahui mulainya dari
proses reaksi akrosom. Proses reaksi akrosom adalah perubahan pro akrosin
yang tidak aktif secara enzim di dalam akrosom menjadi aktif secara enzim di dalam
akrosom. Hal ini dilakukan oleh glycosaminoglicans dalam uteri, tapi bagaimana cara
molekul besar glycosaminoglicans berpenetrasi ke dalam akrosom melalui selaput akrosom
dan plasma spermatozoa belum diketahui. Dan apakah enzim-enzim akrosom tetap dalam
bentuk inaktif atau berubah aktif selama kapasitasi berlangsung (sebelum reaksi akrosom)
masih menjadi pertanyaan.
5. Perubahan pada Inti

Inti spermatozoa pada kebanyakan mammalia merupakan struktur yang
sangat stabil disebabkan cross-link oleh ikatan 5-5, tapi sedikit ekstensif diban-
dingkan dengan spesies lain. Pada plasma semen terdapat Zn2+ yang berasal dari
kelenjar prostat mengikat radikal bebas 5H+ dari protein inti spermatozoa saat
ejakulasi menyebabkan stabilitas temporer pada protein inti. Selama kapasitasi
inti kehilangan ion Zn2+ dan stabilitasnya meningkat yang mungkin disebabkan
oleh oksidasi pada radikal 5 H+ yang lepas pada ikatan disulida (Lelannou et
al, 1985)
6. Perubahan pada selaput Plasma

Selaput plasma berhubungan langsung pada lingkungan kapasitasi, se-
hingga terjadi perubahan mencolok pada selaput tersebut selama kapasitasi.
Pelepasan atau perubahan material-material pelapis permukaan spermatozoa
merupakan bagian terpenting dari kapasitasi, bukti-bukti yang mendukung
pendapat ini telah banyak.
Akrosom spermatozoa yang berasal dari kauda epididimis tikus mengan-
dung antigen yang tak dapat dilepas dengan mudah dari permukaan spermato-
zoa dengan pencucian berulang-ulang, akan tetapi tidak ada saat spermatozoa
memasuki ruang vittelin sel telur dan antigen ini harus dilepas atau dirubah
selama kapasitasi.
Menurut model “mosaik cairan” yang secara luas diterima pada selaput-
selaput biologis, protein-protein (atau glikoprotein) secara non kovalen berhu-
bungan dengan lapisan ganda lipida yang membentuk matrik selaput. Protein-
protein intrinsik yang menempel dengan kuat pada lapisan ini dapat dilepas hanya
dengan perlakuan kasar (misalnya dengan detergen), sementara protein-protein
pembungkus yang berhubungan dengan selaput terutama melalui interaksi
elektrostatika dapat dilepaskan dengan sedikit penambahan “Chelating agent”
atau dengan penambahan pH atau kekuatan ionic. Glikoprotein-glikoprotein
yang dilepas dari dan atau ditambahkan pada permukaan spermatozoa selama
kapasitasi masih belum pasti diketahui. Salah satunya adalah mungkin ibronectin
atau semacam ibronectin. Diduga ibronectin akan membekukan pergerakan late-
ralnya pada lapisan ganda lipida. Pelepasannya dari selaput ini menyebabkan
protein intrinsik bergerak dengan bebas dalam lapisan ganda lipida.
Pengujian kerusakan selaput plasma sebelum dan setelah kapasitasi adalah
melalui Partikel-Partikel Intra Membran (IMPs) yang merupakan protein-protein
intrinsik pada lapisan ganda lipida berubah penyebarannya pada daerah kepala
maupun ekornya. IMPs yang menyebar hampir merata pada plasma membran
diatas akrosom spermatozoa marmut yang tidak kapasitasi, sedangkan pada
spermatozoa yang kapasitasi terdapat potongan-potongan kecil yang bebas
IMPs, demikian juga pada spermatozoa manusia. IMPs terkonsentrasi di dekat
helix mitokondria hanya ada pada spermatozoa yang tidak kapasitasi, selama
kapasitasi terjadi perubahan isika dan kimia pada lapisan ganda lipida.
Komposisi phospholipid membran plasma mengalami perubahan selama
kapasitasi, akan tetapi perhatian banyak tercurah pada kandungan kolesterol pada
plasma membran. Hal ini karena kolesterol menyebabkan pengaruh yang sangat
jelas pada sifat semua sel biologis (Misalnya permeabilitas ion aktif dan pasif)
dengan mengatur luiditas dan ketebalan selaput lipida. Spermatozoa tikus pada
media kapasitasi akan kehilangan sebagian kolesterol, ini merupakan hal yang
penting pada proses kapasitasi, hal ini disebabkan karena terdapatnya albumin
yang menyebabkan penipisan kolesterol. Penipisan kolesterol ini tidaklah merata
dan hanya sedikit bagian yang bebas kolesterol. Hal ini mungkin karena pemisah-
an selaput lipida dan kolesterol secara lateral dari molekul-molekul tersebut
didalam lapisan ganda lipida untuk membantu domain dan bukannya terjadi
arus keluarnya kolesterol dari selaput. Fluiditas lipida dari selaput membran
plasma kepala dan ekor spermatozoa mengalami perubahan akibat kapasitasi.
Perlu diingat bahwa sering kali dilakukan penelitian secara mikroskopis yang
ringan, perubahan luiditas yang kecil pada area terlokalisir mungkin merupakan
bagian terpenting yang sulit dideteksi (Yanagimachi, 1988)
BAB
REAKSI AKROSOM
IV
4.1. ENZIM-ENZIM DALAM AKROSOM
Bentuk ikatan membran akrosom dengan struktur mirip topi yang me-
nyelubungi daerah permukaan inti spermatozoa. Meskipun ukuran dan bentuk
dari akrosom bermacam-macam diantara spesies akan tetapi struktur dasarnya
sama. Akrosom diyakini analog dengan lysosom atau granul zymogen dari sel-sel
pancreas. Sebenarnya zat ini mengandung susunan enzim hydrolitik yang besar.
Meski beberapa dari enzim-enzim ini dapat terlokalisir di dalam atau permu-
kaan akrosom, bukan di dalam matriks akrosom, enzim tersebut mempunyai
kemampuan hidrolisa yang kuat.
Hyaluronidase dan akrosin adalah dua jenis enzim akrosom yang telah
dipelajari secara luas dan terkarakteristik dengan baik. Keberadaannya di dalam
matrik akrosom telah ditunjukkan secara meyakinkan dengan teknik citokimia
atau immunocitokimia dengan menggunakan mikroskop elektron. Meski
beberapa peneliti menyatakan bahwa sebagian hyaluronidase akrosom dan ak-
rosin bergabung dengan kuat pada selaput akrosom, akan tetapi bukti dengan
mikroskop elektron belum dapat ditunjukkan.
Karbohidrat merupakan komponen utama dari akrosom. Selaput tipis
glikoprotein yang menyelubungi permukaan sebelah dalam selaput terluar akro-
som mungkin berfungsi untuk menjaga agar terjadinya plasma tervesukulasi dan
selaput akrosom secara bersama-sama selama reaksi akrosom. Glikoprotein-
glikoprotein lainnya dan zat-zat yang mengandung karbohidrat di dalam matriks
akrosom bisa membantu konversi enzim-enzim akrosom dari bentuk ion aktif
(misalnya proakrosin) menjadi bentuk aktif (misalnya akrosin).
51
52 Reaksi Akrosom
Gambar 4.1. Terjadinya reaksi akrosom pada saat spermatozoa menempel

pada jelli di luar sel telur
Tabel 4.1. Enzim-enzim yang terdapat pada Akrosom
Diketahui sebelum tahun 1980 Yang ditemukan setelah 1980

Hyaluronidase β-N-Acetylhexosaminidase
Acrosin β-Galactosidase
Pro acrosin β-Glucuronidase
Asam proteinase α-L Fucosidase C
Esterase Cathepsin D
Neuraminidase Peptidyl peptidase
Phisphatase Ornithin decarboxylase
Phospholipase A
βN acetylglucosaminidase
Arylsulfatase
Collagenase
4.2. ARTI FUNGSIONAL REAKSI AKROSOM
Sel telur dari kebanyakan binatang diselubungi oleh gliko protein, sehingga
spermatozoa harus menembusnya sebelum mencapai selaput plasma sel telur.
Pada beberapa invertebrata, “Lysin” yang dilepaskan akrosom spermatozoa
akan melarutkan lapisan sel telur secara lokal untuk menghasilkan lubang tempat
spermatozoa memasuki oosit.
Pelarutan lapisan oleh lysin dilakukan secara enzimatis atau interaksi
inter molekuler hidrofobik. Pada mammalia lapisan tebal glikoprotein tersebut
disebut dengan zona pellusida. Zona pellusida tersebut masih diselimuti oleh
kumulus oophorus yang tersusun dari sel-sel kumulus. Komponen utama ku-
mulus adalah asam hyaluronic. Hialuronidase yang dilepas oleh spermatozoa
bereaksi dengan akrosom, mencerna kumulus dan akrosin yang terbawa di
permukaan spermatozoa bereaksi dengan zona, sehingga spermatozoa dapat
masuk kedalam sel telur. Atau dengan kata lain reaksi akrosom sedikitnya ber-
tujuan untuk (1) membantu spermatozoa menembus zona dan (2) Meleburkan
selaput plasma sel telur.
Gambaran Spermatozoa yang telah mengalami Reaksi Akrosom dengan
pewarnaan FITC Concanavaline A seperti pada gambar 4.2.
Gambar 4.2. Spermatozoa yang telah mengalami Reaksi Akrosom dengan

pewarnaan FITC Concanavalin A (Susilawati, 2000)
54 Reaksi Akrosom
Pewarnaan FITC Concanavalin A pada prinsipnya adalah pewarnaan

D-Mannosa yang terikat pada inner membrane akrosom, apabila membrane
akrosom masih intak, maka pewarna/luoresen akan mewarnai bagian akrosom
dan apabila spermatozoa sudah tidak terdapat akrosom, maka bagian atas kepala
spermatozoa berwarna gelap atau tidak ada pendaran luoresen.
4.3. MORFOLOGI DAN KINETIKA REAKSI AKROSOM.

1. Perbedaan antara Reaksi Akrosom “True” dan “False”.
Karena akrosom mengandung bermacam-macam enzim penghidrolisa
yang kuat, maka spermatozoa yang mati atau sekarat akan rusak membrannya
atau akrosomnya.
Gambar 4.3. Diagram yang menunjukkan tahapan reaksi akrosom. (Ac)

Acrosomal cap ; (Eg) Equatorial Segment of the acrosome ; (IAM) inner acrosomal
membrane. (Gambar diambil dari buku Yanagimachi,R,1981).
Gambar 4.4. Proses reaksi akrosom pada manusia. (Gambar diambil dari
Nagae et al,1984)
Membran akrosom yang terluar relatif stabil dan selaput plasma bagian
atas dapat dihancurkan sebagian atau keseluruhannya atau lepaskan dari
bagian utama spermatozoa. Spermatozoa tanpa akrosom bila diamati dengan
mikroskop cahaya sama dengan spermatozoa setelah reaksi akrosom. Sangat
penting membedakan akrosom yang degeneratif dengan reaksi akrosom secara
isiologis
56 Reaksi Akrosom
Gambar 4.5. Skematis dari proses reaksi Akrosom

Banyak teknik untuk mengamati hilangnya, tetapi semua dilakukan pada
spermatozoa pada kondisi mati. Sangat diharapkan agar dikembangkan suatu
teknik baru yang dapat mengamati reaksi akrosom pada kondisi spermatozoa
hidup, sehingga dapat dibedakan spermatozoa tanpa akrosom karena faktor
degeneratif atau secara fungsional terjadi reaksi akrosom.
2. Sifat Alamiah Exocytotic pada Reaksi Akrosom

Reaksi akrosom selaput akrosom terluar dan selaput plasma bagian atas
yang memungkinkan isi akrosom untuk lepas.
Lokasi tempat penggabungan antara selaput plasma dan akrosom terluar
bermula terjadi dapat bervariasi menurut jenis spesies. Pada kelinci, letaknya
didaerah depan dan sekeliling daerah pembungkus akrosomal. Pada Tupai bulu
emas, biri-biri dan manusia letaknya di dekat perbatasan dari pembungkus akro-
som dan equatorial akrosom. Hal ini tidak mengherankan sebab spermatozoa
pada banyak spesies selaput terluar akrosom dan selaput plasma tidak stabil,
dan selaput plasma terluar tersebut sangat kaya akan kalsium.
3. Waktu Reaksi Akrosom

Kecepatan reaksi akrosom tergantung dari spesiesnya, kondisi sperma-
tozoa dan lingkungannya. Spermatozoa marmut dalam medium yang mengan-
dung ion kalsium selesai dalam 2 menit. Spermatozoa tikus dan dipreinkubasi
dalam media kapasitasi selama 1 jam dapat berpenetrasi kedalam zona sebesar
15% menjelang 11 menit, setelah 9 menit berikutnya 80% sel telur terpenetrasi.
Kemungkinan besar spermatozoa melebur seluruhnya pada saat pertama kali
menyentuh zona pellusida. Setidaknya beberapa spermatozoa memulai dan me-
nyelesaikan reaksi akrosom 10-15 menit saat bersentuhan dengan zona. Semua
fakta tersebut kelihatannya mengindikasikan bahwa spermatozoa berkapasitasi
dan mengalami reaksi akrosom secara tepat.
4. Faktor penyebab alami reaksi akrosom

Sel telur landak laut diselubungi selaput tipis glycoprotein yang disebut
dengan lapisan vitelline dan masih diselubungi lagi dengan lapisan jelly yang
tebal. Lapisan vitelline tersebut homolog dengan zona pellusida dari sel
telur mammalia, sedangkan jelly tersebut homolog dengan sel-sel kumulus
dari mammalia. Pada banyak spesies landak laut, reaksi akrosom terjadi saat
spermatozoa menyentuh jelly atau saat spermatozoa melewatinya. Secara
biokimia, jelly adalah campuran glycoprotein dan polimer sulfat fucose. Reaksi
akrosom terjadi karena jelly mengandung sulfa, sedangkan mekanismenya
masih belum jelas. Pengikatan komponen-komponen jelly yang aktif pada
protein selaput plasma spermatozoa menyebabkan perubahan permeabilitas
ion kalsium temporer.
Faktor yang menyebabkan reaksi akrosom pada mammalia tampaknya
adalah kumulus oophorus dan atau zona pelusida. Pada waktu spermatozoa
menempel pada zona pellusida kemudian mengalami reaksi akrosom, karena
materi-materi pada zona memicu terjadinya reaksi akrosom dengan eisien.
Satu dari tiga glikoprotein zona yaitu ZP3 yang mengikat selaput plasma di
luar pembungkus akrosom. Rantai polypeptida dalam molekul ZP3 tampaknya
berfungsi sebagai pemicu dari reaksi akrosom.
Apakah kumulus oophorus mempunyai kemampuan untuk memicu
terjadinya reaksi akrosom masih kontroversial, Adanya kumulus pada media
yang kekurangan albumin dapat meningkatkan keberhasilan pembuahan, akan
tetapi tidak ada bukti yang jelas tentang pengaruh sel kumulus terhadap reaksi
akrosom, akan tetapi kemungkinan komponen kumulus mengawali terjadinya
reaksi akrosom dan komponen ini bekerjasama dengan zona untuk menyele-
saikan reaksi akrosom.
Pemicu reaksi akrosom bukannya suatu substansi khusus, sebagai contoh
58 Reaksi Akrosom
reaksi akrosom landak laut dapat dipacu dengan bahan kimia dan isika, sedang-
kan mamalia dapat mengalami reaksi akrosom tanpa adanya sel telur dan materi
yang berhubungan dengan sel telur (Misal sel kumulus dan zona). Bahan-bahan
yang secara langsung atau tidak langsung merubah permeabilitas membran
akrosom terhadap ion-ion (Misal Ca++ dan Na++), sehingga spermatozoa yang
berkapasitasi mengalami reaksi akrosom.
Reaksi akrosom diinduksi oleh bertemunya reseptor membran sperma-
tozoa dengan ZP3, salah satu protein dalam ZP3 adalah galaktosil transferase 1
(GaLT-1), suatu enzim intra membranosa yang memiliki lokasi aktif di per-
mukaan dan selanjutnya akan mengikat residu karbohidrat pada ZP3. Setiap
ZP3 dapat mengikat dua atau tiga molekul GaLT-1 (Miller et al , 1992). Ikatan
tersebut mengaktifkan G-protein spesiik pada membran spermatozoa serta
phospholipase C (PLC) yang mengakibatkan depolarisasi membran, sehingga
membukanya channel Ca2+. Kondisi ini akan meningkatkan konsentrasi Ca2+
dalam sitoplasma dan pH meningkat, sehingga vesikula akrosom mengalami
eksositosis (Shi et al , 2001; Florman et al , 1998) Selanjutnya beberapa kom-
ponen signal transduksi yang berperan dalam inisiasi reaksi akrosom yaitu G
protein, inositol-3,4,5 triphosphat (IP3) dan reseptor IP3, Phospholipasi C,
Ca2+, saluran Ca2+ (channel Ca2+/tipe T) yang sensitif terhadap permeabilitas
membran sel (Florman et al, 1998).
Eksositosis dari vesikula akrosom melepaskan bermacam-macam
protease, sehingga melisiskan Zona Pellusida. Enzim ini menimbulkan suatu
lubang/pori yang akan dilewati spermatozoa sehingga sapat masuk ke membran
sel telur (Shi et al, 2001)
4. Mekanisme Reaksi Akrosom

Spermatozoa landak laut tidak mengalami kapasitasi seperti pada mamma-
lia, spermatozoa siap membuahi sel telur setelah keluar dari pejantan. Pada
kebanyakan spermatozoa dari spesies landak laut mengalami reaksi akrosom
di dalam jelly sel telur. Jelly sel telur yang diduga berinteraksi dengan reseptor
selaput plasma melewati dua lintasan parallel. Salah satunya adalah lintasan yang
tak bergantung ion kalsium yang mengarah pada peningkatan pH intraselluler
lewat arus masuk Na++ dan arus keluar H+. Satunya adalah depolarisasi selaput
yang bergantung pada ion Ca++ dan peningkatan pH intraselluler yang meng-
hasilkan arus besar-besaran ion Ca++ ekstraselluler. Ion Ca++ yang berpenetrasi
pada selaput plasma memicu penggabungan antara plasma dan selaput akrosom
terluar, mencapai puncaknya dalam suatu eksositosis kandungan akrosom. Meski
konsentrasi cAMP intraselluler dari spermatozoa landak laut dalam kondisi yang
mendukung reaksi akrosom dan hubungan yang pasti antara cAMP dengan
reaksi akrosom belum jelas.
Gambar 4.6. Tahapan hilangkan ion kalsium selama proses kapasitasi dan
reaksi akrosom menggunakan pewarnaan CTC (Susilawati, 2000)
Arus masuk nya ion Ca++ merupakan tahap penting dari reaksi akrosom
spermatozoa mammalia. Jelas sekali bahwa semua komponen yang berada di
dalam dan di luar akrosom terlibat langsung pada proses reaksi akrosom. Untuk
menjalani reaksi akrosom pada waktu dan tempat yang tepat, maka spermatozoa
mammalia harus dapat bertahan hidup lama. Konsentrasi ion K+ intraselluler
dijaga tetap tinggi dan konsentrasi ion Ca++ dan Na+ intraselluler dijaga tetap
rendah, hal ini sangat penting untuk kelangsungan hidup spermatozoa dan
perlindungan spermatozoa dari reaksi akrosom dini. Semua ini dilakukan oleh
ikatan membran Na+ - K+ ATP ase (yang memompa ion Na+ keluar dan ion K+
ke dalam sel) dan Ca++ -ATP ase ( yang memompa Ca++ keluar dari sel). Selama
kapasitasi, lapisan permukaan makromolekul spermatozoa dilepas atau diru-
bah, sehingga protein-protein membran intrinsik (termasuk zona atau reseptor
kumulus dalam selaput plasma spermatozoa diatas akrosom) menjadi berubah.
Pelepasan tersebut menyebabkan protein membran intrinsik dapat bergerak
lebih bebas di dalam lapisan ganda lipida. Lapisan ganda lipida sendiri merubah
susunan molekulernya selama kapasitasi yang dilakukan oleh faktor-faktor en-
dogen dan eksogen. Albumin merupakan satu dari faktor-faktor eksogen yang
bertanggung jawab pada pengorganisasian kembali lipida-lipida membran saat
60 Reaksi Akrosom
spermatozoa kapasitasi menyentuh kumulus atau zona.
Gambar 4.7. Mekanisme molekuler pada proses reaksi akrosom
Glicosaminoglicans sel kumulus atau glicoprotein zona pellusida mengikat

reseptor. Zona atau reseptor kumulus ini berupa protein pembawa ion Ca++,
reseptor membantu difusi ion Ca++ ekstra selluler. Arus masuk ion Ca++ besar-
besaran menonaktifkan Na+-K+-ATP ase, sehingga meningkatkan konsentrasi
ion Na+ intraselluler. Hal ini menyebabkan arus keluar ion H+ (melalui pem-
buluh balik Na+/H+) yang menyebabkan pH intra selluler naik. Ion Ca++ yang
telah berpenetrasi akan bekerja dengan atau tanpa calmodulin pada selaput
plasma. Ion Ca++ membantu penggabungan antara kedua membran dengan
perlekatan pada phospolipid dan memicu pemisahan phospoliphid membran.
Phospholidase-phospholidase aktif menyerang phospolipid-phospolipid un-
tuk menghasilkan produk-produk gabungan (misalnya asam arachidonic dan
phospholipid). Saat membran akan bergabung atau telah bergabung, ion Ca++
masuk dan ion H+ keluar dari matrik akrosom. Hal ini menyebabkan perubahan
proacrosin menjadi akrosin aktif secara enzim dan mendispersi akrosom yang
mengandung enzim-enzim lainnya.
Spermatozoa mammalia memulai reaksi akrosomnya secara spontan
dalam media kapasitasi spermatozoa, hal ini disebabkan oleh (a) Aktivasi spon-
tan dari zona oleh reseptor-reseptor kumulus atau protein pembawa ion Ca++
dalam membran plasma spermatozoa atau oleh (b) Penonaktifan mekanisme
pemompa ion Ca++ (Ca++-ATP ase). Pada spermatozoa yang sekarat atau mati,
ion-ion intraselluler akan mengalir keluar dan ion-ion eksternal berpenetrasi
dengan bebas ke dalam sel. Hal ini disebabkan oleh lemah atau non aktifnya ATP
ase. Acrosin dan enzim-enzim akrosomal lainnya akan menyerang membran
spermatozoa yang mengakibatkan hilangnya sebagian atau seluruh pembungkus
akrosom. Hal ini disebut dengan reaksi akrosom “false”.
Gambar 4.8. Scanning Electron Microscop spermatozoa tanpa Akrosom
4.5. Hiperaktifasi Spermatozoa

Spermatozoa pada beberapa spesies mulai bergerak sangat aktif sebelum
berlangsungnya reaksi akrosom yang disebut hiperaktivasi. Istilah ini untuk
membedakan dengan kata aktivasi yang menunjukkan gerak aktif dari epididimis
saat bertemu dengan seminal plasma.
Spermatozoa mulai bergerak sangat aktif saat kontak dengan media
kapasitasi, beberapa jam bergerak sangat kaku kemudian bergerak bebas. Mula-
62 Reaksi Akrosom
mula spermatozoa berenang dalam bentuk linier mulai menunjukkan gerakan

tunggal yang ditandai dengan gerakan ekor seperti tali cambuk dan dihentikan
dengan gerakan lurus-lurus pendek. Kedua tipe ini secara gabungan disebut
hiperaktivasi. Motilitas spermatozoa terhiperaktivasi secara in vitro sama dengan
secara in vivo yaitu pergerakan dalam oviduct saat fertilisasi.
Gambar 4.9. Pola Gerak hiperaktivasi pada spermatozoa
Spermatozoa secara in vivo memulai gerakan hiperaktivasi, terjadi di

beberapa tempat dan beberapa spesies terjadi di dalam istmus. Saat hiperakti-
vasi ini spermatozoa mempunyai daya dorong yang tinggi, hal ini selain untuk
bergerak menuju ampulla juga untuk menembus zona pellusida yang keras,
dan ada korelasi positif antara motilitas spermatozoa terhiperaktivasi dengan
kemampuan spermatozoa menembus zona. Komponen-komponen medium
secara keseluruhan mempengaruhi inisiasi dan mempertahankan motilitas
spermatozoa yang hiperaktivasi, misalnya Ca++, HCO3, K+, substrat energi dan
albumin, semuanya untuk mengontrol hiperaktivasi.
Tidak ada basis molekuler pada hiperaktivasi, sebab beberapa mak-
romolekul yang menutup membran plasma dipindahkan selama kapasitasi.
Membran plasma ekor spermatozoa pre hiperaktivasi mengalami perubahan
karakteristik isik dan kimia lipida membran ekor selama kapasitasi. Salah satu
perubahan lipid membran adalah methylsi phospholipid. Methylsi phospho-
lipid membantu masuknya Ca++ ke dalam sel, peningkatan Ca++ yang masuk
kedalam membran spermatozoa merangsang adenylate cyclase yang menghasilkan
cAMP. Ca++ dan cAMP adalah yang mengatur pergerakan ekor spermatozoa.
Spermatozoa hiperhativasi pergerakan ekornya kaku, sedangkan spermatozoa
yang telah hiperaktivasi bergerak lentur atau terbebas dari kebekuan. Hal ini
disebabkan oleh menghalusnya serat kasar bagian luar oleh Mg-ATP, hal ini
dibuktikan dengan terhiperaktivasinya kembali spermatozoa setelah diberi Mg-
ATP ke serat-serat spermatozoa.
Gambar 4.10. Mekanisme molekuler kapasitasi dan hiperaktifasi

PEMBUAHAN (FERTILISASI)
BAB V
Proses fertilisasi adalah suatu peristiwa secara seri mulai dari penempelan
spermatozoa pada oosit, penembusan zona pelusida, perivitellin, sitoplasma
hingga fusinya pronuclei yang berasal dari spermatozoa dengan pronuclei yang
berasal dari oosit.
Spermatozoa banyak mengalami perubahan isiologi di membran sel
mulai dari proses spermatogenesis hingga terjadinya fertilisasi. Fertilisasi meru-
pakan awal dimulainya proses perubahan dari sel tunggal menjadi organisme
multi selluler (Evans, 2001).
Perubahan atau perkembangan dari spermatozoa tersebut terjadi be-
berapa mekanisme yaitu: 1) Proses biosintesis sel-sel spermatogenik sebelum
proses meiosis (2) Mekanisme kontak langsung antara sel sertoli pada proses
spermatogenesis (3) interaksi spermatozoa dengan seminal plasma dan proses
pematangan di epididimis serta saat interaksi dengan cairan dalam saluran re-
produksi betina dan kapasitasi (4) mekanisme fertilisasi (Thaller and Cardullo,
1990)
Proses fertilisasi terdiri dari 4 tahap yaitu: (1) Kontak dan pengenalan
antara spermatozoa dengan sel telur (2) Proses masuknya spermatozoa sel telur
(3) Fusi materi genetik spermatozoa dengan sel telur serta (4) aktivasi metabo-
lisme zigot untuk memulai perkembangannya (Hinsch et al, 1994)
65
66 Pembuahan (Fertilisasi)
Gambar 5.1. Ilustrasi perjalanan spermatozoa sampai fertilisasi
5.1. PENETRASI SPERMATOZOA PADA SEL TELUR

Sel telur dilindungi oleh sel pelindung, sel pelindung terluar adalah zona
pelusida yang relatif tebal yang bersifat elastis dan tersusun oleh glicoprotein.
Pada mammalia zona pelusida masih dikelilingi oleh kumulus oophorus saat
terjadinya fertilisasi in vitro. Kumulus tersusun dari komponen selluler dan
aselluler. Karbohidrat (termasuk asam hyaluronat) dan protein merupakan
komponen utama dari kumulus. Pada domba, sapi dan binatang berkantung
terdapat kumulus setelah ovulasi dalam waktu singkat, sehingga zona merupakan
satu-satunya pelindung sel telur dan spermatozoa harus mampu menembusnya
sebelum mencapai plasma telur.
5.2. PENETRASI SPERMATOZOA DALAM MENEMBUS KUMU-

LUS OOPHORUS
Di saat banyak spermatozoa berenang mengelilingi masing-masing sel
telur untuk menghamburkan kumulus, maka salah satu spermatozoa melakukan
penetrasi ke dalam sel telur. Sering kali spermatozoa tidak dijumpai pada lumen
kumulus akan tetapi sudah terjadi penetrasi, hal ini menunjukkan bahwa proses
penetrasi tersebut sangat eisien di dalam ampulla.
Spermatozoa yang menembus ke dalam sel kumulus harus sudah menga-
lami kapasitasi dan terdapat acrosomal caps, hal ini karena apabila spermatozoa
berada di dalam sel kumulus dalam keadaan belum kapasitasi, maka spermatozoa
tersebut tidak akan mampu melakukan penetrasi ke dalam zona.
Bagaimana spermatozoa terkapasitasi menembus kumulus untuk men-
capai permukaan zona pellusida? Apakah reaksi akrosom dan enzim-enzim
akrosom terlibat dalam proses ini? Membran plasma spermatozoa membawa
enzim hyaluronidase untuk penetrasi kedalam kumulus, Hal tersebut banyak
diyakini orang, akan tetapi tidak ada bukti yang kuat. Kemungkinan enzim-
enzim akrosom keluar melalui akrosom luar dan membran plasma, sedangkan
enzim-enzim selain hyaluronidase adalah yang dapat melisis kumulus belum
diketahui.
Fungsi yang tepat dari hyaluronidase dalam fertilisasi masih kontrover-
si. Hyaluronidase sudah lama sekali dapat teridentiikasi dan terkarakterisasi.
Hyaluronidase sapi tidak mempunyai fungsi biologis karena (a) Hyaluronidase
tidak mampu menghamburkan sel-sel kumulus yang menyelubungi oosit (b)
Oosit mengalir secara spontan di dalam oviduct tanpa pengaruh hyaluronidase,
sehingga para peneliti menyimpulkan enzim dari akrosom ini tidak berfungsi
pada spesies ini. Hyaluronidase berfungsi dalam depolimerisasi asam hyaluro-
nat dari sel kumulus sehinga dikatakan hyaluronidase juga berperanan dalam
penetrasi spermatozoa.
Aksi penghambatan fertilisasi oleh andibodi-antihyaluronidase lebih
banyak di zona dari pada sel kumulus. Myocrisin (Na-aurothiomalat suatu in-
hibitor hyaluronidase) menghambat masuknya spermatozoa yang terkapasitasi
walaupun motilitasnya tinggi. Dengan daya ini spermatozoa lengket pada sel
kumulus, sehingga tidak dapat menerobos ke dalam sel kumulus. Hialuronidase
dapat bertindak sebagai lumbrikan bagi spermatozoa yang masuk melalui sel
kumulus. Jika hialuronidase diperlukan untuk penetrasi kumulus, maka berarti
terdapat ikatan diantara keduanya yang mengembalikan kemampuan sperma-
tozoa untuk menembus kumulus.
Gambar 5.2. Ilustrasi proses penembusan sel-sel kumulus dan oosit oleh
Spermatozoa
5.3. PENETRASI SPERMATOZOA KE DALAM ZONA PELLUSIDA.

