BAB III

METODOLOGI PERCOBAAN

3.1 Waktu dan Tempat

Praktikum berjudul pengaruh faktor lingkungan terhadap pertumbuhan mikroorganisme
ini, dilaksanakan pada hari Rabu, 27 Maret 2019 pukul 13.00 s/d dan Kamis, 29 Maret 2019
pukul 16.00 s/d WIB di Laboratorium Mikrobiologi, Gedung Basic science, Jurusan Biologi,
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Bengkulu.

3.2 Alat dan Bahan

3.2.1 Alat
Alat yang digunakan dalam praktikum pengaruh faktor lingkungan terhadap
mikroorganisme antara lain : cawan petri, tabung reaksi, pinset, inkubator, dan lampu bunsen.
3.2.2 Bahan
Bahan yang digunakan dalam praktikum pengaruh faktor lingkungan terhadap
pertumbuhan mikroorganisme yaitu media NB, NA, NaCl, NaOH, HCl, sukrosa, nystalin,
chloramphenicol, streptomycin, kanamycin, detol, klinsen, anthis, livebouy, wipol, soklin, super
pel, domesticus, Kapas, H2O, koin emas, perak, dan tembaga, alkohol 70%, cuttonbud, kertas
cakram, ohp marker, dan korek api.

3.3 Prosedur Kerja.

3.3.1 Pengaruh tekanan osmosis
Disiapkan 5 buah tabung reaksi yang telah berisi media NB yang masih cukup panas masing-
masing sebanyak 10 ml. pada tabung 1 diberi label untuk kontrol NB, tabung 2 ditambahkan 0.5
gram NaCl 5%, dan tabung 3 ditambahkan 1.5 gram NaCl 15%. Pada tabung 4 ditambahkan
sukrosa 0,5 gram, pada tabung 5 ditambahkan sukrosa 1.5 gram. Selanjutnya kelima tabung yang
berisi media tersebut disterilisasikan. 5 buah cawan petri steril disiapkan, media yang steril
tersebut masing-masing dituangkan pada cawan petri yang sudah disiapkan. Kemudian dibiarkan
sampai terjadi polimerisasi, agar mengeras. Jangan lupa memberi label pada masing-masing
cawan petri. Pada cawan petri digaris menjadi 4 bagian (kuadran). Pada masing-masing kuadaran
inokulasi dengan keempat mikroorganisme diatas. Khusus untuk inokulasi mold dengan cara
sebagai berikut, inokulasi koloni di bagian tengah dari kuadran (lakukan hal yang sama untuk
semua cawan petri). Setelah itu diinkubaasi pada suhu 35°C selama 24 jam. Dicatat hasilnya,
beri tanda 5+ untuk biakan yang paling banyak pertumbuhannya 3+ untuk biakan yang tumbuh
baik, 1+ untuk yang sedikit.
3.3.2 Pengaruh pH
Disiapkan 3 tabung yang berisi NB, kemudian dimasukkan NaCl (asam) pada tabung ke-
1 lalu, dimasukkan NaOH (basa) ke dalam tabung ke-2 dan kontrol (netral) pada tabung ke-3.
diinkubasi tabung yang berisi biakan-biakan tersebut pada suhu 35°C selama 24 jam, dikocok
tabung yang diinkubasi tersebut dan dibandingkan derajat kekeruhannya,, dicatat hasilnya diberi
tanda 5+ untuk biakan yang paling banyak pertumbuhannya, 3+ untuk biakan yang tumbuh baik,
1+ untuk yang sedikit.
3.3.3 Pengaruh Suhu
3 tabung yang berisi NB disiapkan, kemudian ditambahkan HCl atau NaOH untuk
menyesuaikan pH, yaitu tiga tabung NB untuk inkubasi 5°C, tiga tabung NB untuk inkubasi
37°C, tiga tabung NB untuk inkubasi 37°C, tiga tabung NB untuk inkubasi 44°C,
menginokulasikan ke 3 tabung untuk masing-masing suhu inokulasi dengan ketiga biakan yang
disediakan, selanjutnya diinkubasi 48 jam dalam lemari es untuk 5°C, dalam ruangan untuk
27°C, dalam inkubator untuk 37°C, dalam penangas air untuk 44°C, setelah masa inkubasi kocok
tabung tersebut dan bandingkan derajat kekeruhannya, mencatat hasilnya dan memberi tanda 5+
untuk biakan yang paling banyak pertumbuhannya, 3+ untuk biakan yang tumbuh baik, 1+ untuk
yang sedikit.
3.3.4 Daya Kerja Desinfektan
Bakteri Eschericia coli pada media NA dari cawan petri diinokulasi dengan cuttonbud ke
cawan petri yang telah dibagi menjadi 4 kuadran (I, II, III, dan IV) dan beri tabel nama bakteri.
Selanjutnya kertas cakram diambil menggunakan pinset, lalu dicelupkan kedalam masing sampel
uji, untuk kuadran I diisi dengan wipol, kuadran II diisi dengan superpel, kuadran III diisi dengan
soklin, dan kuadran IV diisi dengan demescos, serta pada bagian diisi dengan cakram control.
Kemudian kertas cakram diletakan pada permukaan media di bagian tengah masing-masing
kuadran (tekan sedikit kertas cakram untuk meletakkannya dengan media) menginkubasi dengan
suhu 37°C, selama 24 jam. Kemudian diamati dan diukur zona hambat (daerah jernih di
sekeliling kertas cakram/hallow) dan tentukan nilai indeks antimicrobial dengan rumus :
Indeks Antimikrobial : Diameter zona hambat-Diameter cakram
Diameter cakram (pelczar, 1986).
3.3.5 Daya Kerja Antibiotik Metode Kirby/Bawyer
Bakteri Eschericia coli pada media NA dari cawan petri diinokulasi dengan cuttonbud ke
cawan petri yang telah dibagi menjadi 4 kuadran (I, II, III, dan IV) dan beri tabel nama bakteri.
Selanjutnya kertas cakram diambil menggunakan pinset, lalu dicelupkan kedalam masing-masing
sampel uji, untuk kuadran I diisi dengan nystatin, Diusap permukaan media dengan cotton swab
tersebut secara merata dan dibiarkan mengering (5 menit). Kertas cakram berisi antibiotik yang
berbeda diletakan pada kuadran I, II , dan III. Kemudian diinkubasi dengan suhu 37°C selama 24
jam. Kemudian diamati dan diukur zona hambat (daerah jernih di sekeliling kertas
cakram/hallow) dan tentukan nilai indeks antimikrobial dengan rumus :
Indeks Antimikrobial : Diameter zona hambat-Diameter cakram
Diameter cakram (pelczar, 1986).

