Bismillah Khusus Cover Edit

TESIS
ANALISIS SECARA SIMULTAN KANDUNGAN SULFADOKSIN DAN

PIRIMETAMIN DALAM SEDIAAN TABLET SECARA
SPEKTROFOTOMETRI ULTRAVIOLET DENGAN
METODE DUAL WAVELENGTH DAN
RATIO SUBTRACTION
Diajukan untuk mUniversitas Sumatera Uta

OLEH:
MUHAMMAD ANDRY
NIM 177014019
PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2019
RATIO SUBTRACTION
TESIS
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh

Gelar Magister dalam Ilmu Farmasi Pada Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara
Diajukan untuk mUniversitas Sumatera Uta

OLEH:
MUHAMMAD ANDRY
NIM 177014019
PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2019
PENGESAHAN TESIS

RATIO SUBTRACTION
OLEH:
MUHAMMAD ANDRY
NIM 177014019
Disetujui oleh:
Komisi Pembimbing, Komisi Penguji,
Prof. Dr.rer. nat. Effendy De Lux Putra, S.U., Apt Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt
NIP 195306191983031001 NIP195707231986012001
Prof. Dr. Muchlisyam, M.Si., Apt Prof. Dr. Morin Sinaga, M.Sc., Apt
NIP195006221980021001 NIP 1950082819760320002
Prof. Dr.rer. nat. Effendy De Lux Putra, S.U., Apt

NIP 195306191983031001
Prof. Dr. Muchlisyam, M.Si., Apt

NIP195006221980021001
Medan, Oktober 2019

Mengetahui, Disahkan Oleh:
Ketua Program Studi Dekan,
Prof. Dr. Urip Harahap, Apt. Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt
NIP 195301011983031004 NIP195707231986012001
KATA PENGANTAR
Bismillahirrahmanirrahim,
Puji dan syukur penulis ucapkan kehadirat Allah SWT, karena atas berkat rahmat
dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan tesis dengan judul
“Analisis Secara Simultan Kandungan Irbesartan dan Hidroklorotiazid dalam
Sediaan Tablet secara Spektrofotometri Ultraviolet dengan Metode Dual
Wavelength dan Ratio Subtraction”. Shalawat dan salam untuk Rasulullah
Muhammad SAW sebagai suri tauladan dalam kehidupan.
Selama menyelesaikan penelitian dan tesis ini, penulis telah banyak
mendapatkan bantuan dan dorongan dari berbagai pihak baik moril maupun
materil, Untuk itu penulis ingin mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya
kepada:
1. Bapak Rektor Prof. Dr. Runtung, S.H., M.Hum.,selaku Rektor Universitas
Sumatera Utara, yang telah memberikan kesempatan dan fasilitas kepada
penulis untuk mengikuti Program Studi Magister.
2. Ibu Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara, yang telah menyediakan fasilitas kepada
penulis untuk mengikuti dan menyelesaikan Program Studi Magister di
Fakultas Farmasi.
3. Bapak Prof. Dr. Urip Harahap, Apt.,selaku Ketua Program Studi Magister
Farmasi dan Ibu Prof. Dr. Rosidah, M.Sc., Apt., selaku Sekretaris Program
Studi Magister Farmasi yang telah banyak memberikan motivasi dan
bimbingan sehingga penulis dapat menyelesaikan pendidikan ini.
4. Bapak Prof. Dr. Muchlisyam, M.Si, Apt., dan Ibu Prof. Dr. Masfria, M.S.,
Apt.,selaku ketua dan anggota komisi pembimbing yang telah banyak
membantu memberikan saran, koreksi dan bimbingan kepada penulis dalam
menyelesaikan tesis ini.
5. Bapak Prof. Dr. rer.nat. Efffendy De Lux Putra, SU., Apt., dan Ibu Prof. Dr.
Siti Morin Sinaga, M.Sc., Apt., selaku ketua dan anggota komisi penguji
yang telah banyak memberikan saran dan koreksi kepada penulis dalam
menyelesaikan tesis ini.
iv
6. Bapak dan Ibu staf pengajar Program Studi Magister Farmasi atas
bimbingannya selama penulis menjalani pendidikan.
7. Ayahanda Aiptu Zulfikar dan Ibunda Lindawati, S.K.M., M.Si., yang telah
membesarkan, merawat dan mendidik penulis sejak kecil, serta memberikan
doa, motivasi dan kasih sayang kepada penulis.
8. Abangku Dr. Alzi Kardiasyah dan Kakakku Martarina S.Si., M.M., yang
telah mendukung dan menasehati selama penulis menjalani pendidikan.
9. Bang Fauzan, Bang Mahatir, Bang Andry, Syukur, Kak Ade, Kak Gita, Kak
Devi serta Rekan-rekanMagister Farmasi dan seluruh teman-temanyang
tidak penulis sebutkan satu persatu atas kerjasama dan kekompakannya
selama penulis menjalani pendidikan.
Penulis menyadari bahwa tesis ini masih banyak kekurangan dan perlu
mendapatkan masukan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis berharap
adanya kritik dan saran membangun demi kesempurnaan tesis ini.
Medan, 25April 2019

Penulis,
Hafid Syahputra
NIM 177014015
v
ANALISIS SECARA SIMULTAN KANDUNGAN IRBESARTAN DAN
HIDROKLOROTIAZID DALAM SEDIAAN TABLET SECARA
SPEKTROFOTOMETRI ULTRAVIOLET DENGAN METODE DUAL
WAVELENGTH DAN RATIO SUBTRACTION
ABSTRAK
Irbesartan dan hidroklorotiazid merupakan kelompok obat anti hipertensi

yang sangat efektif dan aman digunakan untuk menurunkan tekanan darah serta
edema. Obat tersebut sering diberikan dalam kombinasi bahan aktif tersebut dapat
menimbulkan masalah dalam analisis kuantitatif untuk kontrol kualitas sediaan.
Penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan metode spektrofotometri secara
dual wavelength method dan ratio subtraction method pada analisis irbesartan dan
hidroklorotiazid secara simultan pada sediaan tablet tanpa adanya pemisahan.
Penelitian dilakukan dengan mengoptimasi jenis pelarut yaitu NaOH,
campuran NaOH dapar fosfat pH 8; pH 9; pH 10 serta metanol dapar fosfat pH 4;
pH 5; pH 6. Metode spektrofotometri teknik dual wavelength method dan ratio
subtraction method kemudiandiuji validitasnya berdasarkan parameter validasi
yaitu liniearitas, akurasi, presisi, LOD dan LOQ serta intraday dan interday.
Kemudian, metode ini diaplikasikan untuk menetapkan kadar irbesartan dan
hidroklorotiazid pada sediaan tablet.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa NaOH merupakan pelarut terbaik
yang digunakan sebagai pelarut untuk analisis. Aplikasi secaradual wavelength
method pada penetapan kadar dilakukan pada λ 263,4 nm dan 281 nm untuk
irbesartan serta hidroklorotiazid pada λ 243,4 nm dan 247,6 nm secara berurutan,
Pada aplikasi secara ratio subtraction method kadar irbesartan dan
hidroklorotiazid ditetapkan kadarnya pada λ 247,6 nm dan 273.6 nm secara
berurutan.
Berdasarkan hasil penelitian ini baik metode spektrofotometri ultraviolet
secara dual wavelength methoddan ratio subtraction method, keduanya berhasil
diterapkan untuk analisis formulasi farmasi secara simultan, tanpa gangguan dari
eksipien seperti yang ditunjukkan oleh hasil parameter validasi berada dalam
kisaran yang dapat diterima.
Kata kunci: Irbesartan, Hidroklorotiazid, dual wavelength method, ratio

subtraction method.
vi
SIMULTANEOUS ANALYSIS OF IRBESARTAN AND
HYDROCLOROTIAZID CONNECTIONS IN TABLET SUPPLIES
SPECTROFOTOMETRY ULTRAVIOLET USING DUAL WAVELENGTH
AND RATIO SUBTRACTION METHODS
ABSTRACT
Irbesartan and hydrochlorothiazide are a group of anti-hypertensive drugs

that are very effective and safe to use to reduce blood pressure and edema. These
drugs often given in combination with these active ingredients can cause problems
in quantitative analysis for the control of the quality of preparations. This study
aims to develop a spectrophotometric method with a double wavelength method
and a ratio reduction method for simultaneous analysis of irbesartan and
hydrochlorothiazide on tablet Creparations without any additions.
The study was carried out by optimizing the type of solvent namely
NaOH, NaOH mixture buffer phosphate pH 8; pH 9; pH 10 and methanol buffer
phosphate pH 4; pH 5; pH 6. The spectrophotometric method of the double
wavelength technique and the ratio reduction method are then calculated for
validity based on the validation parameters, namely linearity, accuracy, precision,
LOD and LOQ as well as intraday and interday. Then, this method was applied to
regulate irbesartan and hydrochlorothiazide levels in tablet Creparations.
The results showed that NaOH was the best solvent used as a solvent for analysis.
The application with the double wavelength method on the level
determination was carried out at λ 263.4 nm and 281 nm for irbesartan and
hydrochlorothiazide at λ 243.4 nm and 247.6 nm respectively, in the application
ratio the method of reducing irbesartan and hydrochlorothiazide levels required
levels of λ 247.6 nm and 273.6 nm in sequence.
Based on the results of this study, both the ultraviolet spectrophotometry
method through the double wavelength method and the ratio reduction method,
were successfully used to analyze pharmaceutical formulations simultaneously,
without changes in excipients such as those produced by the parameters validated
according to the acceptable.
Keywords: Irbesartan, Hydrochlorothiazide, multiple wavelength method, ratio

reduction method.
vii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL................................................................................................ i
LEMBAR PENGESAHAN TESIS ........................................................................ iii
KATA PENGANTAR .............................................................................................v
ABSTRAK ............................................................................................................. vi
ABSTRACT .......................................................................................................... vii
DAFTAR ISI ....................................................................................................... viii
DAFTAR TABEL ................................................................................................. xi
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... xii
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ xiii
DAFTAR SINGKATAN ..................................................................................... xiv
BAB I PENDAHULUAN ..................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ............................................................................................. 1
1.2 Kerangka Pikir Penelitian ...............................................................................5
1.3 Perumusan Masalah ........................................................................................7
1.4 Hipotesis .........................................................................................................7
1.5 Tujuan Penelitian ............................................................................................8
1.6 Manfaat Penelitian ..........................................................................................8
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .............................................................................9

2.1 Uraian Bahan .....................................................................................................9
2.1.1 Irbesartan .........................................................................................................9
2.1.2 Hidroklorotiazid ............................................................................................10
2.2 Analisis Irbesartan dan Hidroklorotiazid .........................................................11
2.3 Spektrofotometri Ultraviolet-Visibel (UV-Vis) ............................................. 12
2.3.1 Pengertian Spektrofotometri Ultraviolet-Visible...........................................12
2.3.2 Penyerapan Radiasi oleh Molekul .................................................................13
2.3.3Hukum Lambert-Beer ....................................................................................14
2.4Analisis Multikomponen ...................................................................................18
2.5 Dual Waveleanght Method (DWM) .................................................................20
2.6Ratio Substraction Method (RSM) ...................................................................22
2.7Validasi Metode Analisis ..................................................................................24
BAB III METODE PENELITIAN ........................................................................30

3.1 Alat dan Bahan ................................................................................................30
3.1.1 Alat – alat ....................................................................................................30
3.1.2 Bahan – bahan .............................................................................................30
3.2 Prosedur Penelitian ..........................................................................................30
3.2.1 Pembuatan Larutan Natrium Hidroksida 0,1 N.............................................30
3.2.2Pembuatan Larutan Kalium Dihidrogenfosfat 0,1 M ....................................31
3.2.3 Pembuatan Larutan Dapar Fosfat pH 4 ........................................................31
viii
3.2.8 Pembuatan Larutan Dapar Fosfat pH 10 ......................................................32
3.2.9 Optimasi Pelarut ...........................................................................................32
3.2.10 Pembuatan Larutan Induk Baku Irbesartan .................................................32
3.2.11 Pembuatan Larutan Induk Baku Hidroklorotiazid ......................................32
3.3 Analisis Kualitatif ...........................................................................................33
3.3.1 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum Irbesartan ..................................33
3.2.2 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum Hidroklorotiazid........................33
3.3.3 Pembuatan Spektrum Serapan Baku Campuran Irbesartan dan
Hidroklorotiazid ............................................................................................33
3.3.4Pembuatan Spektrum Serapan Rasio .............................................................34
3.3.4.1 Pembuatan Spektrum Serapan Rasio Irbesartan .......................................34
3.3.4.2 Pembuatan Spektrum Serapan Rasio Hidroklorotiazid ..............................34
3.3.4.3Pembuatan Spektrum Serapan Rasio campuran Irbesartan
dan Hidroklorotiazid ..................................................................................34
3.3.5 Penentuan Panjang Gelombang (λ) Analisis IRB dan HCT secara DWM ...35
3.3.6 Pembuatan Kurva Kalibrasi IRB dan HCT secara DWM .............................35
3.3.7Pembuatan Spektrum Serapan dan Kurva KalibrasiSecara RSM ..................35
3.3.7.1Pembuatan Spektrum Serapan dan Kurva KalibrasiIrbesartan
secara RSM ................................................................................................35
3.3.7.2 Pembuatan Spektrum Serapan dan kurva kalibrasi Hidroklorotiazid
secara RSM ................................................................................................36
3.4 Validasi Metode ..............................................................................................36
3.4.1Linearitas, Batas Deteksi (Limit of Detection,LOD) dan Batas Kuantitasi
(Limi tof Quantification,LOQ) ..............................................................................36
3.4.2Uji Perolehan Kembali ................................................................................. 37
3.4.3 Pengujian Presisi ..........................................................................................38
3.4.4 Intraday dan Interday ...................................................................................38
3.5 Penentuan Kadar Irbesartan dan Hidroklorotiazid dalam Sediaan Tablet ......39
3.5.1 Penentuan Kadar rbesartan dan Hidroklorotiazid dalamSediaan Tablet.......39
3.5.2 Perhitungan Kadar Irbesartan dan Hidroklorotiazid dalam Sediaan Tablet .39
3.6 Analisis Data secara Statistik ..........................................................................40
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ..............................................................41

4.1 Optimasi Pelarut ..............................................................................................41
4.2 Studi Spektrum Tumpang Tindih ....................................................................44
4.3Spektrum Rasio Serapan Baku ..........................................................................46
4.4Ratio Subtraction Method (RSM) .....................................................................49
4.5Dual Wavelength Method (DWM) ....................................................................51
4.6 Validasi Metode ..............................................................................................54
4.6.1Linieritas, akurasi, presisi, batas deteksi dan batas kuantitasi .................54
4.6.2 Intraday dan Interday ....................................................................................56
4.7 Penetapan Kadar Campuran IRB dan HCT pada SediaanTablet ....................57
4.8 Ratio Subtraction Method dan Dual Wavelength Method ...............................57
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................59

5.1 Kesimpulan ...................................................................................................59
ix
5.2 Saran ...................................................................................................59
DAFTAR PUSTAKA ...........................................................................................60

LAMPIRAN ...........................................................................................................65
x
DAFTAR TABEL
2.1 Penelitian Yang Telah Dilakukan Untuk Analisis Irbesartan Dan

Hidroklorotiazid .....................................................................................................12
2.2 Aplikasi Spektrofotometri UV secara DWM pada Berbagai Zat ....................22
2.3 Aplikasi Spektrofotometri UV secara RSM pada Berbagai Zat .....................24
2.4 Kriteria Daerah Recovery yang Dapat Diterima .............................................26
2.5 Kriteria K V yang Dapat Diterima ...................................................................26
4.1Absorbansi dan % transmitan IRB dan HCT ...................................................41
4.2 Kesalahan fotometrik .......................................................................................41
4.3 Absorbansi pada panjang gelombang DWM ...................................................50
4.4 Nilai linieritas, akurasi, Presisi, LOD dan LOQ untuk IRB dan ..... HCT dengan
RSM dan DWM ...............................................................................................54
4.5 Kadar IRB dan HCT dalam sediaan tablet C dan tablet I ...............................56
xi
DAFTAR GAMBAR
1.1 Kerangka Pikir Penelitian .............................................................................5

2.1 Rumus Struktur Irbesartan .............................................................................9
2.2 Rumus Struktur Hidroklorotiazid.................................................................10
2.3 Error (Kesalahan) Pembacaan terhadap %T (% transmitan) ......................15
2.4 Diagram Tingkat Energi Elektronik ............................................................17
2.5 Spektra Absorpsi Senyawa X dan Y (tidak ada tumpang tindih pada dua
panjang gelombang yang digunakan) ....................................................................19
2.6 Spektra Absorpsi Senyawa X dan Y (tumpang tindih satu arah) ................19
2.7 Spektra Absorpsi Senyawa X dan Y (tumpang tindih dua arah) ................20
4.1Grafik jumlah kesalahan fotometrik terhadap jenis pelarut ..............................43
4.2 Spektrum serapan maksimum IRB dan HCT serta campurannya ................45
4.3 Spektrum serapan IRB dengan konsentrasi 5 – 15 µg/mL..........................47
4.4Spektrum serapan HCT dengan konsentrasi 4 – 12 µg/mL .............................47
4.5Spektrum campuran IRB dan HCT berbagai konsentrasi ................................48
4.6Tumpang tindih spektrum rasio IRB dan HCT dengan berbagai
konsentrasi ...................................................................................................51
4.7 Spektrum kurva kalibrasi konsentrasi 5-15 µg/mL absorbansi orde nol
dari IRB setelah dilakukan manipulate ........................................................52
4.8 Spektrum kurva kalibrasi konsentrasi 4-12 µg/mL absorbansi orde nol
dari HCT setelah dilakukan manipulate.......................................................53
xii
DAFTAR LAMPIRAN
1. Tablet I ............................................................................................................65
2. Tablet C ...........................................................................................................66
3. Alat ..................................................................................................................67
4. Contoh perhitungan % tranmitan dan kesalahan fotometrik ..........................68
5. Spektrum Serapan Maksimum Tunggal IRB dan HCT serta
Campuran Baku IRB dan HCT .......................................................................69
6. Spektrum hasil manipulate ratio subtraction method .....................................71
7. Spektrum Tablet I dan Tablet C .....................................................................73
8. Kurva dan perhitungan kalibrasi IRB dengan mengunakan
rasio subtraction method(HCT 8 µg/ml sebagai pembagi) ............................74
9. Kurva dan perhitungan kalibrasi HCT dengan rasio
subtractionmethod(IRB 10 µg/ml sebagai pembagi) ......................................76
10. Kurva dan perhitungan kalibrasi IRB dengan
dualWavelengthmethodpada panjang gelombang 263,4-281 nm ...................78
11. Kurva dan perhitungan kalibrasi HCT dengan metode dual
wavelength pada panjang gelombang 243,4 – 247,6 nm ................................78
12. Contoh perhitungan LOD dan LOQ ...............................................................82
13. Hasil perhitungan LOD dan LOQ ..................................................................83
14. Contoh perhitungan kadar IRB dan HCT pada sediaan tablet .......................84
15. Kadar IRB dan HCT dalam sediaan tablet C dan tablet I dengan
metode ratio subtraction .................................................................................87
16. Kadar IRB dan HCT dalam sediaan tablet C dan tablet I dengan
metode dual wavelength .................................................................................89
17. Perhitungan statistik kadar IRB pada tablet C dan tablet
Idengan metode ratio subtraction ...................................................................91
18. Perhitungan statistik kadar HCT pada sediaan tablet Cdan tablet I
dengan metode ratio subtraction ....................................................................93
19. Perhitungan statistik kadar IRB pada tablet P dan tablet Idengan
metode dual wavelength .................................................................................95
20. Perhitungan statistik kadar HCT pada sediaan tablet C dan tablet I
dengan metode dual wavelength .....................................................................97
21. Contoh perhitungan persentase perolehan kembali .......................................99
22. Data hasil recovery IRB dan HCT dengan metode ratio
subtraction ....................................................................................................101
23. Data hasil recovery IRB dan HCT dengan metode Dual
wavelength ....................................................................................................102
24. Tabel distribusi t ..........................................................................................103
25. Sertifikat analisis bahan baku IRB dan HCT ................................................104
xiii
DAFTAR SINGKATAN
DWM : Dual Wavelenght Method

