Vektora Volume 6 Nomor 1, Juni 2014: 13 - 18

ISOLASI Bacillus thuringiensis DARI BERBAGAI HABITAT

DI KABUPATEN DAN KOTA MAGELANG DAN PATOGENITAS
TERHADAP JENTIK NYAMUK Aedes aegypti

Esti Rahardianingtyas, Rendro Wianto

Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Vektor dan Reservoir Penyakit, Salatiga
Email: rahardian.esti@gmail.com

ISOLATION OF Bacilllus thuringiensis FROM DIFFERENT HABITS

IN THE DISTRICT MAGELANG AND MAGELANG MULTICIPALITY AND PATHOGENICITY
AGAINST Aedes aegypti LARVAE

Abstrak
Demam berdarah dengue (DBD) masih merupakan masalah kesehatan di Indonesia. Salah satu upaya
pengendalian vektor penyakit tersebut adalah pengendalian terhadap jentik Aedes aegypti menggunakan
Bacillus thuringiensis yang efektif dan aman bagi lingkungan. Tujuan penelitian adalah untuk mengisolasi
dan mengidentifikasi B. thuringiensis yang toksik terhadap jentik nyamuk Ae. aegypti di berbagai lokasi
di Kabupaten dan Kota Magelang. Dua puluh enam sampel tanah diambil dari 10 lokasi diisolasi dan
diidentifikasi.di laboratorium mikrobiologi, B2P2VRP Salatiga diperoleh 40 isolat B thuringiensis, dimana
29 isolat yang didapat memiliki toksisitas ˃50% terhadap jentik nyamuk Ae. aegypti sedangkan sebelas isolat
yang didapat memiliki toksisitas ˂50% terhadap jentik nyamuk Ae. aegypti. Isolat dengan toksisitas 90%
diisolasi dari sampel tanah yang diambil dari habitat makam. Perlu dilakukan penelitian uji serologi dari
isolat yang patogenisitasnya ˃50%.

Kata kunci: Habitat, Isolasi, B. thuringiensis, Ae. aegypti

Abstract
Dengue hemorrhagic fever (DHF) is still a health problem in Indonesia, transmited by Aedes aegypti. One
of vector control method against Aedes aegypti larvae has conducted using Bacillus thuringiensis due to safe
for the environment. The objectives of this study was to isolate and identify B. thuringiensis which toxic to Ae.
aegypti larvae at various habitat and ecosystem in the District Magelangand magelang multicipality. Twenty-
six soil samples collected from 10 locations were isolated and identified in the microbiology laboratory, Institute
for Vector and Reservoir Control Research and Development, Central Salatiga. Twenty-six soil samples and
40 isolates were identified positive of B thuringiensis, 29 isolates had ˃50% toxicity and 11 isolates had ˂50%
toxicity. Isolate with 90% toxicity were isolated from resting place ecosystem.Serological research needs to be
conducted to identify the pathogenicity of isolates with ˃ 50% toxicity against Ae. aegypti larvae.

Keywords: Habitat, Isolation, B. thuringiensis, Ae.aegypti

Submitted: 17 Maret 2014, Review 1: 13 April 2014, Review 2: 1 Mei 2014, Eligible article: 25 Mei 2014

PENDAHULUAN bahkan menimbulkan kematian dan sering terjadi kejadian

Kasus demam berdarah dengue (DBD) dilaporkan luar biasa. Pada tahun 2004, kasus DBD dilaporkan di 334
pada tahun 1968, dan sampai saat ini masih menjadi Kabupaten/Kota di Indonesia, tahun 2007 terjangkit di 465
masalah kesehatan bagi masyarakat Indonesia. Pre­va­lensi dan tahun 2009 meluas lagi menjadi 497 Kabupaten Kota.
penyakit tersebutdilaporkan selalu meningkat setiap tahun (Pusat Data Survelence Epidemiologi, 2010)