1. Karakteristik Kimia Zona Pellusida
Zona pelusida merupakan suatu glikoprotein. Sebagai contoh zona babi
meliputi protein 71%, Heksosa netral 19%, asam sialat 2,7% dan sulfat 2,7%.
Zona babi terdapat empat golongan glycoprotein yaitu: ZP1 (BM=82.000);
ZP2 (BM=61.000); ZP3 (BM=55.000) dan ZP4 (BM=21.000). Zona Tikus
mempunyai 3 macam zona yaitu ZP1 (BM=200.000), ZP2 (BM=120.000),
ZP3 (BM=83.000), zona hamster juga ada tiga yaitu ZP1 (BM=240.000),
ZP2 (BM=150.000) dan ZP3 (BM=80.000). Pada tiap spesies juga terdapat
perbedaan berat molekul, perbedaan tersebut bisa terjadi apabila mengguna-
kan teknik yang berbeda. Integritas struktur zona tampaknya dipertahankan
oleh kekuatan non kovalen meskipun ada beberapa ikatan disulida molekuler.
Bagaimana golongan glykoprotein yang berbeda di distribusikan dalam zona
masih belum diketahui sepenuhnya, tetapi sebagai contoh glikoprotein ZP2 dari
zona tikus didistribusikan pada zona yang paling tebal. Pada babi ZP1, ZP2
dan ZP3 semua terletak pada permukaan yang bila diamati dengan mikroskop
scanning luar pemukaannya terdapat tempat untuk penetrasi berupa kisi-kisi
yang tidak teratur.
Zona tidak mengalami perubahan selama proses maturasi sel telur sampai
terjadinya ovulasi, zona kehilangan glycosaminoglicans beberapa jam sebelum
ovulasi. Pada saat sel telur ditransportasikan dari ovarium ke oviduk, maka oleh
oviduk ditambahkan glikoprotein. Diketahui pada banyak spesies penyusun
zona berubah drastis pada saat fertilisasi, sehingga spermatozoa yang lain tidak
bisa menerobosnya. Hal ini disebut dengan reaksi zona. Pada reaksi ini adalah
hidrolisis glikoprotein ZP2 dan ZP3 oleh granula cortical. Akan tetapi pada
mammalia reaksinya tidak kuat. Pada beberapa spesies, misalnya tikus dan kelinci
zona kembali dapat dipenetrasi oleh beberapa spermatozoa pada beberapa jam
setelah ada spermatozoa yang masuk ke dalam sel telur. Meskipun susunan kimia
zona berubah karena hasil hidrolisa dari granula cortical.
2. Penyerangan Spermatozoa Pada Zona

Spermatozoa yang fertil akan menempel erat pada zona sebelum penetrasi
kedalamnya. Ikatan zona-spermatozoa yang kuat ini karena adanya interaksi
antara molekul spermatozoa dengan zona. Gwatkin dan Williams berpendapat
bahwa keberadaan zona terlarut dalam media fertilisasi akan mencegah kapasi-
tasinya spermatozoa. Zona terlarut tampaknya tidak mempengaruhi pergerakan
spermatozoa. Hal ini karena permukaan spermatozoa terjadi penjenuhan resep-
tor molekul-molekul zona yang mengakibatkan spermatozoa tidak mengenali
zona yang asli, sehingga dapat dikatakan bahwa membran spermatozoa mem-
bawa glikoprotein dengan ainitas yang kuat ke molekul zona.
Molekul-molekul zona yang bertanggung jawab terhadap ikatan sper-
matozoa dan zona telah diteliti secara luas pada tikus oleh Wassarman dan
kelompoknya. Glikoprotein ZP3 dan ZP2, bukan ZP1 yang mempunyai aktivitas
reseptor spermatozoa. ZP3 adalah reseptor spermatozoa yang utama, sedangkan
ZP2 adalah reseptor sekunder. ZP3 adalah reseptor sperma yang mempunyai
aktivitas menginduksi reaksi akrosom pada bagian rantai sakarida-O. ZP3 ber-
tanggung jawab terhadap aktivitas reseptor utama, sedangkan polipeptidanya
terlibat dalam fungsi induksi-reaksi akrosom glikoprotein.
Spermatozoa hasil ejakulasi atau dari epididimis mengikat sel telur secara
homolog atau heterolog. Tampaknya spermatozoa yang belum masak dari epi-
didimis mampu menempel erat pada zona. Apakah ini berarti bahwa reseptor-
reseptor zona pada spermatozoa disusun pada permukaan spermatozoa dan
siap mempengaruhi zona jauh sebelum spermatozoa membuahi sel telur? Paling
tidak ada beberapa materi penutup permukaan spermatozoa yang dirubah selama
pematangan. Pada kondisi alami, hanya spermatozoa yang mengalami kapasitasi
spermatozoa secara penuh saja yang dapat bertemu dengan zona, sehingga untuk
mengenali reseptor zona harus pada spermatozoa yang terkapasitasi.
Keberadaan material pengikat pectin pada membran spermatozoa ter-
kapasitasi dan pada plasma membran akrosom bagian dalam dari spermatozoa
yang telah reaksi akrosom terdapat beberapa glikoprotein integral yang dida-
patkan selama kapasitasi dan reaksi akrosom. Sampai saat ini masih belum jelas
secara keseluruhan apakah reseptor zona pada spermatozoa berupa protein,
glikoprotein atau komponen-komponen glikoprotein. Sakarida-sakarida terminal
glikoprotein misalnya N-asetil-D-glukosamin, mannosa, fruktosa, galaktosa
dan asam sialat mempunyai aktiitas-aktiitas reseptor. Beberapa peneliti yang
lain mengatakan berpendapat bahwa protein-protein membran mempunyai
aktiitas reseptor zona. Ikatan protein-fruktosa pada membran spermatozoa
babi merupakan reseptor zona, tetapi ada lagi yang menyatakan bahwa protein
dengan glikoreansferase atau dengan aktiitas protein dapat bertindak sebagai
reseptor zona pada spermatozoa. Peptida-peptida yang dihasilkan dari autoka-
talisis akrosin bertindak sebagai reseptor zona pada spermatozoa.
Di mana letak reseptor-reseptor zona pada spermatozoa? Sebelum
menjawab pertanyaan ini ada baiknya bila kita membicarakan struktur mana
pada spermatozoa yang melakukan kontak dengan zona. Pada tikus terdapat
pada membran plasma diatas akrosom. Hanya spermatozoa yang mempunyai
akrosom sempurna yang dapat melekat pada permukaan zona. Spermatozoa
yang telah tereaksi yaitu yang telah hilang membran plasma bagian luar penutup
akrosom tidak akan mampu mengikat zona. Dengan kata lain bahwa membran
plasma di atas penutup akrosom adalah reseptor zona, akan tetapi dengan men-
cuci spermatozoa dengan sentrifugasi gradien dextran, sehingga akrosomnya
tereaksi, kemudian spermatozoa dipertemukan dengan sel telur sehingga terda-
pat ikatan yang lemah antara spermatozoa dengan zona. Pada Golden Hamster,
pada spermatozoa yang belum dan sudah tereaksi akrosom dapat menyerang
zona, dengan kata lain reseptor zona yang ada di spermatozoa tidak hanya pada
plasma membran diatas penutup akrosom, tetapi juga pada tempat yang lainnya
dari kepala spermatozoa atau membran akrosom bagian dalam.
Apakah tempat reseptor zona berbeda diantara spesies? reseptor zona pada
spermatozoa yang terkapasitasi terletak pada bagian atas akrosom, sedangkan resep-
tor ZP terletak pada bagian dalam akrosom. Hal ini menunjukkan bahwa pada
permukaan spermatozoa terdapat tipe reseptor yang berbeda yang menjadi aktif
dan tidak aktif selama interaksi antara zona dengan spermatozoa. Jika sperma-
tozoa hanya memiliki satu type reseptor zona pada membran plasma di atas
penutup akrosom, maka spermatozoa yang telah mengalami reaksi akrosom yaitu
spermatozoa yang telah kehilangan membran plasma penutup akrosom tidak
akan dapat melakukan penetrasi sel telur. Yang penting reseptor spermatozoa
terdapat pada permukaan spermatozoa yang akan tereaksi dan terjadi ikatan
yang lunak dengan sel telur, sebab bila ikatan itu kuat maka spermatozoa tidak
bisa menembus sel telur dan hanya menempel pada zonanya saja
Membran plasma di seluruh kepala spermatozoa kelinci mempunyai
reseptor zona. Setelah reaksi akrosom, reseptor-reseptor zona ini terdapat di
sisi depan. Segmen equatorial dan bagian depan daerah pasca akrosom. Selama
fertilisasi spermatozoa kelinci harus menggunakan reseptor zona pada membran
plasma akrosom pertama, kemudian membran plasma setengah bagian belakang
spermatozoa untuk mengikat zona. Spermatozoa harus menggunakan reseptor
zona yang terletak pada membran plasma bagian belakang kepala spermatozoa
untuk mengikat zona.
3. Bagaimana reseptor-reseptor spermatozoa pada zona dan reseptor- resep-

tor zona saling berinteraksi satu dengan lainnya?
Reseptor spermatozoa pada zona dan reseptor zona pada spermatozoa
menjadi pelengkap satu dengan lainnya. Aktivitas reseptor spermatozoa me-
nempati oligosakarida pada rantai O pada salah satu glikoprotein zona yaitu
ZP3. Oligo sakarida tersebut mengandung N-acetyl-D-Glucosamine, asam sialat,
fruktosa dan atau galaktosa yang menyusun bagian-bagian aktif reseptor sper-
matozoa pada zona.
Reseptor-reseptor zona pada spermatozoa merupakan lectin protein
dengan sakarida sebagai aktivitas pengikat. Beberapa protein yang diisolasi
dari spermatozoa diketahui mempunyai kemampuan untuk mengikat molekul-
molekul zona, tetapi tidak jelas apakah reseptor zona merupakan protein murni
atau protein konjugasi. Banyak yang menyatakan reaksi zona menempati bagian
protein, tetapi Shur dan kelompoknya menyatakan bahwa galactose transferase
merupakan reseptor zona pada zona dan terminal N-acetyl-D-Glucosamine meru-
pakan reseptor spermatozoa pelengkap zona. Ikatan spermatozoa–zona terjadi
dalam bentuk enzim substrat yaitu sialil transferase spermatozoa dan asam sialat
zona berinteraksi pada ikatan zona-spermatozoa.
Terdapat keterlibatan tripsin pada ikatan spermatozoa-zona dan terdapat
inhibitor dari proteinase. Molekul-molekul non enzim dapat sebagai pengikat
zona yang kemungkinan berada di membran plasma, karena spermatozoa yang
terkapasitasi setelah menempel pada zona akan menyelesaikan reaksi akrosom-
nya. Macam dari molekul tersebut masih dalam pertanyaan.
4. Penetrasi spermatozoa dalam Menembus Zona Pellusida

Spermatozoa yang mengalami reaksi akrosom dalam aksinya menembus
zona akan kehilangan semua komponen akrosomnya, kecuali segmen equator
dan membran akrosom bagian dalam yang menutup bagian depan. Setengah
kepala yang berhubungan langsung dengan material zona dan menembus zona
dengan menggerakkan ekornya secara kuat. Gerakan ekor yang kuat tersebut
penting untuk keberhasilan penetrasi zona, yang diikuti dengan gerakan me-
motong sisi ke sisi dan gerakan maju dan mundur dari kepala spermatozoa.
Spermatozoa yang membuahi selalu meninggalkan celah penetrasi yang tajam
dan tipis secara vertical dalam menembus zona.
Ada beberapa hipotesis tentang penembusan spermatozoa ke zona:
1. Hipotesa mekanik
Penembusan spermatozoa dalam sel telur benar-benar secara mekanik.
Satu-satunya tujuan reaksi akrosom adalah membuka lubang pada akrosom.
Kemudian membuat titik lubang yang tajam dan membuka zona secara mekanik
sejalan dengan cara menggerakkan ekor spermatozoa secara kuat.
2. Hipotesa enzimatis
Berlawanan dengan hipotesis diatas, setiap tahap alasan spermatozoa
dalam menerobos pelindung telur tergantung enzim. Hyaluronidase akrosom
dilepas selama aliran spermatozoa menembus kumulus. Beberapa enzim lain di
permukaan spermatozoa membantu ikatan antara zona dengan spermatozoa.
Akrosin tidak menghancurkan zona, tetapi menghidrolisa glikoprotein
zona yang spesiik untuk melunakkan zona. Ikatan enzim-enzim ini memecah
molekul zona sejalan dengan gerakan spermatozoa yang kuat. Kemungkinan
ikatan lisin itu meliputi akrosin, proteinase yang bukan akrosin, hyaluronidase,
Aryesulfatase, glycosulfatase dan N-asetylhexosaminidase.
Hipotesis mekanik berdasarkan pertimbangan sebagai berikut:
Secara teoritis, tenaga yang digunakan spermatozoa bisa sebesar 100PN. Hal ini
cukup besar untuk pembebasan tekanan dari hubungan non kovalen glikoprotein
zona yang bertindak sebagai cairan viscoelastis.
1. Celah penetrasi spermatozoa mempunyai batas yang jelas, seolah-olah
memotong zona.
2. Zona kelinci setelah dicerna tripsin dan akrosin masih dapat dipenetrasi.
3. Protein inhibitor menghalangi penempelan spermatozoa di permukaan
zona, tetapi sekali ikatan terjadi maka spermatozoa dapat menerobos
zona.
Jika spermatozoa mammalia menerobos pelindung tanpa bantuan enzim,
mengapa akrosom mempunyai enzim-enzim yang kuat, seperti hyaluronisade
dan akrosin yang mampu menghidrolisa matrik kumulus dan zona. Jika akrosom
dan enzim merupakan kekuatan evolusi, maka kita harus menemukan beberapa
spesies mammalia yang spermatozoanya secara total tidak mempunyai akro-
som atau enzim-enzim akrosom. Oleh sebab itu akrosom dan enzimnya harus
mempunyai fungsi yang sangat penting.
Hipotesa enzimatis juga mempunyai titik kelemahan, jika penetrasi kumu-
lus tergantung sepenuhnya pada hyaluronidase, maka pada spermatozoa yang

tidak mempunyai enzim ini (Sea urching dan Rooster) pasti tidak menembus
kumulus. Spermatozoa binatang berkantung dan burung melepaskan enzim
akrosom (termasuk hyaluronidase dan akrosin) pada permukaan zona untuk
melunakkan zona sebelum spermatozoa memasukinya.
Enzim-enzim pada akrosom berperanan penting pada tahap awal pema-
sukan spermatozoa kedalam zona. Spermatozoa manusia melakukan penetrasi
ke dalam lendir servik lebih eisien jika spermatozoa dalam seminal plasma dari
pada jika berada dalam larutan garam buatan. Enzim-enzim seminal membantu
spermatozoa ke dalam lendir servik. Enzim akrosom yang dilepaskan oleh
spermatozoa pada permukaan zona akan membantu masuknya spermatozoa
ke dalam zona. Jumlah enzim akrosom yang diperlukan untuk pemasukan awal
ini bervariasi pada spesies yang berbeda.
Yang paling mungkin adalah spermatozoa menggunakan sarana me-
kanik dan enzimatis untuk menembus zona. Spermatozoa tidak pernah bisa
menerobos zona yang keras jika dalam keadaan immotil atau sedikit motil.
Spermatozoa harus memiliki daya dorong yang kuat untuk dapat menembus
zona. Materi-materi akrosom termasuk enzim yang jalan aliran spermatozoa.
Beberapa materi akrosom yang dilepas bisa merubah molekul-molekul zona
atau melunakkan zona agar dapat dipenetrasi.
Arand dkk mengusulkan hipotesis ikat lepas interaksi spermatozoa.
Pertama-tama protein terikat zona-spermatozoa (ZBP) yang mempunyai ikatan
dengan ainitas tinggi diikuti dengan degradasi tinggi dan pelepasan ikatan ZP
oleh enzim-enzim spermatozoa. ZBP tersebut mengikat ZP yang baru tanpa
gerak maju spermatozoa. penetrasi tidak akan terjadi jika aktiitas enzimatis
spermatozoa atau kemampuannya untuk memindahkan ikatan ligand dihalangi
(missal penambahan inhibitor), maka ikatan ZP tidak akan didegradasi. ZBP
akan kembali jenuh dengan reseptor dan penetrasi tidak terjadi. Hipotesis ini
dapat menjelaskan kekhasan spesies dalam penetrasi zona.
Gambar 5.3 Masuknya spermatozoa ke Zona dengan adanya Pergerakan
Gambar 5.4. Proses masuknya inti spermatozoa
5. Penggabungan Spermatozoa dengan Zona.

Selama menembus zona pelusida, kepala spermatozoa menerobos ruang
vitellin, menuju ke vitelus dan secara bertahap bergabung ke dalamnya. Proses
dinamis ini dapat diamati secara kontinyu pada kondisi in vitro secara cermat.
Pada binatang berkantung, Burung dan hewan laut juga invertebrata laut
fusi sel telur dengan spermatozoa dimulai antara membran akrosom bagian
dalam dan membran plasma telur. Keadaan yang berbeda terjadi pada mam-
malia, yaitu pada membran plasma spermatozoa tidak pada membran akrosom
bagian dalam yang bergabung pertama kali dengan membran plasma telur. Ini
pertama kali ditemukan pada tikus. Pemasukan kepala spermatozoa ke dalam

sel telur diikuti oleh penggabungan secara bertahap ekor spermatozoa secara
keseluruhan.
5.4. TEMPAT-TEMPAT INISIASI FUSI SPERMATOZOA DAN

TELUR
Mula-mula disebutkan fusi dimulai pada membran plasma spermatozoa
bagian post akrosom. Akan tetapi bila diamati secara cermat aksi penggabungan
terletak pada segmen equator. Hal ini bisa terjadi setelah spermatozoa mengalami
reaksi akrosom. Bila spermatozoa telah kapasitasi sempurna tetapi tidak reaksi
maka tidak dapat bergabung dengan sel telur. Perubahan isiologis yang penting
yang harus terjadi pada membran plasma segmen equatorial sebagai hasil dari
reaksi akrosom, walaupun terjadi pada membran masih belum jelas.
Permukaan telur mempunyai sejumlah mikrovili, kecuali daerah di atas
spindle setelah pembelahan meiosis ke dua. Daerah bebas mikrovilli kaya akan
aktin yang terpolarisasi. Fusi antara spermatozoa dengan sel telur tidak akan
atau jarang terjadi pada daerah yang gundul ini. Meskipun spermatozoa menuju
ke kelompok mikrovilli, tetapi banyak peneliti yang beranggapan bahwa yang
berperanan pada fusi adalah daerah intermicrovilli, karena membran plasma mi-
crovilli bukan diperuntukkan untuk fusi antara spermatozoa dengan sel telur.
Gambar 5.5. Diagram reaksi akrosom dan fusi antara sel telur dan spermatozoa
pada tikus. (Ac) Acrosome;(IAM) Inner acrosomal membrane;
(MV) Egg microvilli; (PA) post acrosomal region; (PM) Sperm
plasma membrane; (N) Nucleus; (Z) Zona pellucida. (Gambar
diambil dari Piko L,1967 dan Piko L et al, 1964)
Gambar 5.6. Diagram tahapan fusi spermatozoa selama fertilisasi dan peng-
gabungan dengan vittelin. (Eg) Equatorial segment of the
acrosome (Gambar diambil dari Bedford SB et al, 1978)
5.5. KEJADIAN-KEJADIAN SESUDAH FUSI

Sel telur setelah dipenetrasi oleh spermatozoa secara metabolis bangkit
untuk serangkaian peristiwa morfologi dan biokimia yang mengarah ke defe-
rensiasi dan formasi individu baru, pembangkitan dianggap sebagai aktivitas.
Indikasi yang mudah dikenal dalam aktivasi sel telur pada mammalia adalah
exocytosis granula-granula cortical dan rangkaian meiosis. Nukleus sel telur yang
setelah metafase II istirahat, maka mulai meiosis lagi setelah fusi antara sel telur
dan spermatozoa. Nukleus haploid mentransformasi ke dalam pronukleus sel
telur. Sementara nukleus spermatozoa merata dan mentransformasi ke dalam
pronucleus spermatozoa. Sintesa DNA (duplikasi akrosom) terjadi setelah peng-
gabungan kedua pronukleus. Pembungkus intinya meluruh dan akrosomnya
bercampur.
Untuk pembelahan meiosis pertama, pencampuran kromosom dapat

dianggap sebagai akhir fertilisasi dan awal perkembangan embrio. Pada beberapa
invertebrata dan vertebrata non mammalia, interval antara fusi spermatozoa
dengan telur dan inisiasi pembelahan pertama adalah dalam beberapa jam,
sedang mammalia biasanya memerlukan 12 jam atau lebih.
Gambar 5.7. Mekanisme masuknya spermatozoa kedalam sel telur
5.6. AKTIFITAS SEL TELUR

Fisiologi dan biokimia aktivasi telur telah diteliti secara luas pada mam-
malia dan invertebrata terutama sea-urchin. Namun aktivasi tersebut belum
diketahui secara menyeluruh. Fusi spermatozoa dan sel telur menyebabkan
pelepasan ion Ca2+ dari intra selluler (Misalnya retikulum indoplasma). Ca2+
intra selluler meningkatkan masuknya Na+/H+ yang menyebabkan pH intra
selluler meningkat temporer. Peningkatan pH temporer ini tampaknya menu-
tup protein penghambat dalam sitoplasma sel telur yang menghasilkan aktivasi
irreversible jalur oksidatif telur, metabolisme lipid, reduksinucotinamide serta
sintesis protein DNA.
Sangat sedikit diketahui tentang mekanisme aktivasi sel telur pada mam-
malia. Pada sel telur Hamster, pelepasan secara eksplosif Ca2+ terjadi 10 – 30
detik setelah penetrasi spermatozoa ke dalam membran plasma sel telur. Yang
menarik, ledakan atau keluarnya Ca2+ terjadi secara berulang dengan interval
sekitar 3 menit selama 100 menit. Signiicansi biologis pelepasan Ca2+ berulang
tidak diketahui, tetapi dapat dihubungkan dengan beberapa aktivitas sistim
cytoskeleton, sebagai contoh depolimerisasi dan polimerisasi tubulin.
Komponen sel telur termasuk membran plasma telur berubah karakter
biologis dan biokimianya setelah terjadi aktivasi telur. Contohnya permeabilitas
membran plasma sel telur tikus terhadap gliserol meningkat secara dramatis
dalam waktu 3 jam setelah fertilisasi/aktivasi sel telur.
Gambar 5.8. Diagram aktivasi sel telur dan perkembangan pronuclear pada
tikus. (a-d)Fusi antara spermatozoa – sel telur dan cortical granule
exocytosis. (d-h) meisis ke dua secara lengkap.(I-k) perkembangan
pronuclear.(I-m) penampakan kembali kromosom spermatozoa
dan sel telur. (n) prometafase pada cleavage yang pertama (Gambar
diambil dari Austin, 1984)
Sejumlah chanel voltage-gated Ca2+ dalam membran plasma telur meningkat

secara nyata selama satu jam pertama diikuti dengan aktivasi sel telur. Fertilisasi
atau aktivasi telur mempunyai sedikit pengaruh terhadap permeabilitas membran
plasma sel telur tikus. Juga mobilitas molekul-molekul lipid dalam membran
plasma membran sel telur tidak berubah secara nyata selama aktivasi sel telur.
Sel telur mammalia dapat diaktivasi oleh variasi rangsangan isik dan
kimia. Semua rangsangan pengaktifan ini tampak menyebabkan peningkatan
konsentrasi Ca2+ intraselluler. Kebanyakan rangsangan ini tampak menginisiasi
beberapa respons pada level membran plasma sel telur. Tak seorangpun tahu
secara tepat bagaimana spermatozoa memulai aktivasi sel telur. Spermatozoa
membawa substansi pengaktifasi telur yang spesiik ke dalam sel telur sudah
lama diketahui, akan tetapi juga diketahui bahwa pada serangga, ikan dan kadal
diketahui sel-sel telur dapat teraktivasi tanpa adanya spermatozoa, mereka telah
memproduksi generasinya secara parthenogenesis untuk mendapatkan ketu-
runannya. Meskipun sel telur mammalia secara potensial mampu menginisiasi
perkembangan tanpa spermatozoa, maka tidak berarti bahwa spermatozoa tidak
mempunyai fungsi dalam aktivasi sel telur, sebab pada kondisi yang normal,
spermatozoa yang mengaktivasi sel telur. Pada landak laut dan tikus penyuntikan
Ca2+ ke dalam sitoplasma sel telur akan mengaktivasi sel telur secara eisien,
akan tetapi kita masih belum bisa secara pasti mengatakan pengaktifasi sel telur
adalah ion Ca2+ masih membutuhkan pendukung yang lebih kuat.
Lamina tebal post acrosome domba sangat kaya kalsium, dapat dibayangkan
bahwa ion Ca2+ yang dilepaskan dari lamina setelah fusi spermatozoa dengan
sel telur memicu aktivasi sel telur. Inositol triphosphattase yang diinjeksikan
secara microsurgical ke dalam sel telur landak laut akan mengaktivasi sel telur
dengan sangat eisien.
Gambar 5.9. Secara seri gambaran micrograph menunjukkan keluarnya intrac-

ellular Ca++ saat fusi antara spermatozoa dengan sel telur pada
hamster. Sel telur yang diinjeksi dengan aequorin, kemudian diinjeksi
dalam gelap. Luminescence emitted oleh adanya interaksi aequorin
dengan Ca++ yang diamati tiap 0,5 detik. Menggunakan high-sensi-
tivety video canera. Gambar tersebut menunjukkan pengumpulan
secara terus menerus Ca++ yang ditunjukkan dengan spot putih.
(Gambar diambil dari Miyazaki S et al, 1986 dari buku Yanagimachi
1988)
5.7. EXOCYTOSIS GRANULA-GRANULA CORTICAL DAN

