1

PERCEPATAN PENETASAN EMBRIO DAN PERLUASAN AREA YOLK SAC

LARVA Danio rerio AKIBAT PAPARAN CADMIUM CHLORIDE (CdCl2)
Syerly Ayuningtyas, Dian Novita W., Noer Aini
Fakultas Kedokteran Universitas Islam Malang

ABSTRAK
Pendahuluan: Dewasa ini, paparan cadmium pada lingkungan semakin meningkat dan menimbulkan efek toksik
dalam tubuh manusia dan makhluk hidup sekitarnya. Embryotoxic dan teratogenic effects adalah dampak toksik
yang disebabkan oleh paparan cadmium. Penelitian bertujuan untuk mengetahui efek paparan CdCl2 pada induk
Danio rerio dewasa terhadap perubahan usia penetasan embrio dan luas area yolk sac pada larva Danio rerio
Hipotesis penelitian ini adalah paparan cadmium dapat menyebabkan percepatan penetesan embrio dan perluasan
area yolk sac larva Danio rerio.
Metode: Metode penelitian eksperimental laboratorium in vivo menggunakan desain control group post test
only. Danio rerio yang digunakan fase juvenile usia 3 bulan didapar 30 hari yang dibagi ke dalam 4 kelompok
CdCl2 dosis 0,5 ppm, 1 ppm, 1,5 ppm, dan kontrol. Pemijahan dilakukan pada Danio rerio usia 4 bulan yang
telah diberi paparan CdCl2. Pengamatan dilakukan pada embrio dan larva Danio rerio dengan menggunakan
mikroskop stereo perbesaran 4,5x dan digunakan software Image J untuk analisa data. Data diuji statistik
menggunakan software SPSS 16.0.
Hasil: Pemberian paparan CdCl2 1,5 ppm menyebabkan terjadinya percepatan penetasan embrio Danio rerio
secara signifikan kurang lebih sebesar 40%. Paparan CdCl2 menyebabkan perluasan area yolk sac bergantung
dosis, semakin tinggi dosis CdCl2 yang dipaparkan pada induk Danio rerio (F1) berdampak semakin besar
perluasan area yolk sac larva Danio rerio (F2). Didapatkan rerata luas area yolk sac ± SD pada kelompok
perlakuan CdCl2 dosis 0,5 ppm, 1 ppm, 1,5 ppm, dan kontrol berturut-turut kurang lebih (3.661±0.236) mm,
(4.622±0.262) mm, (5.069 ± 0.370) mm, dan (3.303 ± 0.302) mm. Terdapat perbedaan yang signifikan pada
perluasan area yolk sac larva Danio rerio antar kelompok perlakuan CdCl2.
Kesimpulan: Pemberian papaparan CdCl2 kronis pada induk Danio rerio (F1) menyebabkan terjadinya
teratogenik ditandai dengan percepatan penetasan embrio dan embriotoksik ditandai dengan perluasan area yolk
sac larva Danio rerio (F2) (p<0,05).

Kata kunci: CdCl2, daya tetas, luas area yolk sac, Danio rerio

ABSTRACT
Introduction: Recently, cadmium exposure in the environment were increasing which causes toxic effects on
the human body and living things around. Embryotoxic and teratogenic toxic effects caused by exposure to
cadmium. This research proposed to know the effect of administration chronic CdCl2 on Danio rerio parental on
the changes of embryo’s hatching time and the yolk sac area on Danio rerio’s larvae. The research hypothesis is
that exposure to cadmium can cause hatching acceleration of embryo and expansion of the yolk sac area of the
Danio rerio larvae.
Methods: This research used laboratory experimental method in vivo with control group post-test only design.
Danio rerio that was used juvenile phase 3 months old that was exposured on 30 days that was divided on 4
CdCl2 0,5 ppm, 1 ppm, 1,5 ppm dose group, and control. The segregation has been done on Danio rerio using
microscope stereo 4,5x magnification and used software Image J for data analyzing. The data experimented
statistically using software SPSS 16.0.
Results: The administration of 1.5 ppm CdCl2 caused a hatching acceleration of Danio rerio embryos
significantly by 40% compared to the control group. The administration of CdCl2 caused the expansion of the
yolk sac area dose dependent, the higher the dose of CdCl2 which is exposed to the Danio rerio parental (F1),
influence the greater impact of the yolk sac area expansion of the Danio rerio larvae (F2). The average yolk sac
area ± SD in the treatment group CdCl2 0.5 ppm, 1 ppm, 1.5 ppm, and the control were approximately
(3,66±0.236) mm, (4,622 ± 0.262) mm, (5,069 ± 0.370) mm, and (3,303 ± 0.302) mm. There were significant
differences in the expansion of the yolk sac area of the Danio rerio larvae between the CdCl2 treatment groups.
Conclusion: The administration of chronic CdCl2 on Danio rerio parental causing teratogenicity that indicated
by hatching acceleration of embryo and embryotoxicity that indicated by expansion of the yolk sac area of
Danio rerio’s larvae (P<0,05).

