MEDIA KULTIVASI MIKROBA

Erma Rofianti1, Gusti Nur Aida Fasha1 dan Hasrul Satria Nur1,2

1. Program Studi Biologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yani Km 36, Banjarbaru,
70713, Indonesia
2. Laboratorium Mikrobiologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yani Km 35,8
Banjabaru, 70713, Indonesia

E-mail: ermarofianti09.er@gmail.com

Abstrak

Medium kultivasi mikroba adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan
mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Media tumbuh bagi mikroba memiliki keragaman dalam hal tipe nutrisi
tergantung mikroba yang mengimbanginya. Sumber nutrien bisa berasal dari alamiah maupun buatan seperti campuran
zat-zat kimiawi. Medium yang digunakan untuk menumbuhkan dan mengembangbiakkan mikroorganisme tersebut
harus sesuai susunanya dengan kebutuhan jenis-jenis mikroorganisme yang bersangkutan. Pembuatan medium kultivasi
mikroba dalam percobaan ini menggunakan 4 macam media yaitu, Potato Dextrose Agar (PDA), NA (Nutrient Agar),
de Mann Rogose and Sharpe (MRS), dan MEA (Malt Extract Agar).

Abstract

Microbial cultivation medium is a substance that contains food substances (nutrients) needed by microorganisms for
growth. Growing media for microbes has diversity in terms of types of nutrients depending on the microbes that balance
it. Sources of nutrition can come from natural or artificial as a mixture of chemicals. The media used to grow and breed
microorganisms must be in accordance with the needs of the type of microorganisms needed. The making of microbial
cultivation medium in this experiment used 4 types of media namely, Potato Dextrose Agar (PDA), NA (Nutrient
Agar), de Mann Rogose and Sharpe (MRS), and MEA (Malt Extract Agar).