RSM : Ratio Subtraction Method
IRB : Irbesartan
HCT :Hidroklorotiazid
UV : Ultraviolet
Vis : Visible
PPM : Part permilion
PPB : Part perbilion
KV : koefisien variasi
JNC : joint National committee
KCKT : Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
RAAS: renin-angiotensin-aldosterone sistem
ICH: International Conference on Harmanization
LOD: Limit of Detection
LOQ:Limit of Quantification
SDStandard deviation
RSDRelative standard deviation
USP
xiv
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Penyakit hipertensi merupakan salah satu penyakit yang paling umum
ditemukan dalam praktik kedokteran primer, menurut studinya 1 dari 3 pasien
menderita hipertensi. Menurut Riset kesehatan Dasar tahun 2013, menunjukkan
bahwa revalensi hipertensi di Indonesia adalah sebesar 26,5% (Muhadi, 2016).
Dalam penanganan penyakit hipertensi para ahli kesehatan umumnya mengacu
pada guideline yang telah ada. Salah-satu guideline terbaru yang dapat dijadikan
acuan dalam penanganan penyakit hipertensi di Indonesia adalah joint National
committee (JNC) 8yang dipublikasikan pada tahun 2014.
Menurut JNC 8 (2014), Penanganan pasien hipertensi harus tepat dan
cepat, yaitu dengan diberikan obat terapi tunggal maupun kombinasi obat (Derosa,
et al., 2009). Hidroklorotiazid (HCT) termasuk dalam kelompok obat diuretikdan
menjadi obat firstline terapi untuk penanganan penyakit hipertensi.Diuretik tiazid
sangat efektif dalam mencegahstroke dan heart failure pada pasien hipertensi.
Irbesartan (IRB) adalah angiotensin II subtipe 1 yang poten dan selektif antagonis
reseptor yang diindikasikan untuk digunakan pada pasien dengan hipertensi,
termasuk mereka yang menderita diabetes melitus tipe 2 dan nefropati. Kombinasi
irbesartan dan hidroklorotiazid sangat efektif dan aman dimana digunakan untuk
menurunkan tekanan darah dan edema disertai dengan komplikasi dan efek
samping yang minimal yaitu hiperkalemia(Núñez-Guzmán, et al., 2017; Raskin, et
al.,1999).
1
Kombinasi dari kedua bahan aktif tersebut dapat menimbulkan permasalah
dalam melakukan analisis kuantitatif untuk kontrol kualitas sediaan tablet.
Permasalah ini disebabkan oleh senyawa yang terkandung mempunyai sifat
fisikokimia yang hampir sama, atau profil kurva serapan masing-masing
komponen saling tumpang tindih pada daerah tertentu menyebabkan serapan yang
didapat merupakan jumlah serapan dari kedua komponen tersebut.
Irbesartan dalam keadaan tunggal dapat ditentukan kadarnya dengan
spektrofotometri ultravioletkovensional dalam pelarutasam pada panjang
gelombang 224 dan 246 nm, sedangkan Hidroklorotiazid dapat keadaan tunggal
dapat ditentukan kadarnya dengan spektrofotometri ultraviolet dalam pelarut basa
pada panjang gelombang 274 nm (Moffat, et al., 2011).
Dalam penetapan kadar zat berkhasiat dalam berbagai sediaan obat
merupakan bagian yang penting di instansi yang melakukan penetapan kadar obat
seperti Badan Pengawas Obat dan Makanan dan industri obat, sehingga
diperlukan metode analisis dengan yang cepat dan handal serta alat dan biaya
operasional yang relatif lebih murah dan lebih mudah dalam pelaksanaannya,
tetapi dapat memberikan hasil dengan akurasi dan presisi yang baik(Hayam, et
al.,2016). Spektrofotometri merupakan salah satu metode yang sederhana, cepat
dan relatif lebih murah bila dibandingkan dengan metode lainnya (Khoshayand, et
al., 2010). Namun, analisis kuantitatif secara simultan untuk sediaan farmasi yang
mengandung lebih dari satu zat aktif sulit dilakukan dengan menggunakan metode
spektrofotometri yang klasik, dikarenakan adanya spektrum yang saling tumpang
tindih (Hajian dan Afshari, 2012).
2
Penelitian yang dilakukanRaja et al.,(2012), telah menetapkan kadar
campuran irbesartan dan hidroklorotiazid dengan mengunakan Kromatografi Cair
Kinerja Tinggi (KCKT). Namun metode ini memerlukan waktu yang cukup lama
untuk proses preparasi sampel dan pengondisian alat dikarena adanya tahap
ektraksi pelarut, pemanasan dan degassingsebelum memulai analisis. Selain itu,
metode ini jugamemerlukan biaya yang cukup mahal karena menggunakan
banyak pelarut.
Penelitian yang dilakukan Dal and Koyutürk (2015), telah menetapkan
kadar campuran irbesartan dan hidroklorotiazid pada sediaan tablet oleh kapiler
elektroporesis. Metode ini tidak memerlukan waktu yang lama dan sensitivitas
yang tinggi tetapi memerlukan preparasi sampel, alat dan proses perhitungan
matematika yang cukup rumit pada tahap analisisnya.
Penelitian yang dilakukan Albero et al. (2002), telah menetapkan kadar
campuran irbesartan dan hidroklorotiazid pada sediaan tablet secara
spektrofotometri derivatif dengan metode zero crossing. Metode ini tidak
memerlukan proses preparasi sampel yang lama karena tidak dilakukan tahap
pemisahan, tetapi memerlukan proses derivatisasi yang lama untuk mendapatkan
nilai zero crossing.
Salah satu dari metode spektrofotometri ialah dual wavelength method
(DWM)dan ratio subtraction method (RSM),metode spektrofotometri ini dapat
digunakan untuk analisis campuran beberapa zat secara langsung tanpa harus
melakukan pemisahan, mudah diterapkan untuk rutinitas analisis dan tanpa perlu
derivatisasi terlebih dahulu, walaupun dengan panjang gelombang yang
berdekatan (Bindaiya, et al., 2010; Hassouna dan Mohamed, 2018; Jain, et al.,
3
2010; Kawy, et al., 2010). Bila dibandingkan dengan KCKT, metode
spektrofotometri secara DWMmaupun secara RSMrelatif lebih sederhana, alat dan
biaya operasionalnya lebih murah dan waktu analisisnya lebih cepat (Darwish, et
al., 2013; Jain et al., 2010; Lotfy, et al., 2012).
Metode spektrofotometri secara DWM yang telah dilakukan oleh Bindaiya
et al., (2010), untuk penetapan kadar nitazoxadine dan ofloxacin, serta penelitian
Jain et al.,(2010), untuk penetapan kadar secara simultan drotaverine HCl dan
aceclofenac pada sediaan tablet memberikan hasil yang akurat, presisi serta
selektif. Metode spektrofotometri secara DWM ini tidak memerlukan waktu
preparasi sampel yang lama, pelarut yang banyak, perhitungan matematika yang
rumit dan proses derivatisasi untuk penentuan nilai zero crossing serta dengan
penentuan panjang gelombang yang mudah dan pengerjaan yang cepat untuk
rutinitas(Bindaiya, et al., 2010).
Metode spektrofotometri secara RSMyang telah dilakukan oleh Kawy et al.
(2010), untuk penetapan kadar hidroklorotiazid, meoxipril dan fosinopril, serta
penelitian Ali dan Abdelwahab (2013),untuk penetapan kadar secara campuran
allopurinol dan benzbromaron pada sediaan tablet memberikan hasil yang akurat,
presisi dan selektif. Metode spektrofotometri secara RSMini tidak memerlukan
waktu preparasi sampel yang lama, pelarut yang banyak, perhitungan matematika
yang rumit dan dapat menentukan lebih dari 2 obat campuran (El-Ghobashy dan
Abo-Talib, 2010).
Pemilihan pelarut merupakan salah satu hal yang perlu diperhatikan pada
analisis dengan menggunakan spektrofotometer ultraviolet. Hal ini disebabkan
beberapa pelarut ada yang mampu menyerap radiasi ultraviolet sehingga dapat
4
mengganggu hasil spektrum dan penentuan panjang gelombang serta berpengaruh
pada kesempurnaan kelarutan obat (Gandhimathi, et al., 2012).
Berdasarkan uraian diatas, maka dalam penelitian ini akan dilakukan
optimasi pelarut mengunakan kondisi asam serta basa dan analisis secara simultan
kadar irbesartan dan hidroklorotiazid tanpa adanya tahap pemisahan pada sediaan
tablet di pasaran secara dual wavelength method maupun secara ratio subtraction
method.
1.2 Kerangka Pikir Penelitian
Penelitian ini meliputi optimasi pelarut yang digunakan, rasio spectrum,
pengaturan PH dan devisor yang digunakan untuk mendapatkan panjang
gelombang analisis kadar irbesartan dan hidroklorotiazid kemudian metode dan
kondisi diaplikasikan terhadap sampel yang beredar dipasaran, selanjutnya
metode divalidasi. Secara ringkasnya kerangka pikir penelitian dapat dilihat pada
Gambar 1.1.
Variabel Bebas
Obat:
Irbesartan
hidroklorotiazid
Absorbansi
Jenis Pelarut:
(Parameternya
- NaOH Variabel Terikat
adalah Kesalahan
- Campuran metanol Kelarutan
Fotometrik)
dan dapar fosfat
pH 4; pH 5; pH 6
- Campuran NaOH
dan dapar fosfat
pH 10; pH 9; pH 8
- Campuran metanol 5
dan dapar fosfat
pH 4; pH 5; pH 6
II
Variabel Bebas
Obat:
Irbesartan
Variabel
hidroklorotiazid
Terikat Validasi
- λ analisis
Kadar: Metode
Metode:
90-110%
Dual
wavelength
method
III
Variabel Bebas
Obat:
Irbesartan
hidroklorotiazid Variabel
- ∆λ (5; 10; Terikat
Validasi
15)
Metode: Kadar: Metode
- λ analisis
Ratio 90-110%
subtraction
method
Gambar 1.1 Kerangka Pikir Penelitian

Keterangan:
I : Kerangka Pikir Penelitian Optimasi Pelarut
II : Kerangka Pikir PenelitianDual wavelength method
III : Kerangka Pikir Penelitian Ratio subtraction method
6
1.3 Perumusan Masalah
Berdasarkan uraian di atas, maka perumusan masalah dalam penelitian ini
adalah:
a. Apakah NaOH merupakan jenis pelarut terbaik jika dibandingkan dengan
campuran metanol dan dapar fosfat pH 4; pH 5; pH 6 serta campuran NaOH
dan dapar fosfat pH 10; pH 9; pH 8 pada perbandingan yang ditentukan untuk
analisis simultan irbesartan dan hidroklorotiazid?
b. Apakah metode spektrofotometri ultraviolet secara dual wavelength method
maupun secara ratio subtraction method dapat digunakan untuk menetapkan
kadar irbesartan dan hidroklorotiazid secara simultan dan memenuhi syarat
validasi metode?
c. Apakah metode spektrofotometri ultraviolet secara dual wavelength method
maupun secara ratio subtraction method dapat digunakan untuk menetapkan
secara simultan kadar irbesartan dan hidroklorotiazid dalam sediaan tablet di
pasaran?
1.4 Hipotesis
Berdasarkan perumusan masalah di atas, maka hipotesis dalam penelitian
ini adalah:
a. NaOH merupakan jenis pelarut terbaik jika dibandingkan dengan campuran
metanol dan dapar fosfat pH 4: pH 5: pH 6 serta pada campuran NaOH dan
dapar fosfat pH 8: pH 9: pH 10 untuk analisis simultan irbesartan dan
hidroklorotiazid.
7
b. Metode spektrofotometri ultraviolet secara dual wavelength method maupun
secara ratio subtraction method dapat digunakan untuk menetapkan kadar
irbesartan dan hidroklorotiazid secara simultan dan memenuhi syarat validasi
metode.
c. Metode spektrofotometri ultraviolet secara dual wavelength method maupun
secara ratio subtraction method dapat digunakan untuk menetapkan secara
simultan kadar irbesartan dan hidroklorotiazid dalam sediaan tablet di pasaran.
1.5 Tujuan Penelitian
Tujuan dari penelitian ini adalah:
a. Untuk menentukan pelarut terbaik yang digunakan pada analisis simultan
irbesartan dan hidroklorotiazid.
b. Untuk mengaplikasikan metode spektrofotometri ultraviolet secara dual
wavelength method maupun secara ratio subtraction method pada penetapan
kadar irbesartan dan hidroklorotiazid secara simultan.
c. Untuk mengaplikasikan metode spektrofotometri ultraviolet secara dual
wavelength method maupun secara ratio subtraction method pada penetapan
kadar irbesartan dan hidroklorotiazid secara simultan dalam sediaan tablet.
1.6 Manfaat Penelitian
Diharapkan metode hasil pengembangan dari penelitian ini dapat menjadi
salah satu metode yang dapat diaplikasikan oleh instansi terkait dalam
menentukan secara simultan kadar irbesartan dan hidroklorotiazid pada sediaan
tablet.
8
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Uraian Bahan
2.1.1 Irbesartan
Menurut Kementerian Kesehatan RI Ditjen Bina Kefarmasian dan Alat
Kesehatan (2014), uraian irbesartan adalah sebagai berikut:
Gambar 2.1 Rumus Struktur Irbesartan
Nama IUPAC : 2-Butil-3-[p-(o-1H-tetrazol-5-ilfenil)benzil]-1,3-

diazaspiro[4,4]non-1-en-4-on.
Rumus Molekul : C25H28N6O
Berat Molekul : 428,53
Pemerian : Serbuk Hablur; putih sampai hampir putih
Kelarutan : Sukar larut dalam etanol dan metilen klorida; praktis tidak
larut dalam air
Menurut (Derosa et al., 2009), Irbesartan termasuk golongan obat
angiotensin II (subtype AT1 reseptor) antagonis dengan lipofilik dan mempunyai
9
aksi anti hipertensi dengan menghambat efek vasokonstriktor dan aldosteron yang
mensekresi angiotensin II secara selektif memblokir pengikatan angiotensin II ke
tempat reseptornya.
2.1.2 Hidroklorotiazid
Menurut Kementerian Kesehatan RI Ditjen Bina Kefarmasian dan Alat
Kesehatan (2014), uraian hidroklorotiazid sebagai berikut:
Gambar 2.2 Rumus Struktur Hidroklorotiazid
Nama IUPAC : 6-Kloro-3,4-dihidro-2H-1,2,4-benzotiadiazina-7-

sulfonamida 1,1-dioksida
Rumus Molekul : C7H8ClN3O4S2
Berat Molekul : 297,74
Pemerian : Serbuk hablur; putih atau praktis putih; praktis tidak

Berbau
Kelarutan :Mudah larut dalam natrium hidroksida, n-butilamina dan

dimetilformamida; agak sukar larut dalam metanol; sukar
larut dalam air; tidak larut dalam eter, kloroform dan asam
mineral encer
Menurut (Derosa et al., 2009), hidroklorotiazid termasuk dalam golongan
obat diuretik tiazid yang mempengaruhi ginjal dan mempunyai aksi anti hipertensi
dengan menghambat reabsorbsi elektrolit natrium kedalam tubulus distal pada
nefron sehingga meningkatkan sekresi urin dari natrium dan air.
Hidroklorotiazid banyak digunakan sebagai pilihan pertama untuk
hipertensi ringan sampai sedang. Sering kali pada kasus yang lebih berat
10
dikombinasikan dengan obat-obat lain untuk memperkuat efeknya, khususnya
beta-blockers. Kombinasi ACE inhibitor dengan golongan ini biasanya aman dan
efektif serta memberi keuntungan blokade angiotensin reseptor, mengurangi
resistensi renin-angiotensin-aldosterone sistem (RAAS) teraktifasi tetapi dosis
pertama bisa terjadi hipotensi (seperti pusing, pening), terutama jika dosis diuretik
tinggi (Derosa et al., 2009).
2.2 Analisis Irbesartan dan Hidroklorotiazid
Analisis tablet irbesartan bentuk tunggal dapat ditentukan dengan metode
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, sedangkan untuk hidroklorotiazid dalam
bentuk tunggal dapat dianalisis tabletnya mengunakan metode Kromatografi Cair
Kinerja Tinggi. Penetapan kadar irbesartan dan hidroklorotiazid, masing-masing
dalam bentuk tunggal dapat ditetapkan dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
dengan fase gerak dapar-asetonitril P (6:4) dan campuran natrium fosfat
monobasa P 0,1 M-asetonitril P (9:1) (Ditjen POM RI., 2014).
Penelitian yang dilakukan Raja et al., (2012), telah menetapkan kadar
campuran irbesartan dan hidroklorotiazid dengan mengunakan Kromatografi Cair
Kinerja Tinggi (KCKT). Namun metode ini memerlukan waktu yang cukup lama
untuk proses preparasi sampel dan pengondisian alat dikarena adanya tahap
ektraksi pelarut, pemanasan dan degassing sebelum memulai analisis. Selain itu,
metode ini jugamemerlukan biaya yang cukup mahal karena menggunakan
banyak pelarut.
Penelitian yang dilakukan Albero et al. (2002), telah menetapkan kadar
campuran irbesartan dan hidroklorotiazid pada sediaan tablet secara
11
spektrofotometri derivatif dengan metode zero crossing. Metode ini tidak
memerlukan proses preparasi sampel yang lama karena tidak dilakukan tahap
pemisahan, tetapi memerlukan proses derivatisasi yang lama untuk mendapatkan
nilai zero crossing.
Beberapa penelitian lain yang telah dilakukan untuk irbesartan dan
hidroklorotiazid dapat dilihat pada tabel berikut:
Tabel 2.1 Penelitian Yang Telah Dilakukan Untuk Analisis Irbesartan dan
Hidroklorotiazid.
λ max
Senyawa Metode Pelarut Referensi
(nm)
Capillary
(Dal dan
irbesartan dan electrophoretic- NaOH 0,1
230 Koyutürk,
hidroklorotiazid diode array M
2015)
detector
irbesartan dan
Spektrofotometri Etanol (Albero, et al.,
hidroklorotiazid 263,317
derivatif absolut 2002)
constant
irbesartan dan multiplication, 270,250,26
Metanol (Fayez, 2014)
hidroklorotiazid ratio difference, 0
constant center
Buffer
Simultaneous (Kumar dan
irbesartan dan phospat pH
equation, 205,272 Annapurna,
hidroklorotiazid 7.5
absorbance ratio 2016)
Irbesartan, Kemometri, NaOH 0,1 (Sivasubramani
151,200-
hidroklorotiazid Simultan M:air an dan
350
dan Ramipril estimation (20:80) Lakshmi, 2016)
2.3 Spektrofotometri Ultraviolet-Visibel (UV-Vis)
2.3.1 Pengertian Spektrofotometri Ultraviolet-Visible
Absorbansi panjang gelombang radiasi elektromagnet antara 200-800 nm
oleh molekul yang mempunyai π-elektron menjadi dasar spektroskopi serapan
elektronik molekuler pada daerah sinar UV-Vis dari spektrum elektromagnet.
Spektrofotometri UV-Vis merupakan pengukuran panjang gelombang dan
intensitas sinar ultraviolet dan sinar tampak yang dapat diabsorbsi oleh senyawa.
12
Sinar ultraviolet berada panjang gelombang 200-400 nm sedangkan sinar tampak
berada pada panjang gelombang 400-800 nm (Muchlisyam dan Pardede, 2017).
2.3.2 Penyerapan Radiasi oleh Molekul
Sinar ultraviolet memberikan energi yang cukup untuk terjadinya transisi
elektronik. Dengan demikian, spektra ultraviolet dan tampak dikatakan sebagai
spektra elektronik. Keadaan energi yang paling rendah disebut dengan keadaan
dasar (Ground State). Transisi-transisi elektronik akan meningkatkan energi
molekuler dari keadaan dasar ke satu atau lebih tingkat energi tereksitasi (Gandjar
dan Abdul, 2007).
Jika suatu molekul sederhana dikarenakan radiasi elektromagnetik maka
molekul tersebut akan menyerap radiasi elektromagnetik yang sesuai dengan
energi molekulnya. Interaksi antara molekul dengan radiasi elektromagnetik ini
akan meningkatkan energi potensial elektron pada tingkat keadaan tereksitasi.
Penyerapan sinar ultraviolet pada umumnya dihasilkan oleh eksitasi elektron-
elektron ikatan, akibatnya panjang gelombang pita yang mengabsorpsi dapat
dihubungkan dengan ikatan yang mungkin ada dalam suatu molekul (Gandjar dan
Abdul, 2007).
Senyawa organik pada umumnya mempunyai gugusan atom yang dapat
mengabsorpsi radiasi UV disebut juga kromofor digunakan untuk menyatakan
gugus tak jenuh kovalen yang dapat menyerap radiasi dalam daerah-daerah
ultraviolet contohnya C-C, C-O dan NO2. Ausokrom adalah gugus jenuh yang bila
terikat pada kromofor mengubah panjang gelombang dan intensitas serapan
maksimum. Ciri ausokrom adalah heteroatom yang langsung terikat pada
kromofor, misal: -OCH3, -Cl, -OH dan O-NH2. Ausokrom menyebabkan
13
pergeseran puncak serapan yang disebut batokromik. batokromik adalah
pergeseran serapan daerah kearah panjang gelombang yang lebih panjang
(pergeseran merah). Pergeseran hipsokromik adalah pergeseran serapan kearah
panjang gelombang yang lebih pendek (pergeseran biru). Efek hiperkromik adalah
kenaikan dalam intensitas serapan. Efek hipokromik adalah penurunan dalam
intensitas serapan (Muchlisyam dan Pardede, 2017).
2.3.3 Hukum Lambert-Beer
Hukum Lambert-Beer adalah hubungan linearitas antara absorbansi
dengan konsentrasi larutan sampel. Konsentrasi dari sampel di larutan dapat
ditentukan dengan mengukur absorbansi pada panjang gelombang tertentu.
Menurut Lambert bahwa serapan berbanding lurus terhadap ketebalan sel yang
disinari maka dengan bertambahnya sel, maka serapan akan bertambah.
A = k.b
Sedangkan menurut Beer, yang berlaku untuk radiasi monokromatis berlaku
dalam larutan yang sangat encer. Serapan berbanding lurus dengan konsentrasi
maka:
A = k.c
(Muchlisyam dan Pardede T. R., 2017).
Hukum Lambert-Beer umumnya dikenal sebagai persamaan berikut:
A = A11 . b . c (g/100ml) atau
A = a . b . c (g/l)
Keterangan:
A = serapan yang diukur
14
A11 = serapan larutan (1%b/v) dalam kuvet 1 cm
a = absorptivitas
b = ketebalan kuvet (cm)
c = konsentrasi larutan
Hukum Lambert-Beer menyatakan bahwa intensitas yang diteruskan oleh larutan
zat penyerap berbanding lurus dengan tebal dan konsentrasi larutan
A adalah serapan pada panjang gelombang; A (1% 1cm) adalah serapan
jenis pada panjang gelombang; b adalah ketebalan lapisan yang menyerap dalam
cm; c adalah kadar zat terlarut yang menyerap, dinyatakan dalam persen b/v
(Depkes RI, 1995). Umumnya zat yang akan dianalisis dibuat absorbansinya
mendekati 0,4343, atau dibuat absorbansi berada pada daerah 0,2-0,8. Hal ini
dikarenakan jika analit diukur pada daerah tersebut nilai kesalahan fotometriknya
kecil atau lebih kecil jika absorbansi analit diukur diluar daerah 0,2-0,8. Plot error
(kesalahan) pembacaan terhadap % T dapat dilihat pada Gambar 2.3.
Gambar 2.3 Error (kesalahan) Pembacaan Terhadap % T (% transmitan)

