Chem Info

Vol 1, No 1, Hal 94 - 100 , 2013

Identifikasi Senyawa Flavonoid dari Daun Ketapang Kencana (Terminalia muelleri Benth.)
dan Uji Aktivitas Sebagai Antibakteri Penyebab Bau Badan

Dyah Arum Ariyanti, Khairul Anam, Dewi Kusrini

Laboratorium Kimia Organik, Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Matematika,Universitas Diponegoro
Jl. Prof. Soedharto, SH, Semarang 50275, Telp. (024)76480824

Abstrak
Telah diisolasi dan diidentifikasi senyawa golongan flavonoid dari daun ketapang kencana
(Terminalia muelleri Benth.) Isolasi diawali dengan ekstraksi menggunakan metode maserasi,
dilanjutkan fraksinasi menggunakan metode kromatografi kolom dan pemurnian menggunakan
kromatografi lapis tipis. Isolat flavonoid dari ekstrak etil asetat daun T. muelleri berwarna kuning
dengan rendemen 0,14%. Hasil identifikasi menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan
pereaksi geser dan spektrometer FTIR diduga senyawa flavonoid merupakan senyawa herbasitin.
Uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis dan Pseudomonas
aeruginosa pada konsentarsi ekstrak etil asetat 1% dan fraksi EC14 5% memiliki kekuatan daya
hambat yang sedang.

Kata kunci : Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Pereaksi geser, Kromatografi

kolom

Abstract
Flavonoid compound was isolated and identified from Terminalia muelleri Benth. leaves.
Isolation was started by maseration, followed by fractionation using column chromatography
method, and purification using thin layer chromatography. Flavonoid was isolated from ethyl
acetat extract of T. muelleri leaves (yield 0.14%). Structure characterization was conducted using
UV spectrophotometer and FTIR. Results showed that the extracted compound was herbasitin.
Ethyl acetat extract (1%) and EC14 fraction (5%) of T.muelleri were found to inhibit the growth of
Staphylococcus epidermidis and Pseudomonas aeruginosa.

Keyword : Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Shift reagen, Coloumn

chromatography

PENDAHULUAN Kandungan kimia pada tanaman T.

Ketapang kencana (Terminalia muelleri
Benth.), berasal dari Australia keluarga
Combretaceae. Tanaman ini tersebar di
berbagai negara yaitu India, Indonesia dan
5,10
Amerika Utara . Ekstrak Terminalia ini
dapat berfungsi sebagai antifungi,
antikanker, antioksidan dan penghambat
1,7,9
glukosidase . sebagai anti jamur terhadap
muelleri belum banyak dilaporkan, namun
kandungan kimia dan uji aktivitas dari genus
Terminalia telah banyak dilaporkan. Daun
Terminalia muelleri Benth dilaporkan
2
memiliki sifat antibakteri . Fraksi fenol pada
tanaman Terminalia catappa diketahui
12
berfungsi sebagai antioksidan . Tanaman
terminalia dilaporkan juga memiliki aktivitas
Candida albicans, Cryptococcus

