 Sinar elektron difokuskan oleh elektromagnet melingkar, yang analog dengan lensa

pada mikroskop cahaya. Objek yang dipegang di jalur sinar menaburkan elektron dan
menghasilkan gambar yang difokuskan pada layar tampilan fluorescent.
 Panjang gelombang elektron yang digunakan dalam EM adalah 0,005 nm,
dibandingkan dengan 500 nm dengan cahaya tampak, yaitu sekitar 100.000 kali lebih
pendek dari pada cahaya biasa. Secara teoritis, jika kondisinya identik dalam
mikroskop optik dan elektron, daya penyelesaian EM harus 100.000 kali (resolusi turun
ke 0,0025 nm). Namun, bukaan lensa numeri dari sebuah lensa EM sangat kecil
(diameter meter dari bukaan hanya beberapa mikrometer) dan tidak mendekati lebar
yang dari sasaran mikroskop optik. Dalam praktiknya, resolusi terbaik yang dapat
diperoleh adalah 0,3 hingga 0,5 nm, satu kali lipat lebih baik daripada mikroskop
cahaya.
 Jenis mikroskop elektron (Gambar 2.3A dan B)
Ilustrasi menunjukkan jalur berkas elektron yang digunakan untuk membuat
gambar spesimen. (A) Transmisi: Dalam mikroskop elektron transmisi, elektron
melewati spesimen dan tersebar. Lensa magnetik memfokuskan gambar ke layar neon
atau pelat fotografi; (B) Pemindaian: Dalam mikroskop elektron pemindaian, elektron
primer menyapu spesimen dan mengetuk elektron dari permukaannya. Elektron
sekunder ini diambil oleh seorang kolektor, diamplifikasi, dan ditransmisikan ke layar
tampilan atau plat foto. Ada dua jenis mikroskop elektron yang umum digunakan:
i. Transmission Electron Microscope (TEM)
Dalam transmisi electron microscope (TEM) elektron seperti cahaya melewati
langsung melalui spesimen yang telah disiapkan dengan pemotongan tipis, pembekuan
beku, atau pembekuan etsa. Ini digunakan untuk mengamati detail halus struktur sel.
ii. Scanning Electron Microscope (SEM)
Pemindaian mikroskop elektron memindai berkas elektron bolak-balik di atas
permukaan spesimen yang menghasilkan tampilan tiga dimensi dari permukaan seluruh
mikroorganisme.
C. Scanning-Probe Microscopy
Mikroskop probe pemindaian memetakan gundukan dan lembah permukaan pada
skala atom. Kekuatan penyelesaiannya jauh lebih besar daripada mikroskop elektron,
dan sampel tidak perlu persiapan khusus seperti yang mereka lakukan untuk mikroskop
elektron. Di antara mikroskop projek yang dipindai adalah:
1. Scanning tunneling microscopy (STM): Mereka digunakan untuk memberikan
pandangan yang sangat rinci tentang molekul seperti DNA.
2. Atomic force microscopy (AFM): Mereka menghasilkan gambar tiga dimensi dari
permukaan molekul.
 POINT PENTING
Mikroskopi: Mikroskop sederhana terdiri dari satu lensa; mikroskop majemuk
memiliki banyak lensa.
Compound Light Microscopy: Mikroskop yang paling umum digunakan dalam
mikrobiologi adalah mikroskop senyawa / mikroskop medan terang / mikroskop
cahaya; Minyak imersi digunakan dengan lensa minyak imersi untuk mengurangi
kehilangan cahaya antara slide dan lensa.
• Mikroskop medan gelap: Mikroskop medan gelap mengarahkan cahaya ke arah
spesimen pada sudut tertentu. Ini sangat berguna untuk mendeteksi keberadaan
organisme yang sangat kecil.
• Mikroskopi Kontras Fase: Mikroskop kontras fasa menyatukan sinar cahaya langsung
dan dipantulkan atau difraksi (dalam fase) dan memperkuat perbedaan dalam refraksi
untuk membentuk gambar spesimen pada lensa okuler. Ini memungkinkan pengamatan
rinci dari organisme hidup.

1
Sinar datang langsung dari sumber cahaya. Set lain berasal dari cahaya yang
dipantulkan atau difraksi dari struktur tertentu dalam spesimen. (Difraksi adalah
hamburan sinar cahaya ketika mereka "menyentuh" tepi spesimen. Sinar difraksi
dibengkokkan menjauh dari sinar cahaya paralel yang melewati lebih jauh dari
spesimen). Ketika dua set sinar cahaya - sinar langsung dan sinar pantul atau difraksi
disatukan, mereka membentuk gambar spesimen pada lensa mata, berisi area yang
relatif ringan (dalam fase), melalui nuansa abu-abu, hingga hitam (di luar fase).
Melalui penggunaan cincin annular di kondensor dan lensa objektif, perbedaan fasa
diperkuat sehingga cahaya dalam fase tampak lebih terang daripada cahaya di luar fase.
Kondensor fase khusus terdiri dari diafragma annular pada disk berputar yang dipasang
di bagian bawah kondensor.