Rumus kesalahan fotometrik
dc 0,4343
= dt
c T (log T)
15
Keterangan:
dc
= kesalahan fotometrik
c
dt = kesalahan pembacaan (1%)
Absorbansi = 2- log%T
% T = antilog (2-A)
Dalam hukum Lambert-Beer tersebut ada beberapa pembatasan yaitu:
(i) Sinar yang digunakan dianggap monokromatis
(ii) Penyerapan terjadi dalam suatu volume yang mempunyai penampang
luas yang sama
(iii) Senyawa yang menyerap dalam larutan tersebut tidak tergantung
terhadap yang lain dalam larutan tersebut
(iv) Indeks bias tidak tergantung pada konsentrasi larutan (Gandjar dan
Abdul, 2007).
Dalam aspek kuantitatif, suatu berkas radiasi dikenakan pada cuplikan
(larutan sampel) dan intensitas sinar radiasi yang diteruskan diukur besarnya.
Radiasi yang diserap oleh cuplikan ditentukan dengan membandingkan intensitas
sinar yang diteruskan dengan intensitas sinar yang diserap. Intensitas atau
kekuatan radiasi cahaya sebanding dengan jumlah foton yang melalui satu satuan
luas penampang per detik. Serapan dapat terjadi jika radiasi yang mengenai
cuplikan memiliki energi yang sama dengan energi yang dibutuhkan untuk
menyebabkan terjadinya perubahan tenaga (Gandjar dan Abdul, 2007).
Apabila pada suatu molekul dikenakan radiasi elektromagnetik maka akan
terjadi eksitasi ke tingkat energi yang lebih tinggi yang dikenal sebagai orbital
16
elektron “anti-bonding” (Mulja dan Suharman, 1995). Diagram tingkat elektron
pada keadaan dasar dan keadaan tereksitasi ditunjukkan pada Gambar2.4:
σ* Anti bonding
π* Anti bonding
n Non bonding
π Bonding
σ Bonding
Gambar 2.4 Diagram Tingkat Energi Elektronik (Mulja dan Suharman, 1995)
Absorpsi sinar ultraviolet oleh suatu atom atau molekul M dapat dianggap
melalui dua proses. Proses pertama adalah eksitasi yang ditunjukkan oleh
persamaan: M + hv M*
Ketika suatu radiasi foton melewati molekul, adsorpsi dapat terjadi jika
energi foton tersebut sesuai dengan perbedaan energi di antara dan satu tingkat
energi yang lebih tinggi dari molekul tersebut. Pada keadaan ini energi dari foton
ditransfer kepada molekul tersebut dan mengubahnya ke tingkat energi yang lebih
tinggi yang disebut excited state M* . Proses terakhir adalah relaksasi. Setelah
suatu periode singkat, molekul berelaksasi ke tempat aslinya atau ground state
dengan mentransfer kelebihan energinya ke atom atau molekul lain pada medium
tersebut. Proses ini menyebabkan peningkatan temperatur lingkungan sementara.
Ini dapat digambarkan dengan persamaan sebagai berikut:
M* M + energi (Skoog, 1994).
Absorpsi sinar UV dalam suatu molekul disebabkan karena adanya
elektron yang bertanggung jawab terhadap absorpsi sinar tersebut. Dua tipe
elektron yang bertanggung jawab terhadap absorpsi radiasi UV dalam molekul
17
yaitu elektron terbagi yang berpartisipasi langsung dalam pembentukan ikatan dan
yang tergabung dengan lebih dari satu atom dan elektron luar tak terbagi yang
banyak terlokalisasi pada atom seperti oksigen, halogen, sulfur dan nitrogen
(Skoog, 1994)
Aplikasi spektroskopi serapan untuk senyawa organik didasarkan pada
transisi n atau π ke π* karena energi yang dibutuhkan untuk proses ini membawa
puncak absorpsi ke daerah spektra 200 – 700 nm. Kedua transisi ini membutuhkan
gugus tidak jenuh yang memberikan orbital π (Skoog,1994).
Transisi π ke π* ini menunjukkan pergeseran merah (geseran batokromik)
dengan adanya substitusi gugus-gugus yang memberi atau menarik elektron
(Skoog,1994).
2.4 Analisis Multikomponen
Sebuah spektrofotometer tidak dapat menganalisis suatu sampel. Alat
tersebut menjadi berguna apabila sampel tersebut diolah sedemikian rupa
sehingga pengukuran dapat ditafsirkan secara individu. Tetapi, dalam banyak hal
tidak perlu tiap komponen individu dari sampel yang kompleks dipisahkan
terlebih dahulu dari sampelnya. Bila suatu larutan mengandung dua konstituen
yang menyerap (X dan Y), rumit tidaknya situasi bergantung pada spektra X dan
Y (Muchlisyam dan Pardede, 2017).
(i) Kasus 1
Spektra tidak tumpang tindih, atau sekurangnya memungkinkan untuk
menemukan suatu panjang gelombang di mana X menyerap dan Y tidak, serta
panjang gelombang serapan dan panjang gelombang serupa untuk mengukur Y.
18
Spektra absorpsi senyawa X dan Y (tidak tumpang tindih pada dua
panjang gelombang yang digunakan) dapat dilihat pada Gambar 2.5.
Gambar 2.5 Spektra Absorpsi Senyawa X dan Y (tidak ada tumpang tindih pada
dua panjang gelombang yang digunakan)
(ii) Kasus 2
Tumpang tindih satu arah (dari spektra): seperti ditunjukan dalam Gambar
2.6, Y tidak mengganggu pengukuran X pada λ1, tetapi X memang menyerap
cukup banyak bersama-sama Y pada λ2. Konsentrasi X ditetapkan langsung dari
absorbansi larutan pada λ1. Kemudian absorbansi yang disumbangkan oleh
konsentrasi X pada λ2 dihitung absorptivitas molar X dan λ2. Sumbangan ini
dikurangkan dari absorbansi terukur pada larutan λ2, sehingga akan diperoleh
absorbansi yang disebabkan oleh Y.
Spektra serapan senyawa X dan Y (tumpang tindih satu arah) dapat dilihat
pada Gambar 2.6.
19
Gambar 2.6 Spektra Serapan Senyawa X dan Y (tumpang tindih satu arah)
(iii) Kasus 3
Tumpang tindih dua arah (dari spektra): dengan prinsip bahwa tidak ada
panjang gelombang di mana salah satu komponen dapat diukur tanpa gangguan
oleh yang lain.
Spektra serapan senyawa X dan Y (tumpang tindih dua arah) dapat dilihat
pada Gambar 2.7.
Gambar 2.7 Spektra Serapan Senyawa X dan Y (tumpang tindih dua arah).
(Muchlisyam dan Pardede, 2017).
2.5 Dual Waveleangth Method (DWM)
Dual wavelength method, dalam metode ini dua panjang gelombang dipilih
untuk setiap obat dengan cara perbedaan absorbansi adalah nol (∆A= A2-A1)
untuk satu obat. Seluruh campuran standar dipindai pada panjang gelombang yang
dipilih ini dan kurva kalibrasi diplot antara absorbansi perbedaan dan konsentrasi
masing-masing. Larutan sampel diukur pada panjang gelombang yang dipilih dan
nilai perbedaan dalam absorbansi adalah diekstrapolasikan pada kurva standar
20
kerja untuk mendapatkan konsentrasi (Pradhan, et al., 2014; Sharma dan Sharma,
2011).
Metode ini berlaku untuk menghitung konsentrasi komponen yang
ditemukan dalam campuran yang mengandung beberapa komponen yang
mengganggu yang tidak diinginkan. Perbedaan absorbansi antara dua titik
campuran spektra berbanding lurus dengan konsentrasi analit terlepas dari
pengangu. Dalam metode ini dua panjang gelombang dipilih (λ1, λ2) untuk satu
obat di mana obat A menunjukkan absorbansi yang sama (atau selisih antara
absorbansi adalah nol) dan obat B menunjukkan perbedaan absorbansi. Akhirnya
panjang gelombang (λ1, λ2) digunakan sebagai panjang gelombang analisis untuk
obat B. Begitu pula untuk obat B dipilih dua panjang gelombang (λ3, λ4) yang
mana obat B menunjukan absorbansi yang sama (atau selisih antara absorbansi
adalah nol) dan obat A menunjukan perbedaan absorbansi. Kemudian, panjang
gelombang (λ3, λ4) digunakan sebagai panjang gelombang analisis untuk obat
A.(Kamal, El-malla, dan Hammad, 2016).
Campuran obat A dan obat B dalam konsentrasi yang berbeda disiapkan
untuk mengkonfirmasi bahwa pada semua perbedaan konsentrasi pada obat A
memiliki perbedaan antara absorbansi pada dua panjang gelombang yang dipilih
(λ1, λ2) yang berguna untuk pengukuran obat B sehingga didapatkan selisih
antara absorbansi pada dua panjang gelombang yang dipilih (λ1, λ2) ditampilkan
respon linier yaitu konsentrasi versus absorbansi itu lah yang menjadi kurva
kalibrasi untuk perbedaan absorbansi variasi konsentrasi. obat B. Demikian pula
prosedur yang sama untuk estimasi obat A dimana panjang gelombang
yangdipilih menunjukan perbedaan antara absorbansi, sehingga di plot respon
21
liniernya dan menjadi kurva kalibrasi untuk penentuan obat A(Kamal, et al.,
2016).
Metode spektrofotometri dual waveleangh digunakan untuk menghitung
konsentrasi komponen yang tidak diketahui yang ada dalam campuran yang
mengandung komponen lain yang menarik dan yang tidak diinginkan komponen
campur, dengan memanfaatkan perbedaan absorbansi pada dua panjang
gelombang dalam spektrum campuran. Ini secara langsung memberikan
konsentrasi komponen yang menarik tanpa gangguan dari komponen lain yang
ada dalam campuran atau formulasi. Dasar untuk metode dual wavelength adalah
pemilihan dua panjang gelombang seperti itu di mana komponen yang
mengganggu menunjukkan absorbansi yang sama perbedaan dalam absorbansi
adalah nol, sedangkan komponen bunga menunjukkan ketergantungan konsentrasi
yang signifikan perbedaan absorbansi pada panjang gelombang yang dipilih (Jain,
et al., 2010; Pradhan, et al., 2014).
Aplikasi beberapa metode Dual Waveleangth dapat dilihat pada Tabel 2.2.
Tabel 2.2 Aplikasi Spektrofotometri UV secara DWM Pada Berbagai Zat

Senyawa/sediaan Metode/teknik Pelarut Referensi
Nitazoxanide dan Dual Waveleangth method Campuran (Bindaiya, et
ofloxacin diklorometan al., 2010)
dan hexane
(60:40)
Sulfadoxine DWMdan Metil blue Aquades (Sharma dan
Sharma,
2011)
Meropenem dan natrium DWM dan kemometri Natrium (Marwada, et

sulbactam hipoksida, al., 2014)
aquades dan
metanol
Atenolol dan indapamid DWM dan simultaneous metanol (Fernandes, et
equation al., 2008)
22
Atorvastatin dan DWM dan Ratio Methanol (Abdelwahab,
ezitimide subtraction et al., 2012)
2.6 Ratio Subtraction Method (RSM)
Metode ini diterapkan untuk analisis campuran dua obat X dan Y memiliki
spektrum yang tumpang tindih dan salah satunya diperpanjang, untuk dapat
menentukan X dengan membagi spektrum campuran oleh konsentrasi Y yang
diketahui sebagai pembagi (Y0). Hasil spektrum akan memberikan kurva baru
yang mewakili X/Y + konstan. Metode ini akan memisahkan spektrum campuran
menjadi spektrum tunggalnya sehingga hasil spektrum diplot kurva kalibrasinya
dan di tentukan kadarnya(Ali dan Abdelwahab, 2013).
Campuran obat X dan Y dibagi dengan pembaginya (Y0) sehingga
menghasilkan kurva baru X/Y + konstan. Jika kurva tersebut dikurangkan dengan
konstantanya yaitunya Y/Y0 menghasilkan kuvra baru yang mewakili X/Y lalu
kurva tersebut dikalikan dengan pembaginya (Y0). Akhirnya didapatkan spektrum
orde nol atau kurva kalibrasi dari X. Penjelasan diatas dapat dijabarkan sebagai
berikut:
X+Y X Y
Langkah 1: = + (konstanta)
Y0 Y0 Y0
X X
Langkah 2: + konstanta – konstanta =
Y0 Y0
X
Langkah 3: xY0 = X
Y0
(Kamal, et al., 2016).
Konsentrasi X dihitung menggunakan persamaan regresi mewakili
korelasi antara amplitudo rasio spektrum X/Y dan konsentrasi X yang sesuai
dalam perbedaan konsentrasi. Sedangkan, untuk menentukan komponen
23
y,dilakukan pengembangan dari metode ini yaitu metode extended ratio
subtractiondimana Y dapat ditentukan dengan cara membagi spektrum campuran
denganspektrum orde nol yang diperoleh dari nila manipulate sebelumnya(X0).
Spektrum tersebut digunakan sebagai pembagi (X0). Spektrum yang diperoleh dari
pembagian tersebut dikurangkan dengan konstanta X/cdimana X adalah spektrum
dari konsentrasi yang diketahui. Lalu hasil spektrum tersebut menghasilkan kurva
yang baru mewakili Y/X lalu kurava tersebut dikalikan dengan pembagi (X0) sehingga
didapatkan kurva baru spektrum orde nol dari Y.
rumus:
X+Y X Y Y
+ - = xX=Y
X° X° X° X°
Konsentrasi y dapat dihitung dengan kurva kalibrasi dari spektrum Y yang
mempunyai hubungan linear antara absorbansi pada panjang gelombang maksimum
dengan konsentrasi yang sesuai (El-Ghobashy dan Abo-Talib, 2010; Lotfy, et al., 2013).
Aplikasi beberapa ratio subtraction method dapat dilihat pada Tabel 2.3.
Tabel 2.3 Aplikasi Spektrofotometri UV secara RSM pada Berbagai Zat