13

Demam berdarah dengue disebabkan oleh virus
dengue, ditularkan oleh nyamuk vektor, Aedes aegypti
dan Aedes albopictus. (Direktorat Jenderal Pengendalian
Penyakit Dan Penyehatan Lingkungan, 2008) Upaya
penangulangan DBD selama ini dilakukan dengan
pengendalian nyamuk vektor, baik stadium dewasa
maupun jentiknya. (Direktorat Jenderal Pengendalian
Penyakit Dan Penyehatan Lingkungan, 2008)
Upaya pengendalian jentik cukup efektif dan aman
bagi masyarakat dan lingkungan menggunakan Bacillus
thuringiensis. B. thuringiensis merupakan bakteri gram
positif dan bersifat fakultatif anaerob (Bahagiawati.
2002). Sejumlah strain B. thuringiensis menunjukkan
aktif mengendalikan inverterbrata khususnya larva
dari insekta ordo Lepidoptera, Diptera, Coleoptera dan
Nematoda (WHO, 1999). Sifat patogen B. thuringiensis
berasal dari kristal protein mengandung toksin (di
Alam masih bersifat protoksin), karena adanya aktivitas
proteolisis dalam sistem pencernaan serangga. Protoksin
ini berubah menjadi polipeptida yang lebih pendek
dan bersifat toksin. Toksin aktif berinteraksi dengan
sel-sel epithelium di midgut serangga. Interaksi ini
menyebabkan terbentuknya pori-pori pada sel membran
saluran pencernaan dan mengganggu keseimbangan
osmotik sel tersebut. Keseimbangan osmotic sel
terganggu, sehingga terjadi pembengkakan dan pecah,
menyebabkan kematian serangga (Hofte, H and H.R.
whitely, 1989).
Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Vektor
dan Reservoir Penyakit (B2P2VRP) telah berhasil
mengisolasi B. thuringiensis H-14 isolat Salatiga da­
ri tanah di wilayah Kota Salatiga, dan diketahui
tok­­si­­sitasnya tinggi terhadap jentik Ae. aegypti,
An. aconitus dan Cx.quenquefasciatus (Blondine,
2003). Keanekaragaman flora dan fauna Indonesia,
memungkinkan adanya isolat dari B. thuringiensis yang
memiliki toksisitas tinggi. Berdasarkan latar belakang
tersebut, penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan
mengidentifikasi B. thuringiensis memiliki toksisitas
yang tinggi terhadap jentik nyamuk vektor DBD.
BAHAN DAN METODE
Penelitian dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi
B2P2VRP Salatiga dengan jenis penelitian eksperimental
murni. Populasi digunakan dalam penelitian ini adalah
jentik Ae. aegypti instar III akhir, hasil pemeliharaan
di laboratorium B2P2VRP. Pengambilan sampel pada
kelompok perlakuan dan kontrol dilakukan secara
com­pletely randomized sampling. Hal ini disebabkan
percobaan bersifat homogen. Randomisasi dilakukan
dengan menempatkan perlakuan secara random terhadap
unit percobaan. (Finney,D.J.,”1971)
14
Isolasi Bacillus Thuringiensis dari Berbagai ... (Esti Rahardianingtyas, et. al)
Ulangan atau replikasi
Banyaknya ulangan untuk uji patogenisitas dihitung
menurut rumus (Kemas,A.H.1993) sebagai beri­kut:
(t – 1) (r – 1) > 15
(9 – 1) (r – 1) > 15
r > 2.8 ~ 3
Keterangan:
t = jumlah perlakuan
r = jumlah ulangan
Cara Kerja
1. Pengambilan sampel tanah
Pengambilan sampel dilakukan sebagai berikut
: permukaan tanah yang akan diambil sebagai sampel
dibersihkan dari rumput, kerikil dan akar tanaman,
kemudian dibuat lubang diameter 5 – 10 cm dan
