TERJEMAHAN PRINSIP XENOGRAFT

PENGANTAR

Lingkungan mikro tumor manusia di mana sel-sel tumor berkembang terdiri dari pembuluh darah
darah, fibroblas dan sel-sel inflamasi (makrofag dan limfosit). Di sekitar komponen-komponen ini
ditemukan matriks ekstraseluler yang terdiri dari serat, proteoglikan, polisakarida non-
proteoglikan, faktor pertumbuhan, protease, sitokin, antibodi kemokin, dan jenis enzim lainnya
[1]. Lingkungan mikro stromal memainkan peran penting dalam tumorigenesis, terutama dalam
perkembangan tumor dan agresivitas sel kanker, dan tergantung pada interaksi dengan komponen
imun. Dengan demikian, lingkungan mikro tumor memberikan fungsi pengaturan dan tekanan
selektif pada sel kanker dan menentukan kemampuan tumor untuk menyerang jaringan di
sekitarnya [1].

Karakterisasi komponen imun dalam lingkungan tumor seperti sel-T [2], sel-B [3], NKcell [4] dan
makrofag [5] telah menunjukkan kemampuan mereka untuk menyusup ke tumor padat.

Proliferasi tumor tergantung pada suplai darah dan interaksi sel tumor dan endotel memulai dan
menggerakkan proses ini. Pertumbuhan kapiler baru dari pembuluh darah yang ada, yang disebut
angiogenesis, dimediasi oleh proses multistep kompleks yang terdiri dari serangkaian peristiwa
seluler yang mengarah pada neovaskularisasi [6]. Angiogenesis memainkan peran sentral dalam
berbagai proses fisiologis dalam tubuh manusia dan telah ditemukan penting untuk pertumbuhan
tumor dan juga merupakan faktor kunci dalam metastasis. Ini disebabkan oleh migrasi, proliferasi
dan diferensiasi sel endotel di bawah pengaruh faktor angiogenik yang disekresikan oleh sel tumor
dan sel stroma [7].

Penggunaan model praklinis xenografts tumor manusia menyiratkan perubahan dalam bagian dari
interaksi ini. Prinsip xenograft didasarkan pada implantasi jaringan tumor manusia baik dalam
posisi subkutan [8] atau di situs ortotopik (alami) [9, 10] (Gambar 1). Untuk model subkutan,
tumor xenograft ditanamkan di antara dermis dan otot di bawahnya dan biasanya terletak di
panggul, atau ke dalam alas kaki atau di punggung ke dalam lemak coklat tikus.

Kerugian utama dari teknik ini yang kadang gagal mungkin karena pengamatan bahwa lingkungan
mikro subkutan tidak relevan dengan situs organ penyakit primer atau metastasis. Xenografts
tumor manusia yang ditanamkan secara orthotopically dapat mereproduksi lingkungan organ
tempat tumor tumbuh, sehingga efek tumor pada lingkungan mikronya dapat dimodulasi [11].
Dalam model ini, tumor xenograft diimplantasikan atau disuntikkan ke dalam organ ekivalen
tempat kanker berasal, atau tempat metastasis ditemukan pada pasien [12]. Untuk menghindari
xenorejeksi dan memungkinkan transplantasi yang efisien, nude athymic (nu / nu) atau tikus
kombinasi imunodefisiensi (skid / skid) yang parah digunakan. Jaringan tumor manusia kemudian
dapat ditransplantasikan secara serial ke tikus. Untuk menghindari infeksi dan kontaminasi, tikus
ditangani dalam kondisi aseptik termasuk pemakaian sarung tangan, gaun dan penutup sepatu.

Tumor manusia primer xenografted menjadi tikus immunodeficient merupakan modalitas yang
menjanjikan untuk mempelajari kemanjuran terapi obat baru [13, 14], asosiasi obat dan mekanisme
respon molekuler atau seluler terhadap pengobatan [15

Metode xenograft menunjukkan kelebihan dan kekurangan. Di antara kelebihannya, xenografts

tumor adalah 1) mudah digunakan, 2) relatif murah dibandingkan dengan model murine yang
dimodifikasi secara genetik [16], 3) mampu mereproduksi heterogenitas dari tumor pasien awal,
sehingga memungkinkan studi subpopulasi sel tumor [ 17, 4] berpotensi diusulkan sebagai terapi
yang dipersonalisasi untuk mengantisipasi perawatan antikanker yang dipersonalisasi [18-20].

