Judul:

Authentication of Panax ginseng from different regions

(autentikasi Panax ginseng dari berbagai daerah)

Bahan dan Metode:

1. Sampel:
Sampel ginseng segar yang tumbuh selama lima tahun (60 per tahun) dari berbagai
daerah [Ji An (JA), Jing Yu (JY), Fu Song (FS), Wang Qing (WQ)] dari provinsi Jilin,
Cina pada Oktober 2015 dan 2016. Ginseng segar disimpan menggunakan metode MAP
2. Preparasi Sampel:
1 g akar dihomogenisasi dengan cryogenic mesin penggiling dan ditempatkan dalam
tabung centrifuge; setelah itu, 10 mL etanol 70% ditambahkan, diikuti dengan
pengocokan padakecepatan 100 rpm semalam. Sampel dirawat tiga kali dengan
gelombang ultrasonik (40 kHz). Larutan yang diekstraksi dibiarkan menguap selama
rotasi sampai tidak ada residu cair yang tersisa. Air suling (10) mL) dan eter (10 mL)
ditambahkan ke corong pemisah, yaitu proses diulangi tiga kali, dan lapisan air diperoleh.
Lapisan berair diekstraksi tiga kali oleh air jenuh butanol (10 mL). Air suling (10 mL)
ditambahkan tiga kali untuk menghilangkan polisakarida dan mendapatkan lapisan
organik. Solusinya menjadi sasaran penguapan rotasi sampai tidak residu cair tetap ada.
Metanol murni secara kromatografi larutan (10 mL) ditambahkan dan larutan yang
dihasilkan disimpan dalam botol cokelat untuk menghindari fotooksidasi.
3. Analisis Ginsenosides dengan HPLC
Sampel dilarutkan dalam metanol dan disaring melalui filter 0,45 mm untuk analisis
HPLC. HPLC dilakukan pada Sistem HPLC-20A (Shimadzu, Jepang), dilengkapi dengan
otomatis sampler dan detektor UV menggunakan kolom C18 (250 mm 50 mm, 4,6 mm;
Agilent, USA). Fase seluler adalah pelarut A (100% asetonitril) dan pelarut B (100% air)
dan Program gradien berikut digunakan: 0–32 menit, 18% A (isokratik); 32–50 menit,
18–25% A; 50–70 menit, 25–30% A; 70– 100 mnt, 30–35% A; 100–120 menit, 35–70%
A. Sampel volume injeksi adalah 10 mL dan suhu 25 C. Itu Kecepatan adalah 1,0 mL
menit 1 dan penyerapan UV diukur pada 203 nm. Analisis kuantitatif dilakukan dengan
menggunakan standar metode kurva dan standar eksternal auentik ginsenosida..
 4. Kuantifikasi level transkrip
Untuk menyelidiki korelasi ekspresi gen dengan konten total ginsenoside, kami mengukur
tingkat transkripsi enzim kunci dalam ginseng segar dari berbagai daerah menggunakan RT-
PCR.
5. Uji Aktivitas Enzim
a. Protein extraction.
b. Uji aktivitas HMGR.
c. Uji aktivitas FPS
d. aktivitas enzim DE
e. aktivitas enzim SS
f. Aaktivitas enxim SE
g. Aktivitas CYP450
h. Aktivitas enzim GT

Hasil dan Pembahasan:

