Langkah ELISA

1. Melakukan coating antigen dengan perbandingan 1:50 kemudian diinkubasi selama

sehari pada suhu 4° C selanjutnya dicuci menggunakan 100 µl PBS-T 3 kali @ 3
menit.
2. Blocking menggunakan BSA 1% dalam PBS kemudian diinkubasi selama 1-1,5 jam
pada suhu ruang.
3. Dicuci menggunakan 100 µl PBS-T 3 kali @ 3 menit.
4. Melakukan coating antigen primer dalam BSA 1% dengan perbandingan 1:1000
kemudian diinkubasi selama satu hari pada shu 4°C selanjutnya dicuci menggunakan
100 µl PBS-T 3 kali @ 3 menit.
5. Coating antibodi sekunder dalam PBS dengan perbandingan 1:1000 kemudian
diinkubasi selama 1 jam pada sugu ruang selanjutnya dicuci menggunakan 100 µl
PBS-T 3 kali @ 3 menit.
6. Menambahkan SA-HRP 1:1000 kemudian diinkubasi selama 1 jam pada suhu ruang,
selanjutnya dicuci menggunakan 100 µl PBS-T 3 kali @ 3 menit.
7. Menambahkan sureblue TMB dan diinkubasi selama 30 menit pada suhu ruang dalam
keadaan gelap selanjutnya dicuci menggunakan 100 µl PBS-T 3 kali @ 3 menit.
8. Menambahkan larutan untuk stop reaction berupa HCl 1N kemudian diinkubasi
selama 15 menit pada suhu ruang dan dalam keadaan gelap.
9. Dibaca menggunakan ELISA reader dengan panjang gelombang (λ) 450 nm.