Kab.

Toba Samosir
Telp./Fax. +62 632 331234/ +62 632 331116
PENGARUH PH TERHADAP AKTIVITAS ENZIM
Samosir Grace1, Ester Sinaga 2, Nathasia Simangunsong 3 , dan Cristopel
Simanullang 4
1)
Jurusan Teknik Bioproses, Fakultas Bioteknologi Institut Teknologi Del
Institut Teknologi Del, Jl. Sisingamangaraja Kec. Laguboti Kab. Toba Samosir
Telp./Fax. +62 632 331234/ +62 632 331116
2)
Jurusan Teknik Bioproses, Fakultas Bioteknologi Institut Teknologi Del
Institut Teknologi Del, Jl. Sisingamangaraja Kec. Laguboti Kab. Toba Samosir
Telp./Fax. +62 632 331234/ +62 632 331116
3)
Jurusan Teknik Bioproses, Fakultas Bioteknologi Institut Teknologi Del
Institut Teknologi Del, Jl. Sisingamangaraja Kec. Laguboti Kab. Toba Samosir
Telp./Fax. +62 632 331234/ +62 632 331116
4)
Jurusan Teknik Bioproses, Fakultas Bioteknologi Institut Teknologi Del
Institut Teknologi Del, Jl. Sisingamangaraja Kec. Laguboti Kab. Toba Samosir
Telp./Fax. +62 632 331234/ +62 632 331116

Abstract

Enzymes are macromolecules that act as catalysts, i-chemical agents which accelerate the reaction without
being consumed by the reaction (there is no regulation by enzymes) of the chemical-i traffic through the meta-
path pathway. Totalism will be total because many chemical reactions will. prolonged (Many environmental
factors that can affect enzymes, for example pH (Many enzymes are sensitive to changes in pH) and each
enzyme has the optimum pH for its activity (pervasive pH can result in the cessation of enzymatic activity of the
denaturation process) in the structure of three-dimensional enzymes PH on the enzyme should not be too acidic
or too alkaline because it will decrease the rate of reaction with the denaturation. At a certain pH range of the
enzyme has a high stability. Enzymes work at a certain pH range, and generally depends on the pH of the
environment. Factors affecting the activity of the enzyme is the temperature, pH, enzyme concentration, and
substrateconcentration.