94
Chem Info
Vol 1, No 1, Hal 94 - 100 , 2013
neoformans, Aspergillus fumigatus,
7 Dan Gizi Universitas Gadjah Mada.
Microsporum canis dan Sporothrix schenkii .
Tanaman terminalia chebula dilaporkan
dapat digunakan sebagai uji antibakteri
terhadap bakteri Escherichia coli, Salmonella
8 peralatan ini adalah Blender, botol semprot,
Sp., Shigella Sp., Saccharomyces cerevisiae .
Banyak tanaman terminalia yang sudah
diteliti aktivitasnya sebagai antibakteri,
namun belum pernah diuji aktivitas terhadap
antibakteri penyebab bau badan seperti
Staphylococcus epidermidis Coryne
bacterium acne, Pseudomonas aeruginosa
dan Streptococcus pyogenes. Selain itu,
belum pernah dilaporkan jenis senyawa yang
bertanggung jawab terhadap aktivitas
antibakteri dari Terminalia muelleri.
Penelitian tentang kandungan jenis
senyawa flavanoid dalam tanaman T.
muelleri belum pernah dilakukan. Mengingat
senyawa flavonoid memiliki banyak manfaat
sehingga menarik untuk diidentifikasi jenis
senyawanya dan diuji aktivitasnya sebagai
antibakteri.
METODE PENELITIAN
Bahan
Daun ketapang kencana (Terminalia
muelleri Benth.), metanol (teknis), etil asetat
(teknis), n-heksana (teknis), akuades, plat
silika gel GF254 (Merck), sephadex LH-20
(Amersham), silika gel 60-H (Merck),
aluminium klorida (Merck), metilen klorida
(teknis), kuersetin (Merck), miresetin
(Merck), pereaksi Libermann–Burchad,
pereaksi Meyer, pereaksi dragendrof, serbuk
magnesium, asam sulfat p.a (Merck), natrium
hidroksida 2 N, kloroform (t.k), pereaksi
Steasny, natrium asetat (Merck), eter (t.k),
ferri klorida 1%, aluminium klorida 5%,
anhidrida natrium asetat, asam borat, etanol
96%, tetrasiklin, akuabides, bakteri
Staphylococcus epidermidis (FNCC 0048)
dan Pseudomonas aeruginosa (FNCC
95
0063) yang diperoleh dari Pusat Studi Pangan
Alat
Peralatan yang digunakan dalam
pipet tetes, pipa kapiler, peralatan gelas,
kertas saring, corong, rotary vacuum
evaporator, plat tetes, hot plate, kertas
whatman no.1 dan 4, seperangkat alat
kromatografi kolom, kertas cakram (Oxoid),
petri dish, jarum ose, spektrofotometer UV–
Vis (Shimadzu) dan spektrometer IR
(Shimadzu).
Cara kerja
Preparasi sampel
Daun T. muelleri yang diperoleh dari
Kebun Raya Bogor dibersihkan dari debu,
pasir dan pengotor lainnya, kemudian
diangin-anginkan hingga kering dan
dijadikan serbuk menggunakan blender.
Pembuatan ekstrak
Daun ketapang kencana yang telah
menjadi serbuk kemudian dimaserasi dengan
pelarut n-heksana selama 3 kali 24 jam, filtrat
yang diperoleh dipekatkan menggunakan
rotary vacum evaporator hingga didapatkan
ekstrak n-heksana. Selanjutnya bagian ampas
dikeringkan lalu dimaserasi dengan pelarut
etil asetat selama 3 kali 24 jam, filtratnya
dipekatkan hingga diperoleh ekstrak etil
asetat. Kemudian ampas dimaserasi kembali
dengan metanol selama 3 kali 24 jam dan
filtratnya dipekatkan hingga menjadi ekstrak
metanol.
Penapisan fitokimia
Penapisan fitokimia dilakukan terhadap
serbuk simplisia dengan tujuan untuk
mengetahui kandungan golongan senyawa
kimianya meliputi uji alkaloid, flavonoid,
saponin, tanin, kuinon, triterpenoid dan
steroid menurut metode yang dikembangkan