Senyawa/sediaan Metode/teknik Pelarut Referensi
Omeprazole, tinidazole RSM, RSM, rasio Etanol (Lotfy, et al.,
dan claritromisin difference 2012)
Benazepril dan RSM, principal component Metanol (Farouk, et al.,

amlodipin regression dan partial 2014)
least squares
Timolol dan RSM, absorbance Metanol (Lotfy, et al.,
dorzolamide subtraction dan amplitude 2014)
modulation
Flumethasone dan RSM, ratio difference, Metanol (Abdel-Aleem, et
clioquinol RSM al., 2015)
Ambroksol dan RSM,derivative ratio Metanol (Darwish, et al.,

doxycycline 2015)
24
Sofosbuvir dan RSMdan ratio difference Metanol (Hassouna dan
ledipasvir Mohamed, 2018)
2.7 Validasi Metode Analisis
Validasi metode menurut United State Pharmacopeia (USP) dilakukan
untuk menjamin bahwa metode analisis akurat, spesifik, reprodusibel dan tahan
pada kisaran analit yang akan dianalisis.
Suatu metode analisis harus divalidasi untuk melakukan verifikasi bahwa
parameter-parameter kinerjanya cukup mampu untuk mengatasi problem analisis,
karenanya suatu metode harus divalidasi, ketika:
- Metode baru dikembangkan untuk mengatasi problem analisis tertentu
- Metode yang sudah baku direvisi untuk menyesuaikan perkembangan
- Penjaminan mutu yang mengindikasikan bahwa metode baku telah
berubah seiring dengan berjalannya waktu
- Metode baku digunakan di laboratorium yang berbeda, dikerjakan dengan
analis dan alat yang berbeda
- Untuk mendemonstrasikan kesetaraan antar 2 metode, seperti antara
metode baru dan metode baku.
Menurut USP, ada 8 langkah dalam validasi metode analisis yaitu: presisi,
akurasi, batas deteksi, batas kuantifikasi, spesifisitas, linieritas dan daerah,
kekasaran (Rudggedness) dan ketahanan (Robutness).
Sementara itu International Conference on Harmanization (ICH) membagi
karakteristik validasi metode yang sedikit berbeda dengan USP yaitu: presisi,
25
akurasi, batas deteksi, batas kuantifikasi, spesifisitas, linieritas, kisaran (range),
ketahanan (Robustness) dan kesesuaian sistem.
1. Akurasi
Akurasi atau kecermatan adalah ukuran yang menunjukkan derajat kedekatan
hasil analis dengan kadar analit yang sebenarnya. Range nilai % recovery analit
yang dapat diterima adalah 90 – 110%. Range tersebut bersifat fleksibel
tergantung dari kondisi analit yang diperiksa, jumlah sampel dan kondisi
laboratorium. Akurasi dinyatakan sebagai persen perolehan kembali (recovery)
analit yang ditambahkan (Harmita, 2004).
Tabel 2.4 Kriteria Daerah recovery yang Dapat Diterima (Harmita, 2004).
Analit pada matriks sampel (%) Daerah recovery yang diperoleh
100 98 – 102%
>10 98 – 102%
>1 97 – 103%
>0,1 95 – 105%
0,01 90 – 107%
0,001 90 – 107%
0,0001 (1ppm) 80 – 110%
0,00001 (100ppb) 80 – 110%
0,000001 (10 ppb) 60 – 115%
0,0000001 (1 ppb) 40 – 120%
2. Presisi
Presisi atau keseksamaan adalah ukuran yang menunjukkan derajat kesesuaian
antara hasil uji individual, diukur melalui penyebaran hasil individual dari rata-
rata jika prosedur diterapkan secara berulang pada sampel – sampel yang diambil
dari campuran yang homogeny (Harmita, 2004). Presisi biasanya dinyatakan
dalam koefisien variasi (KV). Suatu metode dapat dinyatakan memiliki presisi
yang baik apabila memiliki KV < 2% tetapi kriteria ini fleksibel tergantung dari
kondisi analit yang diperiksa, jumlah sampel dan kondisi laboratorium.
Tabel 2.5 Kriteria KV yang Dapat Diterima
26
Kadar Analit KV (%)
≥ 1% 2,5
0,1% 5
1 ppm 16
1ppb 32
3. Keterulangan
Suatu metode analisis harus dapat diulang terhadap sampel yang sama dan
hasil yang memenuhi persyaratan statistik secara umum.
Keterulangan adalah keseksamaan metode jika dilakukan berulang kali oleh analis
yang sama pada kondisi sama dan dalam interval waktu yang pendek.
Keseksamaan dapat dihitung dengan cara berikut:
∑(𝑋𝑖−𝑋̅ )2
SD = √ (𝑛−1)
𝑆𝐷
KV = x 100%
𝑋
Keterangan:
SD = Standard deviasi
KV = Koefisien Variasi (Harmita, 2004).
4. Sensitivitas
Limit of Detection (LOD) didefinisikan sebagai konsentrasi analit terndah
dalam sampel yang masih dapat dideteksi. LOD yang paling umum digunakan
dalam kimia analisis adalah bahwa LOD merupakan kadar analit yang
memberikan respon sebesar respon blanko (yb) ditambah dengan 3 simpangan
baku blanko (3Sb). Sedangkan LOQ didefinisikan sebagai konsentrasi analit
terendah dalam sampel yang dpat ditentukan dengan presisi dan akurasi yang
dapat diterima pada kondisi operasional metode yang digunakan(Harmita, 2004).
27
5. Selektivita
Selektivitas adalah kemampuan yang hanya mengukur zat tertentu saja secara
cermat dan seksama dengan adanya komponen lain yang mungkin ada dalam
matriks sampel. Selektivitas seringkali dapat dinyatakan sebagai derajat
penyimpangan (degree of bias) metode yang dilakukan terhadap sampel yang
mengandung bahan yang ditambahkan berupa cemaran, hasil urai, senyawa
sejenis, senyawa asing lainnya dan dibandingkan terhadap hasil analisis sampel
yang tidak mengandung bahan lain yang ditambahkan (Harmita, 2004).
6. Linieritas
Linieritas merupakan kemampuan suatu metode untuk memperoleh hasil –
hasil uji yang secara langsung proporsional dengan konsentrasi analit pada kisaran
yang diberikan. Linieritas suatu metode merupakan ukuran seberapa baik kurva
kalibrasi yang menghubungkan antara respon (y) dengan konsentrasi (x).
Linieritas dapat diukur dengan melakukan pengukuran tunggal pada konsentrasi
yang berbeda-beda. Data yang diperoleh selanjutnya diproses dengan metode
kuadrat terkecil, untuk selanjutnya dapat ditentukan nilai kemiringan (slope),
intersep dan koefisien korelasinya (Harmita, 2004).
7. Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi
Batas deteksi adalah jumlah terkecil analit dalam sampel yang dapat
dideteksi yang masih memberikan respon signifikan dibandingkan dengan blanko.
Batas kuantitasi merupakan parameter pada analisis renik dan diartikan sebagai
kuantitas terkecil analit dalam sampel yang masih dapat memenuhi kriteria cermat
dan seksama (Harmita, 2004).
28
Menurut Harmita (2004), penentuan batas deteksi suatu metode berbeda-
beda tergantung pada metode analisis itu mengggunakan instrumen atau tidak.
Pada analisis instrumen batas deteksi dapat dihitung dengan mengukur respon
blanko beberapa kali lalu dihitung simpangan baku respon blanko dan forsa di
bawah ini dapat digunakan untuk perhitungan.
𝐾 𝑥 𝑆𝑏
Q= 𝑆1
Keterangan:
Q = LOD (batas deteksi) dan LOQ (batas kuantitasi)
K = Perkalian 3 untuk LOD dan 10 untuk LOQ
Sb = Simpangan baku respon analititk dari blanko
Sl = Arah garis linear dari kurva antara respon terhadap konsentrasi
29
BAB III
METODE PENELITIAN
Penelitian ini bersifat eksperimental dan deskriptif, dilakukan di
Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
3.1 Alat dan Bahan
3.1.1 Alat-alat
Spektrofotometer UV-Vis 1800 (Shimadzu) serta seperangkat Personal
Computer (PC) yang dilengkapi dengan software UV-Probe 2.42, Microsoft
Excel dan SPSS 20, Matlab® versi R2016a, kuvet 1 cm, alat-alat gelas, lumpang
dan alu, bola karet, neraca analitik (Boeco), sonikator (Branson 1510), pH meter
(Hanna) serta alat-alat lainnya yang diperlukan dalam penyiapan sampel dan
larutan.
3.1.2 Bahan-bahan
Semua pereaksi yang digunakan adalah grade analysis kecuali dinyatakan
lain. Baku irbesartan (BPOM), baku hidroklorotiazid (Kimia Farma),
akuabidestilata (PT. Ika Pharmindo), natrium hidroksida (E-Merck), kalium
30
dihidrogenfosfat (E-Merck) 0,1 M, kertas saring whatman no. 42, kertas
perkamen, tablet Co Aprovel® (Sanofi) dan Irtan Plus ® (Ikampharmindo).
3.2 Prosedur Penelitian
3.2.1 Pembuatan Pelarut Natrium Hidroksida 0,1 N
Dilarutkan sebanyak 4 g NaOH dalam akuades bebas CO2 kemudian
dicukupkan sampai 1000ml (Ditjen POM Depkes RI, 1995).
3.2.2 Pembuatan larutan kalium dihidrogenfosfat 0,1 M
Dilarutkan 6,805 g kalium dihidrogenfosfat dalam akuabidestilata,
dicukupkan volumenya hingga 500 mL dengan akuabidestilata (Ditjen POM,
1995).
3.2.3 Pembuatan larutan dapar fosfat pH 4
Dicampurkan 50,0 mL kalium dihidrogenfosfat 0,1 M dengan 3,6 mL
natrium hidroksida 0,1 N, diencerkan dengan akuabidestilata hingga 100 mL
(Ditjen POM, 1995).
(Ditjen POM, 1995).
(Ditjen POM, 1995).
31
(Ditjen POM, 1995).
(Ditjen POM, 1995).
(Ditjen POM, 1995).
3.2.9 Optimasi pelarut
Dilakukan optimasi dengan mengukur serapan yang dihasilkan oleh
irbesartandan hidroklorotiazid dalam NaOH 0,1 N dan campuran methanol: dapar
fosfat pH 4; pH 5; pH 6 serta NaOH 0,1 N:dapar fosfat pH 8; pH 9; pH 10 pada
perbandingan yang ditentukan.
3.2.10 Pembuatan Larutan Induk Baku Irbesartan
Ditimbang dengan seksama 50 mg baku irbesartan, kemudian dimasukkan
ke dalam labu tentukur 50 ml. Dilarutkan dengan NaOH 0,1 N hingga larut dan
dicukupkan volume dengan pelarut yang sama sampai garis tanda hingga
diperoleh larutan dengan konsentrasi 1000 μg/ml, yang disebut sebagai larutan
Larutan Induk Baku I (LIB I). Dari larutan LIB I dipipet 5 ml dan dimasukkan ke
dalam labu tentukur 50 ml, dicukupkan dengan pelarut yang sama sehingga
32
diperoleh konsentrasi larutan irbesartan 100 μg/ml, yang disebut dengan sebagai
Larutan Induk Baku II (LIB II).
3.2.11 Pembuatan Larutan Induk Baku Hidroklorotiazid
Ditimbang dengan seksama 50 mg baku hidroklorotiazid, kemudian
dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml. Dilarutkan dengan NaOH 0,1 N hingga
larut dan dicukupkan volume dengan pelarut yang sama sampai garis tanda hingga
diperoleh larutan dengan konsentrasi 1000 μg/ml, yang disebut dengan Laurtan
Induk Baku I (LIB I). Dari larutan LIB I dipipet 5 ml dan dimasukkan ke dalam
labu tentukur 50 ml, dicukupkan dengan pelarut yang sama sehingga diperoleh
konsentrasi larutan hidroklorotiazid 100 μg/ml, yang disebut dengan sebagai
Larutan Induk Baku II (LIB II).
3.3 Analisis Kualitatif
3.3.1 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum Irbesartan
Dipipet 1 ml dari LIB II irbesartan, dimasukkan ke dalam labu tentukur 1
ml dan dicukupkan dengan pelarut NaOH 0,1 N sampai garis tanda. Dikocok
sampai homogen hingga diperoleh larutan irbesartan dengan konsentrasi 10
μg/ml, kemudian diukur serapannya pada rentang panjang gelombang 200-400nm.
3.3.2 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum Hidroklorotiazid
Dipipet 0,8 ml dari LIB II hidroklorotiazid, dimasukkan ke dalam labu
tentukur 10 ml dan dicukupkan dengan pelarut NaOH 0,1 N sampai garis tanda.
Dikocok sampai homogen hingga diperoleh larutan hidroklorotiazid dengan
konsentrasi 8 μg/ml, kemudian diukur serapannya pada rentang panjang
gelombang 200-400nm.
33
3.3.3. Pembuatan Spektrum Serapan Baku Campuran Irbesartan dan
Hidroklorotiazid
Dipipet masing-masing 10 ml dan 8 ml dari LIB II irbesartan dan LIB II
hidroklorotiazid, kemudian kedua larutan tersebut dicampurkan ke dalam labu
tentukur 10 ml dan dicukupkan sampai garis tanda dengan NaOH 0,1 N. Diukur
serapan pada rentang panjang gelombang 200-400 nm.
3.3.4 Pembuatan Spektrum Serapan Rasio Baku
3.3.4.1 Pembuatan Spektrum Serapan Rasio Baku Irbesartan
Dipipet LIB II irbesartan sebanyak 0,5 ml; 0,75 ml; 1 ml; 1,25 ml dan 1,5
ml secara berurutan. Masing-masing hasil pemipetan dimasukkan ke dalam labu
tentukur 10 ml, kemudian diencerkan dengan NaOH 0,1 N hingga garis tanda.
Dikocok sampai homogen sehingga diperoleh konsentrasi larutan irbesartan 5
μg/ml; 7,5 μg/ml; 1 μg/ml; 1,25 μg/ml; 1,5 μg/ml. Diukur serapan pada panjang
gelombang 200-400 nm.
3.3.4.2 Pembuatan Spektrum Serapan Rasio Baku Hidroklorotiazid
Menurut Rivai et al (2016), pemilihan konsentrasi untuk serapan baku
hidroklorotiazid pada 4-12 μg/ml. Dipipet LIB II hidroklorotiazid sebanyak 0,4
ml; 0,6 ml; 0,8 ml; 1 ml dan 1,2 ml secara berurutan. Masing-masing hasil
pemipetan dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 ml, kemudian diencerkan
dengan NaOH 0,1 N hingga garis tanda. Dikocok sampai homogen sehingga
diperoleh konsentrasi larutan hidroklorotiazid 4 μg/ml; 6 μg/ml; 8 μg/ml; 10
μg/ml; 12 μg/ml. Diukur serapan pada panjang gelombang 200-400 nm.
34
3.3.4.3 Pembuatan Spektrum Serapan Rasio Campuran Irbesartan dan
Hidroklorotiazid
Pada penentuan panjang gelombang analisis campuran irbesartan dan
hidroklorotiazid dengan rasio 5:4. Dipipet LIB II irbesartan dan hidroklorotiazid
masing-masing kedalam labu 10 ml dengan konsentrasi masing-masing 5:4
µg/mL; 7,5:6 µg/mL; 10:8 µg/mL; 12,5:10 µg/mL; 15:12 µg/mL untuk irbesartan
dan hidroklorotiazid. Kemudian di ukur pada rentang panjang gelombang 200-400
nm.
3.3.5 Penentuan Panjang Gelombang (λ) Analisis IRB dan HCT secara
DWM
Pada penentuan panjang gelombang analisis IRB dan HCT, dicari λ dimana
untuk satu obat memiliki dua λ. Penentuan panjang gelombang dilakukan dengan
menentukan selisih absorbansi pada spektrum IRB dengan berbagai konsentrasi
(5; 7,5; 1; 1,25; 1,5 μg/ml) yang mendapatkan selisih absorbansi adalah nol (∆A=
A2-A1) maka panjang gelombang tersebut digunakan sebagai panjang gelombang
analisis untuk HCT (λ1, λ2). Hubungan linieritas terbaik antara konsentrasi
dengan nilai DWM, yang ditunjukkan dengan nilai koefisien korelasi (nilai r ≤ 1)
mendekati satu.
Begitu pula dengan HCT, selisih absorbansi HCT dengan berbagai
konsentrasi (4; 6; 8; 10; 12 μg/ml) yang mendapatkan selisih absorbansi adalah
nol maka panjang gelombang tersebut digunakan panjang gelombang analisis
untuk IRB (λ3, λ4). Hubungan linieritas terbaik antara konsentrasi dengan nilai
DWM, yang ditunjukkan dengan nilai koefisien korelasi (nilai r ≤ 1) mendekati
satu.
35
3.3.6 Pembuatan Kurva Kalibrasi IRB dan HCT secara DWM
Nilai DWM IRB dan HCT masing-masing dari berbagai konsentrasi yang
dihasilkan dari spektrum serapan pada λ yang diperoleh, dihitung dan diplot
untuk mendapatkan persamaan garis regresi.
3.3.7 Pembuatan Spektrum Serapan dan Kurva Kalibrasi secara RSM
3.3.7.1 Pembuatan Spektrum Serapan dan Kurva KalibrasiIrbesartansecara

RSM
Spektrum serapan campuran IRB dan HCT dibagi dengan spektrum
serapan hidroklorotiazid konsentrasi 8μg/mL sebagai pembagi. Dilakukan
manipulate dengan bantuan software UV Probe 2.34 untuk mendapatkan
spektrum orde nol IRB dan plot regresi atau kurva kalibrasi irbesartanberbagai
konsentrasi obat.
3.3.7.2 Pembuatan Spektrum Serapan dan kurva kalibrasi

Hidroklorotiazidsecara RSM
Spektrum serapan campuran IRB dan HCT dibagi dengan spektrum orde
nol IRB sebelumnya yaitu konsentrasi 10 μg/mLsebagai pembagi. Dilakukan
manipulat dengan bantuan software UV Probe 2.34 untuk mendapatkan spektrum
orde nol HCT dan plot regresi atau kurva kalibrasi HCT berbagai konsentrasi
obat.
3.4 Validasi metode
3.4.1 Linearitas, Batas Deteksi (Limit of Detection, LOD) dan Batas Deteksi
(Limit of Quantification, LOQ)
Dipipet masing-masing 0,5; 0,75; 1; 1,25 dan 1,5 ml LIB II irbesartan
kedalam labu ukur 10 mL, kemudian dicukupkan volumenya dengan
36
menggunakan pelarut sampai garis tanda untuk mendapatkan larutan irbesartan
konsentrasi 5; 7,5; 1; 1,25; 1,5 μg/ml secara berturut-turut.
Dipipet masing-masing 0,4; 0,6; 0,8; 1; 1,2 mL LIB II hidroklorotiazid
kedalam labu ukur 10 mL, kemudian dicukupkan volumenya dengan
menggunakan pelarut sampai garis tanda untuk mendapatkan larutan
hidroklorotiazid konsentrasi 4; 6; 8; 10; 12 µg/mL secara berturut-turut.
Larutan-larutan diatas dilihat serapannya pada λ analisis masing-masing
zat yang telah ditentukan. Kemudian dilakukan analisis hubungan antara
konsentrasi dengan serapan untuk masing-masing zat, sehingga didapat
persamaan regresi linear dan juga nilai korelasinya.
y = a + bx
Berdasarkan absorbansi pada λ analisis dilakukan pula perhitungan LOD
dan LOQ.
2
  Y  Yi 
SD = n2
3,3 x SD
LOD =
slope
10 x SD
LOQ =
slope
Keterangan:
SD = Standard Deviation (Residual Standard Deviation)
Slope = b
3.4.2 Uji Perolehan Kembali
Uji perolehan kembali dilakukan dengan pengukuran persentase perolehan
kembali pada tiga daerah spesifik, yakni: 80%, 100% dan 120%. Dimana pada
37
masing-masing daerah spesifik digunakan 70% sampel irbesartan dan
hidroklorotiazid yang berasal dari tablet) yang dianalisis dan 30% berasal dari
baku yang akan ditambahkan (metode adisi standar) (Harmita, 2004).
Pada metode adisi standar (penambahan bahan baku), sejumlah sampel
yang dianalisis ditambah analit dengan konsentrasi yang diperlukan dari kadar
analit yang diperkirakan, dicampur dan dianalisis kembali. Selisih kedua hasil
dibandingkan dengan kadar yang sebenarnya (Harmita, 2004). Menurut Harmita
(2004), dalam kedua metode tersebut, kadar yang diperoleh dinyatakan sebagai
rasio antara hasil yang diperoleh dengan hasil yang sebenarnya:
CF −CA
Y= x 100%
C∗A
Keterangan:
Y = Persentase perolehan kembali

CF = Jumlah analit yang terukur
CA = Jumlah analit dalam sampel (70% berasal dari sampel)
CA∗ = Jumlah baku yang ditambahkan (30% berasal dari baku)
3.4.3 Pengujian Presisi
Presisi dinyatakan dengan SD atau RSD dari serangkaian data. Untuk
mencari RSD menggunakan rumus:
SD
RSD = x 100%
X
Keterangan:
RSD = Relative standard deviation

SD = Standard deviation
X = Data yang telah dirata-ratakan
3.4.4 Intraday dan interday
Intraday dan interday merupakan pengukuran presisi dengan sampel
simultan. Intraday merupakan pengulangan yang dilakukan tiap jam tertentu
38
dalam satu hari, sedangkan interday merupakan pengulangan yang dilakukan tiap
hari pada jam tertentu dalam beberapa hari (Harmita, 2004).
Intraday dan interday dilakukan dengan tiga kali pengulangan pada setiap
konsentrasi. Intraday adalah tiga kali pengulangan di hari yang sama (pagi, siang,
sore) dan interday adalah tiga kali pengulangan dengan 3 hari berbeda (hari ke-1,
ke-2, ke-3). Penentuan presisi interday dan intraday dilihat dari standar deviasi
relatifnya< 2,5% (Harmita, 2004).
3.5 Penentuan Kadar Irbesartan dan Hidroklorotiazid dalam Sediaan Tablet
3.5.1 Penentuan Kadar Irbesartan dan Hidroklorotiazid dalam Sediaan

