PENGINFEKSIAN SPODOPTERA LITURA MULTIPLE

NUCLEOPOLYHEDROSIS VIRUS (SpLtMNPV) TERHADAP

MORTALITAS ULAT GRAYAK (Spodoptera litura )

Putri Dwi Astuti (16030204051), Dwi Wahyu Agustina (16030204055), Dzurrotul Firdaus (16030204058),
Mellany Wahyu Iryanti (16030204060), Dian Nur Khayati (16030204063)
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Negeri Surabaya

ABSTRAK
Salah satu insekta yang sering dianggap sebagai hama yang sangat merugikan adalah Spodoptera litura.
Hama ini dapat dikendalikan dengan agen biologis berupa virus. Virus yang sedang dikembangkan
sebagai bioinsektisida adalah SpltMNPV (Spodoptera litura multiple nucleopolyhedrosis virus). Jumlah ulat
yang mati akibat terinfeksi Spodoptera Litura Multiple Nucleopolyhedrosis Virus (SpltMNPV) yaitu
pada instar 3 sebanyak 10 ekor (33,3%), pada instar 4 sebanyak 12 ekor (40%) dan pada instar 5 sebanyak
8 ekor (26,7%) dengan total keseluruhan 30 ekor ulat (18,2%) yang mati dari 165 ekor ulat. Hasil
perhitungan jumlah koloni virus didapat pada instar 3 pengulangan pertama 11 koloni, pengulangan
kedua 15 koloni dan pengulangan ketiga 11 koloni dengan nilai kerapatannya 61.5x106. Pada instar 4
pengulangan pertama 23 koloni, pengulangan kedua 16 koloni dan pengulangan ketiga 26 koloni dengan
nilai kerapatannnya 108.5x106. Pada instar 5 pengulangan pertama 16 koloni, pengulangan kedua 24 dan
pengulangan ketiga 28 koloni dengan nilai kerapatannnya 113.5x106. Dari hasil perhitungan ini diketahui
bahwa semakin tinggi instar ulat maka semakin banyak pula virus di tubuhnya. Hal ini dikarenakan
semakin lama hidup inangnya maka semakin banyak juga virus tersebut berkembang biak dikarenakan
waktu yang digunakan untuk bereplikasi lebih panjang.

Kata kunci: Hama , Spodoptera litura, Spodoptera Litura Multiple Nucleopolyhedrosis Virus (SpltMNPV),
mortalitas dan kerapatan