Keywords: CdCl2, hatching time, area of the yolk sac, Danio rerio

*Correspondence to :
Noer Aini 085258155455
Jl. MT Haryono 193 Malang, Jawa Timur, Indonesia 65145
Email : noeraini@unisma.ac.id

PENDAHULUAN
Cadmium (Cd) merupakan salah satu logam
berbahaya bagi lingkungan yang sampai saat ini
terus menjadi perhatian dunia1,2. Hal ini
disebabkan oleh beberapa faktor yaitu
peningkatan paparan Cd di lingkungan, efek toksik
Cd yang menggangu kesehatan manusia, dan
waktu paruh yang panjang sekitar sepuluh tahun
sehingga sulit dikeluarkan dari dalam tubuh 3.
Dalam kehidupan sehari-hari, Cd dapat kita jumpai
pada beberapa peralatan rumah seperti baterai,
printer warna, plastik, kaca/cermin, fotokopi,
pestisida, dan air laut4. Logam berat seperti Cd
dapat mencemari lingkungan tanah, perairan, dan
udara, namun yang paling membahayakan
kehidupan yaitu pencemaran yang terjadi pada
perairan5. Cd dapat masuk ke dalam tubuh manusia
melalui tiga cara, yaitu ingesti, inhalasi, dan
dermal. Efek toksik yang ditimbulkan Cd
diantaranya yaitu nephrotoxic, cytotoxic,
genotoxic, immunotoxic, dan carcinogenic4,6,7.
Efek paparan Cd pada ibu hamil dapat
menyebabkan terjadinya embryotoxic dan
terratogenic8.
Untuk mengetahui lebih lanjut efek
terratogenic dan embryotoxic akibat paparan Cd
dapat dilakukan dengan mengamati perubahan usia
penetasan dan perubahan luas yolk sac pada larva
Danio rerio. Usia penetasan dapat menjadi marker
efek terratogenic dan embryotoxic akibat paparan
Cd karena Cd yang menempel pada chorion
embrio akan menutupi pori-pori chorion yang
menyebabkan penurunan sirkulasi O2 sehingga
merangsang peningkatan laju respirasi dan
merangsang pengeluaran choriolysin yang
menyebabkan percepatan penetasan9. Selain itu,
perubahan luas yolk sac juga dapat dijadikan
marker untuk mengetahui efek terratogenic dan
embryotoxic akibat paparan Cd karena yolk sac
pada ibu hamil berfungsi untuk mengatur nutrisi
pada janin, jika yolk sac terganggu maka nutrisi
pada janin tidak optimal10. Penelitian sebelumnya
telah dilakukan pada larva ikan dace (Leuciscus
idus L.) yang dipapar Cd dosis 0,1 ppm selama 125
dan 141 hpf didapatkan hasil oedema yolk sac11.
Penelitian Lizardo-Daudt and Kennedy (2008)
pada Oncorhynchus mykiss yang dipapar CdCl2
dosis 0.05 and 0.25 μg/L menyebabkan premature
hatching. Namun, belum ada penelitian yang
mengamati efek teratogenik larva Danio rerio
dengan paparan Cd yang dipaparkan pada
induknya sejak fase juvenile sampai dewasa.
Berdasarkan hal tersebut, perlu dilakukan
penelitian untuk mengetahui efek paparan CdCl2
pada induk Danio rerio dewasa terhadap
perubahan waktu penetasan dan luas area yolk sac
pada larva Danio rerio.
2
METODE PENELITIAN
Penelitian ini menggunakan metode
eksperimental laboratorium secara in vivo dengan
desain penelitian control group post test only,
menggunakan hewan coba Danio rerio yang diberi
paparan CdCl2 selama 30 hari.
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium
Zebra Fish Fakultas Kedokteran Universitas Islam
Malang dan Laboratorim Fakultas Peternakan dan
Perikanan Universitas Brawijaya. Penelitian ini
dilakukan pada Februari-April 2019 yang telah
disetujui oleh Komisi Etik Penelitian (Animal Care
and Use Commited) Universitas Brawijaya dengan
No. 1070-KEP-UB tahun 2019.
Pengelompokan dan Perlakuan Hewan Coba
Penelitian ini menggunakan Danio rerio
juvenile usia 3 bulan yang diternakkan dari Sentra
Pembiakan Danio rerio Tulungagung, Jawa Timur
serta telah didentifikasi dan disertifikasi di
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas
Airlangga dengan Nomor:
006/ULMKILP/UA.FPK/03/2019. Sampel dibagi
ke dalam 4 kelompok perlakuan yaitu kelompok
kontrol, kelompok CdCl2 0,5 ppm, kelompok 1
ppm, dan kelompok 1,5 ppm yang dipapar selama
30 hari. Pemijahan dilakukan dengan perbandingan
Danio rerio jantan dan betina 2:1. Embrio Danio
rerio yang didapatkan dari pemijahan dipilih
sebanyak 10 embrio pada masing-masing
kelompok perlakuan. Larva yang dipilih dan
digunakan sebanyak 10 larva pada masing-masing
kelompok perlakuan.
Pembuatan dan Penentuan Dosis Cadmium
Chloride (CdCl2)
Media uji yang digunakan adalah CdCl2
berasal dari cadmium stock Loba Chemie dengan
nomor CAS 35658-65-2 dan kode produk 02417.
Dosis yang digunakan yaitu 0,5 ppm, 1 ppm, dan
1,5 ppm didapatkan dari eksplorasi dan acuan
LC50 Danio rerio juvenile yaitu 2,5 ppm12. Dosis
tersebut diperoleh dengan cara melarutkan 500 mg
kristal CdCl2 ke dalam 1000 mL aquades sehingga
didapatkan larutan induk CdCl2 500 ppm.
Selanjutnya, dilakukan penghitungan dengan
rumus pengenceran untuk mendapatkan dosis
CdCl2 0,5 ppm, 1 ppm, dan 1,5 ppm dan
didapatkan larutan uji yaitu 50 ml, 100 ml, dan 150
ml.
Pengamatan Daya Tetas Embrio Danio rerio
Diambil 10 telur usia 5,25 hpf dari
masing-masing Akuarium Perlakuan 1 (P1),
Perlakuan 2 (P2), Perlakuan 3 (P3), dan kontrol
(P0) lalu dipindahkan dalam 24 well plate yang
berisi embryonic medium dengan diberikan masing
– masing label P1, P2, P3, P0 yang kemudian
 3

