Abstrak

Kromatografi cair kinerja tinggi normal dan fase terbalik telah digunakan untuk mengidentifikasi dan
memisahkan pigmen caï-protenoid yang ada dalam varietas komersial ancho, guajillo dan mulato
dari Capsicum annuum, karena ada banyak sekali variasi dalam komposisi karotenoid. Pada fase
terbalik 13 karotenoid umum dari 24 ditemukan. Pada fase normal ada 14 karotenoid umum dari 22.
Di antara karotenoid utama yang diidentifikasi, adalah b-karoten dan b-cryptoxanthin yang memiliki
aktivitas provitamin A.

. pengantar

Capsicum annuum L., dikenal di Meksiko sebagai cabai, memiliki jumlah varietas yang sangat besar,
dan hanya sedikit yang telah dipelajari secara terperinci. Meskipun C. annuum adalah berasal dari
Benua Amerika, penggunaannya telah menyebar ke banyak negara di seluruh dunia. Warna buah C.
annuum bervariasi, mulai dari hijau, kuning atau putih untuk buah mentah, dan berubah menjadi
merah, merah tua, coklat dan terkadang hampir hitam dalam keadaan matang (Long-Solis, 1998).
Warna setiap varietas Capsicum pada tahap matang sepenuhnya tergantung pada kapasitasnya
untuk mensintesis karotenoid dan bahkan untuk mempertahankan pigmen klorofil.

Karotenoid biasanya cukup stabil secara alami lingkungan Hidup; Namun, mereka menjadi jauh lebih
labil begitu mereka dipisahkan dan dimurnikan atau dilarutkan Pelarut organik. Karotenoid harus
ditangani dengan hati-hati dan disimpan tanpa adanya cahaya dan oksigen; sampel murni harus
dijaga pada suhu rendah (Kanner & Mendel,

1976; Malchev, Ioncheva, Tanchev, & Kalpakchieva,

1982). Sebagian besar reaksi merosot melibatkan oksidasi dan pembentukan radikal bebas.
Keasaman silika kolom, terutama saat menggunakan HPLC fase normal,Tujuan dari ini kertas adalah
untuk membandingkan komposisi karotenoid tiga varietas terpilih ditentukan oleh normal dan
kromatografi fase terbalik

material dan metode

2.1. Sampel

Sampel komersial dari buah utuh kering

tiga varietas, Ancho, Mulato dan Guajillo, dikejar dari pasar (merek San Lazaro). Satu kilo? Gram
dipilih dan diperiksa untuk integritas

buah dan tidak adanya debu dan kontaminasi serangga.

Dari 800 g masing-masing Ancho, Mulato dan Guajillo (keseluruhan

buah), biji dan peduncules dihilangkan, dan

mereka dipotong kecil-kecil.

2.2. Ekstraksi pigmen

Sepuluh gram diambil dari sampel yang representatif

bahan cincang dan dihomogenisasi dari masing-masing varietas

dan setiap sampel diekstraksi dengan aseton, menggunakan

aduk dan tanpa cahaya. Perawatannya

diulangi sampai tidak ada lagi warna yang diekstraksi. Saluran-saluran dari masing-masing varietas
dikumpulkan, ditempatkan dalam pemisah

corong dan campur dengan 100 ml etil eter dan diolah

dengan 100 ml larutan air NaCl 10%; fase

dipisahkan dan dicuci dengan Na2SO4 jenuh

larutan. Lapisan eter selanjutnya dikeringkan di atas anhesi Na2SO4 untuk menghilangkan sisa air.
Eter

fase, yang mengandung ester karotenoid, disabunkan oleh

menggunakan 100 ml larutan yang mengandung 20% kalium

hidroksida dan 20% MeOH. Campuran diizinkan

tahan selama 1 jam, dengan gemetaran dalam gelap. Setelah itu,

fase air telah dihapus dan fase organik

dicuci dengan air suling sampai netral, lalu

diuapkan sampai kering pada 35 C dalam rotary evaporator.

Pigmen disimpan pada) 20 C dalam larutan aseton

sebelum pemisahan HPLC. Metode kerja umum, seperti persiapan sampel dan pencegahan klorofil,
dilakukan menurut Harold, Benjamin,

dan Walter (1971).