Keuntungan Fase-kontras mikroskop meningkatkan kontras, struktur internal sel

menjadi lebih tajam dan membuat jelas struktur dalam sel yang berbeda dalam
ketebalan atau indeks bias.

Kegunaan :
1. Untuk mempelajari sel-sel hidup yang tidak ternoda
2. Pemeriksaan terperinci terhadap struktur internal mikroorganisme hidup.
3. Untuk mempelajari pergerakan flagellar dan motilitas bakteri dan protozoa.
4. Mempelajari protozoa usus dan hidup lainnya seperti amuba dan Trichomonas.
5. Memeriksa jamur yang tumbuh dalam kultur.

Mikroskopi Differential Interference Contrast (DIC) Diferensial.

(DIC) mirip dengan mikroskop fase-kontras di mana ia menggunakan
perbedaan dalam indeks bias. Namun, dalam mikroskop DIC dua sinar cahaya
digunakan, bukan satu. Selain itu, prisma membagi setiap berkas cahaya,
menambahkan warna-warna kontras pada spesimen. Oleh karena itu, resolusi
mikroskop DIC lebih tinggi daripada mikroskop phasecontrast standar. Juga, gambar
berwarna cerah dan muncul hampir tiga dimensi.

4. Mikroskopi Fluoresens
Mikroskopi fluoresensi mengambil keuntungan dari fluoresensi, kemampuan
zat untuk menyerap panjang gelombang cahaya yang pendek (ultraviolet) dan
mengeluarkan cahaya pada panjang gelombang yang lebih panjang (terlihat). Jika
jaringan, sel atau bakteri diwarnai dengan pewarna fluoresens dan diperiksa di bawah
mikroskop dengan sinar ultra violet alih-alih cahaya tampak biasa, mereka menjadi
bercahaya dan terlihat sebagai benda terang dengan latar belakang gelap. Warna sel
akan muncul tergantung pada jenis pewarna dan filter cahaya. Mikroskop fluoresensi
digunakan untuk mengamati sel atau bahan lain yang baik secara alami fluoresens atau
telah ternoda atau ditandai dengan pewarna fluoresens.

Penggunaan Utama
Penggunaan utama mikroskop fluoresensi adalah teknik agnostik yang disebut
teknik antibodi fluoresen (FA), atau imunofluoresensi yang digunakan untuk
mendeteksi antigen (teknik antibodi fluoresen langsung) dan antibodi (metode antibodi
fluoresen tidak langsung).
Mikroskop Epifluoresensi
Variasi umum dari mikroskop fluoresensi standar adalah mikroskop epifluores
cence, yang memproyeksikan sinar ultra violet melalui lensa objektif dan ke spesimen.
Karena cahaya tidak ditransmisikan melalui spesimen, sel-sel dapat diamati melekat
pada partikel tanah atau bahan buram lainnya.

2
 5. Mikroskopi confocal
Dalam mikroskop confocal, lensa memfokuskan sinar laser untuk menerangi
titik tertentu pada satu bidang vertikal spesimen. Seperti mikroskop fluoresen,
spesimen diwarnai dengan fluorokrom sehingga akan memancarkan, atau
mengembalikan cahaya. Cermin kemudian memindai sinar laser melintasi spesimen,
menerangi wilayah dan pesawat berturut-turut sampai seluruh spesimen telah dipindai.
Setiap bidang sesuai dengan gambar satu irisan halus spesimen. Komputer kemudian
mengumpulkan data dan membuat gambar tiga dimensi, yang ditampilkan di layar.
Akibatnya, lingkup mikro ini adalah pemindaian CAT mini untuk sel. Seringkali,
spesimen terlebih dahulu diwarnai atau ditandai dengan pewarna fluorescent. Dengan
menggunakan tag fluoresens tertentu yang mengikat secara khusus untuk protein
tertentu atau senyawa lain, lokasi seluler yang tepat dari senyawa itu dapat ditentukan.
Dalam beberapa kasus, beberapa tag berbeda yang mengikat molekul tertentu
digunakan, masing-masing memiliki warna yang berbeda.

 Penggunaan
1. Untuk mendapatkan gambar tiga dimensi dari seluruh sel dan komponen seluler.

2. Untuk mengevaluasi fisiologi seluler — dengan memantau distribusi dan konsentrasi

zat-zat seperti ATP dan ion kalsium.

B. Mikroskopi Elektron

• Mikroskop elektron dalam beberapa hal dapat dibandingkan dengan

mikroskop cahaya. Daripada menggunakan lensa kaca, cahaya tampak, dan mata untuk
mengamati spesimen, mikroskop elektron menggunakan lensa elektromagnetik,
elektron, dan layar neon untuk menghasilkan gambar yang diperbesar (gambar).
Gambar itu dapat ditangkap pada film fotografi untuk membuat cograf photomi
elektron.
• Resolusi superior mikroskop elektron disebabkan oleh fakta bahwa elektron
memiliki panjang gelombang yang jauh lebih pendek daripada foton cahaya putih.