Tablet
Ditimbang 20 tablet, kemudian digerus dalam lumpang sampai halus dan
homogen. Ditimbang seksama sejumlah serbuk setara 25 mg irbesartan
(penimbangan dilakukan sebanyak 6 kali pengulangan) dan dihitung kesetaraanh
hidroklorotiazid didalamnya. Dimasukkan serbuk yang telah ditimbang ke dalam
labu tentukur 50 ml, dilarutkan dengan pelarut NaOH 0,1 N dan dicukupkan
sampai garis tanda, kemudian dihomogenkan dengan sonikator selama 10 menit.
Larutan tersebut disaring, lebih kurang 10 ml filtrat pertama dibuang dan filtrat
selanjutnya ditampung. Kemudian dipipet 0,5 ml filtrat dan dipipet 1,86 ml dari
LIB II hidroklorotiazid, dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 ml dan
dicukupkan dengan pelarut NaOH 0,1 N garis tanda sehingga diperoleh larutan
39
dengan konsentrasi irbesartan 10 μg/ml dan hidroklorotiazid 8 μg/ml. Diukur
serapan pada panjang gelombang 200-400 nm. Absorbansinya kemudian diukur
sesuai dengan prosedur hasil optimasi baik dengan menggunakan DWMmaupun
secara RSM.
3.5.2 Perhitungan Kadar Irbesartan dan Hidroklorotiazid dalam Sediaan

Tablet
Nilai absorbansi yang didapatkan dari analisis disubstitusikan kedalam
persamaan garis regresi yang didapatkan sehingga akan didapatkan kadar analit
(irbesartan dan hidroklorotiazid) dalam sampel . Kadar analit (irbesartan dan
hidroklorotiazid) dalam satu tablet dapat dihitung dengan menggunakan rumus:
(C/1000) x Fp x A
X = xB
S
Keterangan:
X = Kadar analit dalam satu tablet
C = Kadar analit dalam sampel
Fp = Faktor pengenceran (10000)
A = Berat sampel setara dengan satu tablet (berat 20 tablet dibagi 20)
S = Berat sampel yang dilarutkan (berat sampel setara 100 mg irbesartan)
B = Kadar yang tertera dalam sertifikat analisis
3.6 Analisis Data Secara Statistik
Data perhitungan kadar irbesartan dan hidroklorotiazid dianalisis secara
statistik dengan menggunakan uji ttabel distribusi t.
Rumus yang digunakan adalah:
𝛴(𝑋𝑖−𝑋̅ )2
𝑆𝐷 = √ 𝑛−1
Untuk menghitung thitung digunakan rumus
𝑋−𝑋̅
𝑡ℎ𝑖𝑡𝑢𝑛𝑔 = 𝑆𝐷/
√𝑛
40
Kadar sebenarnya dengan taraf kepercayaan 99% dan nilai α = 0,01,
dihitung dengan menggunakan rumus:
SD
̅±t 1
µ= X ×
(1− α)dk √n
2
Keterangan:
µ = interval kadar sebenarnya
̅
X = kadar rata-rata sampel
X = kadar sampel
t = harga t tabel sesuai dengan dk = n-1
dk = derajat kebebasan (n-1)
α = tingkat kepercayaan
SD = standar deviasi
n = jumlah perlakuan
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Optimasi Pelarut
Optimasi perlarut menjadi tahap awal yang dilakukan dalam melakukan
penelitian ini, dimana optimasi pelarut berguna untuk mengetahui kelarutan dari
senyawa obat tersebut (IRB dan HCT) dalam pelarut yang akan digunakan dalam
analisis. Absorbansi IRB dan HCT pada konsentrasi 10 µg/ml dan 8 µg/ml secara
berturut-turut serta persen transmitan dan nilai persen transmitan dapat dilihat
pada Tabel 4.1 sedangkan, nilai persen kesalahan fotometrik dapat dilihat pada
Tabel 4.2.
41
Tabel 4.1 Absorbansi dan % transmitan IRB dan HCT
Absorbansi % Transmitan
Jenis Pelarut
IRB HCT IRB HCT
NaOH 0,1 N pH 11,8 0,4454 0,4296 0,3586 0,3719
NaOH 0,1 N: Dapar Posfat pH 10 0,4511 0,427 0,3539 0,3741
Metanol: Dapar Posfat pH 6 0,5349 0,4901 0,2918 0,3235
Tabel 4.2 Kesalahan fotometrik

Selisih Kesalahan Jumlah
Kesalahan Fotometrik dengan Selisih
Jenis Pelarut Fotometrik (%) Kesalahan Terkecil Kesalahan
(%) Fotometrik
IRB HCT IRB HCT (%)
NaOH pH 11,8 2,7192 2,7185 0,0009 0,0002 0,0010
NaOH 0,1 N: Dapar Posfat
pH 10 2,7203 2,7187 0,0020 0,0004 0,0024
pH 9 2,7237 2,7186 0,0053 0,0003 0,0057
pH 8 2,7280 2,7220 0,0097 0,0037 0,0133
Metanol: Dapar Posfat pH 6 2,7824 2,7391 0,0641 0,0208 0,0848
Metanol: Dapar Posfat pH 5 2,7268 2,7490 0,0084 0,0307 0,0392
Metanol: Dapar Posfat pH 4
2,7194 2,7441 0,0011 0,0258 0,0269
Jenis pelarut yang digunakan pada optimasi pelarut adalah NaOH, NaOH
0,1 N: Dapar Posfat pH 10:NaOH 0,1 N: Dapar Posfat pH 9: NaOH 0,1 N: Dapar
Posfat pH 8: dapar posfat pH 6, metanol: dapar posfat pH 5, dan metanol: dapar
posfat pH 4. Absorbansi dari IRB dan HCT diukur pada λ 200-400 nm dalam
masing-masing pelarut tersebut kemudian dipilih pelarut yang akan digunakan
untuk analisis selanjutnya berdasarkan pada jumlah kesalahan fotometrik dari
absorbansi yang terukur pada konsentrasi tertentu dengan terlebih dahulu
diselisihkan dengan nilai kesalahan fotometrik terkecil yang didapatkan ketika
42
mengukur zat tersebut pada absorbansi 0,4343, yaitu 2,7185. Perhitungan untuk
mendapatkan % transmitan dan kesalahan fotometrik dapat dilihat pada Lampiran
4.
Menurut Gandjar dan Abdul (2007), absorbansi yang terbaca pada
spektrofotometer hendaknya antara 0,2 sampai 0,8 atau 15%-70% jika dibaca
sebagai transmitan, karena kesalahan pembacaannya adalah 0,0005 (kesalahan
fotometrik). Pernyataan di atas menunjukkan bahwa pengukuran serapan
dilakukan pada rentang tertentu yang kesalahan fotometriknya kecil, sehingga
pelarut yang paling optimal untuk digunakan dalam penelitian ini dipilih bukanlah
berdasarkan pada serapan yang memberikan absorbansi dengan nilai
maksimal/paling besar yang dihasilkan oleh masing-masing zat pada pelarut
tersebut, namun berdasarkan pada jumlah kesalahan fotometrik yang paling
kecil.
Penjumlahan kesalahan fotometrik didapatkan dari penjumlahan
kesalahan fotometrik masing-masing zat (IRB dan HCT). Jumlah kesalahan
fotometrik dari zat dalam jenis pelarut lebih jelasnya dapat dibandingkan satu
sama lain dengan menggunakan grafik. Grafik jumlah kesalahan fotometrik
terhadap jenis pelarut dapat dilihat pada Gambar 4.1.
43
5.4423 5.5215
5.4377
Jumlah Persen Kesalahan Fotometrik

5.5400 5.4758
5.5200
5.4500 5.4635
5.5000 N pH 11.8
5.4390
5.4800 NDP 10
5.4600 NDP 9
5.4400 NDP 8
5.4200 MDP 6
5.4000 MDP 5
5.3800 MDP 4
N pH NDP 10 NDP 9 NDP 8 MDP 6 MDP 5 MDP 4
11.8
Jenis Pelarut
Gambar 4.1 Grafik jumlah kesalahan fotometrik terhadap jenis pelarut

Keterangan :
N = NaOH 0,1 N= pH 11,8
NDP 10 = NaOH 0,1 N: Dapar Posfat pH 10 = pH 11,8
NDP 9 = NaOH 0,1 N: Dapar Posfat pH 9 = pH 11,5
MDP 8 = NaOH 0,1 N: Dapar Posfat pH 8 = pH 11,1
MDP 6 = Metanol: Dapar posfat pH 6 = pH 6,2
Berdasarkan Tabel 4.1 dan Gambar 4.1 dapat disimpulkan bahwa NaOH
adalah pelarut yang memilki serapan yang memberikan absorbansi dengan nilai
maksimal dengan jumlah kesalahan fotometrik terkecil. Selain itu, NaOH juga
memilki syarat-syarat sebagai pelarut untuk analisis dengan metode
spektrofotometri yaitu bebas dari kontaminan, mudah didapatkan/dibeli, dan
murah pada daerah panjang gelombang analisis (USP, 2007).
Absorbansi dari IRB dan HCT dipengaruhi oleh variasi pH dan
polaritas pelarut yang digunakan. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian yang
telah dilakukan oleh Adam (2017) bahwa variasi pH dan polaritas pelarut
44
berpengaruh terhadap absorbansi dari zat yang dianalisis. Absorbansi dari IRB
dan HCT dengan nilai paling maksimal dimiliki oleh NaOH.
Berdasarkan hal tersebut maka pelarut yang dipilih untuk digunakan dalam
penelitian ini adalah NaOH 0,1 N.
4.2 Studi Spektrum Tumpang Tindih
Studi spektrum tumpah tindih didapatkan dari spektrum serapan maksimal
dari IRB dan HCT serta campuran IRB dan HCT. Pada spektrum serapan
maksimal IRB digunakan konsentrasi 10 µg/ml dan untuk HCT konsentrasi 8
µg/ml, maka didapatkan perbandingan rasio 5:4 untuk IRB dan HCT masing-
masing.
Menurut Kamal et al, (2016), penentuan studi spektrum tumpang tindih
menjadi poin mula untuk menetapkan kadar mengunakan metode dual wavelenght
dan ratio subtraction. Penentuan in penting dalam mencari panjang gelombang
yang digunakan untuk analisis, dimana studi spektrum tumpang tindih dapat
menghasilkan titik panjang gelombang yang digunakan untuk metode dual
wavelenght. Sedangkan untuk metode ratio subtraction penentuan mula obat yang
digunakan sebagai divisor awal dimana X atau Y ditentukan untuk dapat
dilanjutkan ke langkah berikutnya.
45
243,4
263,4 281
247,6
Gambar 4.2Spektrum serapan maksimum IRB dan HCT serta campurannya.

Keterangan: Spektrum IRB 10 µg/mL + HCT 8 µg/mL
Spektrum HCT 8 µg/mL
Spektrum IRB 10 µg/mL
Pada dual wavelength studi spektrum tumpang tindih berguna sebagai
pemilihan dua panjang gelombang yang dipilih, dimana kaidah penentuan panjang
gelombang untuk metode ini, absorbansi dari kedua panjang gelombang yang
dipilih memiliki selisih absorbansi yaitu nol dan konsentrasi yang digunakan
memenuhi hukum lambert beer yaitu 0,2-0,6.
Dari gambar 4.2 di atas dapat dilihat campuran kedua obat di ambil 2 titik
panjang gelombang untuk obat IRB pada panjang gelombang 247,6 nm (λ1)
menjadi panjang gelombang maximum sehingga di ambil pada panjang
gelombang tersebut dan tarik garis lurus sehingga didapatkan selisih absorbansi
nol lalu panjang gelombang yang menghasilkan selisih absorbansi nol dipilih
yaitu 243,4 nm (λ2) dimana pada panjang gelombang tersebut absorbansi IRB
sedang menaik dan absorbansi berada pada rentang lumbert beer. Begitu pula
46
untuk obat HCT dipilih panjang gelombang 263,4 nm (λ3) dimana pada panjang
gelombang tersebut terjadi titik perpotongan antara HCT dan IRB lalu di tarik
garis lurus untuk mendapatkan selisih absorbansi nol untuk panjang gelombang
kedua pada HCT yaitu 281 nm (λ4) dimana absorbansi sedang menaik dan
absorbansi memenuhi hukum lumbert beer.
Pada ratio subtraction pemilihan pembagi awal (Y°) yang digunakan untuk
manipulate dipilih dengan cara mengkaji spektrum tumpang tindih kedua obat
tunggal tersebut, dimana kaidah pemilihan pembagi awal (Y°) dilihat berdasarkan
luas area serta pengaruh terhadap konsentrasi, dari hasil spektrum yang diamati,
didapatkan bahwa HCT memiliki luas area yang lebih panjang dibandingkan
dengan IRB, sehingga HCT digunakan sebagai pembagi awal yaitu Y°. Penentuan
pembagi awal tersebut sangat berpengaruh pada hasil plot regresi dari campuran
obat, karna hasil plot regresi tersebut akan berbeda jika menggunakan IRB
sebagai divisor awal dan menghasilkan linearitas yang buruk.
4.3 Spektrum Rasio Serapan Baku
Spektrum rasio serapan baku IRB dan HCT dengan berbagai konsentrasi
dapat dilihat pada Gambar 4.3; 4.4; secara berturut-turut, sedangkan spektrum
campuran IRB dengan HCT berbagai konsentrasi dapat dilihat pada Gambar 4.5.
47
Gambar 4.3Spektrum serapan IRB dengan konsentrasi 5 – 15 µg/mL
Keterangan: Konsentrasi IRB 5 µg/mL
Konsentrasi IRB 7,5 µg/mL
Konsentrasi IRB 10 µg/mL
Gambar 4.4Spektrum serapan HCT dengan konsentrasi 4 – 12µg/mL

Keterangan: Konsentrasi HCT 4 µg/mL
Konsentrasi HCT 6 µg/mL
48
IRB 5 µg/mL + HCT 4 µg/mL
IRB 7.5 µg/mL + HCT 6 µg/mL
IRB 12.5 µg/mL+ HCT 10 µg/mL
Gambar 4.5Spektrum campuran IRB dan HCT berbagai konsentrasi

Keterangan: Konsentrasi IRB 5 µg/mL + HCT 4 µg/mL
Konsentrasi IRB 7,5 µg/mL + HCT 6 µg/mL
Konsentrasi IRB 10 µg/mL + HCT 8 µg/mL
Konsentrasi IRB 12,5 µg/mL+ HCT 10 µg/mL
Konsentrasi IRB 15 µg/mL + HCT 12 µg/mL
Spektrum serapan IRB maupun HCT dengan berbagai konsentrasi dalam
NaOH menunjukkan bahwa konsentrasi tidak mengubah bentuk spektrum dari
masing-masing zat, sehingga dapat disimpulkan bahwa IRB maupun HCT stabil
dalam pelarut NaOH.
Spektrum campuran IRB dan HCT akan menghasilkan spektrum yang
berbeda dengan spektrum masing-masing dari IRB dan HCT, hal ini dikarenakan
spektrum campuran merupakan kombinasi dari spektrum zat yang menyusunnya.
Spektrum serapan campuran baku IRB dan HCT dapat dilihat pada Gambar 4.5.
Metode spektrofotometri ultraviolet konvensional tidak dapat dilakukan
untuk menetapkan IRB maupun HCT dalam campuran IRB dan HCT karena
spektrum IRB dan HCT saling tumpang tindih, sehingga absorbansi pada λ
spektrum campuran IRB dan HCT tidak menggambarkan besar konsentrasi
49
masing-masing zat tersebut dalam campurannya. Berbeda dengan metode
spektrofotometri ultraviolet konvensional, metode spektrofotometri ultraviolet
secara DWM dan RSM memungkinkan untuk menetapkan kadar suatu zat dalam
campuran zat tersebut dengan zat lainnya, karena metode ini memungkinkan
pemisahan spektrum campuran sehingga penetapan kadar zat tunggal dalam
campurannya dapat dilakukan.
4.4 Dual Wavelength Method (DWM)
Dual wavelength method diawali dengan pentuan panjang gelombang yang
sebelumnya telah dibahas pada studi spektrum tumpang tindih. Hasil pemilihan
dua panjang gelombang tersebut di ambil dan dikurangkan sehingga didapat
selisih dari kedua panjang gelombang yang absorbansinya adalah nol. Selanjutnya
dapat dikonfirmasi bahwa pada panjang gelombang tersebut dapat digunakan
sebagai panjang gelombang analisis.
Studi tumpang tindih mendapatkan dua panjang gelombang IRB pada 247,6
nm dan 243,4 nm memiliki selisih absorbansi nol pada spektrum tunggal IRB.
Sehingga pada panjang gelombang tersebut dapat digunakan untuk mengukur
HCT dalam campuran obat. Karna diasumsikan bahwa perbedaan absorbansi pada
spektrum campuran obat tersebut adalah perbedaan absorbansi HCT.
Pada HCT di dapatkan dua panjang gelombang pada 263,4 nm dan 281 nm
(λ3 dan λ4) memiliki selisih absorbansi nol pada spektrum tunggal HCT.
Sehingga pada panjang gelombang tersebut dapat digunakan untuk pengukuran
IRB dalam campuran obat. Karna diasumsikan bahwa perbedaan absorbansi pada
spektrum campuran obat tersebut adalah perbedaan absorbansi IRB.
50
Penentuan regresi di dapatkan dengan memplot hasil selisih dari kedua
panjang yang dipilih berdasarkanspektrum rasio campuran obat berbagai
konsentrasi yang telah dibuat, sehingga didapatkan orde nol dan seterusnya dapat
dibuat dalam kurva kalibrasi agar bisa dilanjutkan untuk menetukan kadar obat.
Salah satu yang menjadi kaidah penting penentuuan panjang gelombang
yang digunakan ialah selisih absrobansi adalah 0. Berikut selisih absorbansi pada
panjang gelombang yang digunakan.
Tabel 4.3 perbedaan absorbansi pada panjang gelombang DWM

I
Relatif
Konsentrasi 243,4 247,6 Rata- Standar
selisih standar
IRB (µg/ml) nm nm rata deviasi
deviasi
0 0 0 0,000 0 0 0
5 0,2195 0,2202 -0,001 0,2199 0,0005 0,2251
7,5 0,3127 0,3127 0,000 0,3127 0,0000 0,0000
10 0,4454 0,4454 0,000 0,4454 0,0000 0,0000
12,5 0,5593 0,5594 0,000 0,5594 0,0001 0,0126
15 0,6825 0,6808 0,002 0,6817 0,0012 0,1763
II
Relatif
Konsentrasi 263,4 Rata- Standar
281 nm selisih standar
HCT (µg/ml) nm rata deviasi
deviasi
0 0 0 0 0 0 0
4 0,1559 0,1555 -0,0004 0,1557 0,0003 0,1817
6 0,2369 0,2374 0,0005 0,2372 0,0004 0,1491
8 0,3142 0,3134 -0,0008 0,3138 0,0006 0,1803
10 0,3812 0,3816 0,0004 0,3814 0,0003 0,0742
12 0,4646 0,4636 -0,0010 0,4641 0,0007 0,1524
Keterangan:I = Selisih nilai absorbansi pada spektrum tunggal IRB
II= Selisih nilai absorbansi pada spektrum tunggal HCT
Berdasarkan tabel di atas pemilihan panjang gelombang analisis memenuhi syarat
dengan nilai RSD < 2,5%, sehingga panjang gelombang dapat diterima sebagai
panjang gelombang pengukuran. Hasil kurva kalibrasi untuk analisis IRB dan
HCT dapat dilihat pada lampiran 10 dan 11.
51
4.5Ratio Subtraction Method(RSM)
Pada ratio subtraction method diawali dengan membuat spektrum rasio
dan memilih konsentrasi pembagi awalnya (Y°). Penentuan konsentrasi pembagi
diambil dari rentang konsentrasi yang memenuhi hukum Lambert-Beer (Hoang,
2014).
(a).
IR
B
CT
(b)
.H
Gambar 4.6 Tumpang tindih spektrum rasio IRB dan HCT dengan berbagai
konsentrasi
Keterangan:(a) Spektrum rasio IRB dengan berbagai konsentrasi;
(b) Spektrum rasio HCT dengan berbagai konsentrasi
Konsentrasi pembagi yang digunakan dalam penelitian ini adalah IRB 10
µg/ml dan HCT 8 µg/ml. Dasar pemilihan konsentrasi pembagi adalah tidak
terdapat perbedaan pada letak panjang gelombang maksimum dari zat-zat yang
dibagi spektrumnya, yang berbeda hanya nilai absorbansi yang dihasilkan serta
konsentrasi tersebut merupakan konsentrasi untuk panjang gelombang maksimum
(Saraan, 2015).
Pembagi awal (Y°) yang digunakan berdasarkan studi spektrum tumpang
tindih mendapatkan bahwa pembagi awal ialah HCT. Pengolahan spektrum
52
campuran obat baku di manipulate menggunkan UV probe 2.43 dengan operasi
division dengan HCT 8 µg/ml. lalu hasil tesebut di subtraction dengan konstanta
dimana konstanta ialah HCT 8 µg/ml yang dibagi dengan divisornya, hasil
pengurangan tersebut menghasilkan spektrum baru yaitu IRB/HCT°, lalu
spektrum tersebut di kalikan dengan divisor yang sama sehingga di dapatkan
spektrum IRB tunggal yang terpisah dari campurannya. Hasil Spektrum tersebut
diplot orde nol dengan persamaan regresi atau kurva kalibrasi yang dapat dilihat
pada lampiran 8 dan Hasil manipulate spektrum masing-masing langkah dapat
dilihat pada lampiran 6. Penjelasan ringkas terkait rumus sebagai berikut:
IRB + HCT IRB HCT

