Summary

Infeksi virus Zika (ZIKV) selama kehamilan muncul sebagai masalah kesehatan masyarakat global
karena menyebabkan penyakit bawaan yang parah. Di sini, kami mengembangkan enam antibodi
monoklonal tikus (mAbs) terhadap ZIKV meliputi empat (ZV-48, ZV-54, ZV-64, dan ZV-67) yang
spesifik terhadap Infeksi ZIKV dan menetralkan dari Afrika, Strain Asia, dan Amerika ke berbagai
derajat. kristalografi X-ray dan kompetisi pengikatan dianalasis dengan fragmen Fab dan scFvs
mendefinisikan tiga epitop spasial berbeda dalam DIII envelope protein sesuai dengan lateral
ridge (ZV-54 dan ZV-67), loop C-C (ZV-48 dan ZV-64), dan Wilayah ABDE sheet (ZV-2). Studi
Transfer pasif in vivo mengungkapkan aktivitas protektif DIII-lateral ridge mAbs sebagai penetral
dalam model mouse infeksi ZIKV. Hasil kami menunjukkan bahwa DIII adalah ditargetkan oleh
beberapa jenis antibodi spesifik dengan aktivitas penetralan yang berbeda, yang menyediakan
jalan untuk mengembangkan antibodi profilaksis untuk digunakan dalam kehamilan atau
merancang epitop khusus vaksin terhadap ZIKV.

Hasil
Isolasi mAb melawan ZIKV E Protein
Untuk menghasilkan panel antibodi terhadap ZIKV, kami secara beruntun infisikan tikus Irf3
selama 30 hari dengan ZIKV MR-766 (Uganda,
1947) dan ZIKV H / PF / 2013 (Polinesia Prancis, 2013).
Tikus Irf3 digunakan sebagai pengganti tikus tipe liar (WT), karena ZIKV
strain kurang efisien dalam menghindari imunitas yang dimediasi interferon tipe I
(Lazear et al., 2016; Rossi et al., 2016). 3 hari sebelumnya
Perpaduan myeloma-splenocyte, tikus dikuatkan secara intravena
dengan ZIKV H / PF / 2013 atau DIII rekombinan (asam amino 299 hingga
407 dari protein ZIKV E). Setelah menyaring 2.000 hibridoma,
kami mengisolasi enam mAb yang mengenali protein ZIKV E oleh ELISA

Kami menguji mAb untuk spesifisitasnya dengan mengevaluasi reaktivitas

dengan sel-sel yang terinfeksi ZIKV, DENV (keempat serotipe), atau JEV. Lima
antibodi mAbs (ZV-2, ZV-48, ZV-54, ZV-64, dan ZV-67) adalah
spesifik terhadap ZIKV dan tidak mengenali sel yang terinfeksi DENV atau JEV dengan uii
flow cytometry (Gambar 1A; data tidak ditampilkan); semua antibodi terikat
pada rekombinan ZIKV DIII dalam ELISA langsung (Gambar 1B). Sebaliknya,
ZV-13 reaktif silang dan terikat pada sel yang terinfeksi dengan semua serotipe
DENV (Gambar 1A). Konsisten dengan data ini, hanya ZV-
13 terikat pada protein WNVE, seperti yang dideteksi oleh ELISA (Gambar 1B). ZV-
13 diketahui melestarikan FL dalam DII, karena pengikatannya hilang dari
Protein ZIKV E dengan mutasi konservasi residu yang tinggi di dalamnya
dan segera proksimal ke FL