disimpan dalam inkubator MMM Ecocell sampai Tabel 2 Rerata Daya Tetas Embrio Danio rerio
72 hpf. 48 hpf
Pengamatan daya tetas embrio Danio Usia N Rerata ± SD
Kelompok
rerio dilakukan pada 24, 48, dan 72 hpf (hpf) (Ʃ Ulangan) (%)
menggunakan mikroskop stereo perbesaran 4.5x Kontrol (P0) 48 3 00.00 ± 00.00a
yang terhubung pada komputer dengan software CdCl2 0,5
Honestech vhs to dvd 2.5 se. Kemudian dilakukan 48 3 00.00 ± 00.00a
ppm (P1)
penghitungan daya tetas embrio Danio rerio CdCl2 1 ppm
dengan menggunakan rumus sebagai berikut13 : 48 3 00.00 ± 00.00a
(P2)
CdCl2 1,5
48 3 43.33 ± 15.28b
ppm (P3)
Keterangan : Tabel 2 menunjukkan rerata daya tetas embrio
Danio rerio 48 hpf. Data diuji menggunakan Kruskal Wallis
Pengamatan Luas Area Yolk Sac Larva Danio dan dilanjutkan dengan Mann-Whitney (p<0,05). Notasi (a)
rerio berbeda signifikan terhadap P3, (b) berbeda signifikan terhadap
Diambil 10 telur usia 5,25 hpf dari P0, P1, dan P2.
masing-masing Aquarium Perlakuan 1 (P1),
Perlakuan 2 (P2), Perlakuan 3 (P3), dan kontrol Tabel 3 Rerata Daya Tetas Embrio Danio rerio
(P0) lalu dipindahkan dalam 24 well plate yang 72 hpf
berisi embryonic medium dengan diberikan masing Usia N Rerata ± SD
Kelompok
– masing label P1, P2, P3, P0 yang kemudian (hpf) (Ʃ Ulangan) (%)
disimpan dalam inkubator MMM Ecocell sampai Kontrol (P0) 72 3 100.00 ± 00.00
72 hpf. CdCl2 0,5
Pengamatan luas area yolk sac dilakukan 72 3 100.00 ± 00.00
ppm (P1)
pada 72 hpf yang difoto melalui mikroskop stereo CdCl2 1 ppm
perbesaran 4.5x yang terhubung pada komputer 72 3 100.00 ± 00.00
(P2)
dengan software Honestech vhs to dvd 2.5 se dan CdCl2 1,5
72 3 100.00 ± 00.00
software Image J untuk mengukur luas area yolk ppm (P3)
sac. Hasil pixels dikonversi ke dalam bentuk Keterangan : Tabel 3 menunjukkan rerata daya tetas embrio
Danio rerio 72 hpf. Data diuji menggunakan Kruskal Wallis
milimeter14. dan dilanjutkan dengan Mann-Whitney (p>0,05).

Analisa Data
Data yang diperoleh dilakukan analisa
menggunakan SPSS 16.0. Hasil pengamatan daya
tetas embrio Danio rerio dilakukan uji statistik
menggunakan Kruskal Wallis yang dilanjutkan
Mann Whitney dengan taraf signifikansi p<0,05,
sedangkan hasil pengamatan luas area yolk sac
larva Danio rerio dilakukan uji statistik
menggunakan one way ANOVA dilanjutkan Post
Hoc Test LSD dengan taraf signifikansi p<0,05.
Kelompok perlakuan
HASIL DAN ANALISA DATA Gambar 1. Pengamatan Daya Tetas Embrio
Efek Paparan CdCl2 terhadap Perubahan Daya
Tetas Embrio Danio rerio Danio rerio
Keterangan: Gambar 1 menunjukkan hasil pengamatan daya
Penghitungan daya tetas embrio Danio rerio pada tetas embrio ikan zebra menggunakan mikroskop stereo
24 hpf, 48 hpf, dan 72 hpf dapat dilihat pada Tabel dengan perbesaran 4.5x.
1, 2, dan 3.
Tabel 1 Rerata Daya Tetas Embrio Danio rerio Berdasarkan hasil penelitian didapatkan
24 hpf bahwa pada 24 dan 72 hpf tidak didapatkan
Usia n Rerata ± SD perbedaan signifikan usia penetasan embrio Danio
Kelompok
(hpf) (Ʃ Ulangan) (%) rerio kelompok kontrol dibandingkan kelompok
Kontrol (P0) 24 3 00.00 ± 00.00 perlakuan (CdCl2 dosis 0,5 ppm, 1 ppm, dan 1,5
ppm) dan diantara kelompok perlakuan juga tidak
CdCl2 0,5
ppm (P1)
24 3 00.00 ± 00.00 didapatkan perbedaan yang signifikan. Pada hasil
CdCl2 1 ppm penelitian daya tetas embrio Danio rerio 48 hpf
24 3 00.00 ± 00.00 kelompok kontrol dibandingkan kelompok CdCl2
(P2)
CdCl2 1,5 0,5 ppm dan 1 ppm tidak didapatkan perbedaan
24 3 00.00 ± 00.00
ppm (P3)
Keterangan : Tabel 1 menunjukkan rerata daya tetas embrio
Danio rerio 24 hpf. Data diuji menggunakan Kruskal Wallis
dan dilanjutkan dengan Mann-Whitney (p>0,05).
 4