.
 PENDAHULUAN
Salah satu insekta yang sering dianggap
sebagai hama yang sangat merugikan adalah
Spodoptera litura. Pada stadium larva/ulat dapat
menyerang berbagai tanaman seperti kapas,
tembakau, jarak, jagung, kedelai, dan kobis
(Sudarmo, 1987) dengan tingkat kerusakan mencapai
50 % (Naito, 1983). Ulat Spodoptera litura, memiliki
ukuran panjang badan 20 - 25 mm, berumur 5 - 10
hari dan untuk seekor serangga betina jenis ini
dapat bertelur 1.500 butir dalam kelompok-
kelompok 300 butir. Serangga ini sangat aktif
pada malam hari, sementara pada siang hari
serangga dewasa ini diam di tempat yang gelap
dan bersembunyi.
Larva Spodoptera litura memiliki jumlah
instar 5 dengan ukuran instar 1 panjang 1,0 mm
dan instar 5 panjang 40 - 50 mm berwarna coklat
sampai coklat kehitaman dengan bercak-bercak
kuning dan berumur 20 - 26 hari. Sepanjang
badan pada kedua sisinya masing-masing
terdapat 2 garis coklat muda. Ciri khas ulat
grayak ini adalah terdapat bintik-bintik segitiga
berwarna hitam dan bergaris-garis kekuningan
pada sisinya. Sedangkan ulat dewasa berwarna
abu-abu gelap atau cokelat. Larva akan menjadi
pupa (kepompong) yang dibentuk di bawah
permukaan tanah. Daur hidup dari telur menjadi
kupu-kupu berkisar antara 30 hari hingga 61 hari.
Stadium yang membahayakan dari hama
Spodoptera litura adalah larva (ulat) karena
menyerang secara bersama-sama dalam jumlah
yang sangat besar untuk menunjang
metamorfosisnya. Ulat ini memangsa segala jenis
tanaman (polifag), termasuk menyerang tanaman
cabai.
Hama ini dapat dikendalikan dengan agen
biologis berupa virus. Virus yang sedang
dikembangkan sebagai bioinsektisida adalah
SpltMNPV (Spodoptera litura multiple
nucleopolyhedrosis virus) yang berdasar penelitian
Asri (2005) efektif mengendalikan Spodoptera litura
dengan mortalitas 80 – 90% pada konsentrasi 107
PIBs/ml di greenhouse dan di Laboratorium efektif
pada konsentrasi 106 PIBs/ml (Asri, 2004).
Pengembangan virus bisa dilakukan secara
konvensional dengan menggunakan inang aslinya
(in vivo).
Penelitian ini merupakan penelitian
ekperimental untuk menguji mortalitas ulat
grayak (Spodoptera litura) yang telah diinfeksi
dengan Spodoptera Litura Multiple
Nucleopolyhedrosis Virus (SpLtMNPV).
BAHAN DAN METODE
Penelitian ini dilakukan di Labolatorium
Mikrobiologi Jurusan Biologi Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Negeri Surabaya mulai tanggal 4
sampai 23 November 2017. Menggunakan ulat
grayak (Spodoptera litura) dan Spodoptera Litura
Multiple Nucleopolyhedrosis Virus (SpLtMNPV).
Bahan dan Alat
Bahan uji yang digunakan dalam penelitian
ini adalah ulat grayak (Spodoptera litura) dan
pakan buatan yang telah diinfeksi dengan
Spodoptera Litura Multiple Nucleopolyhedrosis
Virus (SpLtMNPV). Alat-alat yang digunakan
dalam penelitian ini meliputi: botol kapsul R30,
kain kasa, pinset, tabung reaksi, pipet, preparat,
cover glass, mikroskop, Haemocytometer, vortex-
mixer, sentrifuse, kertas penyaring, gelas ukur,
mortal dan pengaduk.
Tahap Perbanyakan Virus
Pakan buatan ulat dipotong kecil-kecil (1-2
cm) kemudian diinfeksikan dengan virus
SpLtMNPV setelah itu dimasukkan ke dalam
botol kapsul beserta ulat grayak. Dipelihara
sampai ulat tersebut mati. Ulat yang mati karena
virus akan menggantung di tutup botol dengan
kaki abdomen sebagai tumpuan seperti huruf “V”
terbalik, atau diam terlentang dengan tubuh yang
lunak berwarna hitam kecoklatan. Ulat yang telah
mati tersebut diambil secara hati-hati karena
tubuhnya hancur. Diambil dengan cara menjepit
kepalanya dan diangkat pelan-pelan. Kemudian
ulat tersebut dimasukkan ke dalam tabung reaksi
steril yang telah berisi 1 ml akuades dan disimpan
dalam freezer. Apabila telah terkumpul banyak,
ulat siap untuk dimurnikan.
Tahap Pemurnian Virus
Ulat yang telah mati karena terinfeksi virus
dihaluskan dengan mortal, bila terlalu pekat