HAMBATAN POLYSPERMA
Granula-granula kecil yang berbentuk bola pada membran pembatas
organel ditemukan di bawah membran plasma sel telur masak yang tidak
dibuahi, hal ini banyak dijumpai pada kebanyakan vertebrata dan kebanyakan
invertebrata. Dengan menggunakan mikroskop fasekontras ditemukan adanya
granula-granula tersebut juga pada mammalia. Banyak granula kecil pada bagian
korteks telur hamster yang tidak dibuahi dan akan hilang selama fertilisasi, den-
gan demikian dapat disimpulkan bahwa granula-granula ini homolog dengan
granula-granula cortical landak laut yang berperan dalam modiikasi penutup
sel telur selama fertilisasi.
Pada landak laut dan ikan, eksositosis dimulai pada dekat titik fusi sper-
matozoa dan akan segera menyebar dalam bentuk seperti gelombang ketempat
yang berlawanan pada sel telur. Gelombang eksositosis granula cortical landak
laut ini didahului oleh gelombang intraselluler Ca2+ yang dilepaskan. Eksositosis
granula cortical adalah suatu proses yang tergantung pada Ca2+. Pada hamster
pelepasan Ca2+ intraselluler mulai dekat fusi spermatozoa sel telur, tetapi gelom-
bang seperti penyebaran exocytosis granula cortical belum dapat dibuktikan.
Granula cortical sel telur mammalia mengandung enzim-enzim hidrolitik
dan komponen-komponen sakarida. Pada beberapa spesies kandungan granula
cortical yang dilepaskan dari korteks sel telur selama fertilisasi atau aktivasi
sel telur akan merubah karakteristik isik dan kimia zona pellusida, sehingga
zona dapat dipenetrasi oleh spermatozoa, ini yang disebut dengan reaksi zona.
Reaksi zona adalah hidrolisis (inaksivasi) glikoprotein zona oleh proteinase
atau glikosidase yang dilepaskan oleh germinal cortical selama aksositosis. Sper-
matozoa bertanggung jawab pada penyerangan yang kuat terhadap zona,
sehingga spermatozoa mengalami hidrolisis dan zona tidak dapat menangkap
spermatozoa dengan kuat. Reaksi akrosom yang mempunyai kemampuan untuk
menginduksi zona juga dihilangkan, akibatnya spermatozoa tidak mampu lagi
menembus zona.
Germinal cortical juga untuk menghambat polyspermi. Membran plasma
telur juga memiliki kemampuan untuk membuang kelebihan spermatozoa.
Penghambatan polyspermi ini pada level membran plasma disebut dengan
Vittelline Block atau egg plasma membrane block. Sayangnya sifat dan mekan-
isme vitteline block ini masih sedikit diketahui, meskipun beberapa peneliti telah
menyebutkan kemungkinan keterlibatan material germinal cortical dalam pem-
bentukan vitteline block masih belum ada bukti yang kuat untuk mendukung
pernyataan ini. Pada landak laut, membran plasma sel telur menolak kelebihan
spermatozoa dalam beberapa detik setelah penyerangan spermatozoa yang
pertama. Panghambatan yang cepat terhadap polyspermi ini bersifat elektrik.
Peningkatan potensial membran yang tiba-tiba disebabkan oleh fusi antara
spermatozoa dengan sel telur, hal ini mencegah terjadinya fusi yang berlebihan
dari spermatozoa. Sampai saat ini belum ada bukti yang kuat bahwa vitteline block
pada mammalia dicapai oleh mekanisme elektrik yang sama.
Gambar 5.10. Mekanisme molekuler saat terjadinya fertilisasi dan block

polyspermi
Eisiensi reaksi zona dan vitteline block dapat disimpulkan dengan mem-
pelajari sejumlah spermatozoa yang memasuki ruang perivittelin dan sitoplasma
sel telur yang diikuti perkawinan alami atau Inseminasi Buatan. Dengan cara ini
telur-telur hamster, anjing, domba diketahui mengalami reaksi zona yang
sangat kuat. Sedangkan telur-telur kelinci dan tikus sebaliknya, yaitu tidak tampak
mengalami reaksi zona atau hanya reaksi lemah pada kondisi alami. Telur-telur
tersebut hampir sepenuhnya tergantung dari vittelin Block untuk menghindari
polyspermy. Sel-sel telur tikus besar, mencit, marmut, kucing secara in vitro sama
dengan manusia yaitu mengalami reaksi zona yang kuat, bahkan ketika diin-
seminasikan dengan sejumlah spermatozoa, maka sebagian besar spermatozoa
mengikat permukaan zona lebih dari jumlah yang biasa pada bagian dalam zona.
Sangat mungkin zona bagian dalam merupakan tempat reaksi zona, sehingga
fertilisasi polispermi bisa terjadi. Salah satu sebab yang mungkin polyspermi
pada manusia adalah penundaan eksocytosis germinal cortical dan mengaki-
batkan penundaan terjadinya reaksi zona. Kerusakan zona bertanggung jawab
terhadap ketidak eisienan atau bagian penghambat terhadap polyspermi pada

level zona.
Gambar 5.11. Reaksi molekuler di dalam oosit saat spermatozoa menempel

pada zona pellusida
Sel telur tikus mensekresikan suatu faktor yang disebut dengan ovum
faktor yang secara langsung atau tidak langsung merangsang produksi proges-
terone induk. Ovum faktor bukan merupakan ovum tunggal, dia dalam bentuk
molekul ganda. Ovum faktor pertama kali dilepaskan sel telur pada saat fertilisasi
(aktivasi parthenogenesis) dan terus diproduksi sedikitnya pada tahap blastosit.
Sehingga diduga ovum faktor adalah komponen germinal cortical yang dikeluar-
kan. Ovum faktor juga terus dikeluarkan oleh embrio selama perkembangan
preimplantasi, sehingga diduga ovum faktor tidak saja merupakan komponen
germinal kortical tetapi yang lainnya.
Exositosis germinal kortical juga terjadi saat fertilisasi, akan tetapi jum-
lahnya lebih banyak dikeluarkan selama telur berada di ovarium.
Exocytosis germinal cortical premature mempunyai dua fungsi:
1. Dapat mendukung pembentukan perivitellin. Sangat mungkin bahwa prek-
sistensi ruang perivittelin membentau sperma telur pada mammalia. Jika
ruang perrivittelin tidak ada sebelum fertilisasi, ujung akrosom spermato-
zoa tereaksi yang telah menembus zona menjadi lengket pada permukaan
kortek telur. Dengan dicegah dari kemajuan lebih lanjut, spermatozoa
tidak akan fusi membran plasma telur karena membran akrosom bagian
dalam yang menutup bagian depan akrosom spermatozoa tereaksi bersifat
nonfusigenik. Sebaliknya jika ruang vittelin ada kepala spermatozoa yang
telah menembus zona dapat bergerak bebas. Membran plasma sperma
fusigenik pada equatorial akrosom bisa bergabung dengan membran plasma
telur tanpa kesulitan.
2. Exositosis premature sedikit merubah karakteristik isik dan kimia zona
pellusida dan membran plasma telur dengan cara sedemikian rupa sehingga
hanya spermatozoa yang motil dan sangat kuat yang dapat melakukan pe-
netrasi telur. Ini beralasan untuk berpendapat bahwa exositosis CG prema-
ture selama fertilisasi dan pemecahan pada exositosis CG selama fertilisasi
bekerja secara sinergis dalam melindungi telur dari bahaya polispermi atau
fertilisasi oleh spermatozoa yang lemah.
Gambar 5.12. Sel telur yang telah difertilisasi pada kelinci (A) dan manusia (B).
Pada kelinci, beberapa sisa spermatozoa terdapat pada bagian
perivitteline (PVS) pada oosit yang ifertilisasi oleh satu sper-
matozoa. Pada manusia juga terdapat sisa spermatozoa pada
bagian perivitelline pada sel telur yang difertilisasi secara normal.
Micrograph B menunjukkan hanya dua spermatozoa (panah)
yang dapat masuk kedalam zona pellucida (ZP) tetapi gagal untuk
masuk (dihasilkan oleh Dr.J.Micheal Bedford (A) dan DR.Philip
Matson (B). (Gambar diambil dari buku Yanagimachi, 1988)
Gambar 5.13. Proses masuknya spermatozoa dalam oosit pada proses

fertilisasi.
Gambar 5. 14. Tahapan proses masuknya spermatozoa ke dalam oosit

5.8. DEKONDENSASI NUKLEUS SPERMATOZOA DALAM SITO-

PLASMA TELUR
Pada tahap akhir ketika berlangsungnya pemadatan nucleus sperma,
hampir semua histon somatic di dalam sperma dipindahkan oleh sekelompok
tertentu histon atau protemine-protemine yang kaya akan arginine, serine
cysteine. Diyakini bahwa, kekompleksan DNA spermatozoa terhadap muatan
asam amino merupakan dasar yang memungkinkan kromatin beraktiitas.
Salah satu gambaran tunggal tentang nucleus spermatozoa mammalia
adalah rantai silang SS ekstensif protamine-protamine inti yang terjadi selama
spermatozoa di epididimis. Hasilnya, nucleus spermatozoa yang sudah ma-
sak mempunyai kekuatan yang elastis. Hal ini menguntungkan untuk aliran
spermatozoa secara mekanik melalui zona pellusida yang tebal dan agak ulet.
Rantai silang yang berlebihan akan menyulitkan nukleus untuk mengkondensasi
kedalam sitoplasma telur. Pada manusia Zn2+ yang berasal dari prostat dapat
bertindak dalam pencegahan pembentukan rantai silang SS yang berlebihan dari
protein/protamin yang terjadi selama kapasitasi spermatozoa.
Salah satu kejadian ketika nucleus bergabung kedalam sitoplasma telur
adalah disintegrasi yang cepat menutup inti. Kromatin spermatozoa secara
langsung membuka sitoplasma telur. Ini memungkinkan faktor-faktor dalam
sitoplasma telur untuk mencapai jalan masuk ke kromatin dan dengan demikian
merubah komposisinya. Sifat dari faktor-faktor inilah yang bertanggung jawab
terhadap disintegrasi telur secara cepat pada telur setelah dibuahi.
Sekali penutup sel telur disintegrasi, kromatin spermatozoa mulai kehil-
angan protamin-protamin dengan cepat, bahwa sebelum dekondensasi kromatin
terbukti. Meskipun protein-protein dasar yang baru disintesis akan menggan-
tikan protamin-protamin pada suatu periode tertentu (Misalnya selama tahap
akhir dekondensasi kromatin). Ketika kromatin spermatozoa tanpa protamin dan
histon-histon somatic. Jika ini benar ia mewakili kondisi tunggal, sebab seperti
pada pembelahan sel secara cepat, histon-histon disimpan dengan cepat dalam
DNA. Sintesa DNA mulai setelah perpindahan protamin dan dekondensasi
kromatin selesai.
Nukleus spermatozoa mammalia didekondensasi oleh duhiothreito
(DDT) dan sodium dodecyl sulfat, banyak senyawa tambahan ditunjukkan un-
tuk dekondensasi nucleus spermatozoa dengan cara yang kurang lebih sama.
Dekondensasi didalam sel telur (secara in vitro) nucleus spermatozoa dibantu
oleh reduksi SS protein inti. Reasgen yang keras seperti DDT dapat menjadi
faktor dekondensasi inti alami dalam bentuk reduksi glutathionine (GSH). Ke-
nyataannya reduksi buatan GSH didalam sel telur (dengan menghambat GSH
sinhefase) menyebabkan sel telur tak mampu mengkonsendasi sel spermatozoa.
Bagaimanapun juga GSH tidak dapat menjadi satu-satunya faktor yang ber-
tanggung jawab pada dekondensasi inti secara in vitro, karena sitoplasma telur
hamster yang tidak masak (pada tahap germinal vesikel) dan telur hamster yang
masak sepenuhnya kaya akan GSH, namun yang pertama tidak sama dengan
yang berikutnya yaitu tidak mampu mengkondensasi nucleus spermatozoa.
Karena nucleus-nukleus spermatozoa hamster yang diperlakukan dengan
DDT dapat mengkondensasi dalam sitoplasma telur yang tidak masak pada ta-
hap germinal vesicle dapat dibayangkan bahwa (a) Sesuatu di dalam sitoplasma
telur yang tidak masak menghalangi GSH dari aksi protein ini. (b) Sesuatu selain
GSH hilang dari sitoplasma. Nukleus-nukleus katak, tikus dan hamster tidak
dikondensasi sama sekali atau mereka hanya dikondensasi sangat kecil tanpa
keberadaan bahan germinal vesicle (GV) dalam sitoplasma telur. Material GV
(atau beberapa produk interaksinya dengan komponen sitoplasma sel telur)
harus memindah/menutup beberapa faktor penghalang yang diperlukan untuk
suatu kondensasi nucleus spermatozoa yang eisien. Kemungkinan lain faktor
dekondensasi nucleus spermatozoa secara bertahap diakumulasikan ke dalam
sitoplasma pertumbuhan telur dan diaktifasi oleh material GV setelah pemeca-
han GV. Penting untuk dicatat bahwa sitoplasma untuk binatang lain (Misal :
anjing, Ikan, Moluska) dapat mengkondensasi nucleus spermatozoa sebelum
pemecahan GV atau ketika pemecahan GV dihambat pada kondisi eksperimen.
Tampaknya pada telur-telur binatang ini faktor dekondensasi sperma aktif atau
menjadi aktif sebelum material GV bercampur dengan sitoplasma telur. Ini
adalah suatu pemikiran bahwa suatu proteinase yang bergabung dalam nucleus
spermatozoa terlibat dalam dekondensasi inti spermatozoa, tetapi penelitian
selanjutnya belum mampu mendukung penelitian tersebut.. Namun demikian
keterlibatan secara langsung atau tidak langsung proteinase-proteinase dalam
sitoplasma sel telur masih merupakan suatu kemungkinan. Sel Telur Hamster
yang tidak dibuahi mempunyai amino peptidase dan aktiitas-aktiitas seperti
elastase. Apakah aktiitas-aktiitas enzim sedemikian berperan dalam dekonden-
sasi nucleus plasma tinggal ditentukan. Gulationine reduktase dan protein kinase
terdapat pada sel telur yang dihomogenisasi. Beberapa peneliti berpendapat
(a) Phosphorilase antara protein kinase, protamine inti spermatozoa membantu
melepaskan protamine-protamine dari DNA (b) GSH yang diproduksi dan
dipertahankan oleh gluthationine reduksi ikatan SS molekul-molekul protamine
yang dilepaskan.
Gambar 5.15. Pembelahan sel Setelah terjadinya pertemuan pronuclei jantan

dan betina.
BAB
UJI KUALITAS SEMEN
VI
Metode standard untuk evaluasi fertilitas pejantan adalah kemampuan
membuntingi yang dapat diprediksikan dengan memastikan kualitas semennya.
Ax et al (2008) menyatakan Tidak ada satu uji kualitas pun yang dapat
memprediksi fertilitas secara akurat. Pedoman berdasar pada persatuan therio-
genology minimal dari karakteristik kualitas semen pada pejantan yang diper-
gunakan untuk breeding pada sapi dengan klasiikasi:
1. Jumlah spermatozoa lebih dari 500 juta/ml
2. Lebih dari 50% bergerak progressif
3. Lebih dari 80% mempunyai morfologi normal
Ternak dinyatakan steril kalau tidak ada spermatozoa yang motil.
Analisa diagnostik yang menunjukkan fungsi testis dan epididimis yang diperiksa
beberapa kali dan minimum disebut fertil apabila sampel semennya:
1. Motilitas tidak kurang dari 65%
2. Kurang dari 20% morfologi spermatozoa abnormal
3. Tidak kurang 100 juta spermatozoa per mililiter dengan 60-75 mililiter per
ejakulasi.
Ax et al (2008) Semen hasil ejakulasi pada babi terdapat beberapa fraksi
yaitu cairan pada fraksi I adalah tidak mengandung spermatozoa (pre spermatic
fraction), fraksi II adalah bagian yang kaya spermatozoa (sperm rich fraction) dan
fraksi III adalah sedikit spermatozoa (post fraction fraction). Bagian post spermatic
fraction mengandung plasma semen yang berasal dari kelenjar asesori yang
nantinya akan menstimulasi spermatozoa untuk fertilisasi.
Total volume semen babi rata-rata 240-250 ml, 20% merupakan larutan
yang mengandung gelatin, 20-30% mengandung spermatozoa dan terdapat
perbedaan antara pre-sperm dan post-sperm. Total volume dan konsentrasi
dipengaruhi oleh umur, lingkungan, status kesehatan, prosedur koleksi semen,
musim, jumlah penampungan dan bangsa yang berbeda.
Kualitas dan kuantitas semen kuda dapat segera diamati setelah penam-
91
92 Uji Kualitas Semen
pungan semen, gel dapat segera dipisahkan dengan bagian yang tidak mengan-
dung gel dengan menggunakan siring jika tidak ada ilter di dalam vagina buatan.
Filtrasi ini juga perlu untuk menghilangkan debris-debris, rambut dan debu.
Volume dari semen yang mengandung gel dan tidak dapat dilihat melalui warna
dan konsistensinya. Volume semen tidaklah penting di dalam fertilisasi akan te-
tapi total spermatozoa per ejakulasi yang menentukan keberhasilan fertilisasi.
Semen domba berwarna putih susu atau krem muda. Warna merah
muda mengindikasikan terjadinya perdarahan pada penis saat penampungan,
sedangkan terdapatnya warna abu-abu atau kecoklatan mengindikasikan terda-
patnya infersi pada saluran reproduksi jantan dan dengan melihat bau dapat
mendukung diagnosa. Volume yang diejakulasikan dipengaruhi umur pejantan,
kondisi isik, musim, ketrampilan, kolektor dan frekuensi penampungan. Jika
penampungan dengan menggunakan vagina buatan dibutuhkan fals mounting
untuk meningkatkan volume dan jika sering dilakukan penampungan yaitu lebih
dari 3X seminggu maka volume akan menurun. Volume semen domba dewasa
berkisar antara 0,5–2 ml, sedangkan yang masih muda berkisar antara 0,5-0,7 ml.
Semen kambing berwarna abu-abu hingga kekuningan dan diantara pe-
jantan warna bervariasi juga pada pejantan yang sama. Volume ejakulasi rata-rata
1 ml dengan range antara 0,5 s/d 1,2 ml.
Uji kualitas semen dilakukan segera setelah penampungan atau sebelum
diencerkan yang meliputi pemeriksaan makroskopis: Volume, Warna, Kon-
sistensi, pH dan pemeriksaan secara mikroskopis meliputi: Motilitas massa,
Motilitas Individu, Persentase hidup-mati, Konsentrasi dan Abnormalitas.
6.1. Uji Makroskopis (Volume, Warna dan pH)

Volume semen sapi bervariasi setiap penampungan antara 1-15 mililiter
atau 5-8 mililiter (Lindsay et al, 1982 dan Garner and Hafez, 2008) Dengan
melihat pada skala tabung yang digunakan untuk menampung semen, maka
dapat ditentukan volume semen yang diejakulasikan.
Pada umumnya semen sapi berwarna putih kekuning-kuningan atau
hampir seputih susu, hal ini karena adanya ribolavin didalam semen. Warna
tersebut sering dikacaukan apabila tercampur urine, oleh sebab itu bau dapat
membedakannya.
Derajat kekeruhannya tergantung pada konsentrasi sel spermatozoa. Se-
makin keruh biasanya jumlah spermatozoa per milliliter semen semakin banyak.
pH semen sapi berkisar antara 6,4-7,8. Pada hewan muda volume lebih sedikit
(Ax et al, 2008)
Teknik pemeriksaan makroskopis adalah:
a. Volume: volume semen yang sudah ditampung pada 1 kali penampungan
diukur dengan melihat langsung pada tabung berskala.
b. pH : diukur dengan cara mengambil sedikit semen segar dengan meng-
gunakan ose dan diletakkan pada kertas lakmus atau pH meter kemudian
dilihat pH-nya pH semen diuji dengan menggunakan pH BTB paper, pH
normal semen = 6,2 – 6,8.
c. Warna: dilihat pada tabung penampung (abnormal = mengandung air,
darah, rambut preputium, nanah air kotor dan bau yang tidak normal).
Semen normal berwarna putih kekuningan atau putih susu.
d. Konsistensi: konsistensi berkorelasi dengan konsentrasi spermatozoa. Peni-
laiannya bisa encer (< 1000.106 spermatozoa/ml semen), sedang (1000.106-
1500.106 spermatozoa/ml semen), dan pekat (>1500.106 spermatozoa/ml
semen).
6.2. Uji Mikroskopis

Uji mikroskopis adalah uji kualitas semen yang menggunakan mikroskop,
Uji mikroskopis ini terdiri dari: Uji motilitas massa, motilitas individu, kon-
sentasi dengan metode thoma, Viabilitas (Persentase hidup), Uji Morfologi
(Abnormalitas spermatozoa)
Parameter motilitas adalah sebagai berikut:
a) Persentase spermatozoa yang motil dalam keadaan normal adalah 70-90
motil.
b) Persentase spermatozoa yang bergerak progresif
c) Kecepatan spermatozoa (velocity) dengan dasar skala 1-2 (Cepat)
d) Umur spermatozoa (longevity) semen segar dengan suhu ruang (20-250C),
sedangkan semen yang diencerkan dapat menggunakan suhu ruang atau
refrigrator 4-6oC.
1. Uji Motilitas Massa
Penilaian motilitas spermatozoa dilakukan setelah semen diencerkan
atau setelah freezing dan thawing. Motilitas massa diamati dengan menggunakan
mikroskop tanpa cover glass dengan pebesaran 400× atau 100× pada suhu yang
dijaga konstan 37ºC.
Kriteria penilaian gerak massa spermatozoa antara lain:
1. Sangat baik (+++) terlihat adanya gelombang besar, banyak, gelap, tebal,
dan aktif seperti gumpalan awan hitam dekat waktu hujan yang bergerak
cepat berpindah-pindah tempat.
2. Baik (++) bila terdapat gelombang-gelombang kecil tipis, jarang, kurang
jelas dan bergerak lamban.
3. Kurang baik (+), jika tidak terlihat gelombang melainkan gerakan-gerakan
individual aktif progresif.
4. Buruk (0), bila hanya sedikit ada gerakan-gerakan individual.
Ax et al (2008) penentuan berdasarkan gerak gelombang adalah sebagai
berikut:
Tabel 6.1. Score berdasarkan gerak masa
Score Gelombang
0 Tidak ada yang bergerak
1 Bergerak individual
2 Pergerakan sangat pelan
3 Secara umum bergerak dengan amplitudo yang pelan
4 Gerak gelombang cepat dan tidak ada pusaran
5 Gerak gelombang cepat dan terdapat pusaran
Tabel 6.2. Faktor-faktor Endogenous yang mempengaruhi motilitas

Spermatozoa
Penyimpanan dalam epididimis
1 Umur Umur donor
Waktu antara setelah ejakulasi
Morfologi
2 Pematangan Sperma Fisiologi
Biokimia
Transport membran
Transport ion
3 Penyimpanan energi (ATP)
Pergerakan lagela
Contractile protein
Faktor aglutimasi
Bahan aktif di permukaan Sper- Antibody
4 Detergents
matozoa Integritas membrane
Reseptor
Tabel 6.3. Faktor-faktor Eksogenous yang mempengaruhi motilitas
Spermatozoa
Hydrodynamics
Viscositas
Osmolaritas
1 Faktor bioisika dan isiologi
Ph
Temperature
Komposisi ion
Cairan epididimus
Seminal plasma
Media cairan pendukung Lengkungan vagina
2 Lendir servix
Cairan uterus
Cairan oviduk
Bagian perivitelum
Ion in organic (Cu, Zn, Cd, Mn, Hg)
Produk sekretory
Neuro-phormacolgicals
Hormone
3 Stimulasi-penghambat Cyclic nucleotides
Kinins
Prostaglandins
Polusi lingkungan
Faktor imuno kimia
2. Motilitas Individu
Penghitungan motilitas spermatozoa lebih bersifat subyektif dibanding-
kan dengan viabilitas, oleh sebab itu untuk mengeliminir subyektiitas pengamat,
maka perlu dilakukan pelatihan atau diuju lebih dari satu orang. Evaluasi semen
dapat dilakukan pada semen segar atau semen yang telah diencerkan (Ax et al,
2008). Evaluasi motilitas semen segar ini juga penting untuk mengamati fungsi
kelenjar asesoris didalam menghasilkan seminal plasma. Pada semen segar
dengan konsentrasi yang tinggi sulit untuk diamati sehingga perlu diencerkan
Gerak individu spermatozoa dapat diamati dengan menggunakan mik-
roskop dengan perbesaran 400x pada suhu yang dijaga konstan 37ºC dengan
menggunakan cover glass ,kemudian menentukan proporsi (persentase) spermato-
zoa yang bergerak progresif. Toelihere (1993) mengklasiikasikan gerak individu
spermatozoa mulai dari pergerakan progresif atau gerak maju yang merupakan
gerak terbaik, gerak mundur dan gerak melingkar sering merupakan tanda-tanda
cold shock, gerakan berayun atau berputar–putar di tempat sering terlihat pada
semen yang tua, kemudian apabila spermatozoa banyak yang berhenti bergerak
dianggap mati. Gerakan maju yang kuat pada spermatozoa merupakan indeks
daya hidup yang penting dalam populasi spermatozoa.
Gambar 6.1. Pola gerak spermatozoa (A dan B) spermatozoa dengan gerak

progresif (C dan D) Spermatozoa tidak bergerak progresif
Beberapa prosedur yang dikembangkan agar pengujian motilitas tidak bias
atau tidak subyektif adalah dengan Time-lapse photograph, frame by frame playback
video micrography,spectrophotometer dan computerized analisis.
3. Persentase Hidup Mati (Viabilitas)

