Nama : Lia Fitria

NPM : 412118050
Kelas : IIB/D4-TLM

Cara kerja isolasi DNA

Sebelum melakukan protokol apapun ,pastikan bahwa ruangan kerja memiliki aliran yang
tepat untuk menghindari kontaminasi sampel atau reagen. Contoh ini dibuat untuk siswa yang
kidal.Tip dan pipet disebelah kiri, rak dan sampel ada di tengah dan ember buangan ada di
sebelah kanan
- Kit koleksi DNA genetik , menutup tabung untuk melepaskan buffer, dan mencampur
solusinya dengan inversi.
- Pada titik ini, tabung sampel tidak boleh diberi label untuk menjaga anonimitas siswa
selama proses genotyping. Menggunakan P1000 micropipet, 500 mikroliter ditransfer
dari masing-masing tabung pengumpulan ke tabung microsentrifuge baru .
- Saat melakukan pipet dalam volume besar, buat solusi perlahan untuk menghindari
gelembung atau mencemari micropipet.
- Setelah solusi ditransfer, tutup tabung dan tutup sampel (Ulangi proses ini untuk
semua sampel yang tersisa).
- Inkubasi sampel di heat block , blok panas harus diputar ke 50 derajat dan dihidupkan
dengan membalik saklar. Jika sedang panas, cahayanya akan menyala merah.
- Tempatkan sampel diblok panas.
- Inkubasi ini harus berjalan setidaknya selama 90 menit tetapi bisa juga dibiarkan
semalaman.
- Tabung berisi 20 mikroliter DNA genetik solusi pemurnian berpemilik. PrepiT akan
disediakan.
- Setelah sampel diinkubasi, transfer seluruh volume ke tabung yang mengandung
larutan pemurnian. Kalau larutan dalam tabug menjadi keruh, ini normal.
- Campur solusinya dengan vortex , untuk menghidupkan vortex , tekan saklar kebawah
untuk menyentuh dan putar kenop searah jarum jam untuk memastikan kecepatan
maksimum. Pegang satu tabung setiap kali dan tekan bagian atas pad hitam untuk
memulai getaran (Ulangi proses ini untuk semua sampel yang tersisa).
- Sematkan semua sampel dalam es selama 10 menit. Kotoran dalam solusi akan
dihapus oleh sentrifugasi.
- Setelah membalik saklar dibelakang microsentrifuge tekan tombol buka.
- Lepaskan tutup logam di dalam dengan menarik kenop.
- Pastikan tabung diberi label baik dengan huruf atau angka.
- Sebelum memasukannya ke sentrifuge. Muat sampel dengan engsel menghadap ke
luar dan menyeimbangkan tabung di rotor dengan memastikan bahwa semua tabung
memiliki volume yang sama. Pasang kembali tutup logam dan tekan sampai berbunyi
klik dengan aman. Tutup microsentrifuge dengan lembut. Ubah waktu sentrifuge
dengan menekan panah ke waktu yang diinginkan. Dalam hal ini, 5 menit. Tekan
panah dengan kecepatan untuk menavigasi ke RPM yang tepat. Dalam hal ini, 14.5
ribu RPM adalah masks yang dapat dilakukan oleh sentrifuge dan cukup dekat dengan
kecepatan yang kita inginkan.
 - Tekan tombol mulai. Sentrifuge akan mulai berputar .Pastikan tidak ada getaran keras,
yang mungkin berarti bahwa tabung tidak seimbang atau tutup internalnya terlepas.
Jika ini terjadi, tekan segera tombol stop.
- Saat putaran berputar, dapatkan empat tabung baru dan beri label.
- Saat putaran selesai, tutup sentrifuge akan terbuka. Lepaskan tutup internal dan
lepaskan sampel dengan lembut untuk menghindari mengganggu pellet.
- Tempatkan tabung dari sampel yang sama sejalan satu sama lain untuk memudahkan
transfer solusi.
- Setelah sentirugasi, lihat pellet putih yang telah terkumpul di bagian bawah dari
tabung di sisi engsel. Pellet ini mengandung kotoran dalam larutan. DNA ada di
supernatan. Menggunakan P1000, transfer 400 mikroliter supernatan yang berisi DNA
ke tabung baru.
- Tempatkan ujung di sisi tabung yang berlawanan dari pellet dan tarik perlahan untuk
menghindari gangguan. Ulangi proses ini untuk sampel yang tersisa

