BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.5 Perhitungan Aktivitas Enzim

Sejumlah besar metode telah menjelaskan secara spesifik tentang pengujian
enzim, terutama enzim amilase. Berbagai macam metode tersebut didasarkan pada
fenomena yang diamati pada penguraian enzim yaitu, bertambahnya daya reduksi
suatu larutan, perubahan sifat pewarnaan yodium dari substrat, dan berkurangnya
viskositas pati yang berbentuk pasta. Fenomena tadi adalah ciri-ciri akan aktifnya
enzim β-amilase. Untuk menentukan aktivitas enzim, dapat dilakukan dengan Assay
Method atau juga DNS Method.
Prosedur yang dapat dilakukan adalah 1 ml enzim yang telah dilarutkan di
inkubasi selama 3 menit dalam suhu 20oC dengan 1 ml larutan substrat. Reaksi enzim
terputus dengan penambahan 2 ml reagen asam. Tabung reaksi yang berisi campuran
tersebut dipanaskan selama 5 menit dalam air panas dan didinginkan dengan air
keran. Tambahkan 20 ml H2O, padatan optic dari larutan mengandung produk reduksi
berwarna coklat ditentukan secara fotometrik (Bernfeld, 1955).
Apabila teori yang dikemukakan Bernfeld diinterpretasikan maka akan dapat
rumus untuk menghitung aktivitas enzim sebagai berikut :

𝐶 1000 1 𝑢𝑛𝑖𝑡
𝑎𝑘𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡𝑎𝑠 𝑒𝑛𝑧𝑖𝑚 = × ×
𝑇 𝐵𝑀 1𝜇𝑚𝑜𝑙

Keterangan :
C = konsentrasi glukosa per mL ekstrak enzim
T = waktu inkubasi (menit)
1 unit enzim = besarnya aktivitas enzim yang dibutuhkan untuk membebaskan 1
μmol glukosa per menit per ml enzim