Chem Info
Vol 1, No 1, Hal 94 - 100 , 2013
4
oleh Fransworth dan Materia Medika
3
Indonesia .
Isolasi senyawa flavonoid
Sebanyak 7 g ekstrak etil asetat daun
T.muelleri difraksinasi dengan kromatografi
kolom gravitasi (KG) menggunakan
sephadex LH-20 dan pengembang metanol-
air dengan sistem elusi gradien menurun.
Hasil fraksinasi menghasilkan 23 vial dan
setiap vial tertampung 120 ml, kemudian
dianalisis komponen penyusunnya
menggunakan plat silika gel GF254 dan
pengembang etil asetat-kloroform (8:2).
Fraksi yang diduga mengandung flavonoid
difraksinasi kembali dengan kromatografi
cair vakum (KCV) menggunakan Silika Gel
60-H dengan campuran pelarut n-heksana-
metilen klorida-etil asetat-metanol dengan
kepolaran meningkat. Setiap vial dianalisis
komponen penyusunnya menggunakan plat
silika gel GF254 dan pengembang etil asetat-
dikrometan (8:2). Vial yang memiliki pola
KLT sama digabung menjadi satu fraksi.
Pola noda dideteksi dibawah lampu UV 365
nm dan menggunakan penampak bercak
AlCl3 5% dalam metanol.
Pemurnian dan uji kemurnian senyawa
flavonoid
Flavonoid yang terdapat dalam fraksi
yang paling dominan dimurnikan
menggunakan metode kromatografi kertas
(whatman no.4). Isolat yang didapatkan
kemudian di uji kemurniannya menggunakan
KLT silika gel GF254 menggunakan
pengembang yang berbeda. Bila terdapat satu
noda maka isolat yang diperoleh dipastikan
telah murni.
Karakterisasi dan elusidasi struktur
Isolat murni dikarakterisasi dengan
spektrometer UV-Vis dan FTIR.
Spektrometer UV-Vis menggunakan metode
pereaksi geser sedangkan FTIR
menggunakan pelet KBr. Data hasil
96
spektrometer UV-Vis dan FTIR digunakan
untuk mengelusidasi struktur.
Uji aktivitas antibakteri
Uji aktivitas antibakteri dilakukan
terhadap ekstrak dan fraksi yang banyak
mengandung flavonoid. Metode yang
2
digunakan yaitu metode cakram dengan
bakteri uji Staphylococcus epidermidis dan
Pseudomonas aeruginosa. Kertas cakram
diletakkan di atas media padat dan kemudian
ditetesi larutan uji. Larutan uji yaitu ekstrak
dan fraksi dengan variasi konsentrasi yaitu
0,5%, 1%, 5% dan 10%. Aktivitas antibakteri
ditunjukkan oleh keberadaan zona bening
disekeliling kertas cakram, kemudian zona
bening diukur diameternya.
Pembuatan media nutrien agar
Nutrien agar (NA) sebanyak 2,5 gram
dilarutkan dalam 100 ml akuades dan
dipanaskan hingga larut. Setelah itu
dilakukan sterilisasi dalam autoklaf selama
o
20 menit dengan suhu 121 C dan tekanan 2
atm.
Penyiapan mikroba uji
Bakteri uji Staphylococcus epidermidis
dan Pseudomonas aeruginosa diinoku-
lasikan dalam media pertumbuhan NA dan
o
diinkubasi pada suhu 37 C selama 24 jam.
Kemudian bakteri ini dibuat suspensi dalam
akuabides dan diukur kekeruhannya dengan
spektrofotometer pada = 580 nm dan
transmitansinya ditepatkan pada T=25%
akuabides digunakan sebagai blanko.
Pengujian aktivitas antibakteri
Pengujian aktivitas antibakteri pada
ekstrak daun ketapang kencana dan fraksi
dilakukan dengan metode cakram. Suspensi
bakteri sebanyak 50 µL dicampur dengan 10
mL NA di petridish. Setelah menjadi padat,
kertas cakram diletakkan di atas media dan
ditetesi larutan uji sebanyak 10 µL.
