I.

DATA DAN ANALISA DATA

1. Isolasi Protein

ANALISA PROSEDUR

Pada praktikum Isolasi Protein ini dari Eschericia coli, pertama-tama kultur cair
E.coli sebanyak 1,5 mL yang tumbuh di sentrifuga dengan kecepatan 3000rpm, bertujuan
supernatant dan pellet pada kultur tersebut dapat terpisahkan. Setelah itu supernatant yang
ada dibuang dan resuspensi pellet dengan PBS dan juga 0,5% NOG sejumlah 15x jumlah
pellet yaitu sebanyak 75 mL masing-masing dari PBS dan NOG, dimana fungsi dari PBS
itu sendiri untuk memecahkan sel atau jaringan dimana terdapatnya sel target. NOG sendiri
berfungsi untuk melisiskan protein pada bakteri. Lalu dihomogenkan menggunakan vortex
selama 1 menit. Disentrifuga kembali dengan kecepatan 3500 rpm selama 10 menit pada
suhu 4oC. Supernatan yang berisi crude protein selanjutnya dianalisis kuantifikasi
proteinnya dengan mengukur absoebansi protein pada panjang gelombang 595 nm
menggunakan spektrofotometer dan selanjutnya menentukan konsentrasi protein yang
telah dianalisis tersebut.

ANALISA HASIL

Pada paraktikum Isolasi Protein, berikut hasil yang didapatkan setelah

dilakukannya pengukuran absorbansinya menggunakan spektrofotometri UV-Vis pada
panjang gelombang 595 nm, hasilnya, yaitu mendapatkan absobansi sebesar 0.016 nm
 2. Kuantifikasi Protein dengan Metode Bradford
ANALISA PROSEDUR
Pada praktikum kuantifikasi Protein dengan Metode Bradford ini, mula-mula
disiapkannya larutan standar BSA dengan konsentrasi 100µg/ml sebagai larutan baku induk
dan larutan baku kerja BSA, blanko, dan protein sampel. Selanjutnya dilakukannya inkubasi
larutan selama 5 menit, serta masing-masing larutan tersebut diukur absorbansinya
menggunakan Spektrofotometri UV-Vis dengan panjang gelombang sebesar 595 nm.

ANALISA HASIL

1. Pembuatan Kurva Baku

a. Pembuatan Larutan Standar

100 µg/mL = 100 ppm → dibuat dalam 500 µL

Diambil 1 L dari 50 mg/mL = 50.103 µg/mL

Perhitungan : m v = m v

100 µg/mL . 500 µL= 50.103µg/mL . V

1 µL = V

PBS yang dibutuhkan = 500 µL – 1 µL = 499 µL

b. Pembuatan Kurva Baku

Dibuat dalam 200 µL + Bradford 800 µL

Test Sample Sample vol. PBS Bradford reagent

µl µl µl

Blank 0 100 400

BSA Standard (10 µg/ml) 20 180 800

BSA Standard (20 µg/ml) 40 160 800

BSA Standard (30 µg/ml) 60 140 800

BSA Standard (40 µg/ml) 80 120 800

BSA Standard (50 µg/ml) 100 100 800

 Maka Bradford yang dibutuhkan dalam praktikum ini adalah

800 µL x Σ ppm yang diuji (10 – 50 µl)

800 µL x 5 = 4000 µL

Σ Keseluruhan Reagen Bradford = 5600 µL

2. Pembuatan Formula Reagen Bradford dalam 1 L

1. Coomasie Blue G-250 100 mg

2. Etanol 95% 50 mL

3. Asam Fosfat 85% 100 mL

4. Aquadest ad 1000 mL

3. Hasil Pengamatan

Panjang gelombang (λ) BSA teoritis kemungkinan 280 nm – 320 nm

λ= 595

ppm (x) Absorbansi (y)

10 0,065

20 0.086

30 0,143

40 0,177

50 0,245

a = 0,0079 r = 0,9867

b = 0,0045 r2= 0,09735

y = 0,0045 x + 0,0079
Konsentrasi Sebenarnya

1. 0,065 = 0,0045 x + 0,0079

x = 12,689

2. 0.086 = 0,0045 x + 0,0079

x = 17, 356

3. 0,143 = 0,0045 x + 0,0079

x = 30,022

4. 0,177 = 0,0045 x + 0,0079

x = 32,578

5. 0,245 = 0,0045 x + 0,0079

x = 54,689
Konsentrasi Protein

y = 0,0045 x + 0,0079
0,0160 – 1,0079 = 0,0045 x
0,0081 = 0,0045 x
0,0081
x= = 1,8 x 2 = 3,6
0,0045