kedalaman sampai 10 cm dari permukaan dan dilakukan
pengukuran pH tanah. Sampel tanah diambil 10 – 20
gram, disimpan di kantong plastik dan diberi label berisi
keterangan: kode/ No. Urut pengambilan tanah, tanggal
pengambilan, kode habitat, lokasi dan pH. Sampel tanah
disimpan dalam box pada temperatur kamar.
2. Proses Isolasi B. thuringiensis
Proses isolasi dilakukan dengan cara menimbang
satu gram sampel tanah, kemudian ditambah 10 ml air
suling dan didiamkan selama 5-6 menit. Dari sampel
tesebut dibuat seri pengeceran 10-1 – 10-5, kemudian
ma­sing-masing dipanaskan pada suhu 700 C selama
15 menit. Tujuan dipanaskan untuk menghambat per­
tum­buhan bakteri non spora seperti Pseudomonas,
Proteus dan Coliform. Masing-masing seri pengeceran
diinokulasikan pada media agar nutrien ( NA) berisi
bahan bacto beef exctract 3 gram, bacto peptone 5 gram
dan bacto agar 15 gram per 1 liter aquadest), kemudian
diinkubasikan selama 48 jam pada suhu 300C. Koloni
tersangka B. thuringiensis dilakukan pengecatan de­
ngan menggunakan metode Chilcott & Wigley (1988)
untuk mendeteksi kristal protein. Cara pengecatan
ada­lah dengan membuat preparat olesan dari koloni
patogen, ditetesi dengan “Naphtalen black” selama
2 menit dan “Gurr’s improved R66 Giemsa” selama
1 menit. Dilakukan pengamatan dibawah mikroskop
pada perbesaran 1000 kali, untuk melihat adanya kristal
protein. Koloni terdeteksi adanya positif, dibuat biakan
murni pada media agar nutrien dan diinkubasi pada suhu
300C selama 48 jam.
3. Uji Hayati (Bioassay Test)
Diambil 2 ose penuh kultur murni dari media NA
dan dimasukkan ke dalam gelas gojog ukuran 250 ml
Vektora Volume 6 Nomor 1, Juni 2014: 13 - 18
yang diisi dengan 50 ml TPB, sampel tersebut digojog
dengan menggunakan penggojog pada suhu kamar
selama 48 jam. Sebanyak 15 ml sampel (sudah digojog)
dimasukan ke dalam mangkok plastik diisi dengan 150
ml air suling dan 20 ekor jentik Ae. aegypti instar III
akhir. Kontrol disiapkan mangkok plastik diisi dengan
150 ml air suling dan 20 ekor jentik Ae. aegypti instar
III. Ulangan dilakukan sebanyak 3 kali. Pengamatan
kematian jentik dilakukan setelah ke-24 pemaparan
Perhitungan persen kematian jentik Ae. aegypti uji
dilakukan dengan rumus:
Jumlah jentik mati
x 100 %
Jumlah jentik uji
Apabila kematian jentik pada kontrol 5-20%, angka
kematian jentik uji dikoreksi dengan rumus Abbott:
AK (%) Uji – AK (%) Kontrol
AKk (%) = ------------------------------------- x 100
100 % - AK (%) Kontrol
Keterangan:
AKk : Angka Kematian koreksi
AK : Angka Kematian jentik
Analisis dilakukan secara diskriptif berdasar hasil uji
patogenitas
HASIL
Hasil penelitian diperoleh 40 isolat positif B.
thuringiensis dari 26 sampel tanah diisolasi, yaitu 7
isolat dari Desa Blondo, Kabupaten Mungkid (tanah
makam/bawah pohon beringin (Ficus benjamina),
kebun rambutan/lubang pohon (Nephelium lappaceum)/
lubang pohon jengkol (Pothecellobium jiringa), lubang
pohon kelengkeng (Dimocarpus longan), 1 isolat
dari Desa Bumirejo, (kebun rambutan/lubang pohon
rambutan), 5 isolat dari Desa Mendut, (tempat wisata
Mendut/lubang pohon beringin, 5 isolat dari Desa