Keywords: Cultivation, media, microorganism

1. Pendahuluan Dalam bidang mikrobiologi untuk menumbuhkan dan

mempelajari sifat-sifat mikroorganisme diperlukan
Media merupakan bahan yang dapat digunakan sebagai suatu media sebagai tempat pertumbuhan
tempat pertumbuhan mikroorganisme seperti bakteri. mikroorganisme. Media pertumbuhan harus memenuhi
Beberapa jenis bakteri dapat hidup baik pada media persyaratan nutrisi yang dibutuhkan oleh suatu
yang sangat sederhana, yang hanya mengandung garam mikroorganisme. Nutrisi yang dibutuhkan
anorganik ditambah sumber karbon organik seperti mikroorganisme untuk pertumbuhannya meliputi
gula, namun ada pula bakteri yang memerlukan suatu karbon, nitrogen, unsur non logam seperti sulfur dan
media yang sangat kompleks selain mengandung fosfor, unsur logam seperti Ca, Zn, Na, K, Cu, Mn,
sumber karbon dan nitrogen juga perlu penambahan Mg, dan Fe, vitamin, air, dan energi [2].
darah atau bahan-bahan kompleks lainnya, namun yang
terpenting media harus mengandung nutrisi yang Medium adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran
merupakan substansi dengan berat molekul rendah dan zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan
mudah larut dalam air. Nutrisi dalam media harus mikroorganisme untuk pertumbuhannya.
memenuhi kebutuhan dasar makhluk hidup [1]. Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi media berupa
molekul-molekul kecil yang dirakit untuk menyusun
komponen sel. Dengan media pertumbuhan dapat
dilakukan isolat mikroorganisme menjadi kultur murni
dan juga memanipulasi komposisi media
pertumbuhannya. Mikroorganisme dapat ditumbuhkan
dan dikembangkan pada suatu substrat yang disebut
medium. Medium yang digunakan untuk
menumbuhkan dan mengembangbiakkan
mikroorganisme tersebut harus sesuai susunanya
dengan kebutuhan jenis-jenis mikroorganisme yang
bersangkutan. Beberapa mikroorganisme dapat hidup
baik pada medium yang sangat sederhana yang hanya
mengandung garam anargonik di tambah sumber
karbon organik seperti gula. Sedangkan mikroorganime
lainnya memerlukan suatu medium yang sangat
kompleks yaitu berupa medium ditambahkan darah
atau bahan-bahan kompleks lainnya. Akan tetapi yang
terpenting medium harus mengandung nutrien yang
merupakan substansi dengan berat molekul rendah dan
mudah larut dalam air. Nutrien ini adalah degradasi
dari nutrien dengan molekul yang kompleks. Nutrien
dalam medium harus memenuhi kebutuhan dasar
makhluk hidup, yang meliputi air, karbon, energi,
mineral dan faktor tumbuh [3].
Medium adalah bahan yang mengandung campuran
nutrisi yang bermanfaatuntuk menumbuhkan mikroba.
Medium ada yang alami dan ada yang merupakan
buatan manusia, contoh medium buatan manusia
adalah medium cair, medium kental (padat), dan
medium setengah padat. Medium cair digunakan untuk
menumbuhkan bakteri dan juga fermentasi. Medium
padat digunakan untuk menumbuhkan mikrobia pada
permukaan [4].
Media tumbuh bagi mikroba memiliki keragaman
dalam hal tipe nutrisi tergantung mikroba yang
mengimbanginya. Sumber nutrien bisa berasal dari
alamiah maupun buatan seperti campuran zat-zat
kimiawi. Media yang digunakan juga disterilkan
sebelum dipakai. pH medium perlu disesuaikan dan
ditentukan dengan nilai yang optimum bagi
pertumbuhan miroba. Peran utama nutrien adalah
sebagai sumber energi, bahan pembangun sel,dan
sebagai aseptor elektron dalam reaksi bioenergetik
(reaksi yang menghasilkan energi). Oleh karenanya
bahan makanan yang diperlukan terdiri dari air, sumber
energi, sumber karbon, sumber aseptor elektron,
sumber mineral, /aktor pertumbuhan, dan nitrogen.
Selain itu, secara umum nutrien dalam media
pembenihan harus mengandung seluruh elemen yang
penting untuk sintesis biologik oranisme baru [5].
Potato Dextrose Agar (PDA) merupakan media yang
sangat umum yang digunakan untuk
mengembangbiakkan dan menumbuhkan jamur dan kh