Di antara kelemahannya, kita dapat menyebutkan bahwa 1) untuk memungkinkan

xenotransplantasi, tikus imunodefisiensi digunakan dan oleh karena itu, interaksi penting antara
berbagai jenis sel kekebalan dan sel kanker selama inisiasi dan pemeliharaan tumor dikecualikan
[17] dan 2) tekanan seleksi diinduksi oleh hewan inang, dan stroma manusia secara bertahap hilang
[21]. Perbedaan yang diamati mungkin karena perubahan dalam lingkungan mikro tumor yang
dihasilkan dari engraftment pada tikus yang immunocompromised [22]. Lingkungan mikro tumor
ditandai oleh sifat-sifat seperti pH ekstraseluler rendah, konsentrasi glukosa rendah, nekrosis, dan
hipoksia, yang dikenal sebagai penyebab genetik.
Gambar 1: Principe xenograft tumor manusia menjadi tikus imunodefisiensi. Setelah reseksi,
jaringan tumor manusia dapat xenografted menjadi tikus yang kekurangan imun setelah disosiasi
jaringan baik sebagai suspensi sel atau sebagai spesimen tumor padat kecil. Bagian serial dapat
dengan demikian ditetapkan menjadi tikus. Tumor manusia yang pada awalnya dicangkokkan ke
tikus mengandung populasi sel tumor yang heterogen, sel induk tumor, sel radang, pembuluh
darah, serta matriks fibroblast dan ekstraseluler.

ketidakstabilan dan perubahan ekspresi gen dalam sel tumor [1].

Ketika tumor manusia dicangkokkan ke dalam hewan, lingkungan mikro tumor dipengaruhi oleh
faktor-faktor yang berbeda, di antaranya adalah stroma tumor manusia, strain tikus, situs
xenografts, dan penggantian pembuluh darah manusia progresif. Faktor-faktor ini dapat
menginduksi modifikasi fenotipik dan genotipik pada sel tumor. Pada bagian selanjutnya, peran
berbagai faktor ini akan dibahas.

1. Stroma Manusia vs. Tikus Stroma

Stroma manusia digantikan dengan murine stroma selama bagian berturut-turut dari tumor dalam
tikus dan dapat mengubah komposisi asli tumor [17, 22]. Modifikasi lingkungan mikro stroma
seperti angiogenesis, sel inflamasi, komposisi matriks ekstraseluler, dan ekspresi faktor
pertumbuhan dalam kompartemen stroma mempengaruhi perkembangan sel tumor.

Beberapa perbedaan yang diamati pada ekspresi gen xenografts kanker payudara tampaknya
disebabkan oleh hilangnya gen stroma manusia [21]. Modifikasi pada stroma tumor juga diamati
oleh tim lain. Dengan demikian, Chou et al. ditunjukkan dalam xenografts kanker kolorektal,
bahwa stroma manusia, pembuluh darah, dan elemen hematopoietik secara sistematis digantikan
oleh analog murine sementara komponen karsinoma bertahan [23].

Stromal microenvi Lingkungan mikro stromal dengan demikian merupakan penentu untuk
pertumbuhan ganas. Perubahan dalam lingkungan mikro stroma dalam model tikus sudah cukup
untuk mempromosikan transformasi maligna dari penampilan sel-sel epitel prostat manusia dari
fibroblas terkait karsinoma (CAF), dan dikaitkan dengan perubahan genetik tambahan dan
perubahan ekspresi gen [24, 25].

2. Strain Mouse

Model tumor Xenograft dikembangkan secara luas setelah identifikasi tikus mutan nude athymic
dengan penghapusan gen FOXN1 [26]. Kurangnya timus pada tikus telanjang homozigot
menyebabkan defek pada sistem kekebalan tubuh, seperti limfosit T (Gambar 2). Pada tikus-tikus
ini populasi limfosit tersusun hampir seluruhnya dari sel-B. Kekebalan humoral yang utuh pada
tikus telanjang mengurangi efisiensi pembentukan tumor setelah xenografts. Strain mouse ini telah
terbukti bermanfaat untuk pembentukan xenograft tumor baik dari sampel tumor pasien dan garis
sel kanker manusia yang telah terbentuk [27, 28].