Spermatozoa yang hidup dan mati dapat dibedakan reaksinya terhadap
warna tertentu, sel spermatozoa yang tidak motil dan dianggap mati menghisap
warna dan sel spermatozoa yang motil dan yang hidup tidak berwarna. Bahan
pewarna yang biasa digunakan adalah eosin negrosin. Eosin dan negrosin
adalah pewarna sel yang paling baik dipergunakan, untuk prosedur ini sehingga
pengamatan sel spermatozoa yang berwarna dan tidak berwarna menjadi jelas
dan spermatozoa yang berwarna sebagian juga dianggap mati.
Teknik penghitungan persentase hidup spermatozoa dilakukan dengan
menggunakan pewarna yaitu eosin-negrosin. Adapun cara kerjanya adalah
sebagai berikut:
* Satu tetes semen segar diteteskan pada ujung obyek glass dengan meng-
gunakan ose. Larutan eosin-negrosin diteteskan satu tetes di dekat semen
segar, kemudian keduanya dicampur. Campuran tersebut kemudian ditutup
dengan obyek glass lain pada ujungnya yang membentuk sudut 45ºC dan
ditarik ke arah ujung yang lain.
* Hasil olesan diamati pada mikroskop dengan perbesaran 400X, spermatozoa
yang menyerap warna berarti spermatozoa tersebut mati sedangkan yang
tidak menyerap warna berarti hidup.
Gambar 6.2. Viabilitas spermatozoa (A) Hidup (tidak berwarna) dan (B) Mati
(Berwarna) (Susilawati, 2000)
Spermatozoa yang hidup membrannya masih baik, sehingga pewarna

tidak dapat masuk, sedangkan spermatozoa yang mati adalah membrannya tidak
berfungsi, sehingga pewarna dapat masuk ke dalam membran spermatozoa.
4. Konsentrasi Spermatozoa
Konsentrasi semen sapi bervariasi dari 1000-1800 juta spermatozoa
tiap milliliter atau 800-2000 juta spermatozoa tiap milliliter (Garner and Hafez
2008). Bearden dan Fuquay (1984) membedakan konsentrasi antara sapi perah
dan sapi potong, yaitu 1200 juta spermatozoa tiap milliliter untuk sapi perah
dan 1000 juta spermatozoa tiap milliliter pada sapi potong. Penilaian konsen-
trasi spermatozoa tiap milliliter semen sangat penting, karena faktor ini dipakai
sebagai criteria penentu kualitas semen dan menentukan tingkat pengenceran-
nya. Konsentrasi semen dapat dihitung dengan menggunakan haemositometer,
colorimeter atau spectrophotometer.
Teknik penghitungan spermatozoa adalah konsentrasi spermatozoa di-
hitung menggunakan haemocytometer dengan cara kerja sebagai berikut: Semen
dihisap dengan pipet eritrocyt sampai angka 0,5 kemudian NaCl 3% dihisap sam-
pai angka 10,1. Pipet eritrocyt digoyang-goyang tetes yang selanjutnya digoyang
lagi selama 2-3 menit lagi. Setelah itu semen membentuk angka delapan selama
2-3 menit. Kemudian semen dibuang 1-2 dibuang 1-2 tetes lagi, yang kemudian
baru dituang pada kamar hitung yang diatasnya sudah ditutupi dengan cover glass
sebanyak satu tetes. Spermatozoa dihitung pada 5 kotak (kamar hitung) yaitu
pada sudut kanan dan kiri atas, sudut kanan dan kiri bawah, dan tengah.
Seperti gambar 6.2, perhitungan menggunakan hemocytometer dalam
menghitung spermatozoa yang ada didalam slide dengan jumlah skor yang pasti
di setiap kamarnya, jumlah spermatozoa dalam kotak dihitung secara manual.
Saat ini metode ini digantikan dengan spektrophotometer atau colorimeter yang
telah dikalibrasi dari perhitungan menggunakan haemositometer. Spektropho-
tometer ini dapat menggantikan penentuan konsentrasi spermatozoa dengan
mesin di kalibrasi pada 550 nm. Larutan yang digunakan pada semen adalah
sodium sitrat 2,9% dan 5 ml pada 10% formalin/liter. Kurva standar untuk
menghitung konsentrasi dibandingkan dengan pengencer 0,5% dengan cahaya
transmeter yang merupakan range untuk mengukur konsentrasi, akan tetapi
fotometer tidak akurat digunakan pada semen yang terkontaminasi sehingga
hasilnya tidak benar.
Range konsentrasi:
Sapi muda : 2x108 sperm/ml 8x109 sperm/ml
Babi : 6-10x108 sperm/ml
Kuda : 100-150x106 sperm/ml
Gambar 6.3 Penghitungan spermatozoa dengan haemositometer (Hafez,

2000)
Gambar 6.4 Posisi spermatozoa yang dihitung dengan menggunakan hae-

mositometer (Sumber The Royal Australian College of General
Praktitionares, 22 sept 2010)
Gambar 6.5 Penghitungan spermatozoa dengan chamber makler Hafez, 2000

Tabel 6.4 Nomenklatur dari hasil semen analisis

Parameter Kriteria evaluasi Nomenklatur
Tidak ada Aspermia
Volume Kurang Hipospermia
Kelebihan Hiperspermia
Tidak ada Azoospermia
Kurang Oligozoospermia
Konsentrasi spermatozoa
Normal Normozoospermia
Kelebihan Polyzoospermia
Pergerakan spermatozoa Turun /kurang Asthenozoospermia
Spermatozoa hidup Semua mati Necrozoospermia
Spermatozoa abnormal Persentasenya tinggi Teratozoospermia
(Ax, et al, 2008)
Konsentrasi semen pada berbagai ternak adalah sebagai berikut:
a. Konsentrasi semen pada sapi dengan kisaran 2 X 108 spermatozoa/ml
pada pejantan muda sampai 1,8 X 109 spermatozoa/ml pada pejantan
dewasa.
b. Konsentrasi spermatozoa pada fraksi yang kaya spermatozoa 6-10 X 108
spermatozoa/ml dengan inal konsentrasi dipengaruhi oleh volume fraksi
pre spermatozoa dan post spermtozoa lebih sedikit.
c. Jumlah spermatozoa kuda antara 100 X 106 sampai 150 X 106 spermatozoa/
ml, dengan total volume antara 60-100, sehingga total spermatozoa 7- 15
bilion per ejakulasi. Total spermatozoa ini dipengaruhi oleh musim, umur,
frekuensi ejakulasi, ukuran testes dan penyakit reproduksi.
d. Normal konsentrasi semen domba berkisar antara 3,5 X 109 sampai 6,0
X 109 spermatozoa/ml. Domba pejantan dengan skore 0-2 tidak dapat
digunakan (Sesuai tabel 6.2)
Tabel 6.5. Konsentrasi semen domba hubungannya dengan konsis-
tensi.
Jumlah spermatozoa (X109)
Skor Konsistensi
Rata-rata Kisaran
5 Kental cream 5,0 4,5 – 6,0
4 cream 4,0 3,5 – 4,5
3 Encer cream 3,0 2,5 – 3,5
2 Susu 2,0 1,0 – 2,5
1 Susu encer 0,7 0,3 – 1,0
0 Bening (air) Tidak terhitung
e. Colorimeter tidak dapat untuk menghitung konsentrasi semen kambing
karena warnanya bervariasi. Konsentrasi semen kambing lebih rendah dari
domba. Konsentrasi semen kambing antara 2,5 – 5,0 X 109 spermatozoa/ml
(Ax et al, 2008).
5. Abnormalitas Spermatozoa
Abnormalitas spermatozoa dapat dibedakan menjadi dua yaitu abnor-
malitas primer (seperti pada gambar 6.6) dan abnormalitas sekunder.
Setiap sampel semen terdapat sel spermatozoa yang abnormal seperti
pada gambar 6.6. Morfologi abnormal pada spermatozoa berhubungan dengan
fertilitas ternak. Stres panas yang paling banyak pengaruhnya terhadap kerusa-
kan spermatozoa. Periode pada temperatur yang tinggi dan kelembapan yang
tinggi lebih dari 6 minggu akan menyebabkan jantan steril. Besarnya jumlah
spermatozoa yang abnormal juga terjadi pada saat periode recovery.
Abnormalitas sperma pada sapi sekitar 20% fertilitas akan menurun.
Abnormalitas dibedakan menjadi primer, sekunder atau tersier. Abnormalitas
primer yang berhubungan dengan kepala dan akrosom. Abnormalitas sekunder
terjadi ketika adanya sitoplasmic droplet pada mid piece pada ekor. Abnorma-
litas tersier adalah kelainan pada ekor pada babi, persentase spermatozoa yang
intak akromosomnya adalah penting untuk uji kualitas spermatozoa. Beberapa
prosedur pewarnaan digunakan untuk pengaman morfologi. Integritas membran
spermatozoa dapat dievaluasi menggunakan mikroskop fase kontras dengan
memiksasi sperma menggunakan Glurakal dehide. Apical ridge akrosom dapat
dengan mudah diamati dan diklasiikasi yang tidak intak. Metode lain untuk
melihat integritas membran juga dapat diamati menggunakan Fluorochrome
H33258 juga mengamati morfologi dan viability. Pewarnaan menggunakan
Giemsa digunakan untuk mengamati morfologi. Morfologi spermatozoa dapat
diamati dengan mikroskop cahaya 1000x dengan menggunakan smear sperma
yang dikeringkan cahaya. Pewarnaan yang spesiik dikembangkan secara umum
menggunakan pewarna sel misalnya Giemsa, Hematoxyllin-eosin juga dapat
digunakan pada sel germal dan sel somatis dalam smear semen dengan meng-
gunakan pewarna background misalnya eosin-negrosin dan tinta india. Metode
ini sering digunakan karena penggunaannya mudah.
Visualisasi secara mendetail dapat ditingkatkan dengan memiksasi sel
menggunakan Formol-salinatal larutan buffer Glutarol dehide. Pada sel yang
tidak diwarnai menggunakan mikroskop fase kontras atau mikroskop differ-

eus infokus kontras. Metode dengan ixasi untuk mencegah perubahan atau
kerusakan akibat pewarnaan.
Gambar 6.6. Gambar Abnormalitas Spermatozoa (Ax et al, 2008)

Dua ratus spermatozoa dievaluasi ada tidaknya abnormalitas morfologi
yang spesiik adalah kerusakan akrosom, protoplasmic droplet bagian proximal,
pengelembungan bagian midpiece dan melingkar pada bagian ekor. Pesentase
morfologi normal dalam sampel semen mirip atau sesuai dengan perentase
motilitas. Bila motilitasnya rendah tetapi morfologinya normal menunjukkan
terjadinya kesalahan pemeriksaan laboratorium pada rendahnya motilitas.
Pada domba, terdapat korelasi positif antara morfologi normal dengan
motilitas spermatozoa pada setiap semen yang diejakulasikan terdapat sper-
matozoa abnormal, ketika sudah 20% atau lebih maka fertilitas pejantannya
dipertanyakan, semen yang mempunyai abnormalitas 15% tidak dapat digunakan
untuk IB (Ax et al, 2008). Morfologi spermatozoa dapat diuji dengan pewarnaan
eosin negrosin atau pewarnaan Wright’a dan Williams’stains dengan mengguna-
kan mikroskop dengan pembesaran 400X. Paling kurang 150 spermatozoa yang
diamati dan kategori spermatozoa yang abnormal ada 5 kategori yaitu:
a. Tidak ada ekor.
b. Abnormal kepala
c. Bentuk ekor abnormal
d. Bentuk ekor abnormal dengan adanya sitoplasmic droplet pada bagian
proximal.
e. Bentuk abnormal ekor dengan distal droplet.
Abnormalitas spermatozoa primer adalah terjadi saat proses spermatoge-
nesia, sedangkan abnormalitas sekunder adalah setelah proses spermatogenesis
hingga ejakulasi juga saat proses prosesing spermatozoa.
Gambar 6.7. Spermatozoa mengalami kelainan (Ax et al, 2008)

6. Kualitas semen pada ternak

Pada sapi, uji kualiats semen beku adalah gabungan antara motilitas
spermatozoa dan akrosom intak. Dua straw yang 0,5 ml atau 0,25 ml di tha-
wing dalam 95oC dalam water bath setelah 45 detik, satu straw diangkat dan
dikeringkan dengan handuk disisi yang tidak ada penutup kapasnya dipotong.
Setetes semen ditaruh di slide yang tutup dengan cover glass, selanjutnya
diamati menggunakan mikroskop dengan pembesaran 100-400 X. Mikroskop
dengan optik inferens Contras (nomarski) 1000X dengan menggunakan minyak
emersi dapat digunakan untuk menentukan abnormalitas sermatozoa dan
intak akrosom. Setelah itu straw yang kedua diinkubasi 3 jam pada suhu 95oC
untuk melihat penutup akrosom yang terletak di bagian 2/3 anterior kepala.
Pada akrosom terdapat korelasi antara persentase akrosom intak setelah 3 jam
inkubasi dengan fertilitas.
Tes yang paling akurat untuk mengukur fertiliats babi jantan yang me-
nentukan adalah kebuntingan dan lahir hidup. Walaupun banyak kriteria yang
dapat menentukan status tingginya kualitas spermatozoa yang sub optimal,
tidak ada satu parameter in vitro yang dapat digunakan untuk prediksi babi
jantan (Ax et al, 2008).
Semen domba dengan kualitas tinggi yaitu sebagian besar motilitas 85% ,
abnormalitas < 10%. Total spermatozoa yang motil per inseminasi lebih penting
dibandingkan persentase abnormalitas, karena hanya satu spermatozoa yang
melakukan penetrasi zona pelusida ovum dan telah dipercaya bahwa bukan
satu faktor yang mempengaruhi fertilitas semen.
7. Teknik Pemeriksaan kerusakan membran spermatozoa
Membran merupakan bagian terluar dari spermatozoa yang berfungsi
untuk melindungi spermatozoa, sehingga apabila membrannya fungsi dan atau
strukturnya rusak maka spermatozoa akan mati, dan hanya spermatozoa yang
membrannya utuh sajalah yang mampu melakukan fertilisasi. Oleh sebab itu
didalam proses penyimpanan spermatozoa harus dijaga membrannya.
Kerusakan membran pada umumnya dengan menggunakan mikroskop
elektron karena harus dilakukan pada pembesaran 10.000 kali, akan tetapi juga
dapat dilakukan pengamatan kerusakan membran dengan pembesaran 1000 kali
yaitu bagian lensa objektif 100 kali sedangkan okuler 10 Kali. Pada gambar 51
ditunjukkan dengan pewarnaan chlortetrasiclin dan diamati dengan mikroskop
epiluorescen dapat diamati membran yang utuh dan yang rusak .
Gambar 6.8. Spermatozoa Normal dan abnormal pada membrannya meng-

gunakan pewarnaan CTC dan diamati dengan mikroskop epi
luorescent (A) Normal, (B) kerusakan membran (Susilawati, 2000)
Kerusakan membran juga dapat dilakukan dengan pewarnaan eosin
negroin dengan pengamatan 1000 kali dengan mikroskop cahaya seperti gam-
bar B.
Gambar 6.9. Spermatozoa Normal dan abnormal pada membrannya (Susila-

wati, 2000) Normal (B) membran menggelembung pewarnaan
eosin negrosin (C) Membran yang rusak sedang (D) membran
yang utuh menggunakan pewarnaan CTC dan diamati dengan

mikroskop epi luorescent.
Gambar 6.10 Spermatozoa yang melalami kerusakan akrosom Pewarnaan eosin

negrosin dengan pembesaran 1000X
Dead Sperm
Stained with PI
Live
Stained with SYBR
Active Mitochondrial Activity

Stained with JC-1
Gambar 6.11. hasil evaluasi integritas sperma dengan menggunakan mikroskop
luoressen.(Gambar dibuat Dr. Duane L. Garner, University of
Nevada)
8. Pengamatan membran spermatozoa dengan mikroskop elektron
Mikroskop cahaya mempunyai batas maksimal yaitu 1000 kali sehingga
bila digunakan untuk mengamati spermatozoa secara detil sangat terbatas.
Struktur abnormalitas spermatozoa dapat di deteksi dengan scanning dan atau
transmisi electron microscopy (SEM/TEM), akan tetapi sangat mahal . Dengan
menggunakan kedua alat ini didapaikan detail resolusi yang tinggi untuk menen-
tukan morfologi spermatozoa, visualisasi 3 dimensi dapat menggunakan SEM ,
sedangkan jika menggunakan TEM potongan spermatozoa dapat diamati ultra
struktur secara detail.
Kerusakan membran spermatozoa lebih jelas dapat menggunakan mikro-
skop elektron yaitu dengan menggunakan Scanning Elektron Microskop (SEM),
selain itu juga dengan Transmisi Elektron Microskop (TEM)
B C
Gambar 6.12. Kerusakanmembran spermatozoa diamati dengan Scanning
elektron Microskop (A) Normal, (B,C) kerusakan membran
(Susilawati, 2000)
Gambar 6.13. Kerusakan mambran spermatozoa diamati Pengamatan Meng-

gunakan Transmisi electron mikroskop (Susilawati, 2000)
PREPARASI SPERMATOZOA UNTUK PENGAMATAN

MIKROSKOP ELEKTRON TRANSMISI
Spermatozoa yang akan diamati dicuci dengan PBS, kemudian

di sentrifugasi 1000G dan supernatan dibuang
Tambahkan Glutaraldehyde  Fixasi dengan OsO4 ( Osmium

cuci dengan PB Tetraoksid
Agar 1-2% dipanaskan pada Cuci dengan PB 3X selama

Suhu 40-50oC  sel ditanam 5 menit
Dihidrasi 2-3 X : pada alkohol 50%,

Dipotong dan di proses 60%,70%,80%,85%,90%,95% dan
99,9%
Epon campur :PO =3:3 Propilene okside absolut 2-3X

Epon campur:PO = 3:1
Epon campur
Epon campur:PO = 1:3
Embedding ditanam (alat cetak) Setelah padat dilakukan pemotongan

Menggunakan ultra mikrotome
Dengan ukuran 1µm, kemudian diamati
Dipanaskan bertahap 45oC,50oC menggunakan mikroskop
60oC sehingga terbentuk polimer Inverted sampai terdapat sampel yang
akan diamati
Biru = 240 – 190 nm Supaya Tidak timbul gelembung

Ungu = 190-150 nm Di facum/ diaduk
Kuning = 150 -90 nm
Silver = 90- 60 nm
Dilakukan pemotongan dengan
Pewarna single: Uranyl asetat Ukuran 90-60 nm untuk kepastiannya
Pewarna dobel:Uranyl asetat+BB Diberi warna toluide Blue
sitrat
Ditempel di grade Air dihisap dengan
Grade dikeringkan  diamati

Kertas saring/tissue
Menggunakan mikroskop elektron
Gambar 6.14. Flow cart preparasi spermatozoa untuk pengamatan mikroskop

elektron transmisi (Susilawati, 2000)
PREPARASI SPERMATOZOA UNTUK PENGAMATAN

MIKROSKOP ELEKTRON SCANNING
Spermatozoa yang siap diamati
Glutaral dehide 2-4% pada 4oC 5 menit (3 kali)

kemudian dicuci dengan Posphat buffer
Osmium 1-2 % 1 jam

Fix II & meningkatkan kontras
Dehidrasi dengan alkohol 50%,

60%, 65%, 70%, 75%, 80%,85%
,90%,95%,99,5% Absolut,
absolut, absolut
(15 –10%)
Amilasetat 2X (15-20 menit)
Teteskan pada gelas objek

selanjutnya dilakukan CPD
Cek dengan mikroskop inverted

untuk melihat permukaan
Tempelkan di Holder : Stub

Coating dengan emas
Diamati dengan mikroskop

elektron scanning
Gambar 6.14. Flow cart preparasi spermatozoa untuk pengamatan mikroskop

elektron scanning (Susilawati, 2000)
6.3 Pengamatan kapasitasi spermatozoa dengan pewarnaan Chlorte-

tracycline (CTC)
1. Persiapan Reagen
Langkah 1 : Pembuatan Larutan DABCO
1. 250 mg DABCO (D-2522) dilarutkan dalam 9 ml gliserol (ditempat-
kan dalam tabung yang dibungkus aluminium foil agar terlindung dari
sinar).
2. Diletakkan pada waterbath dengan temperatur 37oC selama 3-4 jam
dan dikocok dari waktu ke waktu.
3. Tambah 1 mililiter PBS dulbecco’s ke dalam larutan dan dicampur
hingga merata.
4. Larutan dibagi dalam 3 tabung tertutup yang dibungkus dengan alu-
minium foil dan disimpan di Freezer.
Langkah 2 : Pembuatan CTC Buffer 20mM NaCL
1. 0.2422 gram tris (Trizma base, Sigma T-1503) dan 0.7592 gram NaCL
dilarutkan kedalam 100 mililiter Diionized water.
2. Kemudian dicampur, disaring dan disimpan dalam refrigerator.
Langkah 3 : Fixative Buffer : 1 M Tris (Trizma base Produksi
Sigma T-1503)
1. 6.057 gram Tris dilarutkan dalam 50 mililiter Diionized Water.
2. Kemudian dicampur, disaring dan disimpan dalam refrigerator.
Langkah 4. Paraformaldehyde 25% (Sigma P-6148).
1. 12.5 gram paraformal dehyde dilarutkan dalam 50 mililiter Diionize Water
yang dikerjakan di ruang asam (lemari uap).
2. Larutan dipanaskan sambil distirer sampai berwarna putih susu (5
sampai 10 menit) dan di tambahkan 1 M NaOH sampai larutan men-
jadi terang .
Langkah 5. CTC Fixative : 12.5% Paraformaldehyde dalam 0.5 Tris.
1. Larutan paraformaldehyde (langkah 4) dicampur dengan larutan buffer 1
M Tris (langkah 3 ) 1: 1.
2. PH diatur sampai 7.4 dengan 0.2 M HCL secara hati-hati, selanjutnya
disimpan dalan refrigerator..
Langkah 6. Larutan Pewarna CTC
1. 0.0044 gram CTC powder (Sigma C-7880) dimasukkan dilam tabung
yang dibungkus dengan aluminium foil ditambahkan 0.0044 gram
L-Systein (Hydrochloride Monohydrate) dan ditambahkan 5 mililiter CTC
Buffer (Langkah2).
2. PH diatur sampai 7.8 dengan 0.2 M HCL secara hati-hati.
Catatan: Ada 3 reagen akhir yaitu:
1. Larutan DABCO
2. Larutan CTC Fixative
3. Larutan Pewarna CTC
Metode yang digunakan adalah modiikasi metode yang diuraikan oleh
Fraser (1995) dengan cara sebagai berikut : 45 µl larutan pewarna CTC dimasuk-
kan dalam tabung ependorf kapasitas 1,5 ml yang ditutup dengan aluminium foil,
lalu ditambah 8 µl CTC iksatif dan di vortex selama 1 menit, larutan tersebut
diambil 10 µl dan ditempatkan pada objek glass , kemudian ditambahkan 10
µl DABCO dan dicampur secara hati-hati kemudian ditutup dengan cover glass,
selanjutnya ditutup dengan kertas tissue yang tebal dan ditekan secara hati-hati,
selanjutnya tepi cover glass ditutup dengan cutex. Gambaran yang tampak adalah :
1) Kepala spermatozoa keseluruhan berwarna terang adalah spermatozoa yang
belum kapasitasi 2) Kepala spermatozoa separo bagian atas berwarna terang
adalah spermatozoa yang mengalami kapasitasi 3) Kepala spermatozoa tidak
berwarna terang dan hanya bagian tengah saja yang terang adalah spermatozoa
yang mengalami reaksi akrosom .
6.4 Evaluasi status akrosom dengan FITC- Con A dan methileen

Blue
Spermatozoa diiksasi dengan 4% formal dehyde, kemudian dicuci
dengan penambahan PBS 3 ml dan disentrifugasi 4000 G selama 30 menit ,
kemudian dibuang supernatannya dan dimasukkan 0,1 ml FITC con A (Sigma)
yang mengandung 10 µg/ml dalam PBS dulbeccos. Staining dilakukan selama
25 menit pada suhu ruangan, selanjutnya dicuci 2 kali dengan sentrifugasi
4000G selama 10 menit, supernatan dibuang dan endapan ditaruh pada slide,
ditetesi 90% gliserol selanjutnya diamati dengan pembesaran 400 kali dengan
mikroskop Fluorescent ( Nikon, Japan). Tiap spesimen diamati dengan epiluo-
rescen ellumination dengan excitation B (Excitation 490 nm dan Emisi 525 nm)
untuk mengamati terdapatnya luorescent pada spermatozoa hasil FITC dengan
menggunakan modiikasi dari metode Nishikima (1997).

Metode dengan menggunakan methileen blue juga dapat digunakan untuk
melihat status akrosom yaitu menempatan semen yang akan dinilai dan ditem-
patkan ke water bath bersuhu 37oC selama 10 menit, kemudian diatas objek
glass ditambahkan methileen blue atau eosin 2,9% kemudian diamati dengan
mikroskop cahaya dengan pembesaran 400 -1000 kali (Bamba, 1988).
Gambar 6.14. Hasil pengamatan status ekrosom dengan methileen Blue

(Pewarnaan akrosom jurnal, ile 18 oktober 2010)
6.5 Hypoosmotic swelling Test (HOS TES).

Integritas membrane sel dapat diuji menggunakan Hypoosmotic swelling
(HOS)-test dan akrosom utuh. Uji HOS dilakukan menggunakan modiikasi
mengikuti metode Jeyendran et al (1984), serta Correa dan Zavos (1994). Secara
prinsip Hos tes untuk melihat status membrane, karena integritas membrane
berpengaruh terhadap viabilitas spermatozoa (Lenchniak et al,2002). Sperma-
tozoa dengan membrane utuh, jika ditempatkan pada media hipoosmotik akan
berusaha meningkatkan volume air didalam tubuhnya agar cairan di dalam
dan di luar spermatozoa tetap seimbang. Upaya ini menyebabkan terjadinya
penyempitan pada membrane yang menutupi ekor, sehingga memaksa ekor
spermatozoa melingkar didalam membrane spermatozoa (Cabrita et al, 1999).
Proses menggelembung diawali pada bagian ujung ekor, dilanjutkan bagian
tengah dan kepala sehingga menyebabkan kepala menggelembung (Jeyendran
et al, 1984). Sehingga jika ekornya menggelembung atau melingkar merarti
membrannya utuh atau spermatozoa motil, bisanya untuk pengalamatan diberi
pewarna eosin untuk menilai integritas membrannya (Roca et al, 2000 ; Neild
et al, 1999).
Urutan kerja HOST test sebagai berikut : 1 ml larutan hipoosmotik 150
m osmol (yang dibuat dari 7,35 gram natrium sitrat. 2H2O, 13.52 gram fruk-
tosa dilarutkan dalam 1000 ml aquades) ditambah dengan 0.1 ml spermatozoa
kemudian diinkubasi pada suhu 37oC selama 30 menit, selanjutnya diamati
dengan pembesaran 400 X perubahan yang khas yaitu adanya pembengkakan
atau ekornya melingkar pada bagian ujungnya.
Gambar 6.15. Spermatozoa Normal dan abnormal pada Integritas membrannya

(Susilawati, 2000) Pengamatan dengan teknik Hipo osmotik swel-
ing tes (Host-tes) Normal (Bagian ekor melingkar dan membran
menggelembung) (B) membran tidak normal ( Ekor lurus)
Gambar 6.16. Hasil Uji Integritas membran babi (Rahmawati dkk, 2010) Penga-
matan dengan teknik Hipo osmotik sweling tes (Host-tes) (A,B,C)
spermatozoa normal (Bagian ekor melingkar dan membran meng-
gelembung) (D,E) membran tidak normal (Ekor lurus dan tampak
membran pada kepalanya menggelembung)
6.6. Uji Biokimia

Uji biokimia adalah digunakan untuk mengamati penyebab-penyebab
kematian spermatozoa atau berfungsinya organ reproduksi, misalnya:
1. Kandungan Fruktosa sebagai indikator berfungsinya kelenjar vesiculasemi-
nalis, karena Fruktosa di produksi oleh kelenjar vesicula seminalis.
2. Kandungan Mineral sebagai indikator berfungsinya kelenjar prostata.
3. Kandungan Glyseril Phosporil Cholin sebagai indikator berfungsinya epidi-
dimis.
Selain itu biokemis juga dapat digunakan sebagai indikator kondisi
seminal plasma atau pengencer, sehingga berpengaruh terhadap proses me-
tabolisme spermatozoa, yaitu pH atau keasaman. hal ini karena spermatozoa
dapat melakukan metabolisme yang normal apabila pada pH normal, apabila
terlalu asam atau terlalu basa akan menyebabkan toxic dan metabolisme tidak
bisa berjalan dengan baik.
6.7. Uji Biologis

Uji biologis adalah uji untuk melihat kandungan mikroba di dalam semen.
Uji biologis ini tidak dilakukan secara rutin, akan tetapi dilakukan secara berkala
atau apabila saat pengalatan mikroskopis dijumpai banyak mikroba.
Uji biologis dilakukan dengan cara kultur mikroba dan apabila melebihi
dari jumlah yang ditentukan maka pejantannya harus dilakukan pengobatan dan
sterilisasi peralatan perlu ditingkatkan.
6.8. CASA
Ax et al (2008) menyatakan Beberapa prosedur telah dikembangkan untuk
pengujian yang obyektif antara lain: time-lapse photomicrography, frame-by-frame
playback videomicrography, spectrophotomicrography dan computerize analysis. Computer
Assisted Semen Analysis (CASA) sistem digunakan pada laboratorium rujukan.
Dengan CASA, produksi semen beku oleh produsen dapat berjalan lebih
profesional dan eisien .Beberapa parameter CASA diantaranya adalah VAP
(average path velocity, µm/detik) adalah waktu rata-rata kecepatan dari spermatozoa
sepanjang alur jalannya; VCL (straight line velocity, µm/detik) adalah waktu
kecepatan rata-rata spermatozoa pada garis lurus diantara awal gerak sampai
akhir gerak saat deteksi; VCL (curve linear velocity, µm/detik) adalah kecepatan
rata-rata dari setiap titik gerak sepanjang alur; ALH (amplitude of lateral head
movement, µm) adalah jarak dari lateral letak gerakan kepala sperma pada setiap
rata-rata alur; LIN (Linearity, %) adalah linearity dari alur curve linear (hasil dari
VSL/VCL); STR (Straightness,%) adalah linearity dari rata-rata alur (hasil dari
VSL/VAP); BCF (beat cross frequency, hertz) adalah rata-rata alur curve linear
spermatozoa melewati rata-rata alurnya (Gambar 6.17).
VAP Actual Paths
VCL
A
AHL
VSL
LIN : Linearity (ratio of VSL/VCL)