amir. Komposisi Potato Dextrose Agar ini terdiri dari
bubuk kentang, dextrose dan juga agar. Bubuk kentang
dan juga dextrose merupakan sumber makanan untuk
jamur dan khamir. Potato Dextrose Agar juga bisa
digunakan untuk menghitung jumlah mikroorganisme
menggunakan metode Total Plate Count. Perindustrian
seperti industri makanan, industri produk susu dan juga
kosmetik menggunakan PDA untuk menghitung
jumlah mikroorganisme pada sample mereka. Karena
fungsinya yang dapat mengembangbiakkan jamur,
sekarang ini PDA juga banyak digunakan
oleh pembudidaya jamur seperti jamur tiram. Untuk
memaksimalkan pertumbuhan bibit jamur, biasanya
pembudidaya mengatur kondisi pH yang
rendah (sekitar 3,5) dan juga menambahkan asam atau
antibiotik untuk menghambat terjadinya pertumbuhan
bakteri [6].
Nutrient Agar (NA) adalah medium yang
digunakan sebagai media pertumbuhan bakteri. NA
dibuat dengan komposisi agar-agar yang sudah
dipadatkan sehingga NA juga bisa disebut sebagai
nutrisi padat yang digunakan untuk menumbuhkan
bakteri. Fungsi agar-agar hanya sebagai pengental
namun bukan zat makanan pada bakteri, agar dapat
mudah menjadi padat pada suhu tertentu.
Medium Nutrient Agar adalah salah satu medium
padat yang memiliki komposisi yaitu agar-agar yang
telah di panaskan dan mencair dengan suhu 90oC [7].
NA (Nutrient Agar) merupakan suatu medium yang
berbentuk padat, NA (Nutrient Agar) dibuat dari
campuran ekstrak daging dan peptone dengan
menggunakan agar sebagai pemadat, dalam hal ini
media yang di gunakan di produksi oleh Oxoid.ltd.,
Basingstoke, Hampshire, England, dengan merek
OXOID. kode CM0003. Komposisi NA Kode CM0003
adalah pepton 5.0, sodium chlorida 5.0, agar 15.0, lab-
lemco’ powder 1.0, yeast extract 2.0.(tertulis dalam
kemasan). Media NA (Nutrient Agar) berdasarkan
bahan yang digunakan termasuk dalam kelompok
media semi alami, media semi alami merupakan media
yang terdiri dari bahan alami yang ditambahkan dengan
senyawa kimia. Berdasarkan kegunaanya media NA
(Nutrient Agar) termasuk kedalam jenis media umum,
karena media ini merupakan media yang peling umum
digunakan untuk pertumbuhan sebagian besar bakteri.
Bedasarkan bentuknya media ini berbentuk padat,
karena mengandung agar sebagai bahan pemadatnya.
Media padat biasanya digunakan untuk mengamati
penampilan atau morfologi koloni bakteri [8].
Media MRS merupakan media spesifik untuk
pertumbuhan bakteri asam laktat. Bakteri asam laktat
biasanya ditumbuhkan pada media de Mann Rogose
and Sharpe (MRS). MRS merupakan media yang
diperkenalkan oleh De Mann, Rogosa, dan Shape
(1960) untuk memperkaya, menumbuhkan, dan
mengisolasi jenis Lactobacillus dari seluruh jenis
bahan. MRS Agar mengandung polysorbat, asetat,
magnesium, dan mangan yang diketahui untuk
beraksi/bertindak sebagai faktor pertumbuhan
bagi Lactobacillus, sebaik nutrien diperkaya MRS agar
tidak sangat selektif, sehingga ada kemungkinan
Pediococcus dan jenis Leuconostoc serta jenis bakteri
lain dapat tumbuh [9].
MEA (Malt Extract Agar) digunakan sebagai media
pertumbuhan khamir. Malt Extract Agar (MEA)
biasanya digunakan untuk mengisolasi, menumbuhkan,
dan enumerasi yeast dan mold. MEA mengandung
maltosa yang digunakan sebagai sumber energi.
Dekstrin, polisakarida turunan pati, dan gliserol
berperan sebagai sumber karbon. Pepton tersedia
sebagai sumber nitrogen, sedangkan agar sendiri
merupakan agen pemadat. Contoh mikroorganisme
yang tumbuh dengan baik pada media ini adalah
Aspergillus niger, Candida albicans, dan
Saccharomyces cerevisiae. MEA dapat menyokong
pertumbuhan mold dan yeast, tetapi tidak untuk
bakteri. Media ini sering digunakan untuk kultur jamur
terisolasi dari tanah dan kayu. MEA biasanya
ditumbuhi oleh Basidiomycota [4].
2. Metode Praktikum
Pada praktikum kali ini, alat-alat yang digunakan
adalah wadah plastik/gelas, neraca analitik, otoklaf,
gelas piala/labu erlenmeyer, pengaduk magnet (stirrer