Langkah 1: = + (konstanta)
HCT° HCT° HCT°
IRB IRB
Langkah 2: + konstanta – konstanta =
HCT° HCT°
IRB
Langkah 3: x HCT° = IRB
HCT°
Gambar 4.7Spektrum kurva kalibrasi konsentrasi 5-15 µg/mLabsorbansi orde

nol dari IRB setelahdilakukan manipulate
Keterangan: Konsentrasi IRB 5 µg/mL
53
Penentuan HCT (Y) dilanjutkan dengan peluasan metode yang telah
dikembangkan.Dimana HCT dapat ditentukan dengan membagi spektrumnya
dengan spektrum orde nol IRB yang digunakan sebagai pembagi (X°) yang
dapatkan sebelumnya. Spektrum campuran obat dibagikan dengan pembaginya
HCT (X°)( 10 µg/mL). selanjutnya dikurangkan dengan konstanta yang didapat
dari pembagian pembagi IRB 10µg/ml dengan hasil spektrum orde nol IRB° dari
plot awal sehingga akan di dapatkan spektrum baru (HCT/IRB°) yang selanjutnya
dikalikan dengan pembagi yang sama yaitu IRB° dan didapatkan spektrum HCT
dari campuran tersebut yang akan di plotkan untuk mendapatkan regresi linear
hubungan absorbansi pada panjang gelombang max versus konsentrasi yang
diukur sehingga didapatkan kurva kalibrasinya yang dapat dilihat pada lampiran 9
. Berikut adalah ringkasan pengerjaannya:
IRB + HCT IRB HCT HCT

+ - = x IRB = HCT
IRB° IRB° IRB° IRB°
Gambar4.8 Spektrum kurva kalibrasi konsentrasi 4-12 µg/mL absorbansi orde

nol dari HCT setelah dilakukan manipulate
Keterangan: Konsentrasi HCT 4 µg/mL
54
Penetapan kadar IRB dan HCT, masing-masing dalam bentuk tunggal dapat
ditetapkan dengan spektrofotometri ultraviolet dalam pelarut basa, IRB pada
panjang gelombang 246 nm dan HCT pada panjang gelombang 274 nm (Moffat,
dkk., 2004), sementara pada metode RSM diperoleh panjang gelombang
maksimum untuk IRB 247,6 nm dan panjang gelombang maksimum untuk HCT
273,6 nm. Panjang gelombang yang diperoleh inilah yang digunakan sebagai
panjang gelombang analisis.
Berdasarkan hal di atas maka telah terjadi geseran batokromik (geseran
merah/red shift) untuk IRB, dan telah terjadi geseran hipsokromik (geseran
biru/blue shift) untuk HCT. Geseran batokromik adalah geseran dari serapan ke
panjang gelombang yang lebih panjang karena sisipan atau pengaruh pelarut
(geseran merah/red shift). Geseran hipsokromik adalah geseran dari serapan ke
panjang gelombang yang lebih pendek karena gugus ganti atau pengaruh pelarut
(geseran biru/blue shift) (Gandjar dan Abdul, 2007).
4.6 Validasi Metode
4.6.1 Linearitas, akurasi, presisi, batas deteksi (Limit of Detection, LOD) dan
batas kuantifikasi (Limit of Quantification, LOQ)
Berdasarkan validasi metode yang telah dilakukan secara RSM dan DWM,
diperolehnilai linieritas, akurasi, presisi, LOD dan LOQ untuk IRB dan HCT yang
dapat dilihat pada Tabel 4.4.
Tabel 4.4 Nilai linieritas, akurasi, Presisi, LOD dan LOQ untuk IRB dan
HCT denganRSM dan DWM
IRB HCT
No. Parameter
RSM DWM RSM DWM
1. Linieritas 0,9994 0,9994 0,9988 0,9995
2. Akurasi (%) 101,03 100,59 100,18 100,34
3. Presisi 0,57 0,87 0,89 45,70
55
(RSD) (%)
LOD
4. 0,70 0,64 0,78 0,49
(µg/mL)
LOQ
5. 2,12 1,93 2,37 1,49
(µg/mL)
Keteranngan :
RSM : Ratio subtraction method
DWM : Dual wavelength method
Tabel 4.4 memperlihatkan bahwa baik RSM maupun DWM memenuhi
syarat validasi untuk parameter linieritas, akurasi presisi serta batas deteksi
(LOD), batas kuantifikasi (LOQ). Nilai linieritas yang digambarkan adalah nilai
koefisien korelasi baik untukRSM maupun DWM hampir seluruhnya mendekati
angka satu yang menunjukkan bahwa terdapat hubungan atau korelasi yang sangat
baik antara konsentrasi dengan nilai absorbansi. Hal ini juga menandakan bahwa
semakin meningkat konsentrasi maka nilai absorbansi pun akan meningkat.
Akurasi merupakan parameter yang pengujiannya dilakukan dengan metode
penambahan baku pada rentang tertentu pada sampel, kemudian keduanya diukur,
baku yang ditambahkan dihitung kembali kembaliannya, atau uji ini sering
disebut dengan uji perolehan kembali. Nilai akurasi pada Tabel 4.4 merupakan
rata-rata nilai kembalian dari tiga rentang spesifik dengan tiga kali pengulangan.
Dalam hal ini tiga rentang spesifik yang digunakan adalah 80%, 100% dan 120%
dimana komposisinya terdiri dari 70% sampel dan 30% baku. Nilai akurasi yang
didapatkan menunjukkan bahwa metode ini memenuhi syarat validasi metode
(syarat nilai akurasi adalah 98%-102%). Contoh perhitungan uji perolehan
kembali dapat dilihat pada Lampiran 21 halaman 99.
Presisi merupakan parameter yang menunjukkan keterdekatan hasil analisis
yang dilakukan dalam beberapa kali pengulangan. Presisi menunjukkan bahwa
56
metode tersebut memberikan hasil yang saling berdekatan walaupun diuji dalam
beberapa replikasi. Parameter presisi dicerminkan dari nilai RSD yang dihasilkan,
dari hasil yang didapatkan baik RSM maupun DWM memenuhi syarat validasi
(RSD <3,9%) kecuali DWM pada HCT yang disebabkan karna sempitnya range
selisih absorbansi pada panjang gelombang yg menyebabkan sangat mudah
tergangu pengukurannya (Harmita, 2004).
4.6.2 Intraday dan Interday
Intraday dan interday merupakan pengukuran presisi dengan sampel
simultan. Intraday merupakan pengulangan yang dilakukan tiap jam tertentu
dalam satu hari, sedangkan interday merupakan pengulangan yang dilakukan tiap
hari pada jam tertentu dalam beberapa hari. Serta dihitung nilai presentase
perolehan
Intraday RSM DWM

Obat Pagi Siang Malam Pagi Siang Malam
SUL 0,2178 0,4641 0,4839 1,0143
PIR 1,0308 2,4745 1,0146 2,2963
Interday RSM DWM
Obat Hari ke-1 Hari ke-2 Hari ke-3 Hari ke-1 Hari ke-2 Hari ke-3
SUL 0,7110 1,0532 0,8602 1,0166
PIR 0,6683 1,6185 1,2255 2,3038
Intraday RSM DWM

Obat Pagi Siang Malam Pagi Siang Malam
SUL 0,2178 0,2183 0,2221 0,4641 0,4712 0,4774
PIR 1,0308 1,1012 1,0146 2,2963 2,3479 24301
Interday RSM DWM
Obat Hari ke-1 Hari ke-2 Hari ke-3 Hari ke-1 Hari ke-2 Hari ke-3
SUL 0,7110 0,7291 0,7967 1,0166 1,1952 1,2964
PIR 0,6683 0,6812 0,6953 1,2255 1,2964 1,3612
Dari data di atas memunjukan semua hasil interday dan intraday memenuhi
syarat < 2% RSD, hal yang dapat di ambil untuk pengulangan interday pada hari
57
yang sama dengan waktu berbeda yaitu pagi, siang dan malam menunjukan
bayangan bahwa alat spektrofotometri masih baik dan bisa mengukur dalam
waktu yang berulang, sedangkan intraday menunjukan bahwa pengukuran pada
tiga haru yang berbeda dan penyimpanan pada suhu 8 0C menunjukan obat masih
stabil dan bisa diukur dengan baik
4.7 Penetapan Kadar Campuran IRB dan HCT padaSediaan Tablet
Kadar IRB dan HCT dalam sediaan tablet berdasarkan hasil analisis baik
secara RSM dan DWM dapat dilihat pada Tabel 4.5.
Tabel 4.5 Kadar IRB dan HCT dalam sediaan tablet C dan tablet I
Klaim
Sediaa RSM DWM
Kompone di Syarat
No. n
n Label (mg)
Tablet
Kadar (mg) Kadar (mg) (mg)
1. Tablet IRB 313,60 ± 1,88 324, 11 ± 8,09 300 270-330
C HCT 12,66 ± 0,20 11,78 ± 0,56 12,5 11,25 – 13,75
Tablet IRB 295,69 ± 1,52 327,89 ± 3,05 300 270-330
2.
I HCT 12,15 ± 0,21 12,81 ± 0,95 12,5 11,25 – 13,75
Berdasarkan Tabel 4.5 di atas baik RSM maupun DWM dapat diaplikasikan
untuk menetapkan kadar IRB dan HCT dalam sediaan tablet karena tablet yang
terdapat dipasaran dan memenuhi persyaratan dimana kadar zat dari hasil analisis
berada dalam rentang 90-110%. Hasil perhitungan kadar IRB dan HCT untuk
Tablet C dan Tablet I baik secara RSM dan DWM dapat dilihat pada Lampiran 15
dan Lampiran 16 halaman 87 dan 89.
4.8Ratio Subtraction Method dan Dual Wavelength Method
Berdasarkan hasil yang diberikan oleh kedua metode ini, baik dari segi
nilai dalam uji validasi maupun hasil untuk analisis sampel yang terdapat
58
dipasaran menunjukkan bahwa metode ini merupakan metode yang potensial
digunakan dalam analisis rutin obat, khususnya obat yang mengandung kombinasi
beberapa obat. Kedua metode ini mudah dalam pengerjaannya khususnya untuk
analisis rutin dan tidak memerlukan pengkondisian alat yang lama. Kedua metode
yang dicobakan dalam penelitian ini memiliki kelebihan dan kekurangan masing-
masing.
RSM dapat digunakan untuk penetapan kadar binary maupun ternary
mixture serta dapat mengeliminasi langkah derivatif (Kamal, et al., 2016)
sehingga metode ini lebih efisien digunakan karena pada metode ini tidak
digunakan lagi langkah derivatif sehingga lebih cepat dalam pengerjaan analisa
sediaan obat. Namun, metode ini memiliki kelemahan yaitu memerlukan
perhitungan matematika dan operasi mengunakan UV probe 2.43.
DWM dapat digunakan untuk penetapan kadar binary mixture, dapat
mengeliminasi langkah derivatif dan pembuatan spektrum rasio serta perhitungan
nilai dual wavelenghtsehingga metode ini lebih efisien, lebih cepat, dan lebih
sederhana dalam pengerjaan analisa sediaan obat (Kamal, et al., 2016). Namun,
metode ini juga memiliki kelemahan yaitu tidak semua obat dapat menggunakan
metode ini.
59
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan pembahasan dan hasil pengamatan selama penelitian maka
dapat disimpulkan bahwa:
a. NaOH merupakan jenis pelarut terbaik jika dibandingkan dengan
campuran metanol dan dapar posfat pH 4; pH 5; pH 6 serta campuran
NaOH dan dapar posfat pH 10; pH 9; pH 8 untuk analisis simultan IRB
dan HCT.
b. Metode spektrofotometri ultraviolet secara RSM dan DWM dapat
digunakan untuk menetapkan kadar IRB dan HCT secara simultan dan
memenuhi syarat validasi metode.
c. Metode spektrofotometri ultraviolet secaraRSM dan DWM dapat
digunakan untuk menetapkan secara simultan kadar IRB dan HCT
dalam sediaan tablet di pasaran.
5.2 Saran
Berdasarkan kesimpulan dari penelitian ini, disarankan peneliti selanjutnya untuk:
- Disarankan untuk melakukan penelitian terhadap sediaan tablet yang
mengandung tiga campuran obat atau lebih denganRSM.
60
- Disarankan untuk melakukan penelitian terhadap sediaan tablet yang
mengandung IRB dan HCT dengan metode selain DWM dan RSM.
DAFTAR PUSTAKA
Abdel-Aleem, E. A., Hegazy, M. A., Sayed, N. W., Abdelkawy, M., & Abdelfatah, R.
M. (2015). Novel spectrophotometric determination of flumethasone pivalate and
clioquinol in their binary mixture and pharmaceutical formulation.
Spectrochimica Acta-Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy,
136(PB): 707–713.
Abdelwahab, N. S., El-Zeiny, B. A., & Tohamy, S. I. (2012). Two spectrophotometric

methods for simultaneous determination of some antihyperlipidemic drugs.
Journal of Pharmaceutical Analysis, 2(4): 279–284.
Adam, E.H.K. (2017). pH Scale Buffer and Solvent on the UV Absorption Spectra of
Cefixime Trihydrate. IJCRPS. 4(4): 1-8.
Albero, I., Ródenas, V., Garcı́a, S., & Sánchez-Pedreño, C. (2002). Determination of
irbesartan in the presence of hydrochlorothiazide by derivative
spectrophotometry. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 29(1–
2): 299–305.
Ali, W. N., & Abdelwahab, N. S. (2013). Spectrophotometric Methods for Simultaneous

Determination of Two Hypouricemic Drugs in their Combined Dosage Form.
Pharmaceutica Analytica Acta, 04(06): 4–11.
Bindaiya, S., Bankey, S., & D.jain. (2010). Simultaneous Determination of nitazoxanide
and ofloxacine in Tablet Dosage Form by Ultraviolet Spectrophotometry (Dual
Wavelength Method). int.J.ChemTech.Res, 1(2): 11–15.
Dal, A. G., & Koyutürk, S. (2015). Simultaneous Determination of Irbesartan and

Hydrochlorothiazide in Tablets by CE-DAD. J. Biol. & Chem., 43(3): 145–152.
Darwish, H. W., Hassan, S. A., Salem, M. Y., & El-Zeany, B. A. (2013). Sequential
Spectrophotometric Method for the Simultaneous Determination of Amlodipine,
Valsartan, and Hydrochlorothiazide in Coformulated Tablets. International
Journal of Spectroscopy, 2013(Figure 1): 1–8.
Darwish, H. W., Metwally, F. H., & El Bayoumi, A. (2015). Novel ratio subtraction and
isoabsorptive point methods for determination of ambroxol hydrochloride and
doxycycline in their combined dosage form: Development and validation.
Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 14(1): 133–140.
61
Derosa, G., Ferrari, I., & Cicero, A. (2009). Irbesartan and Hydrochlorothiazide
Association in the Treatment of Hypertension. Current Vascular Pharmacology,
7(2): 120–136.
Ditjen POM Depkes RI. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi Keempat. Jakarta:
Departemen Kesehatan RI: hal. 1182-1183, 1124.
El-Ghobashy, M. R., & Abo-Talib, N. F. (2010). Spectrophotometric methods for the
simultaneous determination of binary mixture of metronidazole and diloxanide
furoate without prior separation. Journal of Advanced Research, 1: 323–329.
Farouk, M., Elaziz, O. A., Tawakkol, S. M., Hemdan, A., & Shehata, M. A. (2014).
Comparative study between univariate spectrophotometry and multivariate
calibration as analytical tools for quantitation of Benazepril alone and in
combination with Amlodipine. Spectrochimica Acta-Part A: Molecular and
Biomolecular Spectroscopy, 123: 473–481.
Fayez, Y. M. (2014). Simultaneous determination of some anti-hypertensive drugs in

their binary mixture by novel spectrophotometric methods. Spectrochimica Acta-
Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy, 132: 446–451.
Fernandes, N., Nimdeo, M. S., Choudhari, V. P., Kulkarni, R. R., Pande, V. V, &
Nikalje, A. G. (2008). Dual Wavelength and Simultaneous Equation
Spectrophotometric Methods for Estimation of Atenolol and Indapamide in Their
Combined Dosage Form. Int. J. Chem. Sci, 6(1): 29–35.
Gandhimathi, R., Vijayaraj, S., & Jyothirmaie, M. P. (2012). Analytical Process of

Drugs By Ultraviolet (UV) Spectroscopy-A Review. International Journal of
Pharmaceutical Research& Analysis, 2(2): 72–78.
Gandjar, I. G. dan Abdul, R. (2007). Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka

Pelajar: hal. 224-226, 465-471.
Hajian, R., & Afshari, N. (2012). The Spectrophotometric Multicomponent Analysis of a

Ternary Mixture of Ibuprofen, Caffeine and Paracetamol by the Combination of
Double Divisor-Ratio Spectra Derivative and H-Point Standard Addition
Method. E-Journal of Chemistry, 9(3): 1153–1164.
Harmita. (2004). Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya.