3.3.6 Daya Kerja Antiseptik

Bakteri Eschericia coli pada media NA dari cawan petri diinokulasi dengan cuttonbud ke
cawan petri yang telah dibagi menjadi 4 kuadran (I, II, III, dan IV) dan beri tabel nama bakteri.
Selanjutnya kertas cakram diambil menggunakan pinset, lalu dicelupkan kedalam masing sampel
uji, untuk kuadran I diisi dengan wipol, kuadran II diisi dengan superpel, kuadran III diisi dengan
soklin, dan kuadran IV diisi dengan demescos, serta pada bagian diisi dengan cakram control.
Kemudian kertas cakram diletakan pada permukaan media di bagian tengah masing-masing
kuadran (tekan sedikit kertas cakram untuk meletakkannya dengan media) menginkubasi dengan
suhu 37°C, selama 24 jam. Kemudian diamati dan diukur zona hambat (daerah jernih di
sekeliling kertas cakram/hallow) dan tentukan nilai indeks antimikrobial dengan rumus :
Indeks Antimikrobial : Diameter zona hambat-Diameter cakram
Diameter cakram (pelczar, 1986).
3.3.6 Daya Oligodinamik
Diberi label pada cawan petri dengan nama bakteri dan jenis logam. Kemudian media NA
dituangkan dan dibiarkan memadat. Setelah itu koin emas, tperak, dan tembaga yang telah
disterilkan (direndam dalam alkohol 70% dan dilewatkan di atas gas bunsen untuk
menghilangkan alkohol) diletakkan di permukaan media, koin ditekan dengan pinset untuk
diletakkan koin dengan media, kemudian diinkubasi dengan suhu 37°C selama 24 jam, setelah
itu diamati pola pertumbuhan koloni. Kemudian diamati dan diukur zona hambat (daerah jernih
di sekeliling koin) dan tentukan nilai indeks antimikrobial dengan rumus :
Indeks Antimikrobial : Diameter zona hambat-Diameter cakram
Diameter cakram (pelczar, 1986).