1. Korelasi total konten ginsenoside dengan ginsenosides tunggal

total ginsenoside dan ginsenoside individu, diukur dengan metode kolorimetri asam vanillin-
perklorat dan HPLC, mengungkapkan bahwa total saponin dari JY, FS, dan WQ memiliki
perbedaan yang signifikan dibandingkan dengan JA. FS punya konten tertinggi, sekitar 2%
lebih banyak dari WQ. Kandungan ginsenoside menentukan kualitas ginseng. Selain itu,
kualitas ginseng dari empat daerah berbeda secara signifikan. Isi ginsenosides Re dan Rc
berbeda secara signifikan antar daerah. Namun, Re dan Rc konten konsisten dengan tren
konten total saponin, menunjukkan bahwa konten Re dan Rc mungkin memiliki signifikansi
dalam diskriminasi ginseng dari berbagai daerah. Itu isi dari ginsenosides tunggal (Re, Rc,
Rf) dan total ginsenoside konten sangat berkorelasi (Gbr. 4). Namun demikian, hanya Isi
ulang dalam ginseng segar berbeda secara signifikan di antara daerah. Hasil ini menunjukkan
bahwa isi Re mungkin berguna dalam membedakan ginseng dari daerah yang berbeda.
Beberapa penelitian tentang berbagai jenis ginseng didasarkan pada polimorfisme nukleotida
tunggal (SNP), seperti Amerika ginseng dan ginseng Oriental.26–30 Namun, SNP itu
dikembangkan dari kultivar tunggal yang belum disaring ginseng dari berbagai daerah untuk
otentikasi. Berbeda kondisi pertumbuhan mempengaruhi kandungan saponin. 31,32 Saat ini
studi, kami mengusulkan bahwa penanda memiliki korelasi statistik dengan kandungan total
saponin mungkin terkait dengan kualitas ginseng, dan mungkin cocok untuk identifikasi
ginseng dari berbagai daerah. Persentase Re ginsenoside berbeda antar daerah. Ginsenoside
ini dikenal sebagai zat anti-inflamasi dan anti-diabetes.33 Chan et al.34 melaporkan bahwa
rasio Rg1: Re bervariasi pada dua spesies ginseng. Pada spesies ini, isi Re adalah yang
tertinggi di antara ginsenosides.35 Karena itu, dalam ginseng dari berbeda daerah, konten Re
akan menentukan konten total ginsenoside. Selain itu, ia berpotensi digunakan sebagai
penanda untuk membedakan di antara ginseng dari berbagai daerah.
2. Korelasi ekspresi gen dengan total konten ginsenoside
Ekspresi hampir semua gen ditemukan signifikan lebih tinggi pada kelompok FS daripada di
ginseng dari daerah lain (Gbr. 5). Ekspresi gen dari enzim kunci HMGR, FPS, SE, dan DS
konsisten dengan kandungan saponin segar ginseng dari berbagai daerah (FS> JY> JA>
WQ), yang mungkin menjelaskan variasi kandungan saponin di antara daerah dan
menunjukkan bahwa keempat enzim ini mungkin memiliki signifikansi dalam membedakan
antara daerah asal. Urutan korelasi ekspresi gen dengan saponin konten (Gbr. 6) adalah
HMGR (0,99)> SE (0,99)> SS (0,98)> DS (0.96)> GT (0.94)> FPS (0.9)> CYP450 (0.7).
Namun ini korelasi signifikan hanya untuk HMGR dan DS (P <0,05). Namun, konten
HMGR, FPS, SE, DS konsisten dengan itu dari saponin, dan analisis korelasi
mengungkapkan bahwa hanya ekspresi gen HMGR dan DS secara signifikan didiskriminasi
di antara ginseng dari berbagai daerah. Aktivitas hampir semua enzim kunci lebih tinggi di
FS kelompok daripada di ginseng dari daerah lain (Gbr. 7). Itu aktivitas hampir semua enzim
adalah yang tertinggi di FS ginseng, yang konsisten dengan level transkripsi dan konten dari
ginsenoside. Selanjutnya, aktivitas empat enzim utama (HMGR, SS, SE, dan DS) konsisten
dengan urutan konten saponin dalam ginseng dari berbagai daerah, yang mungkin
menunjukkan bahwa keempat enzim akan memiliki signifikansi dalam mengotentikasi
ginseng dari berbagai daerah. Namun demikian korelasi tidak signifikan. HMGR adalah
enzim pembatas laju utama dalam asam mevalonat jalan. Ekspresi berlebihnya telah
digunakan untuk meningkatkan ux karbon melalui jalur asam mevalonat dan meningkat
produksi banyak terpenoid, termasuk triterpenoid dan diterpenoids.36-38 Sementara itu
 pengurangan ekspresinya dapat mengurangi kandungan ginsenosides. Apalagi, HMGR
memainkan peran penting dalam akumulasi ginsenosides selama bertahun-tahun.39 Ekspresi
HMGR dapat menentukan isi dari saponin. Daerah yang berbeda memiliki konten yang
berbeda pula total ginsenosides; perbedaan dalam ekspresi HMGR mungkin mendasari
perbedaan ini dan karenanya menjadi penting untuk mengidentifikasi ginseng dari berbagai
daerah. DS adalah enzim kunci dalam biosintesis ginsenosides yang berbeda di antara
kultivar ginseng.40 Itu bisa mensintesis dammarenediol, yang merupakan prekursor utama
beberapa ginsenosides, dan memiliki banyak efek farmakologis. DS adalah kuncinya Enzim
yang menentukan tingkat produksi dari tipe dammaranet prekursor ginsenoside
dammarenediol-II, dan overekspresi dapat meningkatkan konten ginsenosides. Beberapa
penelitian telah melaporkan bahwa gen DS dapat digunakan untuk itu membedakan antara
berbagai jenis ginseng.
Kesimpulan
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menjelaskan efek dari kondisi lingkungan pada
aktivitas ginsenoside sintase, ekspresi gen, dan kandungan ginsenoside dalam ginseng dari
berbagai daerah di Provinsi Jilin, dan untuk mempelajari korelasinya antara aktivitas saponin
sintase, ekspresi gen, dan ginsenoside konten di berbagai wilayah. Kami secara acak
mengumpulkan 60 sampel ginseng di berbagai bidang budidaya ginseng. Meskipun iklim,
tanah, ketinggian tanam, kebiasaan menanam, dan faktor lain dapat mempengaruhi aktivitas
saponin sintase, gen ekspresi, dan konten ginsenoside, efek dari faktor-faktor ini dapat
dikaitkan dengan efek elemen regional Kami punya menyelidiki ginseng segar dari empat
wilayah di provinsi Jilin. SEBUAH strategi baru untuk diskriminasi ginseng segar dari
daerah yang berbeda menggunakan ginsenoside Re dan ekspresi gen profil HMGR dan DS
ditunjukkan. Untuk memverifikasi apakah indikator yang diukur bersifat universal, ginseng
sampel dari lebih banyak area harus diselidiki.