Mouse SCID memiliki mutasi titik pada kromosom 16 pada strain tikus bawaan CB-17 yang
menunjukkan cacat pada perbaikan DNA. Hal ini menghasilkan gangguan pematangan limfosit
dan defisit dalam sel T dan B yang bersirkulasi, matang, fungsional. Namun, galur tikus ini
memiliki sistem imun bawaan yang utuh dengan jumlah normal monosit / makrofag, sel pembunuh
alami (NK) dan granulosit yang kadang-kadang menyebabkan eliminasi sel xenografted tumor dari
waktu ke waktu [29]. Tikus SCID / Bg tidak memiliki fungsi sel B, sel T, dan NK seluruhnya,
tetapi menunjukkan peningkatan populasi makrofag [30 - 32] (Gambar 2). Tikus SCID dengan
mutasi di lokus Il2r telah secara signifikan meningkatkan kelangsungan hidup jaringan manusia
seperti monosit darah perifer, sel hematopoietik [33] dan beragam jenis sel tumor seperti paru-
paru [34] atau xenografts tumor ovarium [26, 33].

Mouse SCID memiliki mutasi titik pada kromosom 16 pada strain tikus bawaan CB-17 yang
menunjukkan cacat pada perbaikan DNA. Akibatnya adalah gangguan pematangan limfosit dan
defisit dalam sirkulasi, matang, sel T dan B fungsional. Namun, galur tikus ini memiliki sistem
imun bawaan yang utuh dengan jumlah normal monosit / makrofag, sel pembunuh alami (NK) dan
granulosit yang kadang-kadang menyebabkan eliminasi sel tumor xenografted dari waktu ke waktu
[29]. Tikus SCID / Bg tidak memiliki fungsi sel B, sel T, dan NK seluruhnya, tetapi menunjukkan
peningkatan populasi makrofag [30 - 32] (Gambar 2). Tikus SCID dengan mutasi di lokus Il2r
telah secara signifikan meningkatkan kelangsungan hidup jaringan manusia seperti monosit darah
perifer, sel hematopoietik [33] dan beragam jenis sel tumor seperti paru-paru [34] atau xenografts
tumor ovarium [26, 33].

Eksperimen menggunakan tikus SCID telah menunjukkan bahwa pengikatan lingkungan mikro
tumor manusia dipertahankan untuk jangka waktu terbatas [29, 33, 35].

3. Situs Xenograft

Situs implantasi penting karena lingkungan mikro. Engraftment subkutan memungkinkan

penilaian ukuran tumor dengan mudah tetapi tidak mereplikasi lingkungan mikro tumor alami,
yang berkontribusi terhadap perkembangan tumor dan dapat memodulasi respons terapeutik [17].
Dengan demikian, batas utama dari engraftment subkutan adalah kurangnya atau berkurangnya
potensi metastasis dibandingkan dengan situs ortotopik di mana tingkat peningkatan diamati [36]
(Gambar 2).
Model xenograft tumor ortotopik memberikan konteks yang lebih relevan secara biologis untuk
mempelajari penyakit dan interaksi host-tumor. Model transplantasi ortotopik dapat meniru
perilaku biologis dari tumor primer tetapi prosedur ini lebih sulit dilakukan [37]. Beberapa
penelitian telah menunjukkan bahwa implantasi ortotopik dari tumor manusia menunjukkan
pertumbuhan dan metastasis yang superior dibandingkan dengan posisi subkutan. Kapasitas
metastasis sel-sel tumor yang diimplantasikan ke dalam tikus tergantung juga pada sifat-sifat sel
tumor [38].

Modalitas untuk meniru lingkungan mikro tumor manusia adalah memanusiakan model tikus [39,
40]. Dengan demikian, untuk mereproduksi lingkungan mikro alami, peneliti memberikan dosis
rendah estradiol untuk tikus [32, 41] atau "memanusiakan" bantalan lemak susu tikus dengan
fibroblast manusia yang diabadikan [42, 43]. Tumor payudara manusia, mengekspresikan atau
tidak mengekspresikan reseptor estrogen (ER + atau ER) yang tumbuh di bantalan lemak SCID /
Beige dan non-obesitas obesitas (NOD) / SCID / IL2-receptor null

(NSG) tikus, menghasilkan xenografts stabil yang dapat ditransplantasikan pada tingkat masing-
masing 21% dan 19% [32]. Pertumbuhan primer dan tingkat pengambilan yang stabil pada tikus
ini tidak berbeda secara statistik di bawah suplementasi estradiol. ER dan xenografts diperbanyak
dengan adanya pelet estradiol yang menunjukkan bahwa suplementasi estradiol merangsang
pertumbuhan xenografts kanker payudara. Cangkok tumor ER + tetap tergantung pada estrogen
untuk pertumbuhan tumor. Efek stimulasi estradiol pada pertumbuhan ER-tumor setidaknya bisa
disebabkan oleh efek ER-mediated pada sel myeloid yang berasal dari sumsum tulang yang
mempromosikan angiogenesis dan pertumbuhan tumor [32, 44].