yang signifikan, namun didapatkan perbedaan Tabel 4 Luas Area Yolk Sac Larva Danio rerio
yang signifikan jika dibandingkan kelompok 72 hpf
CdCl2 1,5 ppm sebesar kurang lebih 40%. N Rerata ± SD
Kelompok
(Ʃ Sampel) (mm)
Efek Paparan CdCl2 terhadap Perubahan Luas
Kontrol (P0) 10 3.303 ± 0.302a
Area Yolk Sac Larva Danio rerio
Pengamatan dan penghitungan luas area CdCl2 0,5 ppm
10 3.661 ± 0.236b
yolk sac larva Danio rerio pada kelompok kontrol (P1)
(P0) dan kelompok perlakuan (CdCl2 0,5 ppm, 1 CdCl2 1 ppm
10 4.622 ± 0.262c
ppm, dan 1,5 ppm) dapat dilihat pada Gambar 2, (P2)
Gambar 3, dan Tabel 4. CdCl2 1,5 ppm
10 5.069 ± 0.370d
(P3)
A

B
Gambar 3 Histogram Rerata Luas Area Yolk
Sac Larva Danio rerio 72 hpf
Keterangan: Gambar 3 menunjukkan rerata luas area yolk sac
larva Danio rerio 72 hpf. Data telah diuji statistik
menggunakan One Way ANOVA dilanjutkan post hoc LSD
(p<0,05). Notasi (a) berbeda signifikan terhadap P1, P2, dan P3,
(b) berbeda signifikan terhadap P0, P2, dan P3, (c) berbeda
signifikan terhadap P0, P1, dan P3, (d) berbeda signifikan
terhadap P0, P1, dan P2.
C Dari data penelitian didapatkan perbedaan
signifikan luas area yolk sac antara kelompok
kontrol dibandingkan kelompok perlakuan (CdCl2
0,5 ppm, 1 ppm, dan 1,5 ppm) secara berturut-turut
sebesar kurang lebih 10%, 40%, dan 50%.
Didapatkan hasil peningkatan luas area yolk sac
pada kelompok perlakuan. CdCl2 1,5 ppm
meningkatkan luas area yolk sac dibandingkan
CdCl2 0,5 ppm sebesar kurang lebih 40% dan
CdCl2 1 ppm sebesar kurang lebih 10% (p<0,05).
D Kelompok CdCl2 1 ppm meningkatkan luas area
yolk sac sebesar kurang lebih 30% dibandingkan
CdCl2 0,5 ppm (p<0,05).

Gambar 2 Pengamatan Luas Area Yolk Sac
Larva Danio rerio 72 hpf
Keterangan: Gambar 2 menunjukkan hasil pengamatan luas
area yolk sac larva Danio rerio 72 hpf menggunakan
mikroskop stereo dengan perbesaran 4.5x yang diukur
menggunakan software image J dengan satuan pixel. Gambar
(A) yolk sac 72 hpf kelompok kontrol; (B) yolk sac 72 hpf
CdCl2 0,5 ppm; (C) yolk sac 72 hpf CdCl2 1 ppm; (D) yolk sac
72 hpf CdCl2 1.5 ppm. Garis merah menunjukkan luas area yolk
sac.
PEMBAHASAN
Efek Paparan CdCl2 terhadap Perubahan Usia
Penetasan Embrio Danio rerio
Pada penelitian ini, didapatkan percepatan
penetasan embrio Danio rerio pada pemaparan
CdCl2 dosis 1,5 ppm yang terjadi pada 48 hpf
dengan persentase penetasan sebesar kurang lebih
40% (p<0,05) dibandingkan kelompok kontrol.
Hasil penelitian ini diduga disebabkan karena
paparan CdCl2 yang merupakan logam berat yang
mampu mempengaruhi percepatan penetasan
karena menyebabkan pori-pori chorion tertutup
sehingga terjadi penurunan pertukaran O2