STR: Straighties (ratio of VSL/VAP)
Gambar 6.17. Kecepatan dan Gerak Spermatozoa

CASA memberikan analisis yang cepat, obyektif, akurat dan repeatable
dari beberapa ratus spermatozoa per sampel konsisten, lengkap, permanen,
dan aman. Sampel semen dapat dievaluasi tidak hanya motilitas secara umum
saja, juga dapat membedakan setiap pola gerakan yang menyediakan nilai awal
diagnose kemampuan fertilitas (Anonimous, 2004).
Analisa dilakukan dengan mengalikan lapang pandang (screen), lebih dari
95 spermatozoa per lapang pandang sebanyak 20 kali, ke dalaman chamber 10 –
80 µ, parameter motilitas yang digunakan sesuai dengan criteria WHO (World
Health Organization), memberikan data analisis per individu sel, per lapangan
dan per sample, dengan analisis dilakukan dalam waktu kurang dari 2 detik per
lapangan pandang (Anonimous, 2004).
Pada analisis 18 parameter motilitas dilakukan dengan menggunakan
CASA secara otomatis dengan jumlah sel yang dapat dianalisis minimal 200.
Langkah pertama analisis akan didapatkan klasiikasi sel pada level 1 yaitu
motilitas dan motilitas progresif. Motilitas adalah semua sel yang motil tidak
termasuk sel yang tidak motil. Motilitas progesif adalah semua sel yang bergerak
maju ke depan tidak termasuk yang bergerak lokal (motil lokal). Lokal motil
adalah sel yang hidup tetapi bergerak maju sangat sedikit. Pada level ini setiap
kriteria sel ditandai dengan warna tertentu, pada sel yang motil progresif
terdapat tanda warna hijau, tidak motil berwarna merah, lokal motil berwarna
biru dan hiperaktif berwarna ungu. Pada klasiikasi level 2 terdiri dari evaluasi
hiperaktif, linear, non linear dan curve linear yang merupakan informasi motilitas
sampel yang dianalisis. Selanjutnya analisis dilanjutkan untuk data sel secara
detail yang meliputi DCL, DAP, DSL, VCL, VAP, VSL, LIN, STR, WOB, BCF,
ALH, AOC (Anonimous, 2004).
Spermatozoa juga diklasifikasikan dalam tiga grup berdasarkan
kecepatannya yaitu total motil (semua spermatozoa yang bergerak lebih dari 10
µm per detik), progresif motil (semua spermatozoa yang bergerak maju lebih
dari 20 µm per detik) dan local motil (semua spermatozoa yang bergerak pada
10 – 20 µm per detik). Motil progresif dibagi dalam tiga grup tergantung dari
nilai S/V (straight line velocity <µm/detik>), bila nilai 0,9–1,0 dikategorikan Linear
Forward; bila nilai 0,8–0,9 dikategorikan Non Linear Forward dan bila 0,0–0,8
dikategorikan pola gerakan lain (Engelmann, 1997).
Terdapat tiga kelompok pola motilitas spermatozoa yang dapat dianalisis
menggunakan CASA yaitu kelompok hiperaktifasi yang memiliki nilai VCL>100
µm/detik, LIN<60% dan ALH>5 µm; kelompok non hiperaktifasi apabila nilai
VSL>40 µm/detik, LIN>60% dan ALH<5 µm/detik serta kelompok transisi
yang memiliki nilai diantaranya. Angka fertilitas pada kelompok hiperaktifasi
memiliki keberhasilan yang lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok
non hiperaktifasi. Dinyatakan bahwa pengujian pola motilitas hiperaktifasi
menggunakan CASA dapat menjadi upaya yang baik untuk memprediksi
kemampuan fertilisasi spermatozoa. Ripp et al. (2003) menyatakan bahwa
hiperaktifasi ditandai dengan LIN>65%, VCL>100 µm/detik dan ALH>7.5
µm/detik.
Susilawati dkk (2000) menyatakan bahwa hiperaktifasi spermatozoa
diperlukan sesaat sebelum reaksi akrosom secara in vitro sama dengan secara
in vivo yaitu pergerakan dalam oviduk saat fertilisasi. Mula-mula spermatozoa
berenang dalam bentuk linear mulai menunjukkan gerakan tunggal yang ditandai
gerakan ekor seperti tali cambuk dan dihentikan dengan gerakan lurus-lurus
pendek. Saat hiperaktifasi spermatozoa mempunyai daya dorong yang tinggi,
hal ini untuk bergerak menuju ampula dan untuk menembus zona pellucida yang
keras. Terdapat korelasi positif antara motilitas spermatozoa terhiperaktifasi
dengan kemampuan spermatozoa menembus zona.

Hiperaktifasi spermatozoa ditandai dengan perubahan pola gerakan yang
cepat dengan amplitudo yang luas/lebar dan membentuk gerakan whiplash dari
lagelum (Shibahara et al., 2003). Selama hiperaktifasi spermatozoa menunjukkan
peningkatan VCL dan penurunan linearity. Untuk keberhasilan fertilisasi
spermatozoa harus mampu merespon secara baik rangsangan eksternal yang
meliputi protein kinase yang mengatur fungsi lagelar.
Hiperaktifasi spermatozoa ditunjukkan dengan gerak maju cepat non linear,
selama hiperaktifasi terjadi perubahan drastis pada pola gerak spermatozoa. Pola
gerakan berubah menjadi random dan sirkuler tidak progresif dan dinyatakan
sebagai whiplash atau gambar angka 8. Peningkatan amplitudo dari ALH,
peningkatan VCL dan penurunan LIN.
Terdapat korelasi positif diantara VSL, LIN, BCF dengan motilitas
spermatozoa dan korelasi negatif diantara MAD (Mean Angular Displacement)
dengan motilitas spermatozoa. Velocity dan linearity spermatozoa memberikan
kontribusi pada motilitas spermatozoa dan merupakan karakteristik penting
dari fungsi spermatozoa.
Beberapa standar parameter motilitas menggunakan CASA pada berbagai
jenis ternak sebagaimana dapat dilihat pada Tabel 6.3. Tidak ada perbedaan pada
VAP, VSL, VCL, ALH, STR, LIN dari semen yang dikoleksi menggunakan vagina
buatan dan elektroejakulator, namun konsentrasi spermatozoa menggunakan
vagina buatan lebih tinggi daripada elektroejakulator.
Tabel 6.6. Standar Parameter Motilitas Menggunakan CASA pada Beberapa
Hewan
Spesies J angkauan Klasifikasi Level 1 Klasifikasi Level 2
Area [µm] Non Lokal Hiperaktif Linear Non- Curve-Linear

dari smp. motil motil Linear
Babi 25 120 AOC<2,2 DS L<4,5 VLC>80 STR>0,9 STR=0,9 DAP/

LIN<0,65 LIN>0,5 LIN<0,5 Diameter =30
ALH>6,5 LIN<0,5
Sapi 22 88 AOC<5,0 DS L<4,5 VLC>80 STR>0,5 STR=0,5 DAP/

ALH>6,5 and LIN<0,5
Tikus 10 70 AOC<5,0 DS L<4,5 VLC>80 STR>0,5 STR=0,5 DAP/

ALH>6,5 and LIN<0,5
Kuda 14 80 AOC<9,5 DS L<6,0 VLC>80 STR>0,9 STR=0,9 DAP/

ALH>6,5 and LIN<0,5
Do mba 28 50 AOC<5,0 DS L<4,5 VLC>80 STR>0,5 STR=0,5 DAP/

ALH>6,5 LIN<0,5
Kambing 20 70 AOC<5,0 DS L<4,5 VLC>80 STR>0,5 STR=0,5 DAP/

LIN<0,65 LIN>0,3 LIN<0,3 Diameter = 30
ALH>6,5 LIN<0,5
Rusa 22 60 AOC<5,0 DS L<4,5 VLC>80 STR>0,5 STR=0,5 DAP/

LIN<0,65 LIN>0,4 LIN<0,35 Diameter = 30
ALH>5,0 LIN<0,5
VAP, VSL, LIN, STR merupakan indikator motilitas progresif sedangkan

VCL, ALH dan BCF merupakan indikator vigor spermatozoa. STR dan LIN juga
menjelaskan swimming pattern spermatozoa. Kemampuan fertilisasi spermatozoa
berhubungan dengan penurunan VSL, namun belum jelas bagaimana parameter
motilitas spermatozoa berhubungan dengan penurunan atau peningkatan
fertilitas. Penurunan motilitas spermatozoa akan menyebabkan penurunan
angka fertilitas. CASA dapat digunakan untuk mendeteksi pengaruh beberapa
faktor seperti pH air, temperatur, penghambat motilitas dan uji keracunan yang
merupakan pengaruh potensial dari lingkungan spermatozoa serta kemampuan
reproduksinya.
6.9. Uji Kualitas spermatozoa yang lain.

1. Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA)
Metode lowcytometry dapat dikembangkan untuk mengevaluasi struktur
integritas membrane pada kromatin spermatozoa dengan mengukr jumlah
double stranded dan single stranded DNA didalam populasi spermatozoa. SCSA
dapat digunakan untuk mengidentiikasi spermatozoa sapi atau kda yang sub
fertile. SCSA dapat di “screen” 5000 sampai 1000 spermatozoa dalam beberapa
menit.
2. Fluoresen yang lain.
Pemeriksaan luoressen yang lain yang dapat digunakan untuk mengevalu-
asi fungsi spermatozoa dengan menggunakan mikroskop atau lowsitometer.
Penghitungan ini sangat berarti karena memberikan informasi yang mendetail
gambaran integritas membrane dan potensi membrane mitochondria.
3. Analisis biokimia seminal plasma atau sekresi pada saluran re-
produksi betina
Dengan mengetahui konsentrasi elektrolit, konsentrasi protein atau
komposisi protein spesiik pada seminal plasma bukannya metode yang baik
untuk memprediksi informasi motilitas post thawing pada medium pembekuan
spermatozoa. Dua protein yang berasal dari epididimis adalah penanda poten-
sial fertilitas yaitu osteopontin dan lipocalin- 1 – like prostaglandin D synthase
Deoxyribonuclease – 1 like enzim dan tipe 2 tissue inhibitor of metallopro-
teinase (TIMP-2) disekresai oleh kelenjar asesori saat ejakulasi dan mengikat
spermatozoa saat melewati alat reproduksi jantan dan juga bergabung dengan
faktor-faktor penyebab fertilitas jantan.
Glycosaminoglycan adalah komponen yang dihasilkan oleh saluran
betina, bergabung dengan spermatozoa sapi dapat menyebabkan reaksi sper-
matozoa secara in vitro. Korelasinya besar antara stimulasi reaksi akrosom oleh
slycoaminoglycans dan pejantan setelah NRR 60-90 (Ax et al, 2008)
6.10. Produksi Semen

Evaluasi tentang kualitas semen tidak dapat dilakukan hanya dengan satu
parameter uji kualitas saja, akan tetapi lebih sesuai jika menggunakan peng-
gabungan dari beberapa parameter diatas, sehingga lebih mudah didalam mela-
kukan evaluasi, terutama didalam menguji produksi semen dari seekor ternak.
Total spermatozoa = Volume semen X Konsentrasi
Total Spermatozoa yang motil = Volume semen X Konsentrasi
X Persentase motilitas Individu
Total spermatozoa yang hidup = Volume semen X Konsentrasi

X Persentase spermatozoa yang hidup
Total Spermatozoa yang abnormal = Volume semen X

Konsentrasi X Persentasi spermatozoa yang abnormal.
PENGENCERAN, PENDINGINAN
BAB VII
DAN PEMBEKUAN SEMEN
Semen yang didapat saat penampungan setelah memenuhi kualitasnya
dilakukan pengenceran agar didapat semen beku yang banyak. Pengenceran
semen ini dibutuhkan pengencer yang dapat menjamin terjadinya proses me-
tabolisme dan respirasi spermatozoa selama proses pendinginan, pencetakan
ke dalam straw ataupun selama pembekuan.
7.1. Media pengenceran

Terdapat 2 alasan pokok semen perlu diencerkan sebelum pembekuan
yaitu: 1) alasan teknis dan 2) alasan biologis. Alasan teknis adalah untuk dapat
menginseminasi lebih banyak betina dari semen pejantan unggul, sedangkan
alasan biologisnya agar dapat memberikan medium yang cocok sebagai sumber
nutrisi, control pH serta mempertahankan tekanan osmotik spermatozoa.
Syarat penting yang harus dimiliki oleh setiap pengencer adalah: (1)
mempunyai daya preservasi tinggi, (2) Mengandung unsur yang sifat isik dan
kimiawinya hampir sama dengan semen dan tidak mengandung zat yang bersifat
racun bagi spermatozoa dan saluran kelamin betina, (3) Tetap dapat memperta-
hankan daya fertilisasi spermatozoa, tidak terlalu kental sehingga menghambat
fertilisasi.
Syarat dari pengencer adalah:
1. Bahan tidak bersifat toxic terhadap spermatozoa.
2. Mengandung sumber energi
3. Bersifat isotonis
4. Mengandung buffer
5. Melindungi dari pengaruh pendinginan secara cepat
6. Menghambat pertumbuhan bakteri
7. Meningkatkan volume sehingga bisa digunakan beberapa kali IB
8. Melindungi spermatozoa dari semen beku
125
126 Pengenceran, Pendinginan Dan Pembekuan Semen
Beberapa tambahan persyaratan yang lain adalah:

1. Mudah membuatnya
2. Tidak menghalangi saat uji kualitas
3. Harganya terjangkau
Bahan-bahan dan peralatan yang dipergunakan untuk media pengenceran
semen harus terhindar dari bahan-bahan yang mematikan spermatozoa. Pengen-
cer yang dibuat harus antiseptik dan disimpan di suhu dingin atau refrigerator,
akan tetapi tidak dalam kondisi beku. Bahan-bahan yang ada di pengencer
(extender) adalah gula sederhana (misal glukosa , laktosa atau rainosa) sitam-
bahkan sebagai sumber energi dari spermatozoa. Kuning telur dan skim milk
digunakan untuk melindungi dari cold shock. Pada saat pendinginan dari suhu
tubuh sampai dengan 5oC, subtansi tersebut juga sebagai nutrisi spermatozoa.
Bermacam-macam bahan yang digunakan sebagai buffer sehingga pH mendekati
netral dan tekanan osmose sekitar 300 mMol yang equivalen (sama) dengan
semen, plasma darah dan susu, sedangkan untuk menghambat pertumbuhan
mikroorganisme didalam semen ditambahkan penisilin, streptomisin, polymyxin
–B atau kombinasi lain antibiotik.
Semen sapi biasa digunakan pengencer larutan kuning telur, homogenized
whole milk, susu segar, skim milk dan santan (coconut milk) dan larutan laktose,
semen juga telah dapat dibekukan dengan buffer organik yaitu tris hydroximethyl
amino methan.
Larutan buffer fosfat atau 3,2%, 2,9 trisodium citrate dihydrate pada pH 6,9
ditambahkan asam sitrat dikombinasikan dengan kuning telur , sebetulnya tidak
perlu ditambahkan asam sitrat sebab komposisi kuning telur (20% dari volume)
cukup kapasitasinya sebagai buffer agar pH menjadi netral.
Tujuan utama membuat semen beku yang baik adalah meningkatkan
keberhasilan kebuntingan yang sama dengan kawin alam. Banyak faktor yang
mempengaruhinya untuk menuju ke tujuan tersebut. Semen ternak sudah
dapat dibekukan 30 tahun yang lalu. Teknik pembekuan secara terus menerus
dimodiikasi dan diperbaiki hingga sekarang. Pembekuan semen diawali den-
gan menggunakan CO2 cair (-79oC , kemudian diganti dengan N2 cair (-196oC)
karena kondisinya lebih stabil pada semen beku. Prosedur cryopreservasi pada
semen sapi keberhasilannya lebih tinggi dibandingkan pada ternak atau hewan
yang lainnya.
Kemampuan hidup semen beku (Freezability) pada semen beku setelah
thawing bervariasi antar spesies dan individu jantan dalam spesies yang sama.
Variasi dalam spesies dan individu berhubungan dengan bioisika dan biokimia
dari karakter membran spermatozoa. Fungsi integritas pada semen setelah
thawing dari pembekuan dapat dievaluasi dengan kemampuan memvertilisasi
ovum dan bertahannya didalam embriogenesis.
Kemampuan hidup spermatozoa setelah diejakulasikan didalam media
seminal plasma hanya dapat bertahan dalam waktu yang pendek. Spermato-
zoa dapat hidup lama pada suhu dingin atau dibekukan membutuhkan media
pelindung. Setiap pengencer yang berbeda mempunyai kemampuan untuk
mempertahankan semen dengan formulasi yang berbeda.
Kallikrein dan kafein dapat menstimulasi motilitas spermatozoa dengan
ditambahkan setelah semen beku di thawing. Kerja kafein adalah menstimulasi
ciclic adenosine monophosphate (cAMP) didalam spermatozoa dengan penambahan
ini kemungkinan dapat membedakan selama transport dari saluran reproduksi
betina.
Gliserol ditambahkan untuk sebagai bahan yang melindungi spermato-
zoa dari efek pembekuan. Dimethylsulfoxide (DMSO) dan gula yaitu laktosa
dan rainosa juga baik dan semua bahan tersebut bersifat degidrasi atau
menyerap air.
Dalam prakteknya, pengencer untuk pengenceran atau pembekuan semen
menggunakan kuning telur atau susu yang dipanaskan atau kombinasi keduanya,
kuning telur secara mudah juga dapat dikombinasikan dengan sodium sitrat
atau buffer organik dan susu yang dipanaskan atau skim milk, dapat digunakan
secara luas pada sapi dan dengan modiikasinya untuk semen domba, kambing,
babi dan kuda.
Tabel 7.1 Jumlah straw yang dihasilkan, penyimpanan dan hasil IB dengan
menggunakan semen beku dalam kondisi rata-rata (Hafez, 2008 b)
Parameter Semen beku

sapi domba kambing babi kuda
Jumlah yang dida- 10-75 5-10 10-25 4 2
pat pada 1 ml se-
men (ml)
Dosis Inseminasi
Volume (ml) 0,2-1 0,05-0,2 0,5 50 20-50
Spermatozoa motil 15 200 20 5000 1500
(106)
Waktu terbaik untuk 9 jam set- 10-12 set- 12-36 jam 15-30 jam Hari kedua,
IB selama estrus elah akhir elah tanda setelah tan- s e t e l a h dimulai hari
estrus estrus da estrus tanda es- ke 2 pada
trus estrus
Posisi deposisi se- Uterus atau Uterus jika Uterus jika Ser vik ke uterus
men servik mungkin mungkin dalam ute-
rus
Jumlah kemampuan
pejantan
Per ejakulasi 300 15 15 10 5
Per minggu 1000 150 150 30 15
Berbagai macam pengencer yang sering digunakan:

1. Pengencer Tris Aminomethan Kuning telur
Bahan yang dapat digunakan sebagai media pengencer antara lain Tris
aminomethan kuning telur. Pengencer ini memiliki bahan atau zat yang diper-
lukan oleh spermatozoa yang merupakan sumber makanan baginya, antara lain
yaitu seperti fruktosa, laktosa, rainosa, asam-asam amino dan vitamin dalam
kuning telur sehingga spermatozoa dapat memperoleh sumber energi dalam
jumlah yang cukup untuk motilitasnya.
Pengencer Tris aminomethan kuning telur terdiri dari tris aminomethan,
asam sitrat, laktosa/levulosa, fruktosa, rafinosa, penicillin dan streptomycin.
Fungsi dari masing-masing bahan tersebut adalah:
a. Tris aminomethan kuning telur: sebagai buffer untuk mencegah perubahan
pH akibat metabolisme spermatozoa berupa asam laktat dan memperta-
hankan tekanan osmotik dan keseimbangan elektrolit.
b. Asam sitrat: sebagai buffer pengikat butir-butir lemak kuning telur dan
mempertahankan tekanan osmotik dan keseimbangan elektrolit.
c. Laktosa/levulosa: sebagai sumber energi spermatozoa.
d. Kuning telur: sebagai pelindung spermatozoa terhadap cold shock dan sum-
ber energi spermatozoa.
e. Rafinosa : sebagai sumber energi dan mencegah efek lethal pembekuan.
f. Penicilin streptomycin: mencegah pertumbuhan mikroorganisme dan
meningkatkan daya tahan spermatozoa (Susilawati, 2000).
Khasiat kuning telur terletak pada lipoprotein dan lechitin yang terkandung
di dalamnya yang bekerja mempertahankan dan melindungi integritas selubung
lipoprotein dari sel spermatozoa. Kuning telur juga mengandung glukosa, yang
lebih baik digunakan oleh spermatozoa sapi untuk metabolismenya daripada
fruktosa yang terdapat di dalam semen, berbagai protein, vitamin-vitamin yang
larut dalam air maupun yang larut dalam minyak, dan memiliki viskositas yang
mungkin menguntungkan spermatozoa. Kuning telur mengandung asam-asam
amino L-tyrosin, L-tryptohan, dan L-phenilalanin yang menghasilkan hydro-
gen peroksida pada deaminasi oksiatif. Kuning telur juga mengandung bahan
diantaranya lipoprotein dan lechitin yang berfungsi melindungi spermatozoa
terhadap cold shock, karena kemampuannya mempetahankan dan melindungi
integritas selubung lipoprotein dari membran sel spermatozoa.
Pembuatan Pengencer Tris aminomethan kuning telur
Tabel 7.2. Komposisi Kimia Pengencer Tris Amino Methan dalam 100
Bahan Penyusun Jumlah
Tris Amino Methan 1.363 g
Citric Acid/asam sitrat 0.762 g
Lactose 1.500 g
Fructose 0.500 g
Kuning telur 20.00 ml
Rafinose 2.700 g
Streptomycin 0.100 g
Aquadest 80.00 ml
Penicillin 0.100 g
Cara pembuatan pengencer Tris Amino Methan adalah sebagai berikut:
 Bahan-bahan yang terdiri dari Tris aminomethan, asam sitrat, laktosa,
rafinosa dan fruktosa dimasukkan dalam Erlenmeyer dan ditambahkan
aquadest 80 ml serta dihomogenkan dengan magnetik stirer selama 10-15
menit.
 Setelah dihomogenkan kemudian dimasukkan ke dalam panci dan dipa-

naskan sampai mendidih dengan tujuan untuk sterilisasi.
 Diturunkan suhunya dari 100 0C ke 370C.
 Ditambahkan penicillin dan streptomycin dan dihogenkan lagi selama
10-15 menit
 Dimasukkan dalam refrigerator dan setelah 3 hari dipisahkan antara enda-
pan dan supernatan serta yang digunakan hanya supernatannya sedeangkan
endapan dibuang.
Tabel 7.3. Tris fruktose kuning telur pengencer untuk domba
Komponen Jumlah
Tris (hydroxymethyl) aminomethan 3.634 g
Fruktosa 0.50 g
Kuning telur 14 ml
Aquades Dibuat sampai 100 ml
(Ax et al, 2008)
2. AndroMed®
AndroMed® merupakan suatu medium tanpa kuning telur untuk semen
beku dan cair yang mempunyai angka fertilitas tinggi walaupun tanpa kandun-
gan dari hewan aslinya. Selain itu juga tidak mempunyai resiko kontaminasi
mikroorganisme serta mudah dalam penanganan dan waktu penyimpanan.
Bahan pengencer instant ini berupa cairan tersusun atas aquabidest, fruktose,
glyserol, asam sitrat, buffer, phosfolipid, spectynomycine, lincomycine 15 mg,
tylocin 5 mg, gentamycine 25 mg. AndroMed® adalah pengencer alternatif
baru, hasilnya lebih baik jika dibandingkan dengan pengencer tris kuning telur.
Selain itu andromed bisa menghasilkan motilitas dan ketahanan spermatozoa
yang lebih baik daripada media tris kuning telur. AndroMed® berisi bukan
protein hewani seperti protein kuning telur. motilitas progresif post thawing
AndroMed® juga lebih baik dari Triladyl™.
Salah satu komposisi AndroMed® adalah gliserol. Gliserol merupakan
krioprotektan intraseluler yang memiliki berat molekul 92,10 kd, rumus kimia
C3H5(OH)3 dan berat jenis 1,25 g/cm3 pada suhu 200C (Garner dan Hafez,
2008). Gliserol adalah suatu zat yang dapat berdifusi ke dalam sel-sel sperma-
tozoa dan dapat dimetabolisir dalam proses-proses yang menghasilkan energi
dan membentuk fruktos. Jadi dalam keadaan aerob, gliserol berfungsi sebagai
penghasil fruktosa; lebih sedikit asam laktat yang terbentuk; tetapi spermatozoa
menunjukkan aktiitas yang optimum (Toelihere, 1985).
Peranan gliserol sebagai bahan krioprotektan dalam alur mekanisme
reaksi preservasi sel adalah sebagai penurunan titik beku medium krioprotek-
tan, perlindungan terhadap membran sel, menekan laju pengaruh peningkatan
konsentrasi, serta merubah bentuk dan ukuran kristal es. Disamping perlunya
penambahan gliserol dalam pengencer, juga dibutuhkan penambahan antibio-
tik. Antibiotik ini berfungsi untuk mengeleminir organisme Vibrio foetus serta
akan meninggikan daya tahan hidup spermatozoa. Gliserol dengan pengencer
seharusnya dimasukkan ke dalam semen yang telah bercampur pengencer
tanpa gliserol setelah didinginkan mencapai suhu 50C tidak lebih dari 2 jam
(Anonymous, 2001).
Pembuatan pengencer AndroMed®:
1. Dimasukkan dalam gelas ukur 50 ml.
2. ditambahkan aquabidest dengan perbandingan antara Andromed dan
Aquabidest = 1 : 4, lalu dihomogenkan
3. dimasukkan dalam wadah waterbath dengan suhu 38ºC.
4. Siap untuk digunakan sebagai pengencer semen.
3. Pengencer TCM 199 Kuning Telur

TCM 199 adalah sebutan dari Tissue Culture Medium 199 adalah media yang
biasa digunakan untuk Culture sel atau embrio, produk dari Sigma Medium ini
mengandung bahan-bahan yang lengkap untuk kebutuhan hidup sel.
Dari hasil penelitian yang telah dilakukan hasilnya menunjukkan bahwa
TCM 199 kuning telur lebih baik dari pada Tris aminomethan kuning telur.
Medium pengencer TCM 199 kuning telur ini adalah merupakan hasil pemcam-
puran dari: 1). TCM 199 produk dari Sigma 2). Serum dan 3). Kuning Telur.
Sedangkan Cara Pembuatannya adalah sebagai berikut:
1. TCM 199
TCM 199 adalah produk dari sigma yang berupa cairan atau dalam
bentuk powder, Perbedaan harganya sangat besar sehingga disarankan meng-
gunakan yang dalam bentuk powder yang lebih murah.
Satu sachet TCM 199 dapat untuk 1000 ml larutan, oleh karena cairan
ini banyak kandungan nutrisinya maka cenderung mudah kontaminasi, oleh

sebabnya sebaiknya pembuatan larutan disesuaikan dengan kebutuhan.
Cara Pembuatan:
1. Misalnya yang dibutuhkan 100 ml maka ambil seper sepuluhnya dengan
cara ditimbang dan dimasukkan ke dalam erlenmeyer.
2. Tambahkan aquabides sebanyak 100 ml, maka larutan akan berwarna
kuning yang menandakan pH sekitar 6
3. Tambahkan NaH2PO4 atau NaH2CO3 sedikit demi sedikit hingga warna
menjadi orange, sehingga pH menjadi sekitar 7.
2. Serum
Serum dapat berasal dari produk perusahaan misalnya Fetal Bove Serum
produk dari Sigma, akan tetapi harganya mahal, maka dapat diganti dengan
serum buatan sendiri, cara pembuatannya adalah sebagai berikut:
1. Ambil darah sapi atau kambing dari ternak yang sehat, dengan tabung
venoject yang telah berisi EDTA. Hindari guncangan dan suhu panas,
sehingga segera tabung dimasukkan dalam termos yang telah berisi es
batu dan hindari banyak goncangan.
2. Sentrifugasi 3000 Rpm selama 20 menit.
3. Ambil serum (Cairan yang bening) dengan menggunakan pipet pasteur
secara hati-hati, jangan sampai tercampur darah merahnya
4. Setelah jumlahnya telah terkumpul banyak, maka dilakukan in activasi.
Proses in activasi ini gunanya agar kerja enzim-enzim tidak aktif, sehingga
tidak berpengaruh terhadap spermatozoa, karena yang diambil hanya
bahan-bahan yang terkandung dalam serum.
5. Cara in activasi adalah: Masukkan erlenmeyer yang telah berisi serum
ke dalam air dengan suhu sekitar 58oC selama 20 menit, selanjutnya
simpan di freezer dalam tabung kecil-kecil, sehingga dapat dithawing
sesuai dengan kebutuhan.
3. Kuning Telur
Kuning telur yang sering digunakan sebagai ekstraseluler krioprotektan
adalah kuning telur ayam ras dengan umur kurang dari 3 hari, sedangkan teh
ayam beras, dan itik juga tepat dapat digunakan asalkan umur telur kurang dari
3 hari agar kualitasnya masih baik.
Cara pencampuran medium:
1. Siapkan larutkan TCM 199 dengan pH netral sekitar 7.
2. Tambahkan serum 4 – 10 % dari cairannya
3. Ambil cairan sebanyak 4% dan dibuang, diganti dengan
kuning telur ayam sebanyak 4% kemudian di homogenisasi.
4. Setelah homogen, maka pengencer siap digunakan.
5. Apabila akan digunakan pembekuan, sistem pencampuran Gliserol sama
dengan pembuatan medium B pada tris amino methan kuning telur.
4. Pengencer semen alternatif.