Majalah Ilmu Kefarmasian, I(3): 117–135.
Hassouna, M., & Mohamed, M. (2018). Novel and facile spectrophotometric techniques
for the determination of sofosbuvir and ledipasvir in their tablet dosage form.
Journal of Analytical & Pharmaceutical Research, 7(2): 92–99.
Jain, J., Patadia, R., Vanparia, D., Chauhan, R., & Shah, S. (2010). Dual wavelength
spectrophotometric method for simultaneous estimation of drotaverine
62
hydrochloride and aceclofenac in their combined tablet dosage form.
International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences.
JNC-8. 2014. The Eight Report of the Joint National Committee. Hypertension
Guidelines: An In-Depth Guide. Am J Manag Care.
Kamal, A. H., El-malla, S. F., & Hammad, S. F. (2016). A Review on Uv

Spectrophotometric Methods for Simultaneous Multicomponent Analysis.
European Journal of Pharmaceutical and Medical Research, 3(2): 348–360.
Kawy, M. A. El, Gindy, A. E. El, Hegazy, M., & Shokry, E. S. (2010). Novel
spectrophotometric method for simultaneous determination of two binary
mixtures containing hydrochlorothiazide by ratio subtraction. Journal of Applied
Sciences Research, 6(8): 918–926.
Kementerian Kesehatan RI Ditjen B. K. A. K. (2014). Farmakope Indonesia. Edisi

Kelima. Jakarta: Departemen Kesehatan RI: hal. 520-521, 562-565.
Khoshayand, M. R., Abdollahi, H., Ghaffari, A., Shariatpanahi, M., & Farzanegan, H.
(2010). Simultaneous spectrophotometric determination of paracetamol,
phenylephrine and chlropheniramine in pharmaceuticals using chemometric
approaches. Daru journal of pharmaceutical sciences, 18(4): 292–297.
Kumar, J. S. P., & Annapurna, M. M. (2016). New Spectrophotometric Methods for the
Simultaneous Determination of Irbesartan and Hydrochlorothiazidein Combined
Dosage Forms. Pharmaceutical Methods, 6(3s): 120–125.
Lotfy, Hayam M., & Saleh, S. S. (2016). Recent development in ultraviolet

spectrophotometry through the last decade (2006–2016): A review. International
Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 8(10): 40–56.
Lotfy, Hayam M, Hassan, N., Elgizawy, S. M., & Saleh, S. S. (2013). Comparative
Study of new Spectrophotometric Methods; An Application on Pharmaceutical
Binary Mixture of Ciprofloxacin Hydrochloride and Hydrocortisone. J. Chill.
Chem. Soc, 3: 90–110.
Lotfy, Hayam Mahmoud, & Abdel-Monem Hagazy, M. (2012). Comparative study of

novel spectrophotometric methods manipulating ratio spectra: An application on
pharmaceutical ternary mixture of omeprazole, tinidazole and clarithromycin.
Spectrochimica Acta-Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy, 96:
259–270.
Lotfy, Hayam Mahmoud, Hegazy, M. A., Rezk, M. R., & Omran, Y. R. (2014). Novel
spectrophotometric methods for simultaneous determination of timolol and
dorzolamide in their binary mixture. Spectrochimica Acta-Part A: Molecular and
Biomolecular Spectroscopy, 126: 197–207.
63
Marwada, K. R., Patel, J. B., Patel, N. S., Patel, B. D., Borkhatariya, D. V., & Patel, A. J.
(2014). Ultraviolet spectrophotometry (dual wavelength and chemometric) and
high performance liquid chromatography for simultaneous estimation of
meropenem and sulbactam sodium in pharmaceutical dosage form.
Spectrochimica Acta-Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy, 124:
292–299.
Moffat, A. C., Osselton, M. D., & Widdop, B. (2011). Clarke’s Analysis of Drugs and
Poisons (4th ed.). London: Pharmaceutical Press.
Muchlisyam dan Pardede, T. R. (2017). Spektrofotometri dan Analisis Multikomponen

Obat. Medan: USU Press: hal. 19-22, 73-88.
Muhadi. (2016). JNC-8 : Evidence-based Guideline Penanganan Pasien Hipertensi. Cdk,

43(1): 54–59.
Mulja, M dan Suharman. (1995). Analisis Instrumental. Airlangga University Press:

Surabaya: hal. 1 – 59.
Núñez-Guzmán, N., Ruíz-Molina, D., Muñoz-Ibarra, A., Figueroa-Núñez, B., &

Almada-Alba, J. (2017). Bioequivalence study of two
Irbesartan/Hydrochlorothiazide tablet formulations in Mexican healthy
volunteers. Blood, Heart and Circulation, 1(1): 1–4.
Pradhan, P. K., Rajput, P. N., Kumar, N., Joshi, B., & Upadhyay, U. M. (2014).
Simultaneous estimation of Flurbiprofen and Gatifloxacin by dual wavelength
UV spectroscopy method in an eye drops. International Journal of
Pharmaceutical Sciences Review and Research, 27(2): 96–99.
Raja, B., Himasri, P., & Ramadevi, B. (2012). RP-HPLC method for the simultaneous
estimation of irbesartan and hydrochlorothiazide in pharmaceutical dosage form.
International Research Journal of Pharmaceutical and Applied Sciences, 2(3):
29–38.
Raskin, P., Guthrie, R., Flack, J. M., Reeves, R. A., & Saini, R. (1999). The long-term
antihypertensive activity and tolerability of irbesartan with hydrochlorothiazide.
Journal of Human Hypertension, 13: 683–687.
Rivai, H., Neki, O. D., dan Dwi D. A. B. (2016). Pengembangan dan Validasi Metode
Analisis Hidroklorotiazid Tablet dengan Metode Absorbansi dan Luas Daerah
Di Bawah Kurva secara Spetkrofotometri Ultraviolet. Padang: Universitas
Andalas: hal. 1-12.
Saraan, S.M.D., Sinaga, S.M, dan Muchlisyam. (2015). Development Method for
Determination of Ternary Mixture of Paracetamol, Ibuprofen and Caffeine in
Tablet Dosage Form Using Zero-crossing Derivative Spectrophotometric.
International Journal of PharmTech Research, 7 (2): 349-353.
64
Sharma, S., & Sharma, M. C. (2011). Determination of Sulfadoxine in Pharmaceutical
Formulations by Dual Wavelength Spectrophotometry Using Methylene blue,
6(4): 205–209.
Sivasubramanian, L., & Lakshmi, K. (2016). Spectrophotometric Multicomponent

Analysis of Irbesartan, Hydrochlorothiazide and Ramipril in Pharmaceutical
Formulations by Chemometric Techniques. Journal of Analytical &
Pharmaceutical Research, 2(3).
Skoog, W.H. (1994). Analytical Chemistry.Edisi VI. Sounders College Publishing:

Philadelphia. hal. 383 – 432.
USP Pharmacopeia.(2007). TheNational Formulary. Edisi XXX. The United

State Pharmacopeia Convention
65
Lampiran 1. Tablet I (Irtan® Plus (Ikapharmindo Putramas))
Spesifikasi sampel
Nama : Irtan®Plus
Nomor Bet : 771109
Tanggal Kadaluarsa : 16 Novemver 2020
Komposisi : Irbesartan : 300 mg
Hidroklorotiazid : 12,5 mg
66
Lampiran 2. Tablet C (Co Aprovel® (Sanofi))
Spesifikasi sampel
Nama : Co Aprovel®
Nomor Bet : 7A570
Tanggal Kadaluarsa : September 2019
Komposisi : Irbesartan : 300 mg
Hidroklorotiazid : 12,5 mg
67
Lampiran 3. Alat
C
B
Keterangan:
68
A. Spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu 1800) dan Seperangkat PC dengan
Software UV Probe
B. Timbangan (Sartorius)
C. Sonicator (Branson)
Lampiran 4. Contoh perhitungan % transmitan dan kesalahan fotometrik
IRB dalam NaOH 0,1 N

Absorbansi = 0,4454
% transmitan = antilog (2-A)
= antilog (2-0,4454)
= 35,8592
Transmitan = 35,8592/100
= 0,3586
Maka kesalahan fotometrik IRB dalam metanol adalah

dc 0,4343
= dt
c T (log T)
dc 0,4343
= x1%
c 0,3586 (log 0,3586)
= 2,7192%
Selisih persen kesalahan fotometrik IRB dalam metanol dengan persen kesalahan
terkecil adalah
= 2,7192% - 2,7183%
= 0,0009%
69
Lampiran 5. SpektrumSerapan Maksimum Tunggal IRB dan HCT serta
Campuran Baku IRB dan HCT
Spektrum Serapan Campuran Baku IRB dan HCT
Spektrum Serapan IRB
70
Spektrum Serapan HCT
71
Lampiran 6. Spektrum hasil manipulate ratio subtraction method
Spektrum campuran IRB dan HCT mengunakan 8 µg/mL dari HCT°

sebagai pembagi
Spektrum campuran IRB dan HCT mengunakan 8 µg/mL dari HCT°

sebagai pembagi dan setelah dikurangkan dengan konstanta (HCT/HCT°)
72
Spektrum campuran IRB dan HCT mengunakan 10 µg/mL dari IRB°
sebagai pembagi
Spektrum campuran IRB dan HCT mengunakan 10 µg/mL dari IRB°

sebagai pembagi dan setelah dikurangkan dengan konstanta (IRB/IRB°)
73
Lampiran 7. Spektrum Tablet C dan Tablet I
z
Spektrum Tablet C
Spektrum Tablet I
74
Lampiran 8. Kurva dan perhitungan kalibrasi IRB dengan mengunakan metode
rasio subtraction(HCT 8 µg/ml sebagai pembagi)
0.7
0.6
0.5
0.4
Nilai RS
0.3
0.2
0.1
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
-0.1
Konsentrasi µg/ml
No. X Y X2 Y2 XY
1. 0 0,0000 0 0 0
2. 5 0,2324 25 0,0540 1,1620
3. 7,5 0,3358 56,25 0,1127 2,5185
4. 10 0,4739 100 0,2245 4,7390
5. 12,5 0,5969 156,25 0,3562 7,46125
6. 15 0,7210 225 0,5198 10,8150
Jumlah 50 2,3600 562,5 1,2674 26,6957
Mean 8,333333333 0,393333
a =
 XY   X Y / n
 X   X  / n
2 2
26,69575−(50)(2,3600)/6
=
562,5−(50)2 /6
= 0,0482
Y=a X +b
b = YaX
75
= 0,3934–(0,0482)(8,33333) = -0,0083
Lampiran 8. (Lanjutan)
Maka persamaan garis regresinya adalah: Y = 0,0482X - 0,0083
r
 XY   X  Y / n
( X 2   X ) / n)( Y  ( Y )
2 2 2
/n 
26,69575−(50)(2,3600)/6
=
√(562,5−(50)2 /6) (1,2675−2,36002 /6)
= 0,9994
76
Lampiran 9. Kurva dan perhitungan kalibrasi HCT dengan metode rasio
subtraction(IRB 10 µg/ml sebagai pembagi)
0.8
0.7
0.6
0.5
Nilai RS
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 2 4 6 8 10 12 14
Konsentrasi µg/ml
No. X Y X2 Y2 XY
1. 0 0 0 0 0
2. 4 0,226 16 0,051076 0,904
3. 6 0,3408 36 0,11614464 2,0448
4. 8 0,4557 64 0,20766249 3,6456
5. 10 0,5604 100 0,31404816 5,604
6. 12 0,7143 144 0,51022449 8,5716
Jumlah 40 2,2972 360 1,19915578 20,77
Mean 6,666666667 0,3829
a =
 XY   X Y / n
 X   X  / n
2 2
20,77−(40)(2,2972)/6
=
360−(40)2 /6
= 0,0585
Y=a X +b
b = YaX
= 0,3829 – (0,0585)(6,6667)
77
= -0,0068
Maka persamaan garis regresinya adalah: Y = 0,0559X -0,0068
r
 XY   X  Y / n
( X 2   X ) / n)( Y  ( Y )
2 2 2
/n 
20,77−(40)(2,2972)/6
=
√(360−(40)2 /6)(1,1992−(2,2972)2 /6)
= 0,9988
78
Lampiran 10. Kurva dan perhitungan kalibrasi IRB dengan mengunakan dual
wavelength methodpada panjang gelombang 263,4-281 nm
0.35
0.3
0.25
0.2
Nilai DW
0.15
0.1
0.05
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
-0.05
Konsentrasi µg/ml
No. X Y X2 Y2 XY
1. 0 0,0000 0 0 0
2. 5 0,0934 25 0,008724 0,4670
3. 7,5 0,1483 56,25 0,021993 1,11225
4. 10 0,2003 100 0,040120 2,0030
5. 12,5 0,2545 156,25 0,064770 3,1813
6. 15 0,3079 225 0,094802 4,6185
Jumlah 50 1,0044 562,5 0,230409 11,3820
Mean 8,333333333 0,1674
a =
 XY   X Y / n
 X   X  / n
2 2
11,3820−(50)(1,0044)/6
=
562,5−(50)2 /6
= 0,0207
Y=a X +b
b = YaX
79
= 0,1674–(0,0207)(8,3333) = -0,0047
Maka persamaan garis regresinya adalah: Y = 0,0207X - 0,0047
r
 XY   X  Y / n
( X 2   X ) / n)( Y  ( Y )
2 2 2
/n 
11,382−−(50)(1,0044)/6
=
√(562,5−(50)2 /6) (0,230409−1,00442 /6)
= 0,9994
80
Lampiran 11. Kurva dan perhitungan kalibrasi HCT dengan dual wavelength
method pada panjang gelombang 243,4 – 247,6 nm
0.018
0.016
0.014
0.012
Nilai DW
0.01
0.008
0.006
0.004
0.002
0
0 2 4 6 8 10 12 14
Konsentrasi µg/ml
No. X Y X2 Y2 XY
1. 0 0 0 0 0
2. 4 0,0067 16 0,000044 0.0268
3. 6 0.0097 36 0,000094 0.0582
4. 8 0.013 64 0.000169 0.1040
5. 10 0,0165 100 0,000272 0,1650
6. 12 0,0191 144 0,000364 0,2292
Jumlah 40 0,065 360 0,000945 0,5832
Mean 6,666666667 0,01083333
a =
 XY   X Y / n
 X   X  / n
2 2
0,5832−(40)(0,065)/6
=
360−(40)2 /6
= 0,001606
Y=a X +b
81
b = YaX
= 0,01083333 – (0,001606)(6,6667)
= 0,000129
Maka persamaan garis regresinya adalah: Y = 0,001606X 0,000129
r
 XY   X  Y / n
( X 2   X ) / n)( Y  ( Y )
2 2 2
/n 
0,5832−(40)(0,065)/6
=
√(360−(40)2 /6)(0,00094504−(0,065)2 /6)
= 0,9995
82
Lampiran 12. Contoh Perhitungan batas deteksi (LOD) dan batas kuantitasi
(LOQ)
Y = 0,0482X - 0,0083
Slope = 0,0482
No X Y Yi Y-Yi (Y-Yi)2
1 0 0 -0,0083 0,00832 0,0000694
2 5 0,2324 0,2326 -0,00027 0,000000072
3 7,5 0,3358 0,3531 -0,01737 0,000302
4 10 0,4739 0,4736 0,00023 0,000000054
5 12,5 0,5969 0,5941 0,00273 0,0000074
6 15 0,721 0,7146 0,00633 0,000040
Jumlah 0,000419
 Y  Yi 
2
SB =
n2
0,000419
=√
4
= 0,010232
3,3 x SB
Batas deteksi =
slope
3,3 𝑥 0,000419
=
0,0482
= 0,700521 µg/ml
10 x SB
Batas kuantitasi =
slope
10 𝑥 0,000419
=
0,0482
= 2,122791 µg/ml
83
Lampiran 13. Hasil perhitungan batas deteksi dan batas kuantitasi
Batas deteksi dan batas kuantitasirasio subtraction method
LOD LOQ
Zat Slope Standar Deviasi
(µg/ml) (µg/ml)
IRB 0,0482 0,010232 0,700521 2,122791
HCT 0,0585 0,013877 0,783452 2,374097
Batas deteksi dan batas kuantitasidual wavelenght method
LOD LOQ
Zat Slope Standar Deviasi
(µg/ml) (µg/ml)
IRB 0,0207 0,003989 0,637373 1,931434
HCT 0,001606 0,00024 0,493116 1,494291
84
Lampiran 14. Contoh perhitungan kadar IRB dan HCT pada Sediaan Tablet
Berat 20 tablet adalah 10443,6 mg
Ditimbang analit setara dengan 25 mg IRB, maka jumlah analit yang ditimbang
adalah
25 mg
= x 10443,6 mg
20 x 300 mg
= 43,52 mg
Kemudian dihitung kesetaraan HCT yang terkandung dalam 43,52 mg
43,52 mg
= x (20 x 12,5 mg)
10443,6 mg
= 1,042 mg
Dilarutkan dengan NaOH dalam labu tentukur 50 ml sampai garis tanda.Larutan
kemudian dihomogenkan dengan sonicator selama 15 menit.Larutan kemudian
disaring, lebih kurang 10 ml filtrat pertama dibuang.Filtrat selanjutnya ditampung.

50 mg
Konsentrasi IRB = x 1000 = 1000 µg/ml
50 ml
1,042 mg
Konsentrasi HCT = x 1000 = 20,83333 µg/ml
50 ml
Kemudian dari larutan filtrat ini, dipipet 0,5 ml dan dimasukkan kedalam labu
tentukur 25 ml dan diencerkan dengan metanol hingga garis tanda.
1000 µg/ml x 0,5 ml

Konsentrasi IRB sampel = = 10 µg/ml
25 ml
20,8333 µg/mlx 0,5ml

Konsentrasi HCT sampel = = 0,4166 µg/ml
25 ml
Konsentrasi maksimum HCT = 8 µg/ml

Maka, konsentrasi HCT yang kurang = 8 - 0,4166 µg/ml
= 7,5833 µg/ml
Dipipet sebanyak 1,92 ml dari LIB II Hidroklorotiazid dan dimasukkan kedalam
labu tentukur 25 ml.
85
V1 . C1 = V2 . C2
V1 . 100 µg/ml = 25 ml . 7,5833µg/ml
V1 = 1,8958 ml
- Contoh perhitungan kadar secara praktek
Misalnya pada perhitungan kadar tablet Co Aprovel:
Berat yang ditimbang adalah 0,0432 g, maka terlebih dahulu dihitung kesetaraan
dengan Irbesartan dan Hidroklorotiazid
0,0432 𝑔
= 𝑥 (20𝑥300 𝑚𝑔) = 24,8190 𝑚𝑔
10,4436
Konsentrasi Irbesartan dalam labu awal:

24,8190 𝑚𝑔
= 𝑥 1000 = 496,381 µg/ml
50 𝑚𝑙
Konsentrasi akhir Irbesartan dalam labu 25 ml:

g
496,381 µ 𝑥 0,5 𝑚𝑙
ml
= = 9,927611 µg/ml
25 𝑚𝑙
Kemudian dihitung kesetaraan Hidroklorotiazid yang terkandung dalam 0,0432 g

analit ini.
0,0432 𝑔
= 10,4436𝑔 𝑥 (20 𝑥 12,5 𝑚𝑔)= 1,04849 mg
Konsentrasi Hidroklorotiazid dalam labu awal:

1,04849 mg
= 𝑥 1000 = 20,9698 µg/ml
50 𝑚𝑙
Konsentrasi akhir Hidroklorotiazid dalam labu 25 ml

g
20,9698 µ 𝑥 0,5 𝑚𝑙
ml
= = 0,4194 µg/ml
25 𝑚𝑙
Konsentrasi Hidroklorotiazid setelah penambahan LIB II Hidroklorotiazid untuk

mendapatkan konsentrasi 8 µg/ml:
= 7,6 + 0,4194 µg/ml

= 8,0194 µg/ml
Serapan (y) Irbesartan pada panjang gelombang 247,6 nm adalah 0,4781. Kadar
dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis Irbesartan
y=0,0482x - 0,0083
Maka, konsentrasi praktek : y = 0,0482x - 0,0083
0,4781= 0,0482x - 0,0083
0,4781−(−0,0083)
x =
0,0482
86
x = 10,09199872 µg/ml
10,09199872 µg/ml
Kadar Irbesartan = x 100%
9,927611 µg/ml
= 101,66%
Serapan (y) Hidroklorotiazid pada panjang gelombang 273,6 nm adalah 0,4601.