dan eliminasi sisa metabolisme yang
mengakibatkan peningkatan laju respirasi dan
ventilasi insang ikan. Peningkatan laju respirasi
dan ventilasi insang ikan akan merangsang
pengeluaran choriolysin dari hatching glands yang
terdapat di epidermis dari yolk sac sehingga
menyebabkan premature hatching15. Hal ini
sejalan dengan penelitian sebelumnya yang telah
dilakukan oleh Su Mei Wu, et al (2013) dengan
memberikan paparan CdCl2 pada embrio
Danio rerio 5,25 hpf dosis 1,6 ppm memberikan
hasil percepatan penetasan embrio Danio rerio
pada 36 dan 48 hpf dengan persentase sebesar
kurang lebih 6% dan 80%.Pada paparan CdCl2 0,5
ppm dan 1 ppm tidak mampu menyebabkan
percepatan penetasan embrio Danio rerio , hal ini
dapat terjadi karena cadmium konsentrasi rendah
yang terlarut belum mampu menutupi porus
chorion embrio ikan yang tersusun atas 3 layer
dengan ketebalan 3,5 µm dan diameter 0,5 µm,
sehingga O2 exchange dan pengeluaran sisa
metabolisme ikan masih normal, apabila proses
tersebut masih normal maka tidak akan terjadi
peningkatan laju respirasi dan ventilasi insang ikan
sehingga choriolysin tidak terstimulasi untuk
keluar lebih awal dari periode normalnya15.
Penetasan merupakan suatu langkah
esensial bagi spesies ikan yang menandakan
berakhirnya masa embriogenesis dan dimulainya
fase larva16. Embrio ikan yang telah tumbuh dan
berkembang dengan baik akan menetas sesuai
periode normal17. Proses penetasan secara normal
pada embrio Danio rerio terjadi pada rentang usia
72-96 hpf18. Proses penetasan embrio Danio rerio
dipengaruhi oleh faktor endogen dan eksogen 16.
Faktor endogen yang dapat mempengaruhi
penetasan embrio Danio rerio diantaranya yaitu
kontraksi otot, pelepasan enzim proteolitik, dan
kadar hormon. Sedangkan faktor eksogen yaitu
siklus terang-gelap, kadar oksigen, air, pH, polutan
lingkungan, dan logam berat16. Penetasan terjadi
ketika embrio yang telah matang akan
menghasilkan prolaktin yang berperan sebagai
sinyal neuroendokrin dan akan merangsang
pelepasan HGCs (Hatching Gland Cells). Sel
tersebut akan menstimulasi pengeluaran enzim
choriolysins atau HE-1 (Hatching Enzyme-1) yang
akan melisiskan glikoprotein pada chorion,
akibatnya chorion akan melemah. Ketika chorion
melemah dan terjadi pergerakan aktif dari embrio
mengakibatkan chorion robek sehingga embrio
Danio rerio keluar sebagai larva16.
Efek Paparan CdCl2 terhadap Perubahan Luas
Area Yolk Sac Larva Danio rerio
Pada penelitian ini, didapatkan
peningkatan luas area yolk sac larva Danio rerio
bergantung pada dosis CdCl2. Semakin tinggi dosis
CdCl2, maka luas area yolk sac akan semakin
besar. Hal ini sesuai dengan teori dasar toksikologi
bahwa “Semakin tinggi dosis, maka semakin parah
respon individu”19. Pemberian CdCl2 dosis 0,5
ppm, 1 ppm, dan 1,5 ppm meningkatkan luas area
5
yolk sac larva Danio rerio secara signifikan
dengan persentase berturut-turut sebesar kurang
lebih 10%, 40%, dan 50%. Hal tersebut sesuai
dengan hasil penelitian yang dilakukan oleh
Witeska, et al (2013) yang memaparkan CdCl2
dosis 0,1 ppm selama 125 dan 141 hpf pada larva
Leuciscus idus L. menyebabkan edema yolk sac.
Dengan adanya edema pada yolk sac,
maka akan meningkatkan luas area yolk sac yang
disebabkan oleh Cd dalam bentuk CdCl2 yang
terakumulasi dalam perivitelline space embrio
Danio rerio diduga disebabkan karena ukuran
partikel CdCl2 yaitu 0,033 µm dapat masuk secara
difusi sehingga menyebabkan perubahan
permeabilitas membran selektif chorion yang
mengakibatkan gangguan pertukaran elektrolit
yaitu K+, Na+, Mg2+, Ca2+ dan air pada perivitelline
space sehingga terjadilah edema yolk sac20. Edema
yolk sac Danio rerio juga dapat terjadi jika
paparan Cd dalam bentuk CdCl2 telah merusak
ginjal ikan disebabkan oleh peningkatakan
Reactive Oxygen Species (ROS) yang diinduksi
karena penurunan metallothionein sehingga Cd
tidak mampu diikat oleh metallothionein.
Penurunan metallothionein diduga disebabkan
karena penurunan fungsi zinc yang terjadi sebagai
bentuk antagonist reaction dari cadmium. Ginjal
yang telah rusak akan terganggu fungsinya dalam
mengatur keseimbangan cairan. Bagian dari ginjal,
ductus pronephric yang bertugas untuk reabsorbsi
elektrolit terganggu, sehingga terjadi
ketidakseimbangan osmotik. Hal ini akan
mengakibatkan edema yolk sac21.
Yolk sac merupakan salah satu organ
terpenting bagi embrio Danio rerio karena
fungsinya yang sangat vital yaitu untuk
mendistribusikan nutrisi bagi embrio dari sel yolk,
membantu proses organogenesis pada saat
pembentukan liver dan jantung, serta berperan
sebagai sistem kekebalan tubuh dari sejak embrio
hingga menjadi larva22,23,24. Pada pembentukannya,
yolk sac dapat mengalami gangguan yang
disebabkan oleh toxicants. Diantaranya yaitu
logam berat seperti cadmium dan copper25.
PENUTUP
Simpulan
Berdasarkan hasil penelitian, dapat disimpulkan
bahwa pemberian paparan CdCl2 kronis pada
induk Danio rerio (F1) menyebabkan:
1. Teratogenik ditandai dengan percepatan
penetasan embrio Danio rerio (F2) pada dosis
1,5 ppm
2. Embriotoksik ditandai dengan perluasan area
yolk sac larva Danio rerio (F2) pada dosis 0,5
ppm, 1 ppm, dan 1,5 ppm.
Saran
Berdasarkan hasil penelitian ini, untuk
pengembangan lebih lanjut adalah :
1. Penelitian untuk mengamati usia penetasan
embrio (F2) dan luas area yolk sac larva (F2)
Danio rerio pada 24, 36, 48, 60, dan 72 hpf

