NAMA : NENDEN NURHAMIDAH

NPM : 5118011
Ringkasan materi chapter kelompok 6,7,dan 8

FIKSASI JARINGAN
1. Pendahuluan
Fiksasi merupakan suatu tahapan yang wajib dilalui baik untuk sediaan
histologik maupun sitologi. Fungsi dari fiksasi antara lain adalah menjaga sel
dari kerusakan struktural maupun kimiawi, pencegahan kematian sel akibat
postmortem ataupun autolisis, mengeraskan jaringan, memadatkan komponen
sel, peningkatan intensitas optical, peningkatan intensitas warna pada saat
proses pewarnaan dan pada kasus-kasus tertentu dapat membantu merekatkan
sel ke kaca sediaan.
fiksatif bertindak dengan meminimalkan kerugian atau kerusakan
enzimatik dari molekul seluler dan ekstraseluler, mempertahankan struktur
makromolekul dan melindungi jaringan dari kerusakan oleh mikroorganisme.
( Grizzle et al. 2001 ). Sebuah fiksatif juga harus mencegah kerusakan
berikutnya dari jaringan atau fitur molekul oleh aktivitas enzimatik atau oleh
mikroorganisme selama penyimpanan jangka panjang,
2. Jenis fiksasi
Fiksasi jaringan dapat dilakukan dengan dua metode yaitu :
a. metode fisik
Metode fisik dilakuakan dengan cara pemanasan, dan microwave.
Pemanasan microwave mempercepat fiksasi dan dapat mengurangi
waktu untuk fiksasi dari beberapa spesimen kotor dan bagian histologis
lebih dari 12 jam menjadi kurang dari 20 menit ( Anonymous 2001 ; Kok
& Boon 2003 ; Leong 2005 ).
Sedangkan fiksai panas adalah fiksasi yang paling sederhana dari bentuk
fiksasi.

