Kromatografi kolom adalah kromatografi yang menggunakan kolom sebagai alat untuk

memisahkan komponen-komponen dalam campuran.

Prinsip Kerja Kromatografi Kolom didasarkan pada absorbsi komponen-komponen campuran

dengan afinitas berbeda terhadap permukaan fase diam.

• Absorben bertindak sebagai fase diam dan fase geraknya adalah cairan yang mengalir
membawa komponen campuran sepanjang kolom.

• Sampel yang mempunyai afinitas besar terhadap absorben akan secara selektif tertahan dan
afinitasnya paling kecil akan mengikuti aliran pelarut.

Kromatografi lapis tipis (KLT) adalah cara pemisahan campuran senyawa menjadi senyawa
murninya dan mengetahui kuantitasnya yang digunakan. Kromatografi lapis tipis dapat
digunakan untuk memisahkan senyawa – senyawa yang sifatnya hidrofobik seperti lipida – lipida
dan hidrokarbon yang sukar dikerjakan dengan kromatografi kertas.

Prinsip kerja Kromatografi Lapis Tipis (KLT):

• KLT menggunakan sebuah lapis tipis silika atau alumina yang seragam pada sebuah lempeng
gelas atau logam atau plastik yang keras.

• Gel silika (atau alumina) merupakan fase diam.

• Fase gerak merupakan pelarut atau campuran pelarut yang sesuai.

• Pelaksanaan ini biasanya dalam pemisahan warna yang merupakan gabungan dari beberapa zat
pewarna.

Dari uraian di atas maka dapat disimpulkan perbedaan dari kromatografi lapis tipis dan
kromatografi kolom yaitu:

 Kromatografi Lapis Tipis menggunakan alumina atau silika gel sebagai fase diamnya,
sedangkan kromatografi kolom menggunakan kolom yang dikemas dengan bahan matriks
yang cocok sebagai fase diamnya.
 Kromatografi lapis tipis didasarkan pada adsorpsi molekul padat-cair. Ini memiliki fase diam
yang biasanya terbuat dari alumina atau silika gel dan fase gerak yang merupakan pelarut.
 Kromatografi kolom menggunakan kolom yang dikemas dengan matriks yang digunakan
untuk memisahkan molekul terutama berdasarkan ukuran, afinitas, atau muatannya.
 Kromatografi lapis tipis didasarkan pada penyerapan padat-cair. Sedangkan Kromatografi
kolom didasarkan pada pengecualian ukuran, muatan, dan bentuk.
 Kromatografi lapis tipis: pewarnaan dan dengan menentukan faktor Retensi. Kromatografi
Kolom: Penentuan spektrofotometri.

Persamaan:

 Semua Teknik Lapisan Tipis Kertas dan Kolom Kromatografi digunakan untuk pemisahan
biomolekul seperti asam amino, protein dan karbohidrat. Kertas Lapisan Tipis dan Teknik
Kromatografi Kolom memiliki fase gerak dan fase diam. Kertas Lapisan Tipis dan Teknik
Kolom Kromatografi menggunakan mekanisme biofisik untuk pemisahan.