Keywords: pH

PENDAHULUAN Enzim LiP yang dihasilkan dapat

Enzim adalah golongan protein yang
merupakan unit fungsional dalam metabolisme sel.
Enzim merupakan biokatalisator bagi reaksi-reaksi
yang terjadi di dalam tubuh makhluk hidup. Sebagai
biokatalisator, enzim memiliki spesifitas yang
sangat tinggi baik terhadap reaktan (substrat)
maupun jenis reaksi yang dikatalisisnya. Pada
umumnya, suatu enzim hanya mengkatalisis satu
jenis reaksi dan bekerja pada suatu substrat tertentu.
Aktivitas enzim sangat dipengaruhi oleh
beberapa faktor antara lain: suhu, pH, konsentrasi
enzim, dan konsentrasi substrat. Keberadaan
inhibitor juga dapat mempengaruhi aktifitas enzim.
Enzim lignin peroksidase (LiP) merupakan
enzim peroksidase ekstraseluler yang menggunakan
H2O2 dalam mendegradasi lignin. LiP memiliki
kemampuan mengkatalisis beberapa reaksi oksidasi
antara lain pemecahan ikatan C-C rantai samping
propil non fenolik komponen aromatik lignin,
oksidasi benzil alkohol, oksidasi fenol, hidroksil
benzylic methylene groups dan pemecahan cincin
aromatik komponen non fenolik senyawa lignin.[3]
diaplikasikan di bidang industri seperti industri pulp
dan kertas, mendegradasi polutan, pewarna yang
dihasilkan industry tekstil dan biokonversi lignin
yang memanfaatkan bagasse tanaman tebu untuk
bioethanol. Substrat yang digunakan dalam
penelitian ini adalah bonggol jagung, dengan
menggunakan Gliomastx sp. sebagai
mikroorganismenya untuk menghasilkan
mikroorganisme tersebut.
Bromelin adalah enzim yang diekstrak daroi
buah nanas. Bromelin diisolasi dari nanas dengan
menghancurkan daging buah untuk mendapatkan
ekstrak kasar enzim bromelin.
Aktivitas optimum bromelim berada di suhu
50oC, di atas suhu tersebut keaktifan akan menurun.
Ph optimum ada di rentang 6,5 - 7, dimana enzim
akan memiliki konformasi yang baik dan aktivitas
maksimal [4]
METODOLOGI
A. Tahap persiapan dan penghasilan enzim
 Dalam [1] Bonggol jagung dikeringkan
dibawah sinar matahari, lalu dipotong kecil ±3 cm,
lalu digiling dan diovenkan 75℃ selama 2 hari dan
substrat siap digunakan. Kemudian buat starter
dengan Kultur Gliomastix sp. usia 5 hari pada agar
miring disuspensikan dengan menambahkan 10 ml
aquades . Suspensi jamur sebanyak 10 % (w/v)
diinokulasikan kedalam 12,5 ml medium
pertumbuhan dan 2,5 gram substrat bonggol jagung,
lalu diinkubasi pada suhu ruang selama 5 hari pada
3 variasi suhu berbeda.
Dalam [2] bonggol nanas dipotong kecil dan
di cuci, kemudian dihomogenasi dengan 66,67 ml
buffer natrium asetat dan kemudian disaring. Lalu
diendapkan dengan amonium sulfat, 7 ml amonium
sulfat dan 3 ml hasil ekstrak yang telah disaring
diaduk selama 45 menit, dan diinkubasi selama
semalam pada suhu 4℃. Dan kemudian di
sentrifugasi untuk mendapat pelet yang merupakan
ekstrak kasar enzim bromelin.
B. Tahap optimasi produk enzim
Substrat bonggol jagung sebanyak 5 gram
dimasukkan ke dalam Erlenmeyer 250 ml.
Kemudian ditambahkan 25 ml medium
pertumbuhan pada masing-masing Erlenmeyer.
pH diatur pada pH 4, 5 dan 6, dengan
menambahkan NaOH 1 M dan HCl 1 M. Medium
disterilkan dengan autoklaf pada temperatur 121℃
tekanan 1,5 atm selama 15 menit. Setelah medium