b. Metode kimia
fiksasi kimia dilakukan dengan menggunakan larutan organik atau non-
organik untuk menjaga kelestarian morfologi yang memadai. fiksatif
kimia dapat dianggap sebagai anggota dari tiga kategori utama: koagulan,
silang, dan fiksatif senyawa ( Baker, 1958 ).
1. fiksatif koagulan
Kedua solusi organik dan non-organik dapat mengental protein, membuat
mereka tidak larut. arsitektur selular dipertahankan terutama oleh
 lipoprotein dan oleh protein berserat seperti kolagen; mengentalkan
protein seperti mempertahankan histomorphology jaringan di tingkat
mikroskopis cahaya. Sayangnya, karena fiksatif koagulan menghasilkan
flokulasi sitoplasma serta pelestarian miskin mitokondria dan butiran
sekretori, fiksatif tersebut tidak berguna dalam analisis ultrastructural.
2. fiksatif koagulan dehydrant
fiksatif mengentalkan paling umum digunakan adalah alkohol (misalnya
etanol, metanol) dan aseton. Metanol lebih dekat dengan struktur air dari
etanol. Oleh karena itu etanol bersaing lebih kuat daripada metanol dalam
interaksi dengan daerah hidrofobik molekul; dengan demikian, fiksasi
koagulan dimulai pada konsentrasi 50-60% untuk etanol tetapi
membutuhkan konsentrasi 80% atau lebih untuk metanol ( Lillie &
Fullmer 1976 ).
3. Jenis lain dari fiksatif koagulan
koagulan asam seperti asam pikrat dan perubahan asam trikloroasetat
biaya pada rantai samping terionisasi, misalnya (-NH 2 → NH 3+) dan
(COO - → COOH), protein dan mengganggu elektrostatik dan ikatan
hidrogen. Asam ini juga dapat menyisipkan anion lipofilik menjadi daerah
hidrofilik dan karenanya mengganggu struktur tersier protein ( Horobin
1982 ).
4. Non-koagulan fiksatif silang
Beberapa bahan kimia yang terpilih sebagai fiksatif sekunder untuk
tindakan potensi mereka membentuk cross-link dalam dan antara
protein dan asam nukleat serta antara asam nukleat dan protein.
5. fiksasi formalin
Formaldehida dengan konsenterasi 10% netral bentuk Buffered (NBF)
adalah fiksatif umum yang paling digunakan dalam patologi
diagnostic.
6. fiksasi glutaraldehid
Glutaraldehid adalah aldehida bifunctional yang mungkin
menggabungkan dengan kelompok reaktif yang sama seperti halnya
formaldehida. Dalam air polimerisasi solusi glutaraldehid, membentuk
siklik dan senyawa oligomer dan juga teroksidasi menjadi asam
glutara ( Hopwood 1969 ).
7. Osmium tetroksida fiksasi
8. Silang fiksatif untuk mikroskop electron
9. merkuri klorida.
3. Faktor yang mempengaruhi kualitas fiksasi
1. Buffer dan pH
Pengaruh pH pada fiksasi dengan formaldehida mungkin mendalam
tergantung pada aplikasi yang jaringan akan terkena. Buffer digunakan
 untuk mempertahankan pH optimal. Pilihan penyangga tertentu tergantung
pada jenis fiksatif dan analit.
2. Durasi fiksasi dan ukuran specimen
Durasi fiksasi bergantung pada beberapa factor dan bervariasi tergantung
dengan jenis agen fiksatif. Misalnya : ketebalan specimen jaringan.
3. Suhu fiksas
Peningkatan suhu pada semua reaksi kimia akan meningkatkan kecepatan
fiksasi.
4. Konsentrasi fiksatif
Efektivitas dan kelarutan terutama menentukan konsentrasi yang tepat
fiksatif. Konsentrasi formalin di atas 10% cenderung menyebabkan
peningkatan pengerasan dan penyusutan ( Fox et al. 1985 ).
5. Osmolalitas fiksatif dan komposisi ionic
6. Aditif
Penambahan elektrolit dan non-elektrolit untuk fiksatif meningkatkan
morfologi jaringan tetap. Aditif ini termasuk kalsium klorida, kalium
tiosianat, amonium sulfat, dan kalium dihidrogen fosfat. Elektrolit dapat
bereaksi secara langsung dengan protein menyebabkan denaturasi, atau
secara mandiri dengan fiksatif dan konstituen seluler ( Hayat 1981 ).
4. Fiksasi untuk jaringan individu yang dipilih
1. Mata
2. Otak
3. Payudara
4. Paru-paru
5. Jaringan limfoid
6. Testis
7. Biopsy otot dan ginjal
5. Memilih atau menghindari fiksatif tertentu
Masalah utama dengan fiksatif yang digunakan dalam pewarnaan histologi
adalah hilangnya oleh solusi / ekstraksi molekul yang menjadi sasaran metode
histokimia tertentu. Biasanya, beberapa molekul yang larut dalam fiksatif air
(misalnya glikogen), sementara yang lain larut dalam fiksatif organik berbasis
(misalnya lipid). Beberapa fiksatif mungkin kimiawi memodifikasi sasaran
pewarnaan histokimia dan dengan demikian mempengaruhi kualitas noda
khusus (misalnya glutaraldehid untuk noda perak); ini termasuk modifikasi
pewarnaan sekunder terhadap perubahan pH yang disebabkan oleh fiksasi.
6. formula berguna untuk fiksatif
1. fiksatif merkuri
Masalah dengan fiksasi dalam solusi merkuri adalah bahwa beberapa jenis
pigmen dapat menggabungkan dengan merkuri. Pigmen ini dikeluarkan
 dari bagian dengan menggunakan pengobatan yodium diikuti oleh natrium
tiosulfat.
2. fiksatif dikroma
3. fiksatif asam fikrat
4. Dehydrant fiksatif silang
fiksatif senyawa dengan kedua tindakan dehydrant dan silang termasuk
campuran alkohol-formalin. Alkohol-formalin fiksasi atau pasca-fiksasi
dapat menguntungkan dalam spesimen besar dengan lemak yang luas.
5. Untuk penyakit tulang metabolik
dapar fosfat 900 ml Formaldehida (37%) 100 ml
Menyesuaikan pH menjadi 7,35.
6. Fiksasi dan decalcifation
Jenuh larutan asam pikrat (10,5 g per 500 ml) 500 ml
Formaldehida (37%) 167 ml asam formiat 33 ml
7. Fiksasi untuk jaringan lemak
solusi Bouin ini 75 ml 95% etanol 25 ml Mungkin memerlukan hingga 48
jam untuk bagian yang baik dari lipoma atau Liposarkoma baik dibedakan.