Pengencer semen alternatif yang dimaksudkan adalah pengencer semen
dengan menggunaan bahan bahan yang ada di lingkungan sekitarnya, misalnya
pemanfaatan air kelapa atau air garam isiologis, banyak sekali penelitian yang
menggunakan produk tanaman akan tetapi anya berupa penelitian yang hingga
saat ini belum ada yang diaplikasikan. Misalnya menggunakan sari buah (Pisang,
apokat, tomat, wortel, dll), susu, kuning telur itik, entok, dan madu. Di dalam
perkembangan pengetahuian tentang pengencer alternatif, diucapayakan tidak
mnggunakan produk dari hewan akan tetapi bahan-bahan dari tanaman.
Berdasarkan kebutuhan spermatozoa hidup dengan mengunakan medium
yang sesuai untuk kehidupannya dan juga geraknya, maka di dalam membuat
pengecer perlu diperhitungkan kedua macam fungsi tersebut, selain itu juga daya
simpan dari pengencer tersebut dan yang paling penting adalah diketahuinya
bahan aktif yang terkandung didalam bahan tersebut, sedangkan yang tak kalah
pentingnya terdapatnya bahan ikutan yang bersifat toxic.
Beberapa tahun ini direkomendasikan IB dengan menggunakan semen
air (Tidak beku) dan beberapa pengencer telah direkomendasikan. Pengencer
yang palin banyak digunakan pada sapi adalah kuning telur dengan Na Sitrat
atau Tris, atau susu yang dipanaskan, pengencer ini juga dapat digunakan oleh
spesies lain. Bila untuk semen beku tinggal menambahkan gliserol, akan tetapi
hasil IB menggunakan semen beku tidak pernah lebih baik dari semen cair,
sebab beberapa spermatozoa akan mati setelah dilakukan pembekuan.
Semen yang disimpan dalam suhu sedang (ambien) dapat digunakan
kuning telur + karbonat yang disebut dengan pengencer Illinois Variabel Tem-
peratur (IVT) atau santan (coconut milk) memberikan fertilitasyang memuaskan

sehingga semen dapat disiman beberapa hari pada suhu sedang (Hafez, 2008
b). Semua sapi dapat di IB dengan semen beku yang telah disimpan lama dalam
suhu -196oC dalam keadaan terendam nitrogen cair.
Semen sapi dalam bentuk pelet yang dibekukan dalam CO2 padat (dry ice)
telah digunakan dibeberapa negara, di dalam pengencer digunakan gula rainosa
atau 11% laktosa. Penggunakan pelet adalah suatu teknik penyimpanan yang
tidak mahal, tetapi sangat suit untuk diaplikasikan bila dengan menggunakan
pejantan yang banyak teutama dalam hal identiikasinya.
Semen beberapa spesies sulit dibekukan dalam bentuk pelet, akan tetapi
semen kambing berhasil dikebukan dengan menggunakan skim milk dengan 9
gram glukosa per liter dan 7% gliserol dari semua volume. Kadar gliserol yang
tinggi dapat menurunkan fertilitas semen babi, sehingga hanya diberikan 2 %
atau lebih kecil dari 2% dalam pengencer dan semen beku babi telah berhasil
dikomersiilkan (Hafez, 2008b).
Semen kuda juga dapat dibekukan dalam bentuk pelet atau semen beku.
Pengencer kuning telur- tris cream-gelatin dapat digunakan sebagai pengencer,
penambahan gliserol akan menurunkan fertilitas semen kuda dan beberapa
semen kuda kualitas semen bekunya akan rendah karena belum adalah metode
yang baku, walaupun saat ini IB pada kuda telah berhasil dilakukan.
7.2. Prosesing semen

Prosesing untuk semen cair atau semen beku sampai dengan suhu 5oC
adalah sama
Cooling adalah proses pendinginan semen setelah diencerkan, dimasukkan
dalam gelas ukur tertutup dan ditempatkan pada beaker glass berisi air dengan
suhu 370C kemudian diletakkan di dalam alat pendingin (cool top) (Bearden
dan Fuquay, 1984 dan Hafez, 2008b). Cooling harus berjalan secara perlahan
dan minimal 1 jam untuk menurunkan suhu semen dari 370C menjadi 50C
dan semen harus direndam air untuk mencegah cold shock. Proses pendinginan
menyebabkan stress isik dan kimia pada membran spermatozoa yang dapat
menurunkan viabilitas dan kemampuan memfertilisasi spermatozoa. Hafez
(2008b) merekomendasikan selama 30 menit dalam suhu 30oC agar antibiotik
dapat bekerja didalam pengencer, kemudian diturunkan pelan-pelan hingga
5oC, sedangkan pada babi hingga pada suhu 15oC.
Prosesing semen kambing perlu beberapa kali sentrifugasi untuk men-
cegah terjadinya koagulasi (Corteel, 1977) kemudian didinginkan paling cepat 1
jam dari suhu 35oC hingga 5oC, prosesing pendinginan ini selalu menggunakan
perlindungan air agar tidak cold shock kalau dilakukan kontak langsung antara
semen dengan suhu refrigerator.
Masuda (1992) berpendapat bahwa proses pendinginan semen pada
suhu 5OC sesuai prosedur meliputi: (1) penambahan pengencer A yang dila-
kukan pada suhu 30 OC kemudian (2) pendinginan pada suhu 5 OC dilakukan
selama 1,5-2 jam (3) penambahan pengencer B yang mengandung gliserol (4)
dilanjutkan proses pembekuan setelah 2-3 jam dari proses glisero-ekuilibrasi.
Pendinginan semen pada suhu 5 OC sebelum penambahan pengencer B atau
pengencer yang mengandung gliserol, dapat meningkatkan daya hidup sel setelah
proses pembekuan atau pencairan (thawing). Gliserolisasi di suhu dingin (50C)
memberikan hasil yang lebih baik.
Proses Pendinginan untuk semen cair adalah semen yang telah ditampng
diuji kualitasnya, bila motilitas diatas 70% dapat diproses lebih lanjut. Pengencer
yang telahditetukan (tris aminomethan kuning telur atau andromed) dimasukkan
ke air hangat 37oC. Semen diencerkan sehingga konsentrasinya menjadi 100
juta/mililiter, kemudian dimasukkan ke dalam refrigerator.
Setelah suhu mencapai 5oC, semen dimasukkan ke dalam straw dan bisa
langsung digunakan untuk IB semen cair ini dapat digunakan selama 3 hari.
7.3. Prinsip-prinsip pembekuan sel (Cryobiologi)

Prinsip pembekuan sel, jaringan, embrio dan sel gamet adalah prinsip
bioisika. Sel atau spermatozoa akan mengalami kerusakan pada saat proses
pembekuan dan thawing, karena terbentuknya kristal es didalam sel, pada proses
pembekuan yang cepat akan memperkecil kristal es, sedangkan sistem pembe-
kuan yang lama akan memperbesar kristal es sehingga tingkat kerusakannya
lebih tinggi, Proses pembekuan yang optimal adalah agar sel toleransi terhadap
efek kristal dan efek racun dari pengencer.
Pada saat sel disuhu 0oC bentukan es intra selluler akan terbentuk ka-
rena sebagian besar spermatozoa tersusun oleh air, dengan penambahan intra
seluler krioprotektan (misal gliserol, DMSO, ethileen glicol) akan menurunkan
titik beku sel sepemarozoa hingga – 196OC. Mekanisme perubahan titik beku
disebabkan oleh peristiwa masuknya kripprotektan didalam sel seperti yang
digambarkan oleh gambar 8.1. yaitu intraseluler krioprotektan yang bersifat
higroskopis, akan menarik air yang ada didalam sel, kemudian digantikan oleh
intraseluler krioprotektan. Selain dibutuhkan intraseluler krioprotektan juga
dibutuhkan ekstraseluler krioprotektan yaitu dapat berupa phospolipid atau
glucose, oleh sebab itu bahan-bahan ekstraseluler krioprotektan adalah lesitin
(sehingga sering dipakai kuning telur yang mengandung lesitin), ekstraseluer
lainnya adalah golongan gula yaitu fruktosa, glucosa, rainosa dll. Range tem-
peratur kritis untuk hidupnya sel adalah -4oC menjadi -60oC saat pembekuan,
sedangkan saat thawing antara suhu -70oC menjadi – 20oC.
Proses pendinginan, pembekuan dan thawing mengakibatkan stress
isik dan kimia pada membran spermatozoa yang dapat menurunkan viabilitas
dan kemampuan memfertilisasi spermatozoa. Spermatozoa yang mengalami
cold shock diakibatkan adanya stress oksidatif oleh ROS (Reactive Oxygen Species).
Semen beku juga dilaporkan menyebabkan penurunan viabilitas spermatozoa,
perubahan fungsi spermatozoa, komposisi lipid, dan susunan plasma membrane
spermatozoa dan perubahan kelompok sulfhydryl pada membran protein .
Selama pendinginan, konsentrasi konsentrasi intra-dan extraseluler laru-
tan terjadi perubahan sebagai hasil pembentukan es eksternal dan pengeluaran
air dari dalam sel. Bermacam penelitian dilaksanakan pada system pendinginan
suhu 5 OC selama 20-22 jam sebelum penambahan pengencer B dengan hasil
motilitas spermatozoa jauh lebih baik dari prosedur beku dan lebih baik dari
metode berikut ini yaitu semen yang disimpan setelah proses glisero-ekuilibrasi
atau setelah penambahan pengencer B selama 20-22 jam (Masuda, 1992).
Gliserolisasi adalah penambahan gliserol pada pengencer berfungsi
melindungi dari efek lethal selama proses pembekuan. Penambahan cryoprotec-
tan gliserol dilakukan beberapa jam sebelum pembekuan agar sel spermatozoa
berkesempatan untuk berekuilibrasi dengan gliserol. Gliserol dipakai sebagai
zat pelindung pada proses pembekuan semen dan ditambahkan secara bertahap
pada semen setelah cooling.
Air keluar HIGROSKOPIS
SEL
Sifat
INTRASELULER
KRIOPROTEKTAN
Masuk kedalam
sel
MEDIA PENGENCER
Gambar 7.1. Mekanisme masuknya krioprotektan didalam sel.
Pada proses pembekuan spermatozoa, menempatkan straw 8-10 cm

diatas permukaan nitrogen cair dan dengan menggunakan rak dinamis meng-
hasilkan persentase motilitas dan spermatozoa hidup nyata lebih baik. Keru-
sakan sel spermatozoa akan terjadi apabila dibiarkan -800C selama lebih dari
4 detik. Setelah semen dimasukkan dalam N2 cair maka motilitas dan viabilitas
semen beku dapat dapat dievaluasi sebelum 48 jam setelah pembekuan dengan
dithawing dalam air suhu 370C selama 15-30 detik .
Kemampuan memfertilisasi semen beku lebih rendah dari semen segar.
Hal ini disebabkan adanya kerusakan sel yang dapat menurunkan kemampuan
memfertilisasi. Kerusakan tersebut umumnya terdapat pada akrosom dan
mitokondria. Selama pembekuan, ada dua proses penting yaitu yang pertama
adalah produksi dari ROS yang dapat merubah fungsi dan struktur membran.
Kedua adalah perubahan sistem pertahanan antioksidan berdasarkan penurunan
isi glutathionine intraseluler. Kerusakan membran spermatozoa banyak terjadi
karena pembentukan kristal es khususnya selama titik kritis 0-100C. Kerusakan
terbesar pada plasma membran dan tudung akrosom terjadi selama pembekuan
dan thawing yang diikuti oleh equilibrasi.
Tabel 7.4. Karakteristik bioisika dari beberapa krioprotektan

Parameter DMSO Gliseol Ethylene Glycol
Formulasi kimia (CH3)2SO4 C3H3(OH)3 (CH2OH)2
Berat molekul 78,13 92,10 62,07
Speciic gravity 1,10 1,25 1,11
(g/cm3 pada 20oC)
Mass ( g/L)
1,0 M 78,13 92,10 62,07
3,0 M 234,39 276,30 186,21
Volume (mL/L)
0,1 M 71,00 73,70 5,90
3,0 M 21,10 221,10 167,70
Sigma chemical
Catalog No D-5879 G-7757 E-9129
• Specivic gravity: ratio berat dengan volume dibandingkan dengan berat
dan air pada 0oC
7.4. Banyaknya pengenceran

Semen diencerkan dengan tujuan unttuk memperbanyak volume, se-
hingga satu pejantan dapat dimanfaatkan oleh banyak betina dalam satu kali
ejakulasi. Jumlah pengenceran untuk semen cair lebih banyak dari pada pada
semen beku. Semen cair dapat diencerkan 200-300 X dengan jumlah sperma-
tozoa yang motil lebih rendah, yaitu 5 juta spermatozoa yang motil per IB
masih mempunyai fertilitas yang tinggi.
Proses pengenceran semen sampai dengan 5oC (atau 15oC pada babi)
adalah dengan cara yang sederhana hanya ditabahkan pengencer padasuhu yang
sama. Semen cair pada sapi, kambing, domba dan babi, fertilitas akan menurun
beberapa hari setelah dikoleksi, sehingga Hafez (2005b) merekomendasikan
pada hari berikutnya.
Penambahan gliserol untuk pembekuan dengan cara menambahkan
pada pengencer sesuai dengan metode pembekuannya yaitu ditambahkan pada
suhu 5oC, hal ini karena gliserol akan melindungi sebelum dibekukan. Jumlah
akhir gliserol adalah 5% pada media gula-kuning telur dan 10 % untuk susu.
Penambahan dilakukan pelan-pelan selama 1 jam akan tetapi bebetapa peneliti
telah merekomendapasi dapat dilakukan 1 kali penambahan dalam pengencer.
Proses penyesuaian atau equilibrasi yang optimal adalah 4-6 jam tergantung
media yang digunakan.
Semen beku dapat di kemas dalam 3 cara yaitu:
1. Straw Polyvenyl chloride yang berisi 0,25 – 0,5 ml pengencer semen.
2. Glass ampules yang berisi 0,5 – 1 ml
3. Pelet yang berisi kira-kira 0,1 – 0,2 ml
Semakin kecil kemasan, konsentrasinya semakin tinggi sebab yang dihitung
adalah total spermatozoa tiap dosis IB
7.5. Pembekuan semen sapi

Bahan untuk pembekuan yang dapat digunakan adalah dry ice, liquid cair,
O2 cair dan N2 cair yang paling populer sebab merupakan pilihan yang cocok
karena dapat disimpan dalam waktu yang lama dengan teknik penyimpanan
yang mudah dengan menggunakan kontainer (Hafez, 2008b).
Metode pembekuan dengan mengunakan pelet , straw atau ampul selalu
didinginkan lebih dulu dalam suhu 5oC , kemudian diuapkan diatas N2 cair
sebelum di masukkan di dalam N2 cair, Hal ini karena starw atau ampul mem-
punyai dinding yang kuat, sehingga memberikan kesimpatan agar dinginnya
masuk terlebih dahulu dalam waktu yan cepat. Bila menggunakan ampul kira-kira
3oC per menit hingga – 15oC, biasanya titik bekunya sekitar -150oC dan ampul
juga dimasukkan dalam N2 cair dengan suhu -196oC. Pembekuan yang sangat
cepat akan menyebabkan cold shock dan pembentukan kristal es, pembekuan
dengan cara lambat dapat menyebabkan konsentrasi garam meningkat saat
keluarnya air pada saat pembekuan dan meningkatnya tekanan osmose pada
periode pembekuan aan merusak protein dan lipo protein didalam spermatozoa
dan akrosom.
Hal yang sangat penting adalah selalu melakukan kontrol nitrogen cair
secara periodik dengan melhat volume didalam kontainer, karena bila kurang
akan mematikan spermatozoa yang telah dibekukan.
Recovery Rate = (Motilitas semen beku) X 100%

Motilitas sebelum pembekuan
Recovery rate = Penurunan motiliats pada proses pembekuan

7.6. Thawing semen

Semen beku teta dapat digunakan selama disimpan(terendam) dalam N2
cair. Apabila semen beku sudah pernah dithawing, maka harus segera di IB kan
dan tidak dapat disimpan lagi .
Straw dapat dithawing dengan suhu antara 0oC – 65oC ataulebih tingi.
Proses thawing harus dilakukan dengan hati-hati karena dampak kematian sel
saat thawing sama besarnya dengan proses pembekuan, sehngga direkomenda-
sikan oleh Hafez (2008a) pada kemasan ampul di thawing 8 menit pada suhu
37oC atau lebih, sedangkan dalam bentuk pelet di thawing padasuhu 40oC tapi
dalam praktek sering digunakan dengan menggunakan air es.
Prinsip dari thawing adalah semakin dingin suhu thawing maka waktunya
semakin lama, sebaliknya semakin tinggi suhu thawing maka waktunya semakin
cepat. Problem yang ada di insemiantor di Indonesia adalah lokasi antar peter-
nak yang berjauhan sehingga apabila harus membawa kontainer menjadi beban
yan berat, maka dilakukan uji coba thawing dilakukan di laboratorium semen
beku kemudian dimasukkan didalam termos es maka selama 3 jam masih dalam
kondisi layak untuk IB, uji coba ini dapat diaplikasikan oleh inseminator yang
sulit mencari nitrogen cair atau lokasi yang saling berjauhan.
7.7. Kebijakan didalam menggunakan teknik Inseminasi Buatan

Tujuan utama dari pemanfaatan Inseminasi Buatan adalah meningkatkan
mutu genetik ternak, sehingga ternak atau sapi yang dengan kualitas unggul
hanya berada di Balai Inseminasi Buatan dan dimanfaatkan semennya untuk
memperbaiki sapi-sapi yang berada di peternak.
Kebijakan menentukan semen semen beku yang digunakan perlu di-
pertimbangkan untuk lokasi yang sulit pengadaan nitrogen cairnya dan lokasi
yang saling berjauhan, hal ini karena sekali saja nitrigen cair habis atau kurang
dari separo tingginya straw di dalam kontainer akan menyebabkan kematian
spermatozoa. Kode didalam kontainer perlu diperhatikan 43 berarti setiap 43
hari kontainer tersebut perlu diisi nitrogen cair, paling lama waktu pengisian
nitrogen cair adalah 1 bulan apabila kondisi kontainer baik (tidak ada prembe-
san atau kebocoran). Apabila depo penyimpanan semen tidak bisa mensuplai
nitrogen cair secara rutin maka perlu dipertanyakan kulitas semen beku yang
disimpannya. Kondisi yang tidak pasti tersebut mengharuskan para petugas
didaerah dan inseminator mampu melakukan uji kualitas semen (minimum
motilitasnya), agar semen beku yang di IB kan kepada sapi di masyarakat benar-
benar dengan kualitas standar Nasional Indonesia (SNI)
Lokasi yang demikian bisa menggunakan semen cair yang dilakukan oleh
UPT pembibitan setempat atau menggunakan sistem intensiikasi kawin alam,
asalkan pejantan yang dipergunakan dengan mutu genetik unggul.
PROSEDUR PEMBEKUAN SEMEN

DENGAN PENGENCER TRIS AMINO METHAN KUNING TELUR
Semen
Pendinginan dari suhu 37oC ke 5oC selama 2 jam
Pendinginan pada suhu 5oC selama 2 jam atau 22 Jam
Gliserolisasi
Penambahan gliserol (diluterB) dengan 3 tahap masing- Masing 2 tahap

berselang waktu 15 menit
Pencetakan
Pengemasan ke dalam mini straw dilakukan di dalam Cool tub
Equilibrasi
Proses adaptasi spermatozoa terhadap pengencer (2 jam) pada cool tub
Pre Freezing
Straw yang telah dikemas dalam rak kemusian dimasukkan ke dalam uap
Nitrogen cair (4-5 cm diatas Nitroge cair) selama 9 menit
Freezing
Straw direndam dalam nitrogen cair
Uji Post Thawing Motility (PTM)

Trinil susilawati
Gambar 7.2. Prosedur pembekuan semen hasil sering menggunakan pengencer

Tris Aminomethan Kuning Telur
PROSEDUR PEMBEKUAN SEMEN

DENGAN PENGENCER ANDROMED@
Semen
Pendinginan dari suhu 37oC ke 5oC selama 2 jam
Pendinginan pada suhu 5oC selama 2 jam atau 22 Jam
Pencetakan
Pengemasan ke dalam mini straw dilakukan di dalam Cool tub
Equilibrasi
Proses adaptasi spermatozoa terhadap pengencer (2 jam) pada cool tub
Pre Freezing
Straw yang telah dikemas dalam rak kemusian dimasukkan ke dalam uap
Nitrogen cair (4-5 cm diatas Nitroge cair) selama 9 menit
Freezing
Straw direndam dalam nitrogen cair
Uji Post Thawing Motility (PTM)

Trinil susilawati
Gambar 7.3. Prosedur pembekuan semen menggunakan pengencer

Andromed®.
BAB
INSEMINASI BUATAN
VIII
Inseminasi Buatan (IB) adalah salah satu teknologi Reproduksi yang
mampu dan telah berhasil untuk meningkatkan perbaikan mutu genetik ternak,
sehingga dalam waktu pendek dapat menghasilkan anak dengan kualitas baik
dalam jumlah yang besar dengan memanfaatkan pejantan unggul sebanyak-
banyaknya, Inseminasi Buatan ini sangat kontras dengan keberhasilan Transfer
Embrio didalam perbaikan mutu genetik. Perbaikan mutu genetik menggunakan
IB pada sapi perah dapat digunakan sebagai progeni tes untuk menghasilkan
pejantan unggul yang dapat dimanfaatkan menghasilkan spermatozoa salah
satunya berdasar pada seleksi ukuran testisnya.
Secara umum IB berfungsi untuk: 1) Perbaikan mutu genetik 2) Pen-
cegahan penyakit menular 3) Rekording lebih akurat 4) Biaya lebih murah
5) mencegah kecelakaan yang disebabkan oleh pejantan. IB dapat difasilitasi
dengan menggunakan sinkronisasi estrus dan dapat dilakukan pengaturan jenis
kelamin dengan pemanfaatan pemisahan spermatozoa X dan Y (Ax et al 2008,
Susilawati, 2000).
Kelemahan dari IB jika tidak dikelola dengan baik adalah: 1) Bila seleksi
pejantan salah maka bisa menyebarkan sifat jelek 2) Membutuhkan ketram-
pilan yang tinggi dari Balai Inseminasai Buatan, Penympanan selama transport,
Inseminator juga peternaknya 3)Bisa menghilangkan sifat bangsa lokal dalam
waktu yang cepat.
8.1. PENAMPUNGAN SEMEN

Pejantan Sapi muda pertama kali dapat ditampung pada umur 12 bulan,
Domba, Kambing dan Babi adalah 7 bulan sedangkan kuda 24 bulan (Ax et
al, 2008).
Penampungan semen terdapat 3 metode yaitu: Ada beberapa metode:
1) Massage ( Pemijatan/pengurutan) 2) Vagina Buatan dan 3) Elektro ejacula-
tor. Metode Massage digunakan pada unggas, Babi dan lainnya, vagina buatan
143
144 Inseminasi Buatan
digunakan untuk penampungan semen ternak secara rutin sedangkan elektro

ejakulator digunakan untuk hewan langka atau ternak yang tidak dapat ditam-
pung menggunakan vagina buatan karena kecelakaan misalnya.
Secara rutin pejantan sapi dapat ditampung setiap hari senin, rabu dan
jumat, akan tetapi untuk menghasilkan kualitas yang baik dapat dilakukan
seminggu dua kali rata-rata total spermatozoa yang didapatkan adalah 8-16
bilion. Rata-rata per minggu dihasilkan 30 bilion spermatozoa. Ternak jantan
dapat dilakukan penampungan dengan menggunakan pemancing ternak betina,
sesama jantan maupun pantom. Masing-masing individu mempunya kesukaan
atau kebiasaan sendiri-sendiri. Begitu juga dengan lokasi penampungan dan
tempat juga mempengaruhi mau tidaknya pejantan ditampung semennya.
Sebelum penampungan semen lokasi tempat penampungan dibersih-
kan dengan desinfektan, ternak dimandikan dan bagian prenulum prepution
dibersih-kan, hal ini penting sebab apabila terdapat penyakit menular akan ditu-
larkan ke banyak betina, atau bila tercampur dengan semen akan menyebabkan
kerusakan semen dengan banyaknya mikroba di dalam semen.
Gambar 8.1. Penampungan semen dengan menggunakan Vagina Buatan

Sebelum dilakukan penampungan pejantan dilakukan fals mounting 3-5
kali yang bertujuan untuk meningkatkan libidonya. Vagina Buatan yang telah
dipersiapkan sesuai dengan suhu badan dan telah diberi vaselin dibagian ujung
karetnya, dengan menggunakan sudut kemiringan 45o dan ujungnya terdapat
tabung reaksi yang telah ditutup bahan gelap agar semen yang dihasilkan tidak
terkena sinar matahari langsung. Semen yang dihasilkan dilakukan uji kualitas
semen, pengenceran dan pembekuan sehingga dapat digunakan untuk IB.
Gambar 8.2. Penampungan semen babi menggunakan pantom di BIBD

Baturiti Bali
Gambar 8.3. Penampungan semen dengan menggunakan metode masage dan

semen di lakukan penyaringan di BIBD Baturiti Bali.
Tabel 8.1. Frekuensi koleksi semen dan persiapan Vagina Buatan (Ax et al,
2008)
Frekuensi koleksi/
Persiapan Vagina Buatan
penampungan semen
SAPI
Semen ditampung 2-3 kali per Temperatur vagina buatan lebih penting
minggu dari pada tekanan di penis, sehingga
suhu air perlu dikontrol.
Tekanan perlu dipertahankan hingga
selesai, temperatur di dalam VB 45oC
atau berkisar antara 38 – 55oC
DOMBA DAN KAMBING
Domba jantan dapat ditampung be- Temperatur dan teknik penampungan
berapa kali dalam satu minggu karena semen mirip dengan sapi. Domba
mempunyai cadangan di epididimis. kurang kuat etapi ejakulasinya cepat,
Jumlah ejakulasi pada kambing lebih sehingga dibutuhkan koordinasi antara
sedikit dari pada domba kolektor dengan domanya.
BABI
Jumlah spermatozoa yang dikeluar- Tekanan adalah yang terpenting saat
kan banyak, juga karea adanya keter- penampungan, karena tipe penis yang
sediaan di epididimis. panjang, sehingga saat penampungan
Tidak direkomendasi untuk ditam- cara yang digunakan adalah kolektor
pung setiap hari, sebaiknya 2-5 hari menggenggam penisnya, sehingga da-
sekali. lam beberapa menit akan keluar
KUDA
Sama dengan babi, jumlah sperma- Cuci penis dengan air sabun dan cuci
tozoa yang dikeluarkan banyak dan lagi dengan air bersih untuk menghi-
direkomendasikan 2-3 hari selang langkan semua kotoran. VB yang digu-
penampungannya nakan harus lebih besar dari penis yaitu
diperkirakan sebesar penis saat ereksi
8.2. LIBIDO DAN KUALITAS SEMEN