2.3. Pemisahan dan kuantifikasi pigmen oleh HPLC

Dua teknik yang berbeda digunakan untuk menilai dan mengukur pigmen karotenoid dengan HPLC.
SEBUAH pemisahan fase normal dilakukan, mengikuti metode oleh Almela, Lopez-Roca, Candela,
dan Alcazar (1990), dengan beberapa modifikasi kecil. Kolom yang digunakan adalah Millipore,
Waters Div. (Milford, Massa ??? chusetts, USA) l-porasil 125 A, 10 lm, 3.9? 150 mm,
dalam kondisi yang dijelaskan dalam referensi di atas,

menggunakan gradien heksana dan aseton (9.5: 0.5). Untuk

HPLC fase balik, yang lebih sering digunakan

(Deli, Matus, & Toth, 1996), kami mempekerjakan Waters? l ??? bondapak C18 kolom 3.9? 150 mm,
menggunakan 1,5 ml / menit

aliran. Pelarut yang digunakan adalah semua grade HPLC dan

disaring melalui membran 0,45 lm dan degassed sebelum digunakan. Instrumen yang digunakan
adalah persiapan Delta Air

4000, dengan detektor absorbansi merdu pada 450 nm dan

sistem integrator.

Peralatan lain yang digunakan termasuk Buchota rotavapor €

RE / A, Flawil, Swiss, dan lampu UV UVP, Inc.

Model UVGL-25 Mineral light 254/366 nm, San Ga ??? briel, CA, USA.

Beberapa faktor respon diambil dari Minguez ??? Mosquera dan Hornero-M? Endez (1993) dan
trans? Dibentuk menjadi b-karoten seperti dijelaskan dalam hal yang sama.

referensi menggunakan rumus:

Fi = b-mobil ¼ fi = fb-mobil;

di mana saya mewakili setiap pigmen dan Fi = b-mobil adalah faktornya

dari masing-masing pigmen relatif terhadap b-karoten. Tambahan

Faktor-faktor yang digunakan berasal dari daerah relatif Kalimantan

puncak dan bobot yang dijelaskan oleh Minguez-Mosquera dan

Hornero-Mendez (1994), Deli, Matus, dan Szaboles

(1992, 1996) dan Almela et al. (1990). Responnya

faktor-faktor dalam makalah ini dihitung sehubungan dengan b? karoten dan ditunjukkan pada Tabel
1.

2.4. Identifikasi karotenoid

Sampel murni b-cryptoxanthin, capsorubin dan

capsanthin, disediakan oleh Dr. Fernando

Walls Armijo (Instituto de Qu Ä ± mika, M exico, DF); murni

b-karoten diperoleh dari Sigma Chemical Co., St.

Louis, MO, AS. Karoten yang disebutkan di atas, bersama dengan anteraxanthin, diisolasi dengan
lapisan tipis

kromatografi dari tiga varietas C. annuum

dan diidentifikasi oleh UV - Vis dan spektra inframerah dan

titik lebur. Lutein dan canthaxanthin hanya

diisolasi dari Mulato, sementara neoxanthin diisolasi dari Guajillo dan Mulato dan diidentifikasi oleh
UVâ € “Vis dan

spektrum inframerah dan titik leleh.

Sebagian besar karoten diberikan hanya oleh waktu retensi mereka dalam HPLC dan UV-Vis Spectra.
Untuk tujuan ini kami mengikuti, sedekat mungkin, kondisi

dijelaskan oleh Deli et al. (1996) dalam kasus kebalikannya

kromatografi fase dan dalam kasus fase normal

milik Almela et al. (1990).

Aktivitas provitamin A dihitung sebagai retinol

ekuivalen (RE) menurut pedoman WHO (1982)

(Mejia, Hudson, Gonzalez de Mejia, & Vazquez (1988);

Simpson, 1983). Untuk tujuan ini, b-karoten berat

dibagi dengan enam, sedangkan bobot b-cryptoxanthin dan a-caro￾tene dibagi dua belas. Persen
berat

karotenoid diperoleh dengan mempertimbangkan berat kering total ca￾rotenoid untuk masing -
masing varietas, bersama dengan

persen berat dari Tabel 2.

3. Hasil dan Pembahasan

Komposisi hadir karotenoid serupa, di

istilah kualitatif, untuk yang diamati dalam C. annuum lainnya

varietas diperiksa dalam literatur (Deli et al., 1992,

1996). Namun, ada beberapa perbedaan penting dalam

ada atau tidaknya karoten tertentu, serta

dalam konsentrasi relatif. Ini adalah laporan pertama kalinya

untuk karoten dalam tiga varietas cabai ini.