mencapai suhu ruang, starter sebanyak 10% (w/v)
diinokulasikan ke dalam medium dan diinkubasi
selama 5 hari. Sebanyak 0,2 ml filtrat enzim, 0,05
ml H2O2 5 mM; 0,1 ml veratril alcohol 8 mM; 0,2
ml buffer asetat 0,05 M pH 3 dan 0,45 ml akuades
dimasukkan ke dalam kuvet kemudian dikocok.
Larutan tersebut dibaca absorbansinya pada
panjang gelombang 310 nm pada interval waktu 0
dan 30 menit. Satu unit aktivitas enzim LiP
didefinisikan sebagai jumlah enzim yang
menyebabkan pengubahan 1 mikromol (1µmol
=10-6) mol veratril alcohol per menit [5].
[1] Tahap optimasi produksi enzim dilakukan
selama 5 hari dan media dikondisikan dengan
berbagai pH dan suhu untuk mengetahui pengaruh
pH dan suhu optimum yang diperlukan Gliomastix
sp. untuk menghasilkan aktifitas enzim lignin
peroksidase secara maksimal. Kemudian
dilakukan ekstraksi enzim kasar dari media limbah
bonggol jagung. Ekstraksi dilakukan dengan
buffer fosfat pH 7 untuk mempertahankan pH
protein yang memerlukan kisaran pH tertentu
supaya dapat mempertahankan struktur protein.
Untuk jurnal [2] sebanyak 0,125 ml gelatin
ditambahkan dengan 0,5 ml buffer asam fosfat 1M
(pH 6,5) dan 0,125 gram ekstrak enzim bromelin
yang telah dikeringkan dalam oven selama 15
menit pada suhu 500 C.Selanjutnya larutan
diinkubasi pada suhu 65oC selama 10 menit pada
nilai pH yakni : 4,0; 5,0; 6,0; 7,0; 8,0. Pengamatan
dilakukan 3 kali pengulangan. Reaksi dihentikan
dengan pemanasan pada air mendidih selama 10
menit. Setelah itu, absorbansi diukur pada λ 595
nm dengan menggunakan spektrofotometer.
C. Analisis data
Percobaan ini menggunakan Rancangan
Acak Lengkap (RAL) pola faktorial 3 x 3 dengan
setiap perlakuan terdiri dari 3 ulangan. Analisis
statistik untuk penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui pengaruh berbagai pH dan suhu
terhadap aktivitas enzim Gliomastix sp.pada
limbah bonggol jagung. Pengolahan data
menggunakan uji Analysis of variance (ANOVA).
[2]Penentuan kadar protein ditentukan
dengan membandingkan absorbansi ekstrak enzim
bromelin dengan persamaan linear kurva standar
gelatin. Sedangkan aktivitas enzim bromelin dapat
ditentukan dengan rumus di bawah ini:
Aktivitas Enzim = Substrat Terhidrolisis x (1
BM/Enzim) x (Volume Larutan/Berat Enzim)
HASIL
[1] Hasil uji aktivasi enzim Lip disajikan
pada tabel berikut,
Pada penelitian ini, aktifitas Lignin peroksidase
(LiP) maksimum terdapat pada limbah bonggol
jagung pH 6 dan suhu 350 C. Berdasarkan uji
ANOVA dengan taraf kepercayaan 95% (α < 0,05)
tidak ada pengaruh yang signifikan terhadap
perlakuan pH dan suhu , hal ini dapat dilihat dari
nilai signifikan pH dan suhu pada uji ANOVA
terhadap aktifitas LiP secara berturut-turut yaitu
0,307 dan 0,785 yang berarti lebih dari nilai α =
0,05 dan tidak berpengaruh secara signifikan
terhadap aktifitas enzim LiP. Karena tidak ada
faktor yang berpengaruh tehadap aktifitas enzim
LiP
[2] Hasil pengukuran aktivitas enzim
bromelin diukur berdasarkan kemampuannya
menghidrolisa substrat gelatin pada suhu inkubasi
65℃ dengan pH bervariasi dilakukan secara
spektrofotometri pada panjang gelombang 595
nm. Hasil pengukuran yang diperoleh dapat dilihat
pada tabel berikut