Penilaian tingkah laku seksual yang selama ini berdasarkan false mounting,
lama ejakulasi, lama libido, daya dorong, daya jepit, daya lompat dan kualitas
ereksi. Hal ini belum ada standard baku metode mana yang paling akurat untuk
menentukan tingginya libido yang berhubungan dengan kualitas semen.
Hasil penelitian Eniek dkk (2003) yang melakukan pengukuran lama
ejakulasi, jumlah fals mounting dan lama libido pada sapi limosin, Bali dan
madura seperti yang tertera pada tabel 9.2. Lama ejakulasi adalah sapi mulai
di dekatkan hingga terjadi ejakulasi, Fals mounting adalah jumlah menaiki yang
digagalkan hingga ereksi dan ejakulasi sedangkan libido adalah mulai didekatkan
hingga menaiki.
Tabel 8.2. Rata-rata Lama Ejakulasi, Jumlah False Mounting dan Lama Libido
pada berbagai bangsa sapi potong
Jenis Lama ejakulasi (detik) Jumlah False Mounting Libido (detik)
Limousin 411,67 ± 131,21 5,07 ± 1,28 28,27 ± 24,53
Bali 541,13 ± 463,85 4,36 ± 1,55 60,87 ± 35,47
Madura 244,33 ± 70,64 4,40 ± 1,59 21,47 ± 33,13
Brahman 343,13 ± 163,09 5,40 ± 1,88 18,60 ± 22,89
Berdasarkan data tersebut di atas bisa diamati bahwa sapi Madura dan
sapi Brahman mempunyai lama ejakulasi yang pendek (cepat) dan libido yang
cepat dibandingkan dengan sapi Limousin dan Bali.
Nilai dari parameter tingkah laku seksual yang tinggi belum tentu Meng-
hasilkan kualitas semen yang bagus pula. Bangsa, umur, lingkar scrotum, daya
adaptasi, situasi lingkungan saat ditampung semennya serta keahlian petugas
yang melaksanakan penampungan juga berpengaruh terhadap kualitas dan
kuantitas semen yang dihasilkan.
Kualitas semen yang diamati terdiri atas: motilitas spermatozoa(%),
volume ejakulasi (cc), konsentrasi spermatozoa per cc semen (juta) dan total
spermatozoa motil per ejakulat (juta).
Tabel 8.3. Kualitas semen pada berbagai bangsa sapi potong
Volume Total spermatozoa
Motilitas ejakulat Konsentrasi spermatozoa motil per ejakulat
Bangsa (%) per cc semen (juta)
(cc) (juta)
Limosin 66,67 6,04 1.483,80 5.785,30
Bali 67,33 5,71 1.049,47 4.103,00
Madura 71,67 4,92 1.202,27 4.173,93
Brahman 68,33 4,91 1.276,93 4.637,24
Total spermatozoa motil perejakulat merupakan perkalian dari konsen-
trasi spermatozoa motil per cc dengan volume ejakulat yang dihasilkan. Rata-
rata total spermatozoa motil per ejakulat tertinggi sebesar 5.785,30 ± 1.410,67
juta terjadi pada sapi Limousin, sedangkan nilai terendah sebesar 4.173,03
± 1155,04 juta didapatkan pada sapi Madura.
Produksi spermatozoa perejakulat secara berurutan menurun mulai

dari sapi Limousin, Brahman, Bali dan Madura. Secara genetik setiap bangsa
sapi adalah berbeda. Produksi spermatozoa harian pada berbagai bangsa sapi
adalah berbeda. dimana terbesar adalah pada sapi Limousin diikuti dengan sapi
Brahman, kemudian Bali dan Madura. Salah satu kekurangan sapi pejantan Bali
adalah libido yang kurang bagus apabila dibandingkan dengan sapi pejantan
yang lain. Untuk itu perlakuan penampungan semen perlu dilakukan sedemikian
rupa selain stimulasi seksual dan preparasi seksual yang cukup dalam hal ini
pengamatan parameter kualitas ereksi yang bagus dan suasana lingkungan yang
cukup tenang agar diperoleh hasil semen yang optimal.
Sapi Madura merupakan sapi pejantan terkecil bila dibandingkan dengan
ke tiga bangsa yang lain dengan berat badan rata-rata 350 kg . Keunggulan pada
sapi Madura antara lain adalah dapat tumbuh baik pada kualitas pakan yang
jelek, persentase karkas yang tinggi dengan kualitas daging yang cukup baik,
daya adaptasi yang tinggi terhadap lingkungan tropis, dapat berlari cepat dan
pada pejantan madura umumnya mempunyai libido yang cukup bagus. Kualitas
semen pada sapi Bali lebih baik daripada sapi Madura dapat disebabkan oleh
nutrisi pada saat pejantan tersebut muda dimana kondisi lingkungan di pulau
Madura lebih gersang dan panas daripada di Bali, sehingga kebutuhan akan
protein maupun energi lebih dapat dipenuhi pada sapi Bali.
Di antara individu pada masing-masing bangsa terdapat perbedaan
kualitas semen yang nyata yaitu pada sapi Limousin, Bali dan Brahman. Pada
sapi Bali dan Brahman perbedaan terjadi karena adanya perbedaan umur dan
lama adaptasi yang menunjukkan bahwa pada masing-masing sapi bali dan
brahman terdapat perbedaan umur dan lama adaptasi sehingga pada sapi yang
mempunyai umur lebih dewasa produksi spermatozoanya lebih tinggi daripada
yang berumur lebih muda terlebih yang masih pubertas.
Fakta tersebut juga sesuai dengan produksi spermatozoa sapi madura
diantara individu sapi Madura lainnya, karena mempunyai umur relatif sama
dan lama adaptasi yang sama pula. Akan tetapi hal ini berbeda dengan fakta sapi
Limousin yang mempunyai umur relatif sama dan lama adaptasi yang sama tetapi
kualitas spermatozoanya terdapat perbedaan pada produksi spermatozoanya.
Pengaruh individu dan lingkungan cuaca berpengaruh pula pada kualitas semen.
Hal ini menunjukkan bahwa perbedaan genetik antar individu, pengaruh libido
atau tingkah laku seksual akan mempengaruhi kualitas semen.
8.3. TEKNIK INSEMINASI BUATAN

Teknik atau metode Inseminasi Buatan ada 2 macam yaitu Rektovaginal
dan transservikal. Pada sapi adalah dengan metode rektovaginal yaitu tangan
dimasukkan kedalam rektum kemudian memegang bagian servik yang paling
mudah diidentiikasi karena mempunyai anatomi keras, kemudian insemination
gun dimasukkan melalui vulva, ke vagina hingga ke bagian servik. Sedangkan
pada Babi, kambing dan domba adalah dengan metode transervikal. Pada
kambing dan domba dapat menggunakan spikulum untuk melihat posisi servik,
kemudian insemination gun dimasukkan hingga mencapai servik, sedangkan
pada babi menggunakan cattether dan dimasukkan hingga kedalam uterus.
Tabel 8.4. Deteksi berahi dan prosedur Inseminasi Buatan (ax et al, 2008)
Deteksi berahi Prosedur Inseminasi Buatan
SAPI
Deteksi berahi dilakukan tiap pagi dan Sapi yang akan di IB sebaiknya di-
sore, apabila tetap berdiri saat dinaiki letakkan dikandang jepit atau diikat
berarti berahi dan diupayakan tidak stress, semen di
deposisikan di bagian uterus
DOMBA
Berahi sulit dideteksi, sehingga deteksi Domba betina diangkat bagian
menggunakan pejantan yang di vasek- belakang, kemudian di IB pada posisi
tomi yang dilengkai dengan harness vagina/servik, selain itu juga dapat
crayon dengan metode laparoskopi.
BABI
Babi yang lagi berahi dapat diamati Babi betina berahi ditekan bagian
menggunakan pejantan yang di vasek- punggung belakangnya, kemudian
tomi. Betina yang sedang berahi apabila tabung yang telah berisi semen
ditekan pada bagian punggungnya akan dimasukkan sampai ke servik, disa-
tetap diam berdiri. rankan volume banyak dan konsen-
Induk akan berahi setelah 3-8 hari me- trasinya tinggi
nyapih anaknya, oleh sebab itu waktu
menyapih anak biasanya digunakan
untuk sinkronisasi berahi
KUDA
Deteksi berahi menggunakan teaser Daerah vulva dibersihkan sebelum di
(jantan yang di vasektomi), ditandai IB, untuk meminimalisasi kontami-
dengan mengangkat ekornya saat di nasi, tangan dimasukkan mengguna-
dekati pajantan, tetap berdisi dan be- kan glove yang telah diberi pelicin
berapa kali kencing dan kontraksi pada dan kateter dimasukkan hingga ke
bagian vulvanya servik, semen dideposisikan di bagian
uterus.
8.4. TEKNIK INSEMINASI UATAN PADA KAMBING

Peralatan-Peralatan yang digunakan dalam Inseminasi Buatan pada
Kambing seperti pada gambar 8.4
Container Nitrogen Cair Insemination Gun
Berbagai Macam Spiculum

Gambar 8.4. Berbagai alat yang digunakan untuk IB pada kambing
Tahapan-tahapan Untuk Inseminasi Buatan pada kambing

1. Persiapkan Semua Peralatan Untuk Inseminasi Buatan
2. Ikat dengan kuat kambing yang sedang estrus
3. Ambil straw yang berisi semen beku dari Container Nitrogen Cair.
4. Masukkan straw kedalam air kran selama 10 detik
5. Ambil dan bersihkan dengan menggunakan tissue
6. Masukkan ke dalam Insemination Gun
7. Potong Bagian Ujung penutup
8. Masukkan plastik Sheet ke dalam Insemination Gun
9. Angkat kambing sehingga Inseminator Mudah untuk lakukan Inseminasi
Buatan.
10. Masukkan spikulum ke dalam vulva dan buka bagian vaginanya dan cari
posisi serviknya.
11. Masukkan Insemination gun yang telah dipasang straw, ke dalam vagina
sampai masuk ke dalam servik.
12. Keluarkan semen pada posisi servik
13. Tarik Insemination Gun
Keberhasilan IB pada kambing lebih rendah dari pada pada sapi karena
terdapat beberapa kesulitan yaitu:
1) Tanda-tanda berahi pada kambing sulit diamati karena tidak mengeluarkan
suara gaduh, sehingga deteksi berahi untuk kambing yang paling tepat adaah
dengan menggunakan pengusik pejantan.
2) Teknik IB menggunakan transervikal, sehingga menggunakan spikulum,
pada kambing lokal umumnya menggunakan spikulum manusia sehingga
kesulitan menemukan bagian servik, sehingga dibutuhkan spikulum yang
dapat mencapai servik.
Gambar 8.5 Tahapan IB pada kambing

FAKTOR-FAKTOR YANG
BAB IX
MEMPENGARUHI DAN
EVALUASI KEBERHASILAN
INSEMINASI BUATAN
Inseminasi Buatan (IB) pada sapi merupakan yang pertama kali
berkembang dan hingga saat ini banyak di aplikasikan pada masyarakat dan
terbukti dapat meningkatkan produktiitas sapi, Selain pada sapi IB juga telah
dilaksanakan pada beberapa ternak yang lain yaitu kuda, kambing, babi dan
berbagai jenis unggas.
Keberhasilan Inseminasi Buatan di pengaruhi oleh beberapa hal yaitu: (1)
Kualitas semennya (2) Manusianya (Inseminator dan peternaknya) dalah hal
ketepatan waktu IB dan penempatan semen (deposisi semen) (3) Fisiologi
betinanya.
9.1. KUALITAS SEMEN

Parameter kualitas semen yang terpenting adalah konsentrasi dan moti-
litas progressifnya atau total spermatozoa yang bergerak kedepan karena hanya
spermatozoa yang progressif saja yang mampu untuk melakukan fertilisasi.
Petugas dinas peternakan tingkat propinsi hingga di peternak termasuk
inseminator diwajib kan mempunyai keterampilan di dalam uji kualitas semen,
terutama didalam menentukan motilitasnya, hal ini karena yang didistribusikan
adalah semen yang mempu memfertilisasi, sehingga di setiap tahapan penyera-
han semen beku harus dilakukan uji kualitas semen. Quality control dengan
uji kualitas semen perlu dilakukan secara periodik seiring dengan cek volume
nitrogen cair, sebab satu kali saja volume nitrogen cair sampai di posisi setelah
berdirinya straw saja dapat berakibat kematian spermatozoa.
153
154 Faktor-Faktor Yang Mempengaruhi Dan Evaluasi Keberhasilan Inseminasi Buatan
Faktor-Faktor yang
mempengaruhi
Keberhasilan IB
Manusianya
Kondisi Fisiologi
Kualitas semen (Inseminator dan
Betinanya
Peternak
Inseminator : Genetik
Motilitas dan
Ketepatan deposisi, Waktu, Anatomi
konsentrasinya
Teknik penyimpanan dan Lingkungan
Thawing
Peternak :
Deteksi Berahi
Waktu memberitau Inseminator
Pemeliharaan
Gambar 9.1. Faktor-faktor yang mempengaruhi keberhasilan IB
Kualitas Spermatozoa harus

Tetap dijaga
Peralatan Proses pembekuan

Harus Selalu
Terendam Nitrogen
Cair
Saat thawing termasuk

waktu yang kritis
Gambar 9,2. Peralatan penyimpanan semen beku dalam Nitrogen Cair

Kualitas semen harus tetap terjaga, oleh sebab itu semen beku harus selalu
terendam di dalam nitrogen cair, sekali saja tidak terendam maka spermatozoa
beku tidak dapat hidup setelah di thawing. Dalam kondisi tersebut maka volume
nitrogen cair perlu di kontrol agar semen beku tetap terendam. Apabila di suatu
daerah tidak dapat secara kontinyu tersedia nitrogen cair maka sebaiknya tidak
menggunakan semen beku untuk Inseminasi Buatan, tetapi kawin alam dengan
menggunakan pejantan unggul atau menggunakan semen cair.
9.2. SUMBER DAYA MANUSIA

Yang dimaksud manusianya adalah Inseminator dan peternaknya. In-
seminator menentukan keberhasilan Inseminasi buatan terutama di dalam (1)
Teknik Thawing semen beku (2) Deposisi semen (3) ketepatan waktu IB.
Efek dari thawing sama dengan saat proses pembekuan terhadap kualitas
semen, apabila salah dalam thawingnya maka membran spermatozoa akan rusak,
proses thawing adalah suatu proses keluarnya intra celluler cryoprotektan (Misal
Gliserol) dari dalam sel dan digantikan lagi dengan air. Thawing dapat dilakukan
dengan air es, air kran maupun air hangat. Pada proses thawing perlu dilakukan
peningkatan suhu yang perlahan, bila menggunakan air es maka proses thawing
lebih lama, sedangkan bila menggunakan air hangat hanya beberapa detik.
Deposisi semen juga berpengaruh terhadap keberhasilan semen, sema-
kin dalam penempatan semen di dalam organ reproduksi, maka peluang untuk
terjadinya kebuntingan semakin tinggi, akan tetapi harus diyakinkan bahwa
ternak tersebut belum bunting.
Ketepatan waktu IB adalah saat menjelang ovulasi, yaitu kalau pada
sapi apabila menunjukkan tanda-tanda berahi pagi hari maka di IB saat sore,
sedangkan bila tanda-tanda berahi sore hari maka pelaksanaan IB pagi hari
berikutnya. Pelaksanaan IB seyogyanya tidak dilakukan pada siang hari, karena
lendir servik mengental pada siang hari, sedangkan pada pagi, sore maupun
malam lendir servik menjadi encer, hal tersebut juga berdampak pada keber-
hasilan IB saat siang yang lebih rendah dari pada saat pagi, sore atau malam
Susilawati, 2000)
Selain inseminator yang berperanan di dalam keberhasilan Inseminasi
Buatan, maka peternak harus mempunyai ketrampilan di dalam mengidentii-
kasi berahi. Hal ini sangat menentukan ketepatan IB, Sehingga apabila peternak
semakin sering melakukan pengamatan berahi maka keberhasilan IB semakin

baik. Kondisi atau waktu yang tepat dari proses melakukan IB adalah seperti
pada gambar 9.3.
Gambar 9.3. Waktu yang tepat untuk Inseminasi Buatan pada Sapi (Hafez,
2008)
Gambar 9.4. Waktu yang tepat untuk Inseminasi Buatan pada Sapi
Deposisi semen menentukan keberhasilan Inseminasi Buatan, hasil
penelitian Susilawati dkk (2010) menunjukkan bahwa pada sapi Peranakan
Ongole, Limosin dan Simental keberhasilan lebih tinggi pada posisi 4+ atau
modiied (metode ini disebut dengan Deep Insemination). Posisi modiied
adalah pengeluaran semen dengan inseminastion gun pada posisi 4+ kornua
kanan, 4+ kornua kiri, dan di posisi 4.
Gambar 9.5. Teknik Inseminasi Buatan (Hafez, 2008)
Gambar 9.6. Posisi Deposisi semen pada sapi

Deposisi semen 4+ lebih baik diletakkan dikornua uteri yang ovariumnya
sedang ovulasi atau terdapat korpus luteum saat diraba, hal itu menunjukkan
pada oviduk terdapat sel telur, sehingga dengan menempatkan posisi semen di
kornua yang sama akan menghasilkan kebuntingan yang lebih tinggi.
Deposisi semen 4+ ini juga dapat digunakan pada saat IB agak terlam-
bat, misal tampak berahi pagi, seharusnya sore di IB akan tetapi inseminator
baru sampai menjelang malam (senja), maka dapat di IB pada posisi 4+ atau
modiied.
9.3. FISIOLOGI SAPI BETINA

Keberhasilan dari IB salah satunya yang terpenting adalah kondisi isio-
logi sapi betinanya.Kondisi isiologi ini dipengaruhi oleh faktor genetik dan
lingkungan.
a. Faktor genetik
Faktor genetik ini bervariasi di antara bangsa dan individunya, hal ini
berhubungan juga dengan ketahanan di daerah tropis. Ternak lokal mempunyai
adaptasi yang lebih baik dibandingkan ternak dari daerah sub tropis, hal ini akan
berdampak pada reproduksinya, karena keberhasilan reproduksi ditentukan
oleh isiologi reproduksinya yaitu dipengaruhi kondisi hormonal dan neuro
hormonalnya. Sebagai contoh adalah keturunan F2 dari sapi Limousin dan
Simental, juga sapi Brahman Cross ex import sebagaian besar adalah sub fertil
(S/C nya tinggi).
b. Faktor Lingkungan
Lingkungan yang mendukung berdampak langsung pada ternaknya dan
secara tidak langsung kepada pakannya, sehingga untuk daerah yang sejuk dan
subur akan lebih mendukung keberhasilan reproduksinya, dibandingkan di
daerah yang panas.
Berdasar pada kedua faktor di atas, maka perlu diatur pemilihan bangsa
di suatu lokasi berdasarkan kondisi alamnya, misalnya ternak lokal dapat di-
tempatkan di lokasi yang panas dan tandus, sedangkan sapi yang berasal dari
sub tropis sesuai di daerah yang sejuk dan subur, oleh sebab itu perlu difahami
beberapa jenis ternak yang berasal dari sub tropis dan tropis yang cocok di
lingkungan tersebut.
Pengaruh lingkungan dapat dibedakan menjadi 2 yaitu (1) lingkungan
yang tidak dapat dikendalikan oleh manusia yaitu suhu, iklim, cuaca, hujan dll
(2) Sedangkan yang dapat dikendalikan oleh manusia adalah manajemen peme-
liharaan yaitu perkandangan, sistem peneliharaan, kualitas dan kuantitas pakan
yang dinerikan, pengendalian penyakit dan sistem perkawinannya.
Tingkat keberhasilan Inseminasi Buatan atau reproduksi sangat dipenga-
ruhi oleh lingkungan yang dapat dikendalikan oleh manusia, sehingga apabila
sistem pemeliharaannya baik, maka kecil kemungkinannya terkena penyakit
dan fertilitasnya tinggi.
Kebutuhan pakan untuk reproduksi sama dengan kebutuhan hidup
pokok (maintenence), sehingga apabila kebutuhan pokoknya terpenuhi maka
ternak akan bereproduksi terutama pada ternak lokal. Pada ternak sub tropis
sering mengalami gangguan reproduksi karena tidak bisa beradaptasi dengan
lingkungan tropis, hal ini disebabkan hormon-hormon gonadotropin dan steroid
tidak dapat dihasilkan secara optimal, sehingga berdampak pada tidak munculnya
berahi atau tidak ovulasi dan lebih ekstrim lagi adalah kematian embrio dini.
Kematian embrio dini ini banyak terjadi pada sapi Friesian Holstein yang bunting
dan menghasilkan susu, kebutuhan energi dan proteinnya tidak terpenuhi.
c. Anatomi reproduksi dan kondisi hormonnya normal.
Anatomi reproduksi ternak sangat menentukan atas keberhasilan IB,
pada ternak yang anatomi reproduksinya tidak normal pada umumnya tidak
dapat bunting. Cara yang sederhana yang dapat digunakan untuk menentukan
normal tidaknya anatomi reproduksinya dengan memilih induk yang telah
mampu bunting bila digunakan sebagai bibit, karena induk yang telah mampu
bunting berarti anatomi dan hormonnya dalam keadaan normal.
d. Body condition score (BCS)
Body Condition Score(BCS) dapat digunakan untuk mengukur kondisi
suatu ternak, yaitu termasuk dalam kategori kurus, sedang atau gemuk (kelebihan
berat badan)/Apabila BCS menggunakan Score 1-5, maka kondisi yang baik
untuk bibit adalah 2-4 yaitu dalam kondisi berat badan yang sedang umumnya
isiologinya normal, ternak yang terlalu kurus atau kegemukan umumnya akan
kesulitan dalam bereproduksi,
e. Ekto parasit dan endoparasit
Ektoparasit adalah parasit yang ada di bagian kulit ternak, misalnya
caplak, kudis, kutu dll, sedangkan Endoparasit yang umum pada ternak adalah
cacing. Ternak yang terkena ektoparasit dan atau endoparasit akan terganggu
reproduksinya karena ternak mengalami stress. Gejala ini paling sering tampak
adalah silent heat (tidak muncul tanda-tanda berahi), tidak ovulasi atau terjadinya
kematian embrio, hal ini dapat dibuktikan bahwa setelah sapi mengalami hal
tersebut ditas dan diberi obat cacing dan dibersihkan kulitnya dari ektoparasit
maka tampak tanda-tanda berahinya.
9.4. EVALUASI KEBERHASILAN INSEMINASI BAUTAN

Jumlah perkawinan perkebuntingan (S/C) merupakan suatu ukuran
untuk mengetahui berapa kali sapi betina dikawinkan sampai bunting. Nilai
normal berkisar antara 1,6 sampai 2,0. Semakin rendah nilai tersebut menunjuk-
kan tingkat kesuburan sapi semakin tinggi. Besarnya nilai jumlah perkawinan
perkebuntingan dipengaruhi oleh kualitas semen yang rendah selain kurang
trampilnya petugas inseminator di lapang (Toelihere, 1981a).
Diagnosa kebuntingan pada sapi dapat dilakukan dengan mengetahui
ukuran Non-Return Rate (NRR), palpasi rektal dan Conseption Rate (CR) (Toeli-
here, 1985).
Non Return Rate (NRR) yaitu persentase jumlah ternak yang tidak kembali
estrus antara hari ke 60-90 setelah dikawinkan. Nilai-nilai ini disebut juga nilai
NRR pada 28 sampai 35 hari atau nilai NRR pada 60 sampai 90 hari. Non return
rate merupakan kriteria umum yang digunakan secara luas untuk menentukan
kebuntingan. Meskipun demikian terdapat beberapa kelemahan-kelamahannya
yaitu tidak semua ternak dapat diamati secara cermat sehingga tidak semua ternak
yang kembali berahi diketahui. Ada juga kejadian dimana ternak bunting dapat
menunjukkan berahi dan sapi tidak bunting atau mengalami abortus menunjuk-
kan anestrus (Lindsay et al.1982).
Palpasi rektal merupakan suatu cara untuk mendiagnosa kebuntingan.
Indikasi ternak bunting dapat diketahui melalui palpasi per rektal terhadap
cornua uteri dimana cornua uteri yang membesar berisi cairan plasenta (am-
nion dan allantois), palpasi per rektal cornua uteri terhadap kantong amnion,
Perabaan dan pemantulan kembali fetus di dalam uterus yang membesar yang
berisi selaput fetus dan cairan plasenta dan melalui perabaan plasenta. Untuk
mengurangi resiko yang mungkin timbul dalam melakukan palpasi rectal baik
pemeriksa maupun ternak maka diperlukan kandang jepit dan sarung tangan
yang menutupi lengan untuk menjaga kebersihan. Palpasi pada 35-40 hari
kebuntingan lebih membutuhkan kemahiran dari pada fase berikutnya. Namun
demikian bila ketepatan hasil bisa diperoleh pada fase ini, maka akan membe-
rikan nilai ekonomis yang lebih tinggi .
Conception Rate (CR) yaitu persentase sapi betina yang bunting pada in-
seminasi pertama yang disebut juga sebagai angka konsepsi. Angka konsepsi
ditentukan berdasarkan hasil diagnosa kebuntingan dalam waktu 40-60 hari
sesudah inseminasi (Toelihere, 1981b ).
Kadar progesteron dapat digunakan sebagai cara untuk mendeteksi
kebuntingan. Sapi yang bunting korpus luteumnya akan tetap persisten selama
bunting sehingga kadar hormon progesterone dalam darah tetap tinggi. Se-
dangkan pada hewan yang tidak bunting kadar progesteron akan turun akibat
regresi korpus luteum pada hari ke 18-24 setelah berahi. Kadar progresteron
lebih dari 11 ng/ml menandakan adanya kebuntingan.
DAFTAR PUSTAKA
Andrews JEA, Smith CA, Sinclair AH. 1997. Sites of estrogen receptor and
aromatase expression in the chicken embryo. Gen Comp Endocrinol
108:182-190.
Austin CR, Short RV, 1972. Reproduction in mammals. Book 1. University

press.Cambridge: 150.
Ax RL, Dally M, Didion BA, Lenz RW, Love CC, Varner DD, Hafez B and
Bellin ME 2008. Semen Evaluation in Farm Animal Reproduction ed
By Hafez ESE. 7th Lea Febiger : 365 – 375.
Bamba,K, 1988. Evaluation of acrosomal integrity of Boar Spermatozoa by

Bright Field Microscopy Using Eosin – Negrosin Stain . Theriogenology.
June 1988, (29(6):1245-1252.
Bearden JH and Fuquay JW, 1984. Applied animal reproduction 2nd edition
reston publishing company inc. A prentice Halls Company Virginia:341-
345.
Bearden JH, Fuquay JW and ST Willard.2004 . Applied Animal Reproduction

6th edition.Pearson.Prentice Hall.Upper Saddle River,New Jersey 07458
Bedford JM, 1970. Sperm capacitation and fertilization in mammals. Biol.

Reprod. 2 : 28.
Bedford JM and Cooper GW.1978.Membrane fusion events in fertilization of

vertebrate eggs in: Membrane Surface Reviews (Membrane Fusion) Vol.5
ed.by G Poste and GL Nicolson.North-Holland Amsterdam : 65-125.
Behringer RR, Finegold MJ, Cate RL. 1994. Mullerian inhibiting substance
function during mammalian sexual development. Cell 79:415-425.
Bianchi NO, 1991. Sex determination in mammals. How many genes are in-
volves?. Biology of Reproduction 44 : 393-397.
163
164 Daftar Pustaka
Blakely J dan DH Bade, 1994. Ilmu Peternakan. Edisi Empat. Alih Bahasa
Srigadono B. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta.
Burks DJ, Sailing PM, 1996. Molecular mechanisms of fertilization and activa-
tion on development. Animal Reproduction Science. 28: 79-86.
Cabrita E., Alvarez R., Anel E and MP Haerriez, 1999. The Hipoosmose Swell-
ing Test Performed with Counter : a method to assay fuctional integrity
of sperm membrane in rainbow trout. Anim Reprod Sci 55 : 279 -287
Chang,M.C.(1951): Fertilizing capacity of Spermatozoa deposited in fallopian

tubes, Nature, 168:997-998
Correa JR and PM Zavos.1994.The hypoosmotic Swelling test:its employment

as an assay to evaluate the functional integrity of the frozen-thawed
bovine sperm membrane. Theriogenology.42:351-360
Corteel JM (1977) Production , storage and Insemination of Goat Semen.