Tingkat pengambilan tinggi juga diamati oleh DeRose et al., Menggunakan jaringan tumor yang
dilapisi Matrigel dan ditanam ke dalam bantalan lemak bebas epitel dari tikus NOD / SCID yang
dilengkapi dengan estradiol [41]. Kuperwasser et al. telah mengembangkan protokol untuk
pembentukan stroma mammae manusia di dalam pad lemak susu mammae. "Memanusiakan" dari
pad lemak mammae tikus dengan memperkenalkan garis sel fibroblast manusia yang diabadikan
sebelum transplantasi, menunjukkan peningkatan efisiensi xenografting menjadi tikus NOD /
SCID. Hasil mereka menunjukkan bahwa stroma memberikan yang tepat

lingkungan untuk pengembangan epitel mamaria manusia [45]. Model ini diterapkan untuk
memahami perkembangan payudara manusia normal atau tumorigenesis payudara [42]. Fibroblast
berkontribusi pada pemeliharaan kerangka struktural sebagian besar jaringan. Fibroblast sub-
peritoneum manusia dan interaksi sel kanker menciptakan lingkungan mikro yang meningkatkan
perkembangan tumor dan metastasis sel kanker kolorektal manusia ketika disuntikkan secara
subkutan ke tikus SCID [43].

4. Stabilitas Tumor Xenograft

Ketika tumor manusia di-xenograft menjadi tikus, jaringan tumor mengalami tekanan sel-sel tumor
secara selektif yang disebabkan oleh lingkungan baru. Validitas studi xenograft sangat tergantung
pada stabilitas fenotipik dan genotipik model. Asumsi mendasar dalam menggunakan xenografts
tumor manusia sebagai model untuk pengembangan obat antikanker praklinis adalah bahwa
xenograft sangat mirip dengan tumor primer yang sesuai.

Studi sebelumnya telah menganalisis kesamaan model xenograft dengan tumor primer dengan
membandingkan fenotip biologis spesifik dari tumor primer, seperti tumorigenisitas [46], volume
tumor [47] atau indeks DNA [48].

Studi profil genom saat ini menunjukkan retensi karakteristik molekuler yang menentukan tipe
tumor. Studi oleh Whiteford et al. [49] menggunakan analisis profil ekspresi cDNA menunjukkan
bahwa, xenografts yang diturunkan dapat mengelompok secara akurat dengan rekan manusia
mereka. Demikian pula, perbandingan langsung dari jaringan biopsi tumor pasien dengan
xenograft awal-jalur menunjukkan kesesuaian yang tinggi dalam ekspresi gen dan kesamaan yang
lebih besar dalam perubahan genomik ketika tumor diperbanyak pada tikus. Stabilitas genomik
dan fenotipik antara jaringan tumor pasien dan xenograft yang sesuai dipelajari dalam lesi yang
berbeda seperti sambungan esofagus dan gastroesofageal [50], payudara [32, 51], paru [52], ginjal
[9], tumor ginekologis [53], uveal melanoma [54] dan kanker kolorektal [23].

Kami telah menunjukkan bahwa model xenograft RCC manusia agresif secara klinis relevan,
menunjukkan stabilitas histologis dan molekuler yang baik dan cocok untuk studi biologi dasar
dan respons terhadap terapi [55].

Kanker melibatkan perubahan dinamis dalam genom, adalah hasil dari beberapa peristiwa
kompleks dan memang demikian

ditandai dengan proliferasi sel yang tidak terkendali. Perkembangannya tergantung tidak hanya
pada perubahan yang terjadi dalam sel yang ditransformasikan, tetapi juga pada interaksi sel
dengan lingkungan mikro mereka. Mayoritas pemahaman kita tentang karsinogenesis saat ini
berasal dari analisis in vitro jaringan tumor terbaru yang dikeluarkan dari pasien kanker. Sementara
ini telah menjelaskan banyak perubahan genomik yang dialami oleh sel-sel kanker, ini
memberikan sedikit informasi tentang faktor-faktor yang mempengaruhi perkembangan kanker
tahap awal in vivo.

Stabilitas peringkat antara sistem model dan tumor primer menunjukkan bahwa basis data ekspresi
gen xenograft juga merupakan alat yang efektif untuk penemuan marker.