ditambahkan akuades lagi. Kemudian disaring
dengan kertas penyaring dan dimasukkan ke
dalam gelas ukur dan disaring lagi. Kemudian
filtrat dimasukkan ke dalam tabung sentrifuse
dan dimurnikan dengan memutarnya pada
kecepatan 3500 rpm selama 15 menit.
Supernatannya dibuang dan ditambah akuades
steril serta diaduk sampai homogen. Diputar
kembali dengan sentrifuse pada kecepatan dan
waktu yang sama sampai warna supernatannya
agak jernih (biasanya 3-4 kali). Kemudian diamati
morfologi virus di bawah mikroskop dengan
perbesaran 1000x, virus akan terlihat bulat
bercahaya.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penginfeksian Virus SpLtMNPV pada Ulat
Grayak dan Kematian Ulat S. litura
 Tahap pertama yaitu penginfeksian virus
pada ulat grayak dilakukan dengan cara
mencampurkan pakan buatan dengan suspensi
virus SpLtMNPV. Alasan virus ini dicampur
dengan pakan karena virus ini menginfeksi
terutama organ pencernaan. Hal ini seperti yang
dinyatakan dalam Asri (2013) yaitu organ S. litura
Instar 4
yang terinfeksi oleh SpltMNPV adalah midgut,
trakea, pembuluh darah, tubulus malpighi, sel
lemak / lemak tubuh, dan sel otot. Satu-satunya
organ yang tidak terinfeksi oleh SpltMNPV
adalah kutikula. Lapisan kutikula (kitin) bebas
dari infeksi SpltMNPV. Kutikula adalah lapisan
terakhir yang tidak terinfeksi oleh virus. Virus
masih membutuhkan kutikula untuk
mengumpulkan virus dari reproduksi
(Rohrmann, 2008). Virus mulai bertindak hanya
setelah dicerna melalui makanan dan diaktifkan
Instar 5
dalam pH basa dari lumen midgut. Midgut
merupakan organ pertama yang menjadi target
virus (Prasad & Yogita, 2006). Di dalam lumen,
polyhedral SpltMNPV akan dipecah dengan pH
basa, maka beberapa nukleokapsid (MNPV) akan
pecah dan merusak selaput peritrofik dengan
enzim endopeptidase / metalloproteinase /
enhancins. Hal ini menyebabkan banyak Kematian ulat tertinggi terjadi pada ulat
kerusakan pada membran peritrofik, sehingga instar 4 dengan jumlah ulat yang mati yaitu 12
membran peritrofik hancur (Rohrmann, 2008). Sel ekor (40%), sedangkan pada instar 3 yaitu 10 ekor
target berikutnya adalah sel epitel midgut. (33,3%) dan pada instar 5 yaitu 8 ekor (26,7%)
Mekanisme infeksi SpltMNPV pada sel epitel dengan total semua ulat yang mati karena virus
midgut akan dimulai oleh beberapa adalah 30 ekor (18,2%) dari 165 ekor ulat.
nukleokapsida multipel SpltMNPV, untuk Pada tahap kedua adalah penghitungan
mengenali membran sel inang dengan konsentrasi virus. Karena SpLtMNPV dalam
menempelkan ke tempat tertentu (situs reseptor) bentuk polyhedra yang besar sehingga dapat
dan melepaskan senyawa tertentu. yang bisa dilihat dengan mikroskop cahaya perbesaran 400
mengubah selaput sel, sehingga membran sel kali, maka konsentrasi virus yang akan digunakan
melekuk dan membentuk terowongan. Menurut untuk menginfeksi ulat S.litura dapat dihitung
Rohrmann (2008), beberapa nukleokapsid melekat dengan menggunakan Haemocytometer. Kerapatan
pada sel induk larva melalui interaksi antara vp91 dari virus yang dinfeksikan penting untuk
(protein virus 91) dan reseptor sel midgut. MNPV diperhatikan karena kemungkinan 1 sel hanya
memiliki situs reseptor yang sensitif sehingga bisa bisa dinfeksi oleh satu virus karena ada
mengikat protein dan mengubah konformasi mekanisme setelah virus masuk ke dalam sel
senyawa di membran sel epitel. Ulat S. litura yang maka sel ini akan menutup kembali membran sel
mati virus dengan ciri tubuhnya berwarna coklat yang rusak. Hal ini juga berkaitan dengan
susu, lunak, mengkilap dan bila disentuh tubuh kompetisi virus dalam mendapatkan komponen
ulat akan pecah serta mengeluarkan cairan sintesis virus
berwarna putih keruh yang berisi PIB’s virus.
Gambar Pengamatan Virus pada Instar 3
Gambar ulat yang mati terinfeksi virus Pengulangan Instar
Instar Gambar