Pertama-tama kita mengarahkan perhatian pada pola karotenoid

menyajikan. Saat menggunakan HPLC fase terbalik (lihat Tabel 2

dan Gbr. 1), lima komponen non-kutub terakhir menunjukkan a

pola yang sama untuk ketiga varietas. Capsanthin to get gether dengan isomer 9-cis dan violaxanthin
mewakili a

bagian utama dari komposisi karotenoid. Ada juga a

pola serupa pada HPLC fase normal (lihat Tabel 3 dan

Gbr. 2) saat membandingkan bagian non-kutub di antara

1,8 dan 7,63 menit, terutama ketika mengamati Mulato dan

Guajillo. Pada fase normal HPLC ada 14 yang umum

dari total 22 karotenoid. Pada fase terbalik ada

13 karotenoid umum dari total 24 yang diidentifikasi

karotenoid. Dalam Ancho dan Guajillo, b-karoten adalah

komponen utama hadir. Caen rotenoid berikutnya yang paling banyak adalah violaxanthin. Ini
berbeda dengan hormat

untuk C. annuum lainnya, di mana karotin yang paling melimpah adalah capsanthin. Di Ancho dan
Guajillo, selanjutnya Karotenoid yang paling melimpah adalah violaxanthin. Di Mulato,

komponen utamanya adalah violaxanthin saat menggunakan reverse

fase HPLC; karotenoid paling banyak berikutnya adalah b ??? karoten. Di Guajillo dan Mulato, cis-b-
karoten adalah

ditemukan ketika fase normal HPLC digunakan.

Deteksi cryptoflavin dalam fase normal HPLC

(lihat Tabel 3 dan Gambar 2) dalam ketiga varietas dan

ketiadaan dalam ketiga varietas, dalam fase terbalik HPLC, adalah

penting dan menarik. Sepengetahuan kami, crypto-

flavin hanya ditemukan di C. annuum ketika normal

fase HPLC digunakan. Satu penjelasan yang mungkin adalah itu

resolusi puncak mungkin tidak cukup tinggi. Kemungkinan penjelasan lain adalah bahwa cryptoflavin
mungkin merupakan artefak,

diproduksi sebagai hasil dari efek katalitik oleh silika dalam

HPLC fase normal. Yang juga patut diperhatikan adalah ketiganya

varietas yang kami periksa berbeda dalam warna. Mulato adalah

cukup gelap (hampir hitam) dan ini dapat dijelaskan dalam

sebagian oleh kandungan klorofilnya yang relatif besar (9,78 lg /

g), bersama dengan sejumlah besar pres karotenoid, termasuk konsentrasi violaxantin yang tinggi
dan

capsorubin, capsanthin 5,6-epoxide (Matus, Deli, &

Szaboles, 1991), dan capsanthin 3,6-epoksida (Parkes

Kevin & Pattenden, 1986) (total konten karotenoid 7.24

mg / 100 g). Ancho berwarna coklat kemerahan (total karotenoid

konten 7,52 mg / 100 g) dan memiliki jumlah kecil

klorofil (0,96 lg / g). Akhirnya, Guajillo memiliki warna merah (kandungan karotenoid total kami 6,76
mg / 100 g) dan tidak

klorofil.

Tiga dari karotenoid yang ditemukan memiliki provitamin A

aktivitas, (b-karoten, a-karoten dan b-cryptoxanthin)

(Howard et al., 1994; Mejia et al., 1988). Provitamin

Aktivitas tertinggi di Ancho (335 lg RE / 100 g d.w.)

terutama karena b-karoten (262 lg RE / 100 g d.w.) dan

b-cryptoxanthin (69,3 mg RE / 100 g d.w.); varietas ini diikuti oleh Guajillo (263 lg RE / 100 g d.w.),
terutama karena

ke b-karoten (201 lg RE / 100 g d.w.) dan ke b-crypto￾xanthin (53,7 lg RE / 100 g d.w.). Provitamin
terendah

Aktivitas dihitung untuk Mulato (235 lg RE / 100 g

d.w.) juga terutama disebabkan oleh b-karoten (180 lg RE / 100 g

d.w.) dan ke b-cryptoxanthin (36,8 lg RE / 100 g d.w.).

4. Kesimpulan

Kami menemukan perbedaan besar pada karotenoid

komposisi dari varietas yang dipilih dari C. annuum L. All

varietas yang diteliti menunjukkan provitamin A yang relatif tinggi

isi karotenoid. Varietas Ancho menunjukkan

nilai provitamin A tertinggi (335 lg RE / 100 g berat kering),

diikuti oleh Guajillo (263 lg RE / 100 g berat kering); itu

terendah adalah Mulato (235 lg RE / 100 g berat kering).