magnetic), dan hot plate. Kemudian bahan-bahan yang
digunakan antara lain media terhidrasi, aquades steril,
larutan HCl, dan larutan NaOH. Pembuatan medium
kultivasi mikroba dalam percobaan ini menggunakan 4
macam media yaitu, Potato Dextrose Agar (PDA), NA
(Nutrient Agar), de Mann Rogose and Sharpe (MRS),
dan MEA (Malt Extract Agar).
Penyiapan media kultivasi mikrob. Media diperiksa
komposisi dan tanggal kedaluwarsa bahan. Media
tersebut dilarutkan dengan aquadest sehingga
menghasilkan larutan 300 ml, sebelumnya media agar
ditimbang sesuai dengan keperluan praktikum
menggunakan rumus sebagai berikut:
𝑉𝑚
Fm= × 𝑇𝑠𝑚
𝑉𝑡
Keterangan:
Fm = Formula Medium
Vm = Volume medium
Vt = Volume total
Tsm = Nutrient Agar (NA) = 20 gram/ml
Potato Dextrose Agar (PDA) = 39 gram/ml
MRS = 52,2 gram/ml
MEA = 48 gram/ml
Media Potato Dextrose Agar (PDA)
Langkah penyiapan media Potato Dextrose Agar
(PDA) adalah pertama, menimbang media dengan
neraca analitik sebanyak 11,7 gr/l kemudian media
dimasukkan ke dalam cawan petri. Lalu, siapkan
akuades sebanyak 300 ml yang dimasukkan dalam labu
ukur, sebelumnya masukkan media yang sudah
disiapkan tadi ke dalam erlenmeyer. Setelah akuades
dan media dipastikan masuk, dipanaskan campuran tadi
di hot plate dengan mengatur suhunya sebesar 100oC.
Masukkan stirrer magnetic ke dalam erlenmeyer
sebelum dipanaskan, dan diatur stir hot plate pada
angka tiga. Di hot plate, larutan tersebut dipanaskan
sampai larutan homogen atau sampai warna larutan
menjadi tidak keruh (sekitar 15 menit). Setelah siap,
agar yang sudah dalam bentuk cair dipindahkan dari
erlenmeyer ke tabung reaksi dengan pipet volumentrik
sebanyak 9 ml. Untuk menghindari buih, larutan
dimasukkan melalui samping tabung dan mulut tabung
dengan mulut pipet harus berdekatan.
𝑉𝑚
𝐹𝑚 = × 𝑇𝑠𝑚
𝑉𝑡
3𝑜𝑜
= × 39
1000
= 11,7 gr/l
Media Nutrient Agar (NA)
Langkah penyiapan media Nutrient Agar (NA) adalah
pertama, menimbang media dengan neraca analitik
sebanyak 6 gr/l kemudian media dimasukkan ke dalam
cawan petri. Lalu, siapkan akuades sebanyak 300 ml
yang dimasukkan dalam labu ukur, sebelumnya
masukkan media yang sudah disiapkan tadi ke dalam
erlenmeyer. Setelah akuades dan media dipastikan
masuk, dipanaskan campuran tadi di waterbath dengan
mengatur suhunya sebesar 100oC. Masukkan stirrer
magnetic ke dalam erlenmeyer sebelum dipanaskan,
dan diatur stir hot plate pada angka tiga. Di hot plate,
larutan tersebut dipanaskan sampai larutan homogen
atau sampai warna larutan menjadi tidak keruh (sekitar
15 menit). Setelah siap, agar yang sudah dalam bentuk
cair dipindahkan dari erlenmeyer ke tabung reaksi
dengan pipet volumentrik sebanyak 9 ml. Untuk
menghindari buih, larutan dimasukkan melalui
samping tabung dan mulut tabung dengan mulut pipet
harus berdekatan.
𝑉𝑚
𝐹𝑚 = × 𝑇𝑠𝑚
𝑉𝑡
3𝑜𝑜
= × 20
1000
= 6 gr/l
Media de Mann Rogose and Sharpe (MRS)
Langkah penyiapan media de Mann Rogose and
Sharpe (MRS) adalah pertama, menimbang media
dengan neraca analitik sebanyak 15,66 gr/l kemudian
media dimasukkan ke dalam cawan petri. Lalu, siapkan
akuades sebanyak 300 ml yang dimasukkan dalam labu
ukur, sebelumnya masukkan media yang sudah
disiapkan tadi ke dalam erlenmeyer. Karena media
MRS ini termasuk media cair, maka ada perbedaan
dengan media-media sebelumnya. Pembuatan media
MRS tidak melalui proses pemanasan. Tetapi, dalam
percobaan ini media MRS tetap dipanaskan di hot plate
dengan sebelumnya diatur stir hot plate pada angka
tiga. Di hot plate, larutan tersebut dipanaskan sampai
larutan homogen atau sampai warna larutan menjadi
tidak keruh (sekitar 15 menit). Setelah siap, agar yang
sudah dalam bentuk cair dipindahkan dari erlenmeyer
ke tabung reaksi dengan pipet volumentrik sebanyak 9
ml. Untuk menghindari buih, larutan dimasukkan
melalui samping tabung dan mulut tabung dengan
mulut pipet harus berdekatan.
𝐹𝑚 =
𝑉𝑚
× 𝑇𝑠𝑚
𝑉𝑡
3𝑜𝑜
= × 52,2
1000
= 15,66 gr/l
Media Malt Extract Agar (MEA)