Tingal kulon, Wanurejo Borobudur ( kebun ketela pohon
(Manihot utilissima)/lubang pohon beringin,lubang
pohon sonokeling (Dalbergia latifolia),lubang pohon
kelapa (Cocos nucifera) 2 isolat dari Desa Mungkidan,
Danurejo (perkantoran.lubang pohon beringin), 2
isolat dari Desa Ngadiarum, Soropadan (perkantoran
dan lapangan tembak/bawah pohon trembesi), 5 isolat
dari Desa Ngadirejo 3, Salaman (tanah makam/bawah
pohon jangkang (Sterculia foetida), celah bawah pohon
beringin), 3 isolat dari Desa Kajoran (tanah makam/
bawah pohon trembesi (Albizia saman), kebun salak
(Salacca zalacca)/tanah pohon suren (Toona sinensis)
mati, 9 isolat dari Desa Tegalsari, Bandongan (Tanah
makam/celah bawah pohon beringin dan bulunya,
lubang pohon pakis (Diplazium esculentum), di atas
pohon mindi (Melia azedarach), 1 isolat dari lokasi
alun-alun Kota Magelang (lapangan atau alun-alun/
lubang pohon beringin.
Isolasi 11 sampel tanah dari ekosistem makam
diper­oleh 20 isolat, 9 sampel tanah dari ekosistem
per­kebunan diperoleh 10 isolat, 3 sampel tanah dari
ekosistem candi mendut diperoleh 5 isolat, 2 sampel
tanah dari ekosistem perkantoran diperoleh 4 isolat,
1 sampel tanah dari ekosistem lapangan diperoleh 1
isolat. Hasil pengujian patogenisitas menunjukkan
29 isolat dengan patogenisitas ˃50 % (51,11% -90%)
dan 11 isolat ˂50 % (0% – 48,89 %) terhadap jentik
Ae. aegypti. Sembilan belas isolat yang memiliki
patogenisitas ˃50% diisolasi dari ekosistem makam,
6 isolat dari ekosistem kebun, 3 isolat dari ekosistem
perkantoran dan 2 isolat dari ekosistem taman wisata
candi mendut. Empat isolat memiliki patogenisitas
˂50% diisolasi dari ekosistem perkebunan, 3 isolat dari
ekosistem Candi Mendut, 2 isolat dari ekosistem makam
dan masing-masing 1 isolat dari ekosistem perkantoran
dan lapangan/alun-alun. Isolat hasil isolasi dari eko­
sis­tem makam memiliki toksisitas 90% sedangkan
isolat yang diisolasi dari ekosistem lapangan memiliki
toksisitas 0%. Patogenisitas dua isolat diperoleh dari
pemeriksaan satu sampel tanah di lokasi perkantoran
Mungkid memiliki toksisitas 63,33% dan 10 %. Hasil
serupa juga ditunjukkan oleh pemeriksaan isolat sampel
tanah diambil dari kebun salak, kajoran (66,67 % dan
46,67 %).
PEMBAHASAN
Sampel tanah dalam penelitian ini diambil dari
habitat pohon karena tanah merupakan habitat alami B.
thuringiensis. Spora B. thuringiensis mampu bertahan
lama di tanah dan akan berkecambah jika terdapat
nutrisi (Martin & Travers, 1989). Tanah di bawah pohon,
cabang dan lubang pohon sudah tua, tanah becek, tempat
perkembangbiakan jentik nyamuk maupun jentik sakit
merupakan sampel tanah digunakan untuk isolasi B.
thuringiensis (Blondine, 2013).
Hasil pemeriksaan terhadap sampel tanah di lokasi
berbeda dengan habitat sama menunjukkan perbedaan
jumlah isolat diperoleh. Perbedaan tersebut dikarenakan
kondisi lingkungan berbeda, seperti: pH tanah, suhu dan
kelembaban udara serta cahaya matahari mempengaruhi
perkembangan dan keberadaan B. thuringiensis pada
habitat tertentu (Khetan, S.K., 2001). Tersedianya
15
 Isolasi Bacillus Thuringiensis dari Berbagai ... (Esti Rahardianingtyas, et. al)