Proceedings of the symposium on Management of Reproduction in
Sheep and Goats. Am. Soc Anim Sci, 1977, 41-57
Cross Nl, Meizels, 1989. Methods for evaluating the acrosomal status of mam-
malia sperm Biol. Reprod.41: 635 – 641.
Dasgupta, Mills SCL, Fraser CR, 1993. Ca2+ regulating mechanism that modu-
late bull sperm capacitation and acrosomal exocytosis as determined by
chlortetracycline analysis. Mol. Reprod. Dev. 40 : 233-241.
De Jonge CJ, Flaherty SP, Barness AM, Swann NJ, Mathew, 1997. Failure of
multitube sperm swim-up for pre selection fertility and sterility Vol. 67
no. 6 : 1109-1114.
Dowson RMC, Elliot DC, Elliot WH, Jones KM, 1986. Data for biochemical
research 3rd edition. Oxford Science. Publication. New York: 514-515
Einarsson S, 1992. Concluding Remarks. In : Inluence of Thawing Method

on Motility, Plasma Membrane Integrity and Morphology of Frozen -
Thawed Stallion Spermatozoa. (Borg K, Colenbrander B, Fazeli A, Parlev-
liet J and Malmgren L). Theriogenology Vol. 48 Th. 1997 : 531 – 536
Elbrecht A, Smith RG. 1992. Aromatase Enzyme activity and sex`determination

in chickens. Science 255:467-470.
Ellegren.H. (2001) Hens, Cocs and Avian Sex determination aques for genes
or Z or W . Embo Report. Vol 2, No 3 : 192-196
Florman HM, Arnoult, C., Kazam I.G, Li.C and O’toole,C.M.B, 1998. A Per-
spective on the control of mammalian fertilization by egg-activated ion
channels in sperm : A tale of two channels. Biol Reprod. 59: 12-17.
Enniek H, Susilawati T dan Hakim L 2004 Pengaruh Tingkah Laku Seksual

Terhadap Kualitas Semen pad Berbagai Bangsa Sapi Potong. Thesis.
Program Pasca Sarjana universitas Brawijaya Malang.
Foote RH, 1993. Artiicial Insemination. In : Reproduction In Farm Animal.

(E.S.E. Hafez). 4th Edition. Lea and Febiger. Philadelphia : 535.
Fraser LR, 1995 Cellular biology of capacitation and the acrosome reaction.
Human Reprod, 10 Suppl 1, : 22-30.
Fraser LR, Ebeydeera LR, Niwa K, 1995. Ca++regulating mechanism that modu-
late bull sperm capacitation and acrosomal exocytosis as determined by
chlortetracycline analysis. Mol-Reprod Dev., 40 : 233 - 241.
Fraser LR, 1998 Sperm capacitation and the acrosome reaction . Human Re-
prod 13.1 : 9-19
Froman DP, Kirby JD and Proudman JA, (2000) Reproduction in Poultry: Male
and Famale. In Reproduction in Farm Animal ed by ESE Hafez , 7th.
Blackwell Publishing : 237 – 258.
Fukui Y, Sonoyama T, Mochizuki H, Ono H, 1990. Effect of heparin dosage

and sperm capacitation time on in vitro fertilization and cleavage of
bovine oocytes maturated in vitro. Theriogenology, 34 : 579-591.
Freshney RI, 1987. Culture of Animal Science a Manual Basic Technique. 2 nd

Edition. Willey-liss. New York.
Garner DL dan Hafez ESE, 2008. Spermatozoa and seminal plasma in repro-
duction in farm animals 7th edition. Ed by Hafez ESE, Lea and Febiger.
Phladelphia: 96-110
166 Daftar Pustaka
Geier MR, Young JL and Kesster D, 1990. Too much or too little science in
sex selection techniques? Fertil. Steril, 53: 1111-1112.
Gomes WR, 1977. Artiicial Insemination. In Reproduction in Domestic Ani-

mals. 3 th Edition. Edited by Cole HH and Cupps PT. Academic Press.
New York.
Gordon I, 1994. Laboratory production of cattle embryos CAB International

: 143 –150.
Graves JAP, 1994. Mammalian Sex Determining Genes in the Differences Be-
tween The sexes ed by RV Short and E. Balaban. Cambridge University
Press: 397-418.
Hafez , ESE (2008a) Anatomy of Male Reproduction in Reproduction Farm

Animal ed by ESE Hafez 7th edition Blackwell Publishing: 3-13
Hafez, ESE (2008b) Preservation and Cryopreservation of Gamet and Embryos

in Reproduction Farm Animal ed by ESE Hafez 7th edition Blackwell
Publishing: 431-442
Hafez ESE and Hafez B (2005) X and Y Chromosome-Bearing Spermato-

zoa. In Reproduction in Farm Animal ed by ESE Hafez , 7th.Blackwell
Publishing : 390 : 394.
Hirai M, Cerbito WA, Wijayagunawardane MPB, Braun J, Leidl W, Ohosaki K,

Matsuzawa T, Miyazawa K and Sato K, 1995. The Effect of Viscosity
of Semen Diluents on Motility of Bull Spermatozoa. Theriogenology.
vol. 47. Th. 1997 : 1463 – 1478
Jeyendran R.S, Van der van ,H.H and M. Perz-Pelaez. 1984. Development of
an assay to acces the fungtional integrity of the Human Sperm Mem-
brane and its Relationship to other semen characteristics. J. Reprod.Fert,
70:219-228
Kaul G, Singhs S, Gandhi KK, Anand SR, 1997. Calcium requirement and time
course of capacitation of goat spermatozoa assested by chlortetracycline
assay. Andrologia. 29 .5: 243-51.
Koopman P, 1995. Molecular biology of SRY and its Role in sex determination
in mammals. Reprod.Fertil. Dev. 7: 712-722
Kubus SA.2000. Handbook for swine Artiicial Insemination. Marcar, S.A.
press. Madrid, Spain.
Lechniak D, Kedziesski A, and D Stainislawski. 2002. The of HOS test to evalu-

ate membrane functionality of boar sperm capacitated in vitro. Reprod
domest. Animals 37 (6): 379-30
Lelannou,D, Calleu,D, Boujard.D. and Seqalin.J (1985) Stabilization of Nuclear

Chromatin in Human Spermatozoa during Capacitation in vitro in hu-
man in vitro Fertilization edited by J testart and R. Fryman. Elseiver,
Amstrdam: 149-152.
Lindsay DR, KW Entwistle and A Winantea, 1982. Reproduction in Domestic

Livestock in Indonesia. Australia University. Queensland
Malmgre L, Martinez HR, 1996. Change in sperm motility and plasma membran
integrity in equine spermatozoa after storage under different conditions.
Presented by 13 th international congress on animal reproduction poster
session : 24-6
Mattioli M, Barboni B, Lucidi P, Seren E, 1996. Identiication of capacitation

in boar spermatozoa by chlortetracycline staining. Theriogenology, 4:
373-376.
Masuda H, 1992. Artiicial Insemination Manual For Cattle. Association of

Livestock Technology Japan.
Mc Clure RD, Nunes L, Tom R, 1989. Semen manipulation: Improved

sperm recovery and function with a two layer percoll gradient. Fertil.
Steril. 51 : 5
Mohri H. 1997. New horizons in sperm cell research. Japan Scientiic Societies
Press. Tokyo: 474.
Miller,D.J., Macek,M.B., and Shur,B. 1992 Complementarity between sperm

surface β-1,4-galactosyltransferase and egg-coat ZP3 mediates sperm-egg
binding. Anim Sci, 37-73
Miyazaki S, Hashimoto N,Yoshimoto Y,Kishimoto T, Igusta Y and Hiramoto

Y .1986. Temporal and partial dynamics of the periodic increase in
intercellular free calcium at fertilization of golden hamsters eggs. Dev.
168 Daftar Pustaka
Biol,118 :259-267.
Maraud R, Vergnaud O, Rashedi M. 1990. New insight on the mechanism of

testis differentiation from the morphogenesis of experimentally induced
testes in genetically female chicken embryos. Am J Anat 188:429-437.
Mori K, Daitoh T, Kmada M, Maeda N, Maegawa M, Hirano K, Irahara M,

Aono T, 1993. Blocking of human fertilization by carbohydrates. Human
Reproduction.8: 1728-1732.
Nakabayashi O, Kikuchi H, Kikuchi T, Mizuno S. 1998. Differential expression

of genes for aromatase and estrogen receptor during gonadal develop-
ment in chicken embryos. J Molec Endocrinol 20:193-202.
Nagae T, Yanagimachi R, Srivastava PN and Yanagimachi H 1986. Acrosome

Reaction in Human Spermatozoa.Fertil.Steril 45 :701-707. Test in equine
spermatozoa. Theriogenology. 51: 721-727
Neild D, Chaves G, Flores M, Mora N, Beconi M and A Aguero, 1999.Hypoos-

motic test in equine spermatozoa. Theriogenology, 51:721-727
Nishikima A, Yamada M, Minami N, Utsumi K, 1997. Evaluation of acrosomal

status of bovine spermatozoa using concanavalin A lectin. Theriogenol-
ogy .48: 1007-1016.
Nishikimi H, Kansaku N, Saito N, Usami M, Ohno Y, Shimada K. 2000. Sex

differentiation and mRNA expression of P450c17, P450arom, and AMH
in gonads of the chicken. Molec Reprod Dev 55:20-30.
Partodihardjo S, 1982. Ilmu Reproduksi Hewan. Mutiara. Jakarta.
Perez LJ, Varcarcel MA, de las Heras, Mozes D, Baldassarre H, 1997. The Stor-
age of Pure Ram Semen at Room Temperature Result in Capacitation of
A Subpopulation of Spermatozoa. Theriogenology, 47: 549-542.
Pineda. R (2005a) Male Reproductive System in Mc. Donald Veterinary En-

docrynology and Reproduction 5th ed by R Pineda. Black well publishing
: 239 – 282
Pineda .R (2005b) The Biology of Sex. in Mc. Donald Veterinary Endocrynology

and Reproduction 5th ed by R. Pineda . Black well publishing: 201- 239
Piko L and Tyler A.1964.Fine Structural studies of sperms penetration in the
rat. Proceeding of the 5th International Congress on Animal Reproduct-
ion.Trento, Italy Vol.2:372-374
Piko L.1967. Immunological Phenomena in the Reproductive Process.

Int.J.Fertil.12:377-383.
Rachmawati, 2010. Metode Pencucian dan Pengenceran Semen untuk Memper-

tahankan Kualitas dan Integritas membrane Spermatozoa Babi. Disertasi,
Program Doktor Pertanian Universitas Brawijaya.
Reymon CS, Kettlewell JR, Hirsch JR, Bardwell B VJ and Zarkower D ;1999.
Expression of DMRT in the genital ridge of mouse and chicken em-
bryos suggest a role in vertebrate sexual development. Ev. Biol. 215,
208- 220.
Scheib D. 1983. Effects and role of estrogens in avian gonadal differentiation.

Differentiation 23:S87-S92.
Shan Z, Nanda I, Wang Y, Scunid M, Vortkamp A and Haaf T (2000) Sex

speciic expression of an evolutionary conserved male regulatory gene,
DMRT1. in Birds, Cytogenet, 89, 252 – 257.
Svivaji S, Scheit KH and PH Bhargava.1999 Proteins on plasma semen, John

Willey and Sons. New York.
Susilawati T, Sumitro SB, Harjopranjoto S, Mantara Y, Nuryadi, 1999. Pola

kapasitasi spermatozoa X dan Y sapi hasil pemisahan menggunakan il-
trasi sephadex dan sentrifugasi gradien densitas percoll. Jurnal penelitian
ilmu-ilmu hayati 11 : 29-40.
Susilawati .T 2000 Analisa Membran Spermatozoa Sapi Pada Proses Seleksi

Jenis Kelamin. Disertasi Program Pasca Sarjana Universitas Airlangga
Surabaya.
Susilawati T, Hardjopranjoto S, Sumitro SB, Hinting A, 2000. Perubahan Fungsi

Membran Spermatozoa Sapi Hasil Sentrifugasi Gradien Densitas Percoll
Pada Proses Seleksi Jenis Kelamin. J. Ternak Tropika. Vol.1
Toelihere MR,1993. Inseminasi Buatan Pada Ternak. Penerbit Angkasa.

Bandung.
170 Daftar Pustaka
Toyoda.Y., Yokoyama,M., and Hoshi.T (1971) : Studies on the fertilization of

mouse eggs in vitro, Jpn. J. Anim. Reprod., 16:147-157.
Yanagimachi R and Chang MC.1963.Fertilization of hamster egg in vitro.

Nature, 200 :282-282
Yanagimachi R,1977. Specivicity of sperm-egg interaction in:Immunobiology

of gametes, ed. by. M Edididn and MG Johnson. Cambridge University.
press.London:255-295.
Yanagimachi R, 1981 Mechanisms of fertilization in mammals In: Fertilization

and embryonic development in vitro ed.by.L.Mastroinni and JD Biggers.
Plenum press New York:81-182
Yanagimachi R, 1988. Mammalia Fertilization. In The physiology of Reproduc-

tion Vol.1. ed.by. Knobil E, Neill JD. The Physiology of Reproduction.
Raven Press, Ltd., New York.Capter 5 : 135 - 185.
Youssef HM, Doncel GF, Bassiouni BA, Acosta AA, 1997. Effect of sperm
viability, plasmalemma integrity and capacitation on pattern of expression
of mannosa-binding sites on human sperm. Arch Androl. 38:1 : 67-74
Vaillant S, Dorizzi M, Pieau C, Richard Mercier N. 2001. Sex Reversal aromatase

in chicken. J Exp Zool 290:727-740.
Valcarcel A, Heras de las MA, Perez L, Moses DF, Baldassaree H, 1997. Ases-
ment of the acrosomal status of membrane-intact ram spermatozoa
after freezing and thawing by simultenous lectin/Hoechst 33258 stain-
ing: 556-559
INDEKS
A betina xvii, 1, 9, 10, 11, 24, 35, 37,
acrosomal caps 67 38, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 65,
acrosome cap 26 90, 122, 125, 127, 138, 144,
adenil 16, 32 149, 160
Adenosine Monophosphate 15 Biokimiawi 8
adenylate cyclase 44, 63 Body Condition Score 159
adrenal cortex 33
aerob 17, 131 C
Akrosom v, xvi, 4, 5, 6, 27, 48, 51, 52, caput 15
53, 54, 56, 58, 61 cauda 28,43,46
Aksonema 6 caudal epididimis 15
albumin 41, 43, 49, 57, 62 central axonemal 4
ampulla 1, 40, 62, 67 chlortetracycline 39, 164, 165, 166,
Andrew 11 167
androgen 11, 14, 32, 33 Chlortetracycline 39, 112
anhydrose 40 citokimia 51
anion 18 cold shock 96, 126, 129, 134, 135,
anterior 3, 5, 106 136, 139
anterior nucleus 3 colorimeter 98
apical 6 corpus epididimis 15
apical ridge 6 cover glass 94, 95, 98, 106, 113
Apical ridge akrosom 103 critical role 10
asam askorbik 14 CTC xvi, xvii, 59, 107, 108, 112, 113
B D
basal plate 6 DABCO 112, 113
berahi 43, 149, 150, 151, 155, 156, 157, debris 92
159, 160, 161 Dehidrogenase 17
171
172 Indeks
Deposisi xviii, 155, 156, 157 Fertilisasi v, 2, 65, 80

diiksasi 113 ibronektin 43
DNA 5, 7, 8, 9, 22, 77, 78, 88, 90, ibrous sheeth 28
122 ilamen 6
Droplet Distal 6 Filtrasi 92
Droplet Proximal 6 isiologi v, 16, 33, 65, 95, 158
duktus deferens 12 lagela 3, 94
dynein 8 luiditas 49, 50
follikular 45
E formalin 98
ektoparasit 159 fosfat 16, 17, 18, 126
Ellegren 10, 165 fosfoglyceromutase 17
enzim 1, 5, 7, 8, 11, 14, 16, 17, 32, 40, fosfopiruvat 17
48, 51, 52, 54, 58, 60, 61, 67, 72, Fruktosa 12, 14, 17, 117, 130
73, 74, 82, 89, 122, 132 Fruktose 18
enzimatis 1, 53, 73, 74
enzim hidrolitik 5, 82 G
eosin negrosin 96, 105, 107, 108 Garner dan Hafez 9, 14, 15, 19, 22,
epididimis xv, 12, 13, 14, 15, 21, 24, 34, 24, 30, 130
37, 41, 42, 43, 46, 48, 61, 65, 70, Germinal epithel 35
88, 91, 94, 117, 122, 146 germ layer 24
epithel 24, 25, 29, 30, 32, 35 Giemsa 103
Epithel seminiferi 22 glikolisis 16, 17, 18
equatorial 6, 56, 71, 76, 85 glikolitik 45
equilibrasi 137, 139 glikoprotein 43, 49, 51, 53, 57, 68, 69,
ergotionine 14 70, 72, 73, 82
erlenmeyer 132 Gliserol 127, 130, 131, 133, 136, 155
ESE Hafez v, 165, 166 glukagon 14
esterase 5 glukose 17
Estradiol 11, 32 Glurakal dehide 103
exocytosis 2, 77, 79, 82, 164, 165 Glycerylphosphorylcholine 14
glyseryphosphorylcholine 14
F gonadal cortex 11
Farm animal reproduct-ion v gonadocrinin xv, 33
gonadotropin 14, 30, 31, 33, 35, 36, integritas membran xviii, 103
159 inti xvi, 3, 5, 6, 7, 8, 26, 27, 28, 48, 51,
gradien ion 46 75, 88, 89, 90
Grifiths 10 intraselluler 46, 58, 59, 60, 61, 80, 82
in vitro 1, 16, 19, 38, 40, 41, 42, 43,
H 46, 62, 67, 75, 83, 89, 106, 119,
haemositometer. 98 122, 165, 167, 170
helix mitokondria 49 in vivo 1, 41, 43, 62, 119
Hematoxyllin-eosin 103 ion Ca++ 58, 59, 60, 61
Hialuronidase 8, 53, 68
Hinsch 65 J
hiperaktivasi 1, 61, 62, 63 jantan xv, xvii, 1, 3, 9, 10, 11, 14, 21,24,
hipertropi 31 30, 31, 32, 35, 42, 90, 92, 103,
hipoplasia 35 106, 122, 127, 144, 146, 150
homolog 57, 70, 81 jelly 57, 58
hormon gonadal 10 Jeyendran 114, 115, 166
hyaluronidase 5, 51, 67, 68, 73, 74 juvenil 30
Hyaluronidase 51, 52, 67, 73
Hydrochloride Monohydrate 113 K
Hypoosmotic swelling 114 kalium 17, 18
kation 18
I kelenjar assesories 12
ikatan divalent 8 kelenjar bulbouretralis 12
immunocitokimia 51 kelenjar vesikula 14
inhibitor methyl xanthines 16 Kumulus Oophorus 43
Inorganik 8
Inseminasi v, xviii, 2, 17, 37, 38, 83, L
128, 140, 143, 149, 150, 151, LDH-X 8
153, 155, 156, 157, 158, 169 libido 24, 35, 146, 147, 148
Inseminasi Buatan v, xviii, 2, 17, 37, ligand 74
83, 140, 143, 149, 150, 151, 153, lipida 49, 50, 59, 62
155, 156, 157, 158, 169
inseminator 140, 141, 153, 155, 157, M
160 magnesium 17
174 Indeks
maintenence 159 P
meiosis 5, 65, 76, 77, 78 paracrine xvi, 31, 33
membran dalam 6 pellusida xvii, 1, 8, 38, 53, 57, 60, 62,
membran luar 6 67, 82, 84, 85, 88
metabolisme zigot 65 penetrasi 1, 2, 8, 46, 67, 68, 69, 71, 72,
methileen blue 114 73, 74, 78, 106
midle piece 4 peptida 14, 70
mid piece 103 phospoliphid membran 60
mikroskop epi luoresen xvii, 39 Photomicrographs xvi, 44
mikrotubulus 4, 6, 8 Pipet eritrocyt 98
mitochondria 4, 32, 122 plasmalogen 19
mitokondria 6, 8, 18, 28, 32, 40, 49, polipeptida 43
137 polypeptida 57
Morfologi abnormal 103 polyspermi 82, 83, 84
motil 12, 74, 85, 91, 93, 96, 106, 115, posterior 6
118, 119, 123, 128, 138, 147 post fraction fraction 91
Motilitas 19, 62, 91, 92, 93, 95, 118, post spermatic fraction 91
121, 139, 147 preksistensi 85
pre spermatic fraction 91
N principal piece 4
Na Sitrat 133 principal segments 6
Neild 115, 168 proacrosin 5, 60
Nomenklatur 102 prolaktin 14, 30, 32
Nucleotid 16 protoplasmic droplet 104
nucleus 3, 88, 89, 90
Q
O Quality control 153
oksidasi 16, 17, 18, 48
oksidatif telur 78 R
oosit xvi, xvii, 1, 2, 5, 19, 37, 38, 41, Rahmawati 116
53, 65, 67, 68, 84, 86, 87 Rektovaginal 149
Oosit 67 rektum 14, 149
outer ibril 4 relaksin 14
ovum 8, 84, 106, 127 reproduksi xv, 1, 2, 10, 21, 32, 35, 37,
38, 40, 44, 65, 92, 102, 116, 122, 33, 65
127, 155, 158, 159 Serum 131, 132
reseptor 1, 11, 30, 32, 33, 38, 58, 59, sexual dimorphic 11
60, 61, 69, 70, 71, 72, 74 silent heat 159
respirasi 16, 45, 125 silinder sheat 28
Reymon 10, 169 skrotum 36
Round spermatid 26 smith 11
ruminansia 14 sorbitol 14
spermatid xv, 22, 24, 25, 26, 27, 28,
S 34
saluran reproduksi 1, 21, 37, 40, 44, spermatogonia 24, 30, 34
65, 92, 122, 127 Spermatogonia 22, 24
Scanning Elektron Microskop 109 spermatosit primer 22, 24
Scheib 10, 169 spermatosit sekunder 22, 24, 25
segmen equator 72, 76 spermatozoa v, x, xv, xvi, xvii, xviii, 1,
sekresi ampula 12 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15,
sel gamet 21, 22, 30, 135 16, 17, 18, 19, 21, 22, 24, 26, 28,
sel sertoli xv, xvi, 22, 24, 28, 30, 31, 29, 30, 31, 34, 35, 37, 38, 39,40,
32, 33, 65 41, 42, 43, 44, 45, 46, 48, 49, 50,
sel telur xvi, xvii, 1, 37, 38, 39, 41, 42, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59,
43, 44, 48, 52, 53, 57, 58, 65, 60, 61, 62, 63, 65, 66, 67, 68, 69,
67, 69, 70, 71, 73, 75, 76, 77, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78,
78, 79, 80, 81, 82,83, 84, 86, 88, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87,
89, 90, 157 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96,
seminal xv, 11, 12, 13, 14, 17, 38, 43, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103,
61, 65, 74, 95, 117, 122, 127, 104, 105, 106, 108, 109, 110,
165 111, 112, 113, 114, 115, 116,
seminal plasma xv, 11, 12, 13, 14, 117, 118, 119, 120, 121, 122,
38, 43, 61, 65, 74, 95, 117, 122, 123, 125, 126, 127, 128, 129,
127, 165 130, 131, 132, 133, 134, 135,
seminiferi xv, 21, 22, 23, 24, 29, 30, 136, 137, 138, 139, 140, 143,
32 144, 146, 147, 148, 153, 155,
Sentrifugasi 132, 169 166, 167, 168, 169, 170
sertoli xv, xvi, 22, 24, 28, 30, 31, 32, Spermatozoa Histone 8
176 Indeks
sperm rich fraction 91

Susilawati 4, 9, 39, 53, 59, 97, 107,
109, 110, 111, 115, 119, 129,
143, 155, 156, 165, 169
T
testosterin 36
Thaller and Cardullo 65
theriogenology 91
transfosforylase 17
Transmisi Elektron Microskop 109
transservikal 149
tubuliseminiferi 3
Tubulus 3
U
Uji mikroskopis 93
Uji Motilitas Massa 93
uretra 12, 21
V
vesicular 12, 15
Viabilitas xvii, 93, 96, 97
vittelin xvii, 48, 77, 83, 85
W
WHO 118
Z
zona pellusida xvii, 1, 8, 53, 57, 60, 62,
67, 82, 84, 85, 88

Buku Spermatozoa PDF

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Buku Spermatozoa PDF

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Spermatologi

Prof. Dr. Ir. Trinil Susilawati, M.S.

Cetakan Pertama, April 2011

Penulis : Prof. Dr. Ir. Trinil Susilawati, M.S.

Dilarang keras memfotokopi atau memperbanyak sebagian atau seluruh

2.4. Fungsi Steroidogenic .................................................................32

7. Teknik Pemeriksaan kerusakan membran

7.4 Karakteristik bioisika dari beberapa krioprotektan ............................ 138

6.9 Spermatozoa Normal dan abnormal pada membrannya ..................... 107

Spermatozoa setelah melakukan penetrasi oosit, menyebabkan aktivasi

1.1. MORFOLOGI SPERMATOZOA

Gambar 1.1. Perbandingan berbagai spermatozoa ternak dan verte-

Gambar 1.2. Spermatozoa sapi diamati dengan mikroskop Differensial

1. Plasma membran 7. Rest of the distal centriole A. Kepala

Gambar 1.3. Struktur internal spermatozoa sapi.

Gambar 1.4. Potongan sagital pada kepala spermatozoa yang terdapat

1.1.3. Ekor spermatozoa

Gambar 1. 5. Axonema spermatozoa

Gambar 1.6. Mitokondria pada bagian leher spermatozoa Diamati dengan

1.2. KOMPOSISI KIMIA SPERMATOZOA

adalah spermatozoa Y. Berdasarkan cara penentuan tersebut diperoleh hasil

4. Spermatozoa X dan Y pada Unggas

1.3. SEMINAL PLASMA

Tabel 1.1. Karakteristik dan komponen kimia dalam semen ternak

1.3.1. Penghasil seminal plasma (kelenjar assesories)

Gambar 1.7. Kelenjar-kelenjar penghasil seminal plasma

Gambar 1.9. Jaringan epididimis tempat pematangan Spermatozoa

Tabel 1.2 Kelenjar asesoris pada hewan domestik

1.3.2. Unsur Biokimia dari seminal plasma

1.4. METABOLISME SPERMATOZOA

spermatozoa yang ditunjukkan secara in vitro dengan menambahkan dibutyryl

bahan pertama (Fruktose).

1.5. RESPIRASI SPERMATOZOA

Manipulasi Semen dan Mikrofertilisasi Spermatozoa dimasukkan

Spermatozoa yang dihasilkan oleh tubuli seminiferi dikeluarkan ke sa-

Gambar 2.3. Sel-sel di dalam tubuli seminiferi

Gambar 2.4. Histologi Testes

Di dalam tubuli seminiferi terdapat sel-sel mulai spermatogonium hingga sper-

Gambar 2.5. Pembelahan spermatogenesis

Gambar 2.6. Tahapan Miosis 1

Gambar 2.7. Tahapan Miosis II

Gambar 2.8. Perubahan sel dari spermatid hingga spermatozoa.

Gambar 2.9. Tahapan Spermiogenesis

Tahapan perubahan bentuk spermatid dibagi menjadi 4 fase yaitu fase

Gambar 2.10. Proses spermatogenesis pada setiap siklus

Pada gambar di atas terdapat tabel di tengah mengindikasikan terdapat 12

2.3. Peran Hormon pada proses spermatogenesis

Gambar 2.11. Hubungan kontrol fungsi hormon dalam testis

Luteinizing hormon (LH) menstimulasi (+) sel leydig untuk sekresi

Tabel 2.2. Sekresi dari fungsi sel sertoli

2.4. Fungsi Steroidogenic

2.5. Faktor-faktor yang mempengaruhi spermatogenesis

gonadotropin dan testosterin yang diinjesikan akan menekan kualitas

2.6. Peran skrotum dalam termoregulasi

Gambar 3.1. Gambaran spermatozoa yang belum kapasitasi, Kapasitasi dan

konsentrasi ion kalsium maka pendarannya semakin jelas.

3.1. KAPASITASI SPERMATOZOA SECARA IN VIVO

3.2. KAPASITASI SPERMATOZOA SECARA IN VITRO

3.3. FAKTOR-FAKTOR YANG MEMPENGARUHI KAPASITASI

Gambar 3.2. Photomicrographs yang menunjukkan kumulus oophorus yang

3.4 PERISTIWA-PERISTIWA YANG TERJADI PADA SPERMATOZOA

Gambar 3.3. Mekanisme molekuler pada proses kapasitasi

2. Perubahan pada metabolisme