yang induknya (F1) dipapar CdCl2 selama 30
hari.
2. Penelitian untuk mengamati usia penetasan
embrio Danio rerio (F1) yang induknya
dipapar CdCl2 dosis tinggi selama 30 hari.
3. Penelitian untuk mengamati kadar elektrolit
(Na+, Ca2+, Mg2+, K+) dan kadar oxidative
stress (H2O2) pada embrio Danio rerio (F2)
yang induknya (F1) dipapar CdCl2 selama 30
hari.
UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan terima kasih disampaikan kepada IOM dan
Fakultas Kedokteran Universitas Islam Malang
yang telah mendanai penelitian, Dr. Yudi Purnomo
Ssi, Apt., M.Kes., sebagai reviewer jurnal, staf
laboran dan tim penelitian yang telah membantu
pada penelitian ini.
DAFTAR PUSTAKA
1. World Health Organization. Environmental
Health Criteria 134, Cadmium. International
Programme on Chemical Safety (IPCS).
Geneva. 1992
2. Satarug, J.R. Baker, S.Urbenjapol, M.
Haswell-Elkins, P.E.B. Reilly, D.J. Williams,
M.R. Moore. A Global Perspective On
Cadmium Pollution And Toxicity In Non-
Occupationally Exposed Population. Toxicol.
13765–83(2003).
3. Darwish, D.A. Blake. Development And
Validation Of A One-Step Immunoassay For
Determination Of Cadmium In Human Serum,
Analytical Chemistry. 74, 52-58(2002).
4. ATSDR (Agency for Toxic Substances and
Disease Registry). Draft Toxicological Profile
for Cadmium. US Department of Human and
Health Services. 2008.
5. Manik, K.E.S. Pengelolaan Lingkungan
Hidup. Jakarta : Djambatan. 2007.
6. Brunner WN, Stephens RW, Danө K,. Control
of Invasion and Metastasis. Dalam: Harris JR,
Lippmann ME, Morrow M, Osborne CK(eds).
Diseases of the Breast. Second edition.
Philadelphia. 367- 375(2000).
7. Risso-de Faverney, C., A. Devaux, M.
Lafaurie, J.P. Girard, B. Bailly, and R.
Rahmani. Cadmium Induces Apoptosis And
Genotoxicity In Rainbow Trout Hepatocytes
Through Generation Of Reactive Oxygen
Species. Toxicol. 53, 65- 76(2001).
8. Thompson J., Bannigan J. Cadmium: Toxic
Effects On The Reproductive System And The
Embryo. Reprod Toxicol. 2008.
9. Cheng SH, Wing Kong Wai A, Hung So C,
Shiu Sun Wu R. Cellular And Molecular Basis
Of Cadmium-Induced Deformities In
Zebrafish Embryos. Environ Toxicol Chem
19:3024–3031(2000).
6
10. Burton, G.J., Watson, A.L., Hempstock, J.,
Skepper, J.N. and Jauniaux, E. Uterine Glands
Provide Histiotrophic Nutrition For The
Human Fetus During The First Trimester Of
Pregnancy. Journal of Clinical Endocrinology
and Metabolism. 87, 2954-2959(2002).
11. Witeska M., Sarnowski P., Lugowska K.,
Kowal E. The Effects Of Cadmium And
Copper On Embryonic And Larval
Development of ide Leuciscus idus L. Fish
Physiol Biochem. 2013Rollin HB, Tahira
Kootbodien, Kalavati Channa, Jon. Odland.
Prenatal Exposure to Cadmium, Placental
Permeability and Birth Outcomes in Coastal
Populations of South Africa. Plos One. 2015.
12. Wold M, Beckmann M, Poitra S, Espinoza A,
Longie R, Mersereau E, Darland DC, Darland
T. The Longitudinal Effects Of Early
Developmental Cadmium Exposure On
Conditioned Place Preference And
Cardiovascular Physiology In Zebrafish. US
National Library of Medicine National
Institutes of Health. 2017.
13. Effendi, I. Biologi Perikanan. Yogyakarta:
Yayasan Pustaka Nusantara. 2002.
14. Reinking, L. ImageJ Basic. Diungah 15
Desember 2018, dari:
www.melville.ch.cam.ac.uk. 2007.
15. Paterson G, Ataria JM, Hoque ME, Burns DC,
Metcalfe CD. The toxicity of titanium dioxide
nanopower to early life stages of the Japanese
medaka (Oryzias latipes). Chemosphere.
82,1002–1009(2011).
16. Paz JF, Beiza N, Paredes-Zúñiga S, Hoare
MS, Allende ML. Triazole Fungicides Inhibit
Zebrafish Hatching by Blocking the Secretory
Function of Hatching Gland Cells. US
National Library of Medicine National
Institutes of Health. 2017.
17. Tolentino, J. J. V. and J. R. Undan. Embryo-
Toxicity and Teratogenicity of Derris elliptica
Leaf Extract on Zebra Fish (Danio rerio)
Embryos, Int. J. Pure App. Biosci.
4(3):16:20(2016).
18. Duan J, Yu Y, Shi H, Tian L, Guo C. Toxic
Effects of Silica Nanoparticles on Zebrafish
Embryos and Larvae. Plos One. (2013).
19. Jeebhay, M. & Ehrlich, R. Toxicodynamics
Dose Response Relationships. University of
Cape Town. 2007.
20. Jezierska, B, Lugowska, K, Witeska, M. The
Effects of Heavy Metals on Embryonic
Development of Fish. Fish physiology and
biochemistry. 2008.
21. Hill AJ, Bello SM, Prasch AL, Peterson RE,
Heideman W. Water Permeability and TCDD-
Induced Edema in Zebrafish Early-Life
Stages. US National Library of Medicine
National Institutes of Health. 2004.