Tabel 1. Hasil uji patogenisitas B. thuringiensis dari berbagai habitat tanah di Kabupaten dan Kota Magelang
terhadap jentik Ae. aegypti
Jumlah Uji Patogenisitas
No Ekosistem Habitat
Sampel Isolat Positif I II
1 Makam Pohon Beringin        
- Bawah pohon beringin 4 8 8 (53,33 -76,67)  
- Lubang pohon beringin 1 1 1 (66,67)  
Pohon Pakis        
- Lubang pohon pakis 2 6 5 (63,33-90,0) 1 (23,33)
Pohon Mindi        
- Atas pohon mindi 1 2 2 (73,33-86,67)  
Pohon Jangkang        
- Bawah pohon jangkang 2 2 1 (80,0) 1 (46,67)
Pohon Mahoni        
- Bawah pohon mahoni 1 1 1 (60,0)  
2 Perkebunan Pohon Jengkol        
- Lubang pohon jengkol 1 1   1 (6,67)
Pohon Kelengkeng        
- Lubang pohon kelengkeng 1 1   1 (20,0)
Pohon Rambutan        
- Lubang pohon rambutan 1 1 1 (75,56)  
Pohon Suren        
- Tanah pohon suren mati 1 2 1 (66,67) 1 (46,67) 
Pohon Beringin        
- Lubang pohon beringin 2 2 1 (71,11), 1 (33,33)
Pohon Sonokeling        
- Lubang pohon sonokeling 2 2 2 (51,11-82,22)  
Pohon Kelapa         
- Lubang pohon kelapa 1 1 1 (60,0)  
3 Candi Mendut Pohon Beringin        
-  Lubang pohon beringin 3 5 2 (57,76-60,0) 3 (35,56-48,89) 
4 Perkantoran Pohon Beringin        
-  Lubang pohon beringin 1 2 1 (63,33) 1 (10,0) 
Pohon Trembesi        
 - Bawah pohon trembesi 1 2 2 (63,33-76,61)  
5 Lapangan / alun-alun Pohon Beringin        
 - Lubang pohon beringin 1 1   1(0,0)
  26 40 29 (51,11-86,67) 11 (6,67-48,89)
I = Jumlah isolat dengan kematian jentik nyamuk selama 24 jam ˃50%
II = Jumlah isolat dengan kematian jentik nyamuk selama 24 jam ˂50%

