KEGIATAN 2

PREPARASI SMEAR (APUS/ULAS)

Tujuan : Membuat sediaan smear dari berbagai bahan (darah,jaringan rongga pipi, bakteri
gram, protozoa)
Alat : Jarum Franke/lanest, Staining jar, Object glass , pipet tetes, Mikroskop, Kapas,
tusuk gigi, ose,bunsen, korek api
Bahan : Jaringan darah manusia, giemsa, alkohol 70%, methanol; Protozoa dalam air yang
tergenang , protozoa, sampel bakteri, methylen blue, larutan gentian violet, larutan
iodium, alkohol, safranin, air
Cara kerja :
A. SMEAR DARAH
1. Pengambilan darah Probandus
Rileksasi lengan dengan cara mengayun-ayunkan lengan, kemudian pegang salah
satu jari yang akan diambil darahnya, beri tekanan pada jari dan ambil darah dengan
posisi jarum tegak lurus jari tangan
2 Pembuatan sediaan apus darah
1. Siapkan dua object glass
2. Letakkan setetes darah yang berasal dari ujung jari probandus pada ujung
object glass pertama
3. Ambil object glass kedua, sentuhkan salah satu ujungnya pada object glass
pertama di sebelah kiri tetesan darah tadi sehingga kedua object glass itu
membentuk sudut 45° ke kanan.
4. Gerakkan object glass kedua ke kanan sehingga tetesan darah berada di sudut
antara kedua object glass dan membentuk garis yang tipis.
5. Biarkan preparat kering dan siap diwarnai. (Humason, 1966)
3. Pewarnaan preparat apus
1. Preparat apus yang telah kering difiksir dengan metanol selama 10 menit
2. Preparat apus ditetesi dengan larutan giemsa (9 - 10 tetes) dan dibiarkan
selama 3-5 menit.
3. Preparat apus dicuci dalam air mengalir lalu dikeringkan dalam suhu ruang
B. SMEAR MUKOSA
1 Torehkan atau keruklah secara perlahan bagian dalam pipi dari dalam rongga mulut
dengan menggunakan ujung tumpul tusuk gigi hingga diperoleh lapisan sendinya.
2 Teteskan sedikit air dengan pipet tetes di atas kaca objek, lalu sebarkan lendir pada
ujung tusuk gigi itu dan aduk dengan tetesan air tadi agar sel-sel tidak
mengelompok.
3 Tutup dengan kaca penutup (cover glass) agar tidak terbentuk gelembung udara di
bawah cover glass.
4 Isap air yang berlebihan dengan kertas isap melalui tepi cover glass.
5 Teteskan metylen blue dengan hati-hati pada pinggir cover glass dan tempelkan
kertas isap pada pinggir cover glass yang berlawanan agar metylen blue cepat
 merata.
6 Mengamati di bawah mikroskop
C. SMEAR PROTOZOA
1 Teteskan cairan yang mengandung Protozoa pada gelas obyek.
2 Periksa dengan mikroskop apakah Protozoa yang dimaksud ada.
3 Goyangkan agar terbentuk lapisan tipis pada gelas obyek.
4 Kering anginkan.
5 Celupkan pada akuades.
6 Fiksasi dengan alkohol 70% 2-3 menit.
7 Warnai dengan pewarna hemaktosilin 1% dalam air 1-2 menit.
8 Cuci dengan air.
9 Dehidrasi dengan etanol bertingkat.
10 Penjernihan dengan xilol.
11 Tutup dengan perekat entellan
D. SMEAR BAKTERI
1 Pembuatan Preparat
a. Bersihkan objek glass
b. Pada bagian ujung objek glass diberi tanda, sebaiknya disebelah permukaan
yang tidak di cat
c. Buat goresan tipis dari biakan bakteri menggunakan ose pada permukaan yang
telah di bersihkan
d. Goresan dikeringkan di udara/ dengan hawa hangat dari api
e. Fikasai dilakukan dengan cara menyentuhkan permukaan kaca objek tiga kali
berturut-turut pada ujung api bunsen
f. Setelah dingin siap untuk di chat
2 Pewarnaan Bakteri Gram
1) Genangi preparat yang sudah jadi dengan zat warna gentian violet 2-5 menit
2) Buang sisa cat
3) Genangi preparat dengan larutan iodium selama 30 detik -1 menit
4) Buang sisa cat
5) Decolorisasi preparat dengan alkohol / aseton sampai warna ungu pada
preparat memudar
6) Cuci dengan air mengalir
7) Genangi preparat dengan larutan safranin 2-5 menit
8) Cuci dengan air mengalir
9) Amati di bawah mikroskop