Kemudian prainkubasi selama 30 menit
Chem Info
Vol 1, No 1, Hal 94 - 100 , 2013
pada suhu kamar selanjutnya diinkubasi
o Senyawa flavonid dalam fraksi Ec
selama 24 jam pada suhu 37 C. Setelah 24
jam diukur diameter zona bening disekitar
kertas cakram dan dinyatakan sebagai
diameter hambat. Pembanding yang
digunakan adalah pelarut etanol 96%
(kontrol negatif) dan antibiotik tetrasiklin
(kontrol positif).
HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji Fitokimia
Hasil penapisan fitokimia menunjukkan
bahwa serbuk daun T. muelleri mengandung
alkaloid, flavonoid, saponin, kuinon, tanin
dan steroid/triterpenoid.
Isolasi senyawa flavonoid
Berdasarkan hasil KLT dengan silika gel
GF254 dan pengembang n-heksana : etil
asetat (8:2), ekstrak etil asetat positif
mengandung flavonoid yang ditandai dengan
adanya noda berwarna kuning setelah
disemprot dengan H2SO4 10% dibawah UV
365 nm. Ekstrak etil asetat ini kemudian
difraksinasi menggunakan metode
kromatografi kolom gravitasi. Fase diam
yang digunakan adalah Sephadex LH-20 dan
pengembang metanol:air dengan sistem elusi
gradien kepolaran menurun dihasilkan 6
fraksi (EA,EB,EC…..,E F). Hasil analisis
terhadap keenam fraksi menggunakan
pengembang etil asetat:kloroform (8:2)
dengan penampak bercak AlCl3 5% (dalam
etanol) ditunjukkan pada gambar 1.
Gambar 1. Profil KLT fraksi EA,EB,EC,….E F dari
ekstrak etil asetat daun T. muelleri dengan
pengembang etil asetat:kloroform (8:2) fase diam
silika gel GF254, diamatai dibawah UV 365 nm
97
dipisahkan kembali dengan metode
kromatografi cair vakum (KCV) dengan
silika gel 60-H dan menggunakan
pengembang n-heksana – diklorometan - etil
asetat -metanol dengan sistem elusi gradien
kepolaran meningkat. Hasil fraksi dianalisis
dengan KLT silika gel GF254 menggunakan
pengembang etil asetat:diklorometan (8:2)
dapat dikelompokkan menjadi 16 fraksi (EC1,
EC2, EC3,….E C16). Hasil KLT ini juga
menunjukkan bahwa fraksi EC14
mengandung flavonoid setelah disemprot
dengan AlCl3 5%, dan selanjutnya dilakukan
pemisahan dengan metode kromatografi
kertas (whatman no.4) dengan pengembang
etil asetat:metanol:air (1:2:7). Pada
kromatogram diketahui bahwa fraksi EC14
memiliki 5 pita, dan selanjutnya
diidentifikasi menggunakan penampak
bercak AlCl3 5% dan diketahui pita 3 (Rf
0,6) adalah senyawa golongan flavonoid. Pita
3 selanjutnya dipisahkan dan dilakukan uji
kemurnian.
Uji Kemurnian
Pada uji kemurnian pita 3 digunakan
metode KLT dengan silika gel GF254 dan
pengembang yaitu etil asetat : kloroform :
metanol (2:2:6) (Rf 0,8); etil asetat:metanol
(3:7) (Rf 0,8); etil asetat : aseton : metanol
(1:4:5) (Rf 0,8); dan kloroform : metanol
(95:5) (Rf 0,2). Hasil uji kemurnian ini
menunjukkan bahwa isolat telah murni dan
merupakan senyawa golongan flavonoid.
Karakterisasi dan elusidasi struktur
Isolat flavonoid murni dikarakterisasi
menggunakan spektrofotometer UV-Vis dan
FTIR. Karakterisasi menggunakan
sepktrofotometer UV dengan pereaksi geser
bertujuan untuk mengetahui letak gugus
hidroksi bebas pada inti senyawa flavonoid
dengan cara mengamati pergeseran puncak
6
serapan yang terjadi . Pereaksi geser yang
Chem Info