22. Kondakova, Ekaterina Alexandrovna, A.
Vladimir, Ivanovich I., Efremov.
Morphofunctional Transformations of The
Yolk Syncytial Layer During Zebrafish
Development. Wiley Online Library. 2013.
23. Fei, F., Sun, S.Y., Yao, Y.X., Wang, X.
Generation and Phenotype Analysis of
Zebrafish Mutations of Obesity-Related Genes
Lepr and Mc4r. ZFIN. 2017.
7
24. Carvalho L, Heisenberg CP. 2010. The Yolk
Syncytial Layer in Early Zebrafish
Development. PubMed. 2010.
25. Karilyn & Alicia. Zebrafish as a Model for
Toxicological Perturbation of Yolk and
Nutrition in the Early Embryo. HHS Public
Acces. 2019.
 8

DAFTAR ISI

Halaman

Kata Pengantar ........................................................................................... i

Daftar Isi ..................................................................................................... ii

Daftar Tabel................................................................................................ vi

Daftar Gambar ............................................................................................. vii

DaftarLampiran......................................................................................... viii

Daftar Singkatan ......................................................................................... ix

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Penelitian ................................................................ 1

1.2 Rumusan MasalahPenelitian .......................................................... 3

1.3 Tujuan Penelitian .......................................................................... 3

1.4 Manfaat Penelitian ......................................................................... 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1Cadmium .. ..................................................................................... 5

2.1.1 .........SumberCadmium .......................................................... 5

2.1.2 .........Penggunaan Cadmium dalam Kehidupan Sehari-hari .... 6

2.1.3 .........Kontaminasi Cadmium terhadap Lingkungan ................ 6

2.1.4 .........Jalur Pajanan Cadmium ................................................ 7

2.1.5 .........Nilai Standar Pajanan Cadmium.................................... 8

2.1.6 .........Farmakokinetika Cadmium dalam Tubuh ...................... 8

2.1.7 .........Mekanisme Toksisitas Cadmium ................................... 10

2.1.8 .........Efek Paparan Cadmium terhadap Tubuh ....................... 12

 9

2.1.9 .........Cadmium Chloride(CdCl2) sebagai Agen Paparan ........ 14

2.2 Danio rerio sebagai Model Hewan Coba ....................................... 15

2.2.1 Taksonomi Danio rerio .......................................................... 15

2.2.2 Morfologi Danio rerio ........................................................... 15

2.2.3 Keunggulan Danio rerio sebagai Model HewanCoba ............. 16

2.2.4 Embriogenesis Danio rerio .................................................... 17

2.2.5 Daya Tetas Danio rerio ....................................................... 18

2.2.5.1 Mekanisme Terjadinya Penetasan.................................. 18

2.2.5.2 Hubungan Toksisitas CdCl2 dengan Perubahan

Kemampuan Daya Tetas Danio rerio............................................ 18

2.2.6 Yolk Sac Danio rerio ........................................................... 20

2.2.6.1 Anatomi dan Histologi Yolk Sac Danio rerio ................. 20

2.2.6.2 Hubungan Toksisitas CdCl2 dengan Perubahan Luas

Yolk Sac Danio rerio .................................................................... 21

2.2.7 Chorion Embrio Danio rerio ............................................... 21

BAB III KERANGKA KONSEP

3.1 Kerangka Konsep Penelitian .......................................................... 23

3.2Hipotesis Penelitian ........................................................................ 25

3.2.1Hipotesis Penelitian 1 .............................................................. 25

3.2.2 Hipotesis Penelitian 2 ............................................................. 25

3.4 Variabel Penelitian ........................................................................ 25

3.4.1 Variabel Bebas Penelitian....................................................... 25

3.4.2 Variabel Terikat Penelitian ..................................................... 25

3.5 Definisi Operasional Variabel Penelitian ....................................... 25

 10

BAB IV METODE PENELITIAN

4.1 Desain Penelitian .......................................................................... 27

4.2 Waktu dan Tempat Penelitian ....................................................... 27

4.3Alat dan Bahan ............................................................................... 27