Cara kerja PCR

Sebelum memulai protokol ini, siswa harus mengisi lembar kerja yang disediakan halaman
terakhir dari dokumen ini memungkinkan siswa untuk menghitung volume pereaksi yang
tepat untuk dicampur dalam penciptaan koktail utama.
- Tujuan dari koktail adalah untuk mencampur semua reagen umum dalam sampel
multi prosedur untuk menghindari kelebihan pemipaan dan potensi kesalahan dalam
contoh ini. Prosedur untuk empat siswa memperkuat gen aktinin 3 dari semua empat
sampel DNA mereka informasi ini diisi di sebelah kiri, sisi sisi lembar kerja di sisi
kanan siswa menggunakan persamaan untuk tentukan jumlah tabung yang dibutuhkan
dan pengali volume reagen dalam selain empat sampel DNA, sampel kontrol negatif
selalu. Karena itu diperlukan lima tabung untuk reaksi dalam pembuatan kesalahan
pemipaan koktail dicatat dengan menambahkan sampel lain, oleh karena itu
pengganda untuk grup ini adalah 6. Setiap baris tabel satu mewakili pereaksi yang
digunakan dalam semua sampel, menjalani reaksi PCR pengali diisi dalam semua
baris , kolom pengali dari tabel satu bergerak di setiap baris volume yang ditunjukkan
pereaksi dikalikan dengan pengali 12,5 X 6 = 75 mikroliter paku merah ditambahkan
ke koktail 11,5 X 6 = 69 mikroliter air yang ditambahkan ke koktail 0,5 X 6 = 3
mikroliter masing masing pemain depan dan reverse primer ditambahkan ke koktail
akhirnya jumlah dari volume ini seharusnya sama dengan produk dari baris terakhir
75+69+3+3 =150 mikroliter volume total dalam koktail jumlah ini cocok dengan 25 X
6.
- Tabel dua digunakan sebagai panduan untuk pelabelan sampel PCR seperti yang
ditunjukkan jumlahkan sampel PCR secara kolektif untuk tidak membingungkan
sampel diantara kelompok dalam contoh ini siswa ini telah menyisihkan sampel
bernomor 5 hingga 9, nama sampel diisi di kolom 2 dan primer digunakan untuk
setiap sampel diisi dakam 2 kolom terakhir. Dalam contoh ini primer ke depan adalah
aktin dan 3f dan primer terbalik adalah aktin dan 3 adalah primer yang sama
digunakan untuk semua sampel reagen umum.
- Disediakan oleh air biologi molekuler, forward primer yang anda harus pastikan untuk
memeriksa penandaan PCR pastikan bahwa anda menggunakan konsentrasi yang
tepat secara terbalik.
- Primer dan sel darah merah, sel darah merah perlu dicairkan sebelum digunakan,
tetapi begitu dicairkan, simpan larutan diatas es untuk mencegah degradasi enzim,
selanjutnya siapkan koktail dengan menggunakan volume dan reagen yang
ditunjukkan pada lembar kerja mendapatkan tabung baru dan label sebagai koktail.
- Saat membuat koktail yang terbaik adalah memulai dengan volume terbesar, sel datah
merah adalah volume terbesar yang harus dijaga agar larutan tetap es, mungkin alih-
alih air ditambahkan terlebih dahulu saat menambakan masing- masing reagen
pastikan untuk menggunakan mikropipet yang sesuai untuk volume ditambahkan.