Instar 3
1
 2
2

Gambar Pengamatan Virus pada Instar 4

Pengulangan Instar
Koloni virus yang diamati terlihat seperti
titik hitam bercahaya dan terdapat warna hijau.
Apabila lebih difokuskan lagi maka akan terlihat
bentuk polyhedral.
1
Tabel Hasil Perhitungan Jumlah Koloni Virus
SpltMNPV pada Masing-Masing Instar

Pengulangan Rata-
1 2 3
Instar Rata

2 Instar 3 11 15 11 12.3

Instar 4 23 16 26 21.7

Instar 5 16 24 28 22.7

3
Kerapatan virus pada instar 3 = x106

= x106
Gambar Pengamatan Virus pada Instar 5

Pengulangan Instar = x 106

= 61.5x106

1
Kerapatan virus pada instar 4 = x106

= x106

= x 10 6 koloni virus didapat pada instar 3 pengulangan
= 108.5x106
Kerapatan virus pada instar 5 = x106
= x106
= x 106
= 113.5x106
Keterangan:
t = jumlah virus yang diperoleh
d = pengenceran (10-2=100)
n = jumlah kotak yang diamati pada
Haemocytometer. (5x16) (5 kotak kecil 16 kotak
besar)
Berdasarkan hasil perhitungan jumlah
koloni virus didapat pada instar 3 pengulangan
pertama 11 koloni, pengulangan kedua 15 koloni
dan pengulangan ketiga 11 koloni. Pada instar 4
pengulangan pertama 23 koloni, pengulangan
kedua 16 koloni dan pengulangan ketiga 26
koloni. Pada instar 5 pengulangan pertama 16
koloni, pengulangan kedua 24 dan pengulangan
ketiga 28 koloni. Dari hasil perhitungan ini
diketahui bahwa semakin tinggi instar ulat maka
semakin banyak pula virus di tubuhnya. Hal ini
dikarenakan semakin lama hidup inangnya maka
semakin banyak juga virus tersebut berkembang
biak dikarenakan waktu yang digunakan untuk
bereplikasi lebih panjang.
KESIMPULAN
Dari hasil penelitian ini dapat disimpulkan
bahwa jumlah ulat yang mati akibat terinfeksi
Spodoptera Litura Multiple Nucleopolyhedrosis
Virus (SpltMNPV) yaitu pada instar 3 sebanyak 10
ekor (33,3%), pada instar 4 sebanyak 12 ekor (40%)
dan pada instar 5 sebanyak 8 ekor (26,7%) dengan
total keseluruhan 30 ekor ulat (18,2%) yang mati
dari 165 ekor ulat. Hasil perhitungan jumlah
pertama 11 koloni, pengulangan kedua 15 koloni
dan pengulangan ketiga 11 koloni dengan nilai
kerapatannya 61.5x106. Pada instar 4 pengulangan
pertama 23 koloni, pengulangan kedua 16 koloni
dan pengulangan ketiga 26 koloni dengan nilai
kerapatannnya 108.5x106. Pada instar 5
pengulangan pertama 16 koloni, pengulangan
kedua 24 dan pengulangan ketiga 28 koloni
dengan nilai kerapatannnya 113.5x106. Dari hasil
perhitungan ini diketahui bahwa semakin tinggi
instar ulat maka semakin banyak pula virus di
tubuhnya. Hal ini dikarenakan semakin lama
hidup inangnya maka semakin banyak juga virus
tersebut berkembang biak dikarenakan waktu
yang digunakan untuk bereplikasi lebih panjang.
DAFTAR PUSTAKA
Arifin, M. 1988. Pengaruh konsentrasi dan volume
nuclear-polyhedrosis virus terhadap kematian
ulat grayak kedelai (Spodoptera litura F.).
Penelitian Pertanian 8(1): 12-14.
Arifin, M. 1989. Daya makan dan perkembangan
ulat grayak (Spodoptera litura Fabricius)
pada tanaman kedelai. hlm. 181-188.
Prosiding Seminar Hasil Penelitian
Tanaman Pangan, Bogor, 17-18 Desember
1986. Buku 2 (Palawija), Balai Penelitian
Tanaman Pangan Bogor.
Asri, dkk. 2013. The Spreading Of Spodoptera litura
Multiple Nucleopolyhedrosis Virus in
Midgut of Third Instar of Spodoptera Litura
Larvae. IOSR Journal of Agriculture and
Veterinary Science (IOSR-JAVS). Volume 3,
Issue 4 (May. - Jun. 2013), PP 40-43
Asri, M.T. 2004. Perbanyakan SlNPV secara in
Vivo Pada Larva S. Litura. Unesa: Surabaya
Prasad Arti and Yogita Wardhwani. 2006.
Pathogenic virus and insect tissues: an
effective way of pest control. Current
Science. 91 (6): 803-807 Rohrmann, G.
2008. Baculovirus Molecular Biology.
Chapter 3.The baculovirus replication
cycle: effects on cells and insects.
Department of Microbiology, Oregon
State University, Corvallis. pp.33-43