Langkah penyiapan media Malt Extract Agar (MEA)
adalah pertama, menimbang media dengan neraca
analitik sebanyak 14,4 gr/l kemudian media
dimasukkan ke dalam cawan petri. Lalu, siapkan
akuades sebanyak 300 ml yang dimasukkan dalam labu
ukur, sebelumnya masukkan media yang sudah
disiapkan tadi ke dalam erlenmeyer. Setelah akuades
dan media dipastikan masuk, dipanaskan campuran tadi
di hot plate dengan mengatur suhunya sebesar 100oC.
Masukkan stirrer magnetic ke dalam erlenmeyer
sebelum dipanaskan, dan diatur stir hot plate pada
angka tiga. Di hot plate, larutan tersebut dipanaskan
sampai larutan homogen atau sampai warna larutan
menjadi tidak keruh (sekitar 15 menit). Setelah siap,
agar yang sudah dalam bentuk cair dipindahkan dari
erlenmeyer ke tabung reaksi dengan pipet volumentrik
sebanyak 9 ml. Untuk menghindari buih, larutan
dimasukkan melalui samping tabung dan mulut tabung
dengan mulut pipet harus berdekatan.
𝑉𝑚
𝐹𝑚 = × 𝑇𝑠𝑚
𝑉𝑡
3𝑜𝑜
= × 48
1000
= 15,66 gr/l
Setelah semuanya dilakukan, langkah terakhir adalah
melakukan sterilisasi metode uap panas basah dengan
autoklaf. Sebelum di sterilisasi, terlebih dahulu media
yang sudah berupa agar cair tadi di tera, di justifikasi
pH nya. pH dapat diketahui misalnya dengan pH stik.
Tetapi pada percobaan kali ini, tidak dilakukan
pengukuran pH. Selanjutnya, bagian atas tabung reaksi
harus disumbat dengan kapas agar mencegah
masuknya uap air atau pengkontaminan lainnya.
Kemudian beberapa tabung disatukan dan ditutupi
dengan kertas dan disatukan dengan diikat
menggunakan karet. Setelah itu, sterilisasi bisa
dilakukan dengan autoklaf yang telah disiapkan. Suhu
yang digunakan pada autoklaf untuk sterilisasi adalah
121oC dengan tekanan 1 atm dan selama 15 menit.
3. Hasil dan Pembahasan
Tabel 1. Perbedaan takaran media yang digunakan
untuk pembuatan media yang berbeda
yang didapat dari perhitungan
sebelumnya.
No. Nama Media Banyaknya media
1. Nutrient Agar 6 gram
2. Potato Dextrose 11,7 gram
Agar
3. de Man Rogosa 15, 66 gram
and Sharpe
4. Malt Extract 14,4 gram
Agar
Setelah dilakukan serangkaian proses pembuatan media
kultivasi mikroba yang diakhiri dengan sterilisasi, di
dapat hasil berupa media yang steril yaitu media
Potato Dextrose Agar (PDA), NA (Nutrient Agar), de
Mann Rogose and Sharpe (MRS), dan MEA (Malt
Extract Agar). Perbedaan beberapa jenis media yang
ada agar media yang digunakan dapat disesuaikan
dengan kebutuhan.
Media Potato Dextrose Agar (PDA)
Penggunaan media ini sebagai media pertumbuhan
kapang, jamur, yeast. Berdasarkan konsistensinya,
media ini termasuk media padat. Media ini memiliki
komposisi diantaranya, agar, dextrose, ekstrak potato,
dan glukosa. Media yang digunakan sebanyak 11,7 gr/l
dalam percobaan ini dengan 300 ml akuades. Karena
dalam komposisi media ini terdapat bahan yang tidak
diketahui penyusunnya (misalnya ekstrak potato),
maka media ini termasuk media kompleks.
Media Nutrient Agar (NA)
Penggunaan media ini sebagai media pertumbuhan Gambar 2. Pemanasan media PDA dan MRS serta
bakteri. Berdasarkan konsistensinya, media ini pencampuran MRS pada hot plate.
termasuk media padat. Media ini memiliki komposisi
diantaranya, agar, ekstrak daging, dan pepton. Media
yang digunakan sebanyak 6 gr/l dalam percobaan ini
dengan 300 ml akuades. Karena dalam komposisi
media ini terdapat bahan yang tidak diketahui
penyusunnya (misalnya ekstrak daging), maka media
ini termasuk media kompleks.
Gambar 3. Pemanasan media NA dengan waterbath
Media de Mann Rogose and Sharpe (MRS) pada suhu 100oC.
Penggunaan media ini sebagai media pertumbuhan
khusus untuk bakteri asam laktat. Berdasarkan
konsistensinya, media ini termasuk media cair. Media
ini memiliki komposisi diantaranya, pepton, agar,
ekstrak daging, ekstrak yeast, dan deglukosa. Media
yang digunakan sebanyak 15,66 gr/l dalam percobaan
ini dengan 300 ml akuades. Media ini termasuk media
sintetik.