16
Vektora Volume 6 Nomor 1, Juni 2014: 13 - 18
nutrisi juga merupakan salah satu faktor populasi
B. thuringiensis ada di alam. (F. Al Momami and M.
Obeidat, 2011)
Perbedaan patogenisitas isolat dari habitat ber­
beda atau sama disebabkan perbedaan serotipe B.
thu­ringiensis. Perbedan kondisi lingkungan masing-
masing habitat mempengaruhi variasi genetik B thu­
ringiensis (F. Almomami and M. Obeidat, 2011).
WHO (1999) telah dilaporkan bahwa B thuringiensis
memiliki 67 serotipe yang diklasifikasikan secara
fenotipe berdasarkan sequence dari gen penyandi
produksi kristal protein toksin. Kristal protein berbeda
berpengaruh terhadap suseptibilitas inang dan toksisitas
serotipe B. thuringiensis. Berdasar komposisinya B.
thuringiensis mempunyai bentuk kristal protein toksin
bervariasi (WHO,1999). Kristal protein toksik terhadap
ordo Diptera berbentuk lonjong, kubus, jajaran genjang
dan bulat (Gholamreza et all, 2007). Perbedaan jumlah
kristal protein toksin dimakan jentik juga merupakan
faktor penyebabkan perbedaan patogenisitas. Jentik
Ae.aegypti mempunyai kebiasaan makan di dasar
habitat perkembangbiakan sehingga perbedaan tingkat
pengendapan membuat kristal protein toksin yang ada
di zona makan jentik berbeda (Blondine Ch P dan Umi
Widiastuti, 1994).
KESIMPULAN
Dua Puluh Enam sampel tanah diisolasi dan
diidentifikasi diperoleh 40 isolat B thuringiensis, dimana
29 isolat yang didapat memiliki toksisitas ˃50% terhadap
jentik nyamuk Aedes aegypti sedangkan sebelas isolat
yang didapat memiliki toksisitas ˂50% terhadap jentik
nyamuk Aedes aegypti.
SARAN
Perlu dilakukan penelitian uji serologi dari isolat
yang patogenisitasnya ˃ 50%.
UCAPAN TERIMA KASIH
Dengan selesainya penelitian ini kami mengucapkan
terima kasih kepada Dra. Blondine Ch P, M.Kes, Kepala
Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Vektor dan
Reservoir Penyakit di Salatiga, Kepala Dinas Kesehatan
Kabupaten Magelang atas bantuan dan fasilitas da­
lam pelaksanaan penelitian. Ucapan terima kasih,
disampaikan juga kepada semua pihak yang telah aktif
membantu dalam pelaksanaan penelitian ini.
DAFTAR PUSTAKA
Bahagiawati. 2002. Penggunaan Bacillus thuringiensis
Sebagai Bioinsektisida. Bulletin AgroBio.
5(1):21-28
Blondine Ch. P, 2013. Efikasi Bacillus Thuringiensis 2
Isolat Serotipe H-10 Galur Lokal Terhadap Jentik
Nyamuk Aedes Aegypti Dan Anopheles Aconitus.
Jurnal Vektora. Vol 5, No.1: 28-33
Blondine Ch. P dan Umi Widiastuti. 1994. Pencarian
dan Isolasi Serta Peengujian Potensinya Sebagai
Pengendali Jentik Nyamuk. Buletin Penelitian
Kesehatan.22(1): 18 - 24.
Blondine Ch. P, Widyastuti U, Widiarti, Sukarno,
Subiantoro.1998/1999. Uji Serologi Isolat
Bacillus thuringiensis dan Patogenisitasnya
Terhadap Jentik Nyamuk Vektor Buletin
Penelitian Kesehatan. 26 (2 &3): 91-98.
Direktorat Jenderal Pengendalian Penyakit Dan
Penyehatan Lingkungan, 2008, Modul Pelatihan
Bagi Pelatih Pemberantasan Sarang Nyamuk
Demam Berdarah Dengue (Psn-DBD) Dengan
Pendekatan Komunikasi Perubahan Perilaku
(Communication For Behavioral Impact),
Kementerian Kesehatan RI, Jakarta
F. Al. Momami and M. Obeidat, 2011. Abundance and
Serotyping of pathogenic isolates of Bacillus
thuringiensis isolated from Ajloun Forests.
Journal Of Biodiversity and Ecologycal Science.
Vol 1, issue 4:16-21
Finney,D.J.,”1971. Probit Analysis”, 3 rd,ed.,Cambridge
Univ.Press.London.
Gollamreza Salehi Jouzani, Ali Pourjan Abad, Ali
Seifinejad, Rasoul Marzban, Khalil Kariman
and Bahram Maleki, 2007. Distribution And
Diversity Of Dipteran-Specific Cry And Cyt
Genes In Native Bacillus thuringiensis Strain
Obtained From Different Ecosystem Of Iran. J
Ind Microbiol Biotechnol (2008) 35: 83-94
Hofte, H and H.R. whitely, 1989. Insecticidal Crystal
Protein Of Bacillus thuringiensis. Microbial.
53:42-255
Kemas,A.H.1993. Rancangan Percobaan Teori dan
Aplikasi. Rajawali Press, Jakarta
Khetan, S.K., 2001. Microbial Pest Control. Marcel
Dekker, Inc. USA
Phyllis A. W. Martin and Russell S. Travers, 1989.
Applied And Environmental Microbiology. Vol.
55, No. 10 P. 2437-2442
17
 Isolasi Bacillus Thuringiensis dari Berbagai ... (Esti Rahardianingtyas, et. al)

Pusat Data Survelence Epidemiologi, 2010, Buletin WHO, 1999. Microbial Pest Control Agent “Bacillus
Jendela Epidemiologi. Kementrian kesehatan RI, Thuringiensis”.WHO, Jeneva.
Jakarta .

18