4.3.1 Hewan Coba ........................................................................... 27

4.3.2 Pembuatan Larutan CdCl2 ....................................................... 27

4.3.3 Perkembangbiakan Danio rerio .............................................. 28

4.3.4 Pemijahan Danio rerio ........................................................... 28

4.3.5 Perkembangan Embrio Danio rerio ........................................ 29

4.3.6 Pengamatan Daya Tetas Embrio Danio rerio .......................... 29

4.3.7 Pengamatan Luas Yolk Sac Embrio Danio rerio...................... 29

4.4 Tahap Penelitian ............................................................................ 29

4.4.1 Pembuatan Media Uji ............................................................. 29

4.4.2 Aklimatisasi dan Pemeliharaan Danio rerio Dewasa .............. 30

4.4.3 Paparan CdCl2 pada Danio rerio Dewasa ............................... 31

4.4.4 Pemijahan Ikan Danio rerio ................................................... 31

4.4.5Pemilihan dan Pemeliharaan Sampel Embrio Danio rerio ....... 31

4.4.6 Penghitungan Sampel Embrio Danio rerio ............................. 32

4.4.7Perlakuan dan Pengamatan Efek Beberapa Dosis CdCl2

Terhadap Perubahan Usia Penetasan dan Luas Yolk Sac

Embrio Danio rerio.................................................................. 33

4.4.7.1 Usia Penetasan Embrio Danio rerio .................................. 33

4.4.7.2 Luas Yolk Sac Larva Danio rerio ...................................... 34

 11

4.5 Analisa Data .................................................................................. 35

4.6 Diagram Alur Penelitian ................................................................ 36

BAB VHASIL PENELITIAN

5.1Efek Paparan Cadmium Chloride terhadap Perubahan Usia

Penetasan Embrio Danio rerio ...................................................... 37

5.2 Efek Paparan Cadmium Chloride terhadap Perubahan Luas

Yolk Sac Larva Danio rerio .......................................................... 38

BAB VIPEMBAHASAN

6.1Efek Paparan Cadmium Chloride terhadap Perubahan Usia

PenetasanEmbrio Danio rerio ....................................................... 40

6.2 Efek Paparan Cadmium Chloride terhadap Perubahan Luas

Yolk Sac Larva Danio rerio .......................................................... 41

BAB VIIPENUTUP

7.1Kesimpulan .................................................................................... 44

7.2 Saran ............................................................................................. 44

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................. 45

 12

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1Embriogenesis Ikan Zebra....................................................... 17

Tabel 4.1Perlakuan Paparan Cadmium Chloride pada Ikan Zebra............. 31

 13

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Struktur Kimia cadmium chloride.......................................... 14

Gambar 2.2Danio rerio........................................................................... 15

Gambar 2.3Danio reriodewasa................................................................ 16

Gambar 2.4Anatomi yolk sac ikan zebra usia 48 hpf yang terlihat

membentang dari nomor 8-17 ........................................... 20

Gambar 2.5Histologi yolk sac ikan zebra ............................................ 20

Gambar 4.1 (A) Embrio Ikan Zebra Sehat dan Fertile 5,25hpf;

(B) Unfertilized EmbrioIkan Zebra 34 hpf ,dan

(C) EmbrioIkan Zebra Mati 34 hpf………………............. 32

Gambar 4.2 (A) EmbrioIkan Zebra Hidup 34 hpfdan (B) Embrio

Ikan Zebra Mati 34hpf........................................................ 34

Gambar 4.3 (A) Yolk Sac Normal Ikan Zebra, dan (B) Yolk Sac

OedemaIkan Zebra ............................................................. 34

Gambar 4.4 Software ImgaeJ................................................................ 35

 14

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran I Waktu Penelitian Dan Kegiatan Penelitian Yang Dilakukan

(RencanaPenelitian Dan Realisasinya)................................ 1

Lampiran II Surat Keputusan Laik Etik....................................................... 2

Lampiran III Identifikasi Hewan Coba........................................................ 3

Lampiran IV Sertifikasi Cadmium Chloride (CdCl2).................................. 4

Lampiran V Dokumentasi Kegiatan Penelitian........................................... 5

Lampiran VI Data Hasil Penelitian………………………………............. 7

Lampiran VII Hasil Analisa Statistik........................................................... 10

 15

DAFTAR SINGKATAN

Cd Cadmium
CdCl2 Cadmium Choride
ATSDR Agency for Toxic Substances and Disease Registry
ROS Reactive Oxygen Species
DNA Deoxyribonucleic Acid
IARC International Agency for Research on Cancer
UNEP United Nations Environment Programme
WHO World Health Organization
PerMenKes Peraturan Menteri Kesehatan
Mg Miligram
KgBb Kilogram Berat Badan
US EPA United States Environmental Protection Agency
HSDB The Hazardous Substances Data Bank
FSH Follicle Stimulating Hormone
LH Luteinizing Hormone
Hpf Hour Post Fertilization
HE-1 Hatching Enzyme-1
HGCs Hatching Gland Cells
HCB Hexachlorobenzene
TCDD Tetrachlorodibenzo-p-dioxin
DDE Didekabrominasi Difenil Eter
YSL Yolk syncytial layer
PPM Part per Million