Media Malt Extract Agar (MEA)

Penggunaan media ini sebagai media pertumbuhan
yeast dan khamir. Berdasarkan konsistensinya, media
ini termasuk media padat. Media ini memiliki Gambar 4. Media MRS dimasukkan ke tabung
komposisi diantaranya, dekstrin, polisakarida turunan reaksi menggunakan pipet volumentrik.
pati, gliserol, dan pepton. Media yang digunakan
sebanyak 14,4 gr/l dalam percobaan ini dengan 300 ml
akuades.

Gambar 5. Media NA,PDA,MEA dan MRS

Gambar 1. Pembuatan media dengan disterilisasi dalam autoklaf.
mencampurkan bahan dengan akuades.

(a) (b)
Gambar 6. (a). Media Potato Dextrose Agar yang
sudah disterilisasi, (b). Media Nutriet [6] Sugianto. 2012. Pembuatan Medium. UGM,
Agar yang sudah di sterilisasi. Yogyakarta.

[7] Sandra. 2013. Mikrobiologi Umum. Erlangga,

Jakarta.

[8] Rossita, A. S., K. Munandar., and S. Komarayanti.

2015. Komparasi Media Na Pabrikan dengan Na
Modifikasi untuk Media Pertumbuhan Bakteri.
Seminar Nasional Biologi, IPA dan
Pembelajarannya I. 9(2): 192-201.

(a) (b) [9] Pelczar., and Chan. 1986. Dasar-Dasar

Mikrobiologi Jilid 1. Penerbit Universitas
Gambar 7. (a). Media Malt Extract Agar yang sudah Indonesia, Jakarta.
disterilisasi, (b). Media de Man Rogosa
and Sharpe yang sudah di sterilisasi.

4. Kesimpulan
Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu
bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan
(nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk
pertumbuhannya. Pembuatan medium kultivasi
mikroba dalam percobaan ini menggunakan 4 macam
media yaitu, Potato Dextrose Agar (PDA), NA
(Nutrient Agar), de Mann Rogose and Sharpe (MRS),
dan MEA (Malt Extract Agar). Media PDA, NA, dan
MEA termasuk media padat berdasarkan
konsistensinya, sedangkan media MRS merupakan
media cair. Potato Dextrose Agar (PDA) digunakan
untuk media pertumbuhan fungi, NA (Nutrient Agar)
digunakan untuk media pertumbuhan bakteri, de Mann
Rogose and Sharpe (MRS) digunakan untuk media
pertumbuhan bakteri asam laktat, dan MEA (Malt
Extract Agar) merupakan media untuk pertumbuhan
khamir dan yeast.

Daftar Acuan

[1] Supriatin, Y., and M. Rahayyu. 2016. Modification

Of Carry-Blair Transport Media For Storage
Salmonella typhi. Jurnal Teknologi Laboratorium.
5(2): 72-73.

[2] Cappuccino., G. James., and S. Natalie. 2013.

Manual Laboratorium biologi; alih bahasa, Nur
Miftahurrahmah. EGC, Jakarta.

[3] Label, J. 2008. Mikrobiologi:Pembuatan Media.

Erlangga, Jakarta.

[4] Dwidjoseputro. 1994. Teknik Pembuatan Medium.

Erlangga, Jakarta.

[5] Hadioetomo. 1990. Mikrobiologi Umum. Gadjah

Mada University Press, Yogyakarta.