Kadar dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis Irbesartan
y=0,216x – 0,0088.
Maka, konsentrasi praktek : y = 0,0585x – 0,0068
0,4601= 0,0585x – 0,0068
0,4601−(−0,0068)
x =
0,0585
x = 7,98802 µg/ml
7,98802 µg/ml
Kadar HCT = x 100%
8,11365 µg/ml
= 98,4517%
87
Lampiran 15. Kadar IRB dan HCT dalam sediaan tablet C dan tablet I dengan
ratio subtractionmethod
Tablet C
IRB
Berat sampel Konsentrasi praktik Konsentrasi Kadar

Nilai RS
(mg) (µg/ml) teori (µg/ml) (%)
43,6 0,4953 10,4488 10,0195 104,28
43,9 0,5020 10,5879 10,0885 104,95
43,8 0,5004 10,5547 10,0655 104,86
43,6 0,4940 10,4219 10,0195 104,02
43,4 0,4931 10,4032 9,9736 104,31
43,7 0,4989 10,5235 10,0425 104,79
HCT

Nilai RS
43,6 0,4618 8,0171 8,0175 100,00
43,9 0,4717 8,1865 8,0204 102,07
43,8 0,4720 8,1916 8,0194 102,15
43,6 0,4714 8,1814 8,0175 102,04
43,4 0,4625 8,0291 8,0156 100,17
43,7 0,4684 8,1300 8,0184 101,39
Tablet I
IRB

Nilai RS
49,8 0,4707 9,9385 10,0087 99,30
49,9 0,4689 9,9011 10,0288 98,73
49,8 0,4661 9,8430 10,0087 98,34
49,7 0,4639 9,7974 9,9886 98,09
49,7 0,4685 9,8928 9,9886 99,04
49,7 0,4627 9,7725 9,9826 97,90
88
HCT

Nilai RS
49,8 0,4418 7,6749 8,01703 95,73
49,9 0,4550 7,9008 8,01786 98,54
49,8 0,4515 7,8409 8,01703 97,80
49,7 0,4507 7,8272 8,01619 97,64
49,7 0,4477 7,7759 8,01619 97,00
49,7 0,4453 7,7348 8,01594 96,49
89
Lampiran 16. Kadar IRB dan HCT dalam sediaan tablet C dan tablet I dengan
Dual wavelengthmethod
Tablet C
IRB

Nilai DW
43,6 0,2151 10,6428 10,0195 106,22
43,9 0,2196 10,8607 10,0885 107,65
43,8 0,2238 11,0641 10,0655 109,92
43,6 0,2148 10,6283 10,0195 106,08
43,4 0,2203 10,8946 9,9736 109,23
43,7 0,2216 10,9576 10,0425 109,11
HCT

Nilai DW
43,6 0,0120 7,3932 8,0175 92,21
43,9 0,0127 7,8292 8,0204 97,62
43,8 0,0118 7,2687 8,0194 90,64
43,6 0,0121 7,4555 8,0175 92,99
43,4 0,0125 7,7046 8,0156 96,12
43,7 0,0125 7,7046 8,0184 96,09
Tablet I
IRB

Nilai DWM
49,8 0,2224 10,9963 10,0087 109,87
49,9 0,2211 10,9333 10,0288 109,02
49,8 0,2212 10,9382 10,0087 109,29
49,7 0,2187 10,8171 9,9886 108,29
49,7 0,2208 10,9188 9,9886 109,31
49,7 0,2221 10,9818 9,9826 110,01
90
HCT

Nilai DWM
49,8 0,0140 8,6388 8,0170 107,76
49,9 0,0135 8,3274 8,0179 103,86
49,8 0,0128 7.8915 8,0170 98,43
49,7 0,0124 7,6423 8,0162 95,34
49,7 0,0135 8,3274 8,0162 103,88
49,7 0,0137 8,4520 8,0159 105,44
91
Lampiran 17. Perhitungan statistik kadar IRB pada Tablet C dan Tablet I
dengan menggunakanratio subtraction method
Tablet C
No. Kadar (Xi)% X-Xi (X-Xi)2

1. 104,28 -0,2498 0,0624
2. 104,95 0,4153 0,1725
3. 104,86 0,3251 0,1057
4. 104,02 -0,5190 0,2693
5. 104,31 -0,2269 0,0514
6. 104,79 0,2552 0,0651
Jumlah 627,2078 0,7267
Rata-rata 104,5346373
∑(Xi − X)2 0,72674

SD = √ =√ = 0,3812454
n−1 5
RSD = (0,3812454/104,5346)x100% = 0,15%
Jika taraf kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01; n = 6; dk = 5, dari daftar tabel
distribusi t diperoleh nilai t (α/2, dk) = 4,0321
Data ditolak jika t hitung ≥ t tabel atau t hitung ≤ - t tabel
Xi − X
t hitung = | |
SD/√n
t hitung 1 -1,60526
t hitung 2 2,66872
t hitung 3 2,08930
t hitung 4 -3,33478
t hitung 5 -1,45795
t hitung 6 1.63996
karena semua data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara:
SD
μ = X ± t tabel x
√n
0,38125
= 104,53 ± (4,0321x )
√6
= (104,53 ± 0,63)%
92
Tablet I
No. Kadar (Xi-X) (Xi-X)2

(Xi)%
1. 99,30 0,73291076 0,537158
2. 98,73 0,16154062 0,026095
3. 98,34 -0,220627 0,048676
4. 98,09 -0,4797077 0,230119
5. 99,04 0,47574861 0,226337
6. 97,90 -0,6698653 0,44872
Jumlah 591,39 1,517106
Mean 98,57
∑(Xi − X)2 1,517106

SD = √ =√ = 0,5508
n−1 5
RSD = (0,5508/98,57 )x100% = 0,559%
distribusi t diperoleh nilai t (α/2, dk) = 4,0321
Xi − X
t hitung = | |
SD/√n
t hitung 1 3,25914
t hitung 2 0,71834
t hitung 3 -0,98110
t hitung 4 -2,13319
t hitung 5 2,11558
t hitung 6 -2,97879
SD
μ = X ± t tabel x
√n
0,5508
= 97,65 ± (4,0321x )
√6
= (97,65 ± 0,91)%
93
Lampiran 18. Perhitungan statistik kadar HCT pada sediaan Tablet C dan Tablet
I dengan menggunakan ratio subtraction method
Tablet C
No. Kadar (Xi)% Xi-X (Xi-X)2

1. 100,00 -1,307723 1,710141
2. 102,07 0,768284 0,590260
3. 102,15 0,844473 0,713135
4. 102,04 0,740837 0,548840
5. 100,17 -1,134423 1,286916
6. 101,39 0,088553 0,007842
Jumlah 607,818508 4,857132
Mean 101,303085
∑(Xi − X)2 4,857132

SD = √ =√ = 0,9729
n−1 5
RSD = (0,9856/101,303)x100% = 0,51%
distribusi t diperoleh nilai t tabel = 4,0321
Xi − X
t hitung = | |
SD/√n
t hitung 1 3,259146
t hitung 2 0,718347
t hitung 3 -0,9811
t hitung 4 -2,13319
t hitung 5 2,115584
t hitung 6 -2,97879
SD
μ = X ± t tabel x
√n
0,9856
= 101,303 ± (4,0321x )
√6
= (101,303 ± 1,6215)%
94
Tablet I

1. 95,73 -1,46923 2,15863
2. 98,54 1,33741 1,78866
3. 97,80 0,60079 0,36095
4. 97,64 0,44026 0,19383
5. 97,00 -0,20001 0,04001
6. 96,49 -0,70921 0,50298
Jumlah 583,21285 5,04506
Mean 97,20214
∑(Xi − X)2 5,04506

SD = √ =√ = 1,00450
n−1 5
RSD = (1,00450/97,20)x100% = 1,0334%
Xi − X
t hitung = | |
SD/√n
t hitung 1 3,25914
t hitung 2 0,71834
t hitung 3 -0,98110
t hitung 4 -2,13319
t hitung 5 2,11558
t hitung 6 -2,97879
SD
μ = X ± t tabel x
√n
1,00450
= 97,20 ± (4,0321 x )
√6
= (97,20 ± 1,652)%
95
Lampiran 19. Perhitungan statistik kadar IRB pada sediaan Tablet C dan Tablet
I dengan menggunakandual wavelength method
Tablet C

1. 106,22 -1,8156 3,2962
2. 107,65 -0,3818 0,1457
3. 109,92 1,8843 3,5507
4. 106,08 -1,9605 3,8437
5. 109,23 1,1983 1,4360
6. 109,11 1,0752 1,1560
Jumlah 648,2191 13,4283
Mean 108,0365
∑(Xi − X)2 13,5283

SD = √ =√ = 1,6388
n−1 5
RSD = (1,6388/108,036)x100% = 1,52%
Xi − X
t hitung = | |
SD/√n
t hitung 1 -2,7137
t hitung 2 -0,5706
t hitung 3 2,8165
t hitung 4 -2,9304
t hitung 5 1,7911
t hitung 6 1,6071
SD
μ = X ± t tabel x
√n
1,6388
= 108,04 ± (4,0321 x )
√6
= (108,04 ± 2,696)%
96
Tablet I

1. 109,87 0,56886 0,32361
2. 109,02 -0,27893 0,07780
3. 109,29 -0,01164 0,00014
4. 108,29 -1,00356 1,00714
5. 109,31 0,01436 0,00021
6. 110,01 0,71091 0,50539
Jumlah 655,79027 1,91428
Mean 109,29838
∑(Xi − X)2 1,91428

SD = √ =√ = 0,61875
n−1 5
RSD = (0,61875/109,30)x100% = 0,566%
Xi − X
t hitung = | |
SD/√n
t hitung 1 2,25198
t hitung 2 -1,10421
t hitung 3 -0,04608
t hitung 4 -3,97285
t hitung 5 0,05685
t hitung 6 2,814312
SD
μ = X ± t tabel x
√n
0,6187
= 109,30 ± (4,0321 x )
√6
= (109,30 ± 1,108)%
97
Lampiran 20. Perhitungan statistik kadar HCT pada sediaan Tablet C dan Tablet
I dengan menggunakan dual wavelength method
Tablet C

1. 92,21 -2,0639 4,2596
2. 97,62 3,3386 11,1460
3. 90,64 -3,6391 13,2428
4. 92,99 -1,2871 1,6566
5. 96,12 1,8430 3,3965
6. 96,09 1,8085 3,2707
Jumlah 565,6671 36,9722
Mean 94,2779
∑(Xi − X)2 36,9722

SD = √ =√ = 2,7193
n−1 5
RSD = (2,7193/94,28)x100% = 2,88%
Xi − X
t hitung = | |
SD/√n
t hitung 1 -1,859111
t hitung 2 3,007341
t hitung 3 -3,278030
t hitung 4 -1,159403
t hitung 5 1,660111
t hitung 6 1,629092
SD
μ = X ± t tabel x
√n
2,7193
= 94,28 ± (4,0321 x )
√5
= (94,28 ±4,48)%
98
Tablet I

1. 107,76 5,30420 28,13451
2. 103,86 1,40927 1,98604
3. 98,43 -4,01760 16,14108
4. 95,34 -7,11490 50,62184
5. 103,88 1,43097 2,04767
6. 105,44 2,98807 8,92854
Jumlah 614,70780 107,85968
Mean 102,45130
∑(Xi − X)2 107,86

SD = √ =√ = 4,6446
n−1 5
RSD = (4,6445/102,45)x100% = 4,53%
Xi − X
t hitung = | |
SD/√n
t hitung 1 2,79738
t hitung 2 0,74323
t hitung 3 -2,11884
t hitung 4 -3,75232
t hitung 5 0,75468
t hitung 6 1,57587
SD
μ = X ± t tabel x
√n
4,6446
= 102,45 ± (4,0321 x )
√6
= (102,45 ± 7,64)%
99
Lampiran 21. Contoh perhitungan persentase perolehan kembali (% recovery)
Sampel yang digunakan adalah Tablet I
Berat 20 tablet adalah 10443,6 mg
Berat kesetaraan penimbangan sampel pada penetapan kadar = 25 mg

Perolehan 80%
80
Irbesartan = 100 𝑥 25 𝑚𝑔 = 20 mg
70
Analit Irbesartan = 𝑥 20 𝑚𝑔 = 14 mg
100
14 𝑚𝑔
Sampel yang ditimbang = 20 𝑥 300 𝑚𝑔 𝑥 10, 4436 𝑔 = 0,0243 g
30
Baku Irbesartan 30% yang ditambahkan = 100 𝑥 20 𝑚𝑔 = 6 mg
Jumlah analit Hidroklorotiazid dalam serbuk yang ditimbang:
0,0243 𝑔
= 10,4436 𝑔 𝑥 (20𝑥12,5 𝑚𝑔) = 0,5834 mg
Baku Hidroklorotiazid 30% yang ditambahkan:
30 20 𝑚𝑔
= 100 𝑥 12,5 𝑚𝑔 𝑥 300 𝑚𝑔 = 0,25 mg
Perolehan 100%
100
70
Analit Irbesartan = 100 𝑥 25 𝑚𝑔 = 17,5 mg
17,5 𝑚𝑔
30
Baku Irbesartan 30% yang ditambahkan = 100 𝑥 25 𝑚𝑔 = 7,5 mg
0,0304 𝑔
= 10,4436 𝑔 𝑥 (20𝑥12,5 𝑚𝑔) = 0,7298 mg
Baku Hidroklorotiazid 30% yang ditambahkan :
30 25 𝑚𝑔
= 100 𝑥 12,5 𝑚𝑔 𝑥 300 𝑚𝑔 = 0,3125 mg
Perolehan 120%
120
70
Analit Irbesartan = 100 𝑥 30 𝑚𝑔 = 21 mg
21 𝑚𝑔
30
Baku Irbesartan 30% yang ditambahkan = 100 𝑥 20 𝑚𝑔 = 9 mg
100
0,0365 𝑔
= 10,4436 𝑔 𝑥 (20𝑥12,5 𝑚𝑔) = 0,876233 mg
Baku Hidroklorotiazid 30% yang ditambahkan:
30 30 𝑚𝑔
= 100 𝑥 12,5 𝑚𝑔 𝑥 300 𝑚𝑔 = 0,375 mg
101
Lampiran 22. Data hasil recovery IRB dan HCT dengan mengunakan
ratio subtraction method
IRB
Jumlah Persen
Konsentrasi Baku yang perolehan
No. Setelah Sebelum
% ditambahkan kembali
penambahan penambahan (%)
baku (mg) baku (mg)
1. 80% 15,5463 21,6459 6 101,661
2. 80% 15,8886 21,9571 6 101,142
3. 80% 15,7330 21,7393 6 100,105
4. 100% 20,7331 28,3369 7,5 101,384
5. 100% 20,7642 28,3887 7,5 101,661
6. 100% 20,9198 28,4354 7,5 100,209
7. 120% 25,8783 34,9760 9 101,085
8. 120% 25,9095 35,0278 9 101,315
9. 120% 25,9665 35,0278 9 100,681
Mean 101,03
HCT
Jumlah Persen
Baku yang perolehan
No. Konsentrasi% Setelah Sebelum
ditambahkan kembali
penambahan penambahan
(%)
baku (mg) baku (mg)
1. 80% 18,2934 18,5415 0,25 99,230
2. 80% 18,2977 18,5458 0,25 99,230
3. 80% 18,2549 18,5073 0,25 100,941
4. 100% 20,8469 21,1591 0,3125 99,914
5. 100% 20,8725 21,1891 0,3125 101,283
6. 100% 20,8811 21,1933 0,3125 99,914
7. 120% 25,3550 25,7357 0,375 101,511
8. 120% 25,3678 25,7399 0,375 99,230
9. 120% 25,4192 25,7956 0,375 100,371
Mean 100,18
102
Lampiran 23. Data hasil persen perolehan kembali IRB dan HCT dengan
mengunakan dual wavelength method
IRB
Jumlah Persen
Baku yang perolehan
ditambahkan kembali
(%)
baku (mg) baku (mg)
1. 80% 18,231 24,331 6 101,68
2. 80% 18,219 24,198 6 99,66
3. 80% 18,364 24,344 6 99,66
4. 100% 23,375 31,025 7,5 102.00
5. 100% 23,581 31,086 7,5 100,06
6. 100% 23,484 31,086 7,5 101,35
7. 120% 28,084 37,138 9 100,60
8. 120% 27,963 36,981 9 100,20
9. 120% 28,084 37,089 9 100,06
Mean 100,59
HCT
Jumlah Persen
Baku yang perolehan
ditambahkan kembali
(%)
baku (mg) baku (mg)
1. 80% 23,014 23,154 0,25 56,05
2. 80% 22,843 22,998 0,25 62,28
3. 80% 22,687 23,154 0,25 186,83
4. 100% 27,358 27,513 0,3125 49,82
5. 100% 27,513 27,825 0,3125 99,64
6. 100% 27,513 27,980 0,3125 149,47
7. 120% 31,063 31,406 0,375 91,34
8. 120% 30,783 31,250 0,375 124,56
9. 120% 31,250 31,561 0,375 83,04
Mean 100,34
103
Lampiran 24. Tabel distribusi t
104
Lampiran 24. Sertifikat analisis bahan bakuIRB dan HCT
105
106
107

Bismillah Khusus Cover Edit

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Bismillah Khusus Cover Edit

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

TESIS

ANALISIS SECARA SIMULTAN KANDUNGAN SULFADOKSIN DAN

Diajukan untuk mUniversitas Sumatera Uta

PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI

Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh

Diajukan untuk mUniversitas Sumatera Uta

PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI

ANALISIS SECARA SIMULTAN KANDUNGAN SULFADOKSIN DAN

Prof. Dr.rer. nat. Effendy De Lux Putra, S.U., Apt

Prof. Dr. Muchlisyam, M.Si., Apt

Medan, Oktober 2019

Medan, 25April 2019

Irbesartan dan hidroklorotiazid merupakan kelompok obat anti hipertensi

Kata kunci: Irbesartan, Hidroklorotiazid, dual wavelength method, ratio

Irbesartan and hydrochlorothiazide are a group of anti-hypertensive drugs

Keywords: Irbesartan, Hydrochlorothiazide, multiple wavelength method, ratio

BAB II TINJAUAN PUSTAKA .............................................................................9

BAB III METODE PENELITIAN ........................................................................30

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ..............................................................41

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................59

DAFTAR PUSTAKA ...........................................................................................60

2.1 Penelitian Yang Telah Dilakukan Untuk Analisis Irbesartan Dan

1.1 Kerangka Pikir Penelitian .............................................................................5

DWM : Dual Wavelenght Method

LOD: Limit of Detection

RSDRelative standard deviation

1.1 Latar Belakang

Penyakit hipertensi merupakan salah satu penyakit yang paling umum

ditemukan dalam praktik kedokteran primer, menurut studinya 1 dari 3 pasien

menderita hipertensi. Menurut Riset kesehatan Dasar tahun 2013, menunjukkan

bahwa revalensi hipertensi di Indonesia adalah sebesar 26,5% (Muhadi, 2016).

Dalam penanganan penyakit hipertensi para ahli kesehatan umumnya mengacu

acuan dalam penanganan penyakit hipertensi di Indonesia adalah joint National

committee (JNC) 8yang dipublikasikan pada tahun 2014.

Menurut JNC 8 (2014), Penanganan pasien hipertensi harus tepat dan

et al., 2009). Hidroklorotiazid (HCT) termasuk dalam kelompok obat diuretikdan

menjadi obat firstline terapi untuk penanganan penyakit hipertensi.Diuretik tiazid

reseptor yang diindikasikan untuk digunakan pada pasien dengan hipertensi,

samping yang minimal yaitu hiperkalemia(Núñez-Guzmán, et al., 2017; Raskin, et

dalam melakukan analisis kuantitatif untuk kontrol kualitas sediaan tablet.

Permasalah ini disebabkan oleh senyawa yang terkandung mempunyai sifat

fisikokimia yang hampir sama, atau profil kurva serapan masing-masing

didapat merupakan jumlah serapan dari kedua komponen tersebut.

Irbesartan dalam keadaan tunggal dapat ditentukan kadarnya dengan

spektrofotometri ultravioletkovensional dalam pelarutasam pada panjang

dapat ditentukan kadarnya dengan spektrofotometri ultraviolet dalam pelarut basa

pada panjang gelombang 274 nm (Moffat, et al., 2011).

Dalam penetapan kadar zat berkhasiat dalam berbagai sediaan obat

al.,2016). Spektrofotometri merupakan salah satu metode yang sederhana, cepat

spektrofotometri yang klasik, dikarenakan adanya spektrum yang saling tumpang

tindih (Hajian dan Afshari, 2012).

campuran irbesartan dan hidroklorotiazid dengan mengunakan Kromatografi Cair

ektraksi pelarut, pemanasan dan degassingsebelum memulai analisis. Selain itu,

metode ini jugamemerlukan biaya yang cukup mahal karena menggunakan

Penelitian yang dilakukan Dal and Koyutürk (2015), telah menetapkan

matematika yang cukup rumit pada tahap analisisnya.

Penelitian yang dilakukan Albero et al. (2002), telah menetapkan kadar

campuran irbesartan dan hidroklorotiazid pada sediaan tablet secara

spektrofotometri derivatif dengan metode zero crossing. Metode ini tidak

pemisahan, tetapi memerlukan proses derivatisasi yang lama untuk mendapatkan

nilai zero crossing.

Salah satu dari metode spektrofotometri ialah dual wavelength method

(DWM)dan ratio subtraction method (RSM),metode spektrofotometri ini dapat