Vol 1, No 1, Hal 94 - 100 , 2013

digunakan adalah natrium hidroksida, Tabel 3: Absorbansi dan panjang gelombang isolat
alumunium klorida, asam klorida, natrium flavonoid dengan pereaksi geser AlCl3 dan AlCl3/HCl
isolat+ + AlCl3 + AlCl3/HCl
asetat dan asam borat. Berdasarkan data metanol (nm) (nm)
spektrofotometer UV-Vis terdapat dua pita (nm)
serapan maksimum yaitu 335 nm (Pita I) dan Pita I 335,0 380,0 351,0
274 nm (Pita II) yang diketahui sebagai (0,125 A) (0,084 A) (0,109 A)
Pita II 274,0 280,0 276,0
Flavon atau Flavonol (3-OH tersubstitusi/3- (0,436 A) (0,465 A) (0,531 A)
6
OH bebas) .
Jenis gugus fungsi dalam isolat flavonoid
diidentifikasi dengan spektrometer FTIR.
Spektra dapat dilihat dalam gambar 5.

Gambar 4. Spektra UV isolat flavonoid dari ekstrak

etil asetat daun T.muelleri dengan penambahan
pereaksi geser.

Tabel 1: Absorbansi dan panjang gelombang isolat

flavonoid dengan pereaksi geser natrium hidroksida.
Isolat+ + NaOH + NaOH 5
metanol (nm) menit
(nm) (nm)
Pita I 335,0 332,0 332,0 Gambar 5. Spektrum IR isolat flavonoid dari ekstrak
(0,125 A) (0,359 A) (0,322 A) etil asetat daun T.muelleri
Pita II 274,0 276,0 278,0
(0,436 A) (0,386 A) (0,360 A) Hasil analisis menunjukkan bahwa
isolat memiliki pita serapan pada bilangan
Tabel 2: Absorbansi dan panjang gelombang isolat -1
flavonoid dengan pereaksi geser NaOAc dan
gelombang 3209,55 cm yang menunjukkan
NaOAc/H3BO3.
adanya gugus hidroksil yang dapat
Isolat+ metanol + NaOAc + NaOAc/
membentuk ikatan hidrogen (OH); bilangan
-1
(nm) (nm) H3BO3 gelombang 3174,83 cm menunjukkan
(nm) adanya gugus C-H aromatic; bilangan
Pita I 335,0 323,0 341,0 -1
gelombang 2920,23 cm menunjukkan
(0,125 A) (0,306 A) (0,160 A)
Pita II 274,0 277,0 274,0
adanya gugus C-H asimetri; bilangan
-1
(0,436 A) (0,284 A) (0,315 A) gelombang 2856,58 cm menunjukkan
adanya gugus C-H simetri; bilangan
-1
gelombang 1708,93 cm menunjukkan
adanya gugus karbonil (C=O); bilangan
-1 -1
gelombang 1514,42 cm dan 1502,55 cm
menunjukkan adanya gugus C=C aromatik;
-1
bilangan gelombang 1452,40 cm
menunjukkan adanya gugus C-H tekuk;

98
Chem Info

Vol 1, No 1, Hal 94 - 100 , 2013

-1
bilangan gelombang 1390,68 cm dan Tabel 4: Rata-Rata Diameter Hambat Pada
-1 Konsentrasi Ekstrak dan Fraksi
1357,89 cm menunjukkan adanya gugus Rata-Rata Diameter hambat (mm)
-
OH tekuk; bilangan gelombang 1041,56 cm Sampel Uji S. epidermidis P. aeruginosa
1
menunjukkan adanya gugus C-O eter;
-1 Ekstrak etil asetat 0,5% - 14±1,0
bilangan gelombang 952,84 cm Ekstrak etil asetat 1% 12.7±3,21 16,3±3,5
menunjukkan adanya substitusi cincin Ekstrak etil asetat 5% 19,7±2,51 29,7±4,1
benzena pada posisi meta; bilangan Ekstrak etil asetat 10% 23±2,0 23,7±3,5
-1 Fraksi EC14 0,5% - 10,3±4,9
gelombang 877,61 cm menunjukkan Fraksi EC14 1% - -
adanya substitusi cincin benzena pada posisi Fraksi EC14 5% 11 ± 2,1 13,3±3,0
-1 Fraksi EC14 10% 12,3±2,1 16,3±2,5
para dan bilangan gelombang 761,88 cm
menunjukkan adanya substitusi cincin Tetrasiklin 36±6,3 35±6,2
Etanol 96% - -
benzena pada posisi orto.
Keterangan :Tetrasiklin (kontrol positif), etanol 96%
Berdasarkan hasil analisis menggunakan (kontrol negatif).15-20 mm: daya hambat kuat; 10-14
spektrofotometer UV-Vis dan FTIR dapat mm: daya hambat Sedang; 0-9 mm: daya hambat
11
diusulkan bahwa senyawa flavonoid yang lemah .
berhasil diisolasi dari ekstrak etil asetat daun
T. muelleri adalah 3,5,7,8,4’
pentahidroksiflavon (Herbasitin) dan KESIMPULAN
strukturnya dapat terlihat dalam Gambar 6.
1. Senyawa flavonoid dari ekstrak etil asetat
daun Terminalia muelleri Benth. berupa
serbuk berwarna kuning dengan rendemen
0,14% dan diidentifikasi sebagai senyawa
Herbasitin.
2. Ekstrak etil asetat daun T.muelleri (1%)
dan fraksi EC14 (5%) dapat menghambat
Gambar 6. Struktur senyawa 3,5,7,8,4’ Pentahidrok- pertumbuhan bakteri Staphylococcus
6
siflavon (Herbasitin) . epidermidis dan Pseudomonas aeruginosa
dengan kekuatan daya hambat sedang.
Uji aktivitas antibakteri
Uji antibakteri dilakukan terhadap DAFTAR PUSTAKA
ekstrak etil asetat dan fraksi EC14. Uji ini
menggunakan bakteri Staphylococcus 1. Anam, K., A.G. Suganda, E.,Y. Sukandar
epidermidis dan Pseudomonas aeruginosa dan Kardono, L.Broto S., 2009,
3
dengan metode cakram . Antimicrobial Activity of Terminalia
Berdasarkan hasil uji antibakteri muelleri Benth. leaves. Indonesia, J. Nad.
diketahui bahwa ekstrak etil asetat dan fraksi Prod., 7: 40-43.
Ec14 bersifat menghambat pertumbuhan 2. Anam, K., A.G. Suganda, E.Y. Sukandar
bakteri Staphylococcus epidermidis dan dan Kardono, L.Broto S., 2010,
Pseudomonas aeruginosa. Daya hambat Antibacterial Effect of Component of
ekstrak dan fraksi memiliki kekuatan yang
11 Terminalia muelleri Benth. against
sedang . Hasil ini dapat terlihat dalam tabel Staphylococcus aureus, International
4. Journal of Pharmacology, 6 (4): 369-374. 3.
Departemen Kesehatan, 1989, Materia
Medika Indonesia, Jilid V, Direktorat