5. Penggantian Pembuluh Darah Manusia

Produksi faktor-faktor angiogenik di lingkungan mikro lokal tumor berkontribusi pada

pengembangan jaringan pembuluh darah dengan pembuluh mikro yang belum matang. Telah
disarankan bahwa tumor yang diimplantasikan dapat bervariasi dalam tingkat di mana pembuluh
darah manusia asli bertahan [56-58]. Pada tumor manusia yang ditularkan ke tikus yang
immunodefisien, pembuluh darah manusia sebagai bagian dari tumor asli tidak bertahan dan tidak
lagi terdeteksi pada saat perjalanan pertama (15-25 minggu). Dengan demikian, setelah lewat,
pembuluh yang mendukung pertumbuhan tumor ini berasal dari murine. Hilangnya pembuluh
manusia dan vaskularisasi oleh pembuluh inang terjadi lebih cepat pada tumor usus besar (pada 3
minggu) daripada di mesothelioma (pada 9 minggu), penggantian ini tergantung pada jenis tumor
[59]. Hasil ini mendukung bahwa keberhasilan pengerjaan dan pertumbuhan xenografts tumor
pasien tergantung pada perekrutan pembuluh darah baru dari host murine [59]. Dalam xenografts
subkutan studi prostat dan sel karsinoma ginjal, 80% dari pembuluh di xenograf utama dari
jaringan jinak dan ganas dari kedua organ dilapisi dengan sel endotel manusia melalui periode
studi 30 hari [56]. Sebuah penelitian serupa pada xenografts kanker kolorektal menemukan bahwa
pembuluh darah manusia dengan cepat menghilang dari pertumbuhan xenografts kolorektal. Jadi,
bahwa pada hari ke sepuluh, 50% dari pembuluh darah adalah murine, pada hari ke 20, itu
didominasi murine dan pada hari ke 30, tidak ada pembuluh manusia yang terdeteksi [57]. Nasib
pembuluh manusia ke dalam xenograft tumor terkait dengan jenis tumor individu dan titik waktu
di mana spesimen yang diolah diperiksa. Pengaturan proses angiogenik dan mekanisme molekuler
yang menentukan kegigihan atau hilangnya manusia

sel endotel dalam konteks tumor berbeda. Jadi setelah implantasi sel ginjal manusia dan xenografts
primer karsinoma prostat dari spesimen biopsi, sel-sel endotel manusia dengan cepat digantikan
oleh rekan-rekan murine mereka (hampir 50% pada hari ke 10 setelah implantasi [57]. Kanker
primer xenograft primer yang ditransplantasikan ke tikus nude telanjang menunjukkan bahwa
sebagian besar pembuluh darah dilapisi dengan sel endotel manusia sepanjang hari ke-30 [56],
sedangkan pada xenografts primer lainnya dari jaringan spesimen bedah kanker prostat yang baru,
ledakan angiogenesis oleh pembuluh darah manusia endogen terjadi antara hari 6-14 setelah
transplantasi ke dalam SCID tikus pra-implan dengan pelet testosteron. Dalam model ini, androgen
mediated angiogenesis diinduksi oleh regulasi VEGF-A yang lebih tinggi dalam kompartemen
stroma [60]. Beberapa laporan menunjukkan semacam "mosaik" dari kapal yang sebagian dilapisi
oleh manusia sel-sel tumor [61] dan “mimikri vaskular” di mana sel-sel darah terlihat dalam
saluran yang dibatasi oleh sel-sel tumor tetapi tidak pada sel endotel ls [62]. Evaluasi spesies sel
endotel (mis. Murine atau manusia) pada tumor xenograft juga penting untuk mengevaluasi
respons terhadap terapi seperti antiangiogenik [63]. Asal sel endotel memiliki dampak langsung
pada pertumbuhan tumor xenograft dan respons terhadap pengobatan dengan obat kemoterapi
cisplatin atau dengan obat anti-angiogenik sunitinib [64].
Kesimpulannya, proliferasi tumor xenograft tidak hanya bergantung pada agresivitas sel-sel tumor
tetapi juga pada lingkungan mikro manusia dan tikus dan interaksinya dengan komponen-
komponennya ketika ditanamkan pada tikus.

Karakterisasi berbagai faktor terkait dengan lingkungan mikro tumor dapat membantu untuk
memahami peran masing-masing dalam perkembangan xenografts tumor manusia menjadi tikus
yang kekurangan imun. Pengetahuan tentang faktor-faktor ini bisa menjadi prasyarat untuk
menguraikan model hewan mirip tumor manusia untuk studi molekuler respon terhadap terapi sel
manusia.