Pada penelitian ini didapatkan aktivitas
tertinggi berada pada pH 7,0 yaitu 1,081 unit/g
dengan substrat terhidrolisis sebesar 39,179 μg/ml.
Pada pH optimum terjadi perubahan ionisasi dalam
gugus ionik enzim pada sisi aktifnya atau pada sisi
lainnya yang secara tidak langsung mempengaruhi
sisi aktif. Gugus pemberi dan penerima proton
berada dalam tingkat ionisasi yang diinginkan,
sehingga konformasi sisi aktif menjadi efektif dalam
mengikat dan mengubah substrat menjadi produk
[6]. Pada pH 4,0; 5,0; 6,0; dan 8,0 aktivitas enzim
lebih rendah dibandingkan dengan pH 7,0 hal ini
dikarenakan pada pH yang lebih rendah atau lebih
tinggi aktivitas enzim akan menurun, rantai samping
beberapa asam amino berperan sebagai asam atau
basa lemah yang melakukan fungsi kritis pada sisi
aktif enzim sehingga enzim menjadi inaktif. Hal ini
menyebabkan perubahan pH mengakibatkan
perubahan intramolekuler dari enzim [7]. Pada
umumnya aktivitas maksimum enzim berada pada
kisaran pH optimum 4,5-8,0. pH optimum enzim
bromelin dari ekstrak kasar bonggol nanas berbeda
dengan pH optimum enzim bromelin yang
didapatkan dari ekstrak kasar batang nanas. Menurut
[8] pH optimum enzim bromelin dari ekstrak kasar
dari batang nanas berada pada pH 6 sedangkan pH
optimum enzim bromelin yang diisolasi dari ekstrak
kasar bonggol nanas berada pada pH 7. Hal tersebut
di karenakan sumber enzim diisolasi dari organ yang
berbeda meskipun enzimnya sama.
KESIMPULAN
Gliomastix sp. T3.7 berpotensi menghasilkan
enzim Ligninolitik salah satunya adalah Enzim
Lignin peroksidase. Aktifitas maksimum yang
dihasilkan sebesar 8,088 U/ml. Berdasarkan uji
ANOVA dengan taraf kepercayaan 95% (α <0,05) ,
perlakuan pH dan suhu tidak berpengaruh secara
signifikan terhadap aktifitas enzim LiP. Saran untuk
penelitian selanjutnya yaitu diperlukan range pH dan
suhu yang lebih luas untuk mengetahui pengaruh
dari kedua faktor tersebut. Selain itu, perlu diadakan
penelitian lebih lanjut mengenai waktu inkubasi
optimum, sumber karbon dan nitrogen dengan
menggunakan kondisi optimum diatas untuk
mengoptimalkan aktifitas yang dihasilkan, sehingga
dapat diaplikasikan langsung dalam dunia industri.
[2] pH lingkungan sangat mempengaruhi
aktivitas enzim bromelin dari bonggol nanas pH
rendah atau pH tinggi dapat menyebabkan terjadinya
proses denaturasi dan ini akan mengakibatkan
menurunnya aktivitas enzim. Pada penelitian ini
jumlah aktivitas enzim dari pH 4,0 sampai pH 7,0
mengalami kenaikan sedangkan di pH 8,0 sudah
mengalami penurunan. pH optimum enzim bromelin
yang diekstrak dari bonggol nenas berada pada pH
7,0 dengan substrat terhidrolisis sebesar 39,179
μg/ml dan aktivitas enzim sebesar 1,081 unit/g.
Isolasi enzim bromelin dapat dilakukan pada organ
lain dari buah nenas dan penelitian selanjutnya dapat
digunakan kisaran variasi pH yang sempit.
DAFTAR PUSTAKA
[1] Ima Mufidatul Ilmi dan Nengah Dwianita
kuswytasari, “Aktifitas enzim lignin peroksidase
oleh gliomastik sp. T3.7 pada limbah bonggol
jagung dengan berbagai pH dan suhu”, Jurnal sains
dan seni pomits. Vol 2, No.1, (2013) 2337-3520.
[2] Mashuri Masri, “Isolasi dan pengukura aktivitas
enzim bromelin dari ekstrak kasar bonggol nanas
(Ananas comosus) pada variasi suhu dan pH”,
Biogenesis Jurnal Ilmiah Biologi UIN Alauddin
Makassar, Vol.2, No.2, (2014), 119-125.
[3] M. Tien, and T.K. Kirk, ” Lignin degrading enzyme
from Phanerochate chrysosporium : Purification,
characterization and catalycal properties of a unique
H2O2-requirung oxygenease,” Practice Natural
academy Science USA, Vol. 81 (1984) 2280-2284.
[4] Fajrin E, “Penggunaan Enzim Bromelin Pada
Pembuatan Minyak Kelapa (Cocos nucifera) Secara
Enzimatis”, Skripsi, Universitas Hasanuddin,
Makassar (2012).
[5] R.I. Syafrizal, “Aktifitas enzim ligninolitik fungi
pelapuk putih Omphalina sp. dan Pleurotus
ostreatus pada limbah lignoselulosa,” Skripsi,
Program Studi Biokimia, FMIPA, Institut Pertanian
Bogor : Bogor (2007).
[6] Nielsen dkk, “Electrostatics in The Active Site of An
α-Amylase” Eur. J. Biochem. vol 246: 816-824
(1999).
[7] Lehninger AL, “Dasar – Dasar Biokomia” Jilid 1.
Penerjemah Maggy T, Erlangga, Jakarta (2009).
[8] Nurhidayah, “Isolasi dan Pengukuran Aktivitas
Enzim Bromelin dari Ekstrak Kasar Batang Nanas
(Ananas comosus) Pada Variasi Suhu dan pH”,
Skripsi, UIN Alauddin Makassar (2013).