99
Chem Info
Vol 1, No 1, Hal 94 - 100 , 2013
Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan,
Jakarta.
4. Farnsworth, N.R., 1966, Biological and
Phytochemical Screening of Plants,
Journal of Pharmaceutical Sciences, 55,
245-265.
5. Lemmens, R.H.M.J. dan N. Wulijarni-
Soetjipto, 1992. Prosea: Plant Resources
of South-East Asia. Pudoc, Wageningen,
The Netherlands, pp: 23.
6. Markham, K.R., 1988, Techniques of
Flavonoid Identification, Academic Press
Inc (LTD). London.
7. Masoko, P., J. Picard dan J.N. Eloff,
2005, The Diversity Antifungal activities
of six south African Terminalia species
(Combretaceae), J. Ethnopharmacol., 99:
301-308.
8. Mostafa, M.G., Rahman M., dan Karim
M.M., 2011, Antimicrobial activity of
Terminali Chebula, Int. J. Med. Arom
Plants, ISSN 2249-4340, Vol.1 No.2, pp
175-179
Pembimbing I
Dr. Khairul Anam, M.Si.
NIP. 19681104 199403 1 002
100
9.Muschietti, L., D. Marcos, V. Sülsen, J.D.
Muñoz, G. Ferraro, S. Zacchino dan V.
Martino, 2005, In vitro antifungal assay of
traditional argentine medicinal plants. J.
Ethnopharmacol., 102: 233-238.
10.Nanakorn, W., 1985, The genus terminalia
(Combretaceae) in Thailand, Thai Forest
Bull. Bot., pp: 59-107.
11.Nazri Mohd,N.A.A, Ahmat,N, Adnan,A,
Mohamad Syed,S.A, dan Ruzaina
Syaripah, S.A., 2011, In Vitro
Antibacterial and Radical Scavenging
Activities of Malaysian Table Salad,
African Journal of Biotechnology
Vol.10(30).
12.Saroja,M, R,Santhi, dan S,Annapoorani,
2011, Antioxidant Activity of Phenolic of
Terminalia Catappa in Ela Propagated
Swiss Albino Mice, Journal of Advanced
Scientific Research 2(3): 70-72
Semarang, Desember 2012
Pembimbing II
Dra. Dewi Kusrini, M.Si.
NIP. 19570807 198703 2 001