Diterima: 26 Maret 2019 | Direvisi: 31 Juli 2019 | Diterima: 27 Agustus 2019 DOI: 10.1002 / iid3.

271

ATAU IGI NAL RE S EARCH

Asosiasi virus dengue - T polifungsi spesifik - respon sel dengan

keparahan penyakit klinis pada infeksi dengue akut

Dulharie T. Wijeratne 1 | Samitha Fernando 1 | Laksiri Gomes 1 |

Chandima Jeewandara 1 | Geethal Jayarathna 1 | Yashoda Perera 1 |

Samurdhi Wickramanayake 1 | Ananda Wijewickrama 2 | Graham S. Ogg 1,3 |

Gathsaurie N. Malavige 1,3

1 Pusat Penelitian Dengue, Fakultas Ilmu Kedokteran,

Universitas Sri Jayewardenepura, Nugegoda, Sri Lanka Abstrak

Pengantar: Meski peran virus dengue (DENV) - sel T spesifik dalam patogenesis infeksi dengue akut
2 Rumah Sakit Penyakit Menular, Angoda, Sri Lanka
muncul, fungsi virus - sel T spesifik yang terkait dengan penyakit klinis yang lebih ringan belum diteliti

dengan baik. Kami berusaha menyelidiki bagaimana fungsionalitas DENV - NS3 dan DENV - Protein NS5 - Sel
3 MRC Human Immunology Unit, Weatherall

Institute of Molecular Medicine, Oxford NIHR T spesifik berbeda pada penderita demam berdarah (DF) dan demam berdarah dengue (DBD).
Biomedical Research Center dan University of

Oxford, Oxford, Inggris

Metode: Dengan menggunakan uji sitokin intraseluler, kami menilai produksi interferon γ ( IFN γ), faktor

nekrosis tumor - α ( TNF - α), protein inflamasi makrofag - 1 β ( MIP - 1 β), dan ekspresi CD107a pada pasien

Korespondensi dewasa dengan DF akut (n = 21) dan DBD (n = 22).

Neelika Malavige, Pusat Penelitian Dengue, Fakultas
Ilmu Kedokteran, Universitas Sri Jayawardanapura,
Sri Lanka. Hasil: Sitokin empat kali lipat - memproduksi, DENV polifungsional - NS3 - dan DENV - NS5 - sel T spesifik lebih

sering pada mereka yang mengalami DF bila dibandingkan dengan mereka yang menderita DBD.
Email: neelika@sjp.ac.lk
Sedangkan DENV - NS3 - dan DENV - NS5 - sel T spesifik pada pasien dengan DF yang diekspresikan IFN γ> TNF

Informasi pendanaan - α> MIP - β> CD107a, sel T pada penderita DBD sebagian besar mengekspresikan CD107a> MIP - 1 β> IFN γ>
Dewan Riset Medis (Inggris); Institut Nasional untuk
Penelitian Kesehatan (NIHR) Pusat Penelitian Biomedis
TNF - α. Produksi IFN secara keseluruhan γ atau TNF - α oleh DENV - NS3 - dan
Oxford (BRC); Pusat Penelitian Dengue, Universitas Sri
Jayewardenapura; National Science Foundation, DENV - NS5 - sel T spesifik secara signifikan lebih tinggi pada pasien dengan DF. Mayoritas NS3 - sel T

spesifik pada pasien DF (78,6%) dan DBD (68,9%) adalah tunggal - produsen sitokin; 76,6% dari DENV - NS5

- sel T spesifik pada penderita DF dan 77,1% pada penderita DBD, hanya menghasilkan satu sitokin.
Sri Lanka, Nomor Hibah / Penghargaan: (NSF / RG

/ 2016 / HS / 05) Namun, tidak ada hubungan signifikan yang ditemukan dengan T polifungsional - respons sel dan derajat

viremia.

Kesimpulan: Hasil kami menunjukkan bahwa fenotipe fungsional DENV - sel T spesifik cenderung

berhubungan dengan keparahan penyakit klinis.

KE YWORD S

keparahan penyakit klinis, sitokin, demam berdarah, sel T polifungsional

---------------------------------------------------------------------------------------------
Ini adalah artikel akses terbuka di bawah persyaratan Lisensi Atribusi Creative Commons, yang mengizinkan penggunaan, distribusi, dan reproduksi dalam media apa pun, asalkan karya aslinya dikutip dengan benar.

© 2019 Penulis. Kekebalan, Peradangan dan Penyakit diterbitkan oleh John Wiley & Sons Ltd

Immun Inflamm Dis. 2019; 1 - 10. wileyonlinelibrary.com/journal/iid3 | 1

2|
1 | PENGANTAR
Infeksi virus dengue mempengaruhi sekitar 390 juta orang setiap tahun,
dimana 96 juta infeksi bermanifestasi sebagai infeksi dengue. 1 Mereka yang
mengalami infeksi dengue memiliki gejala mulai dari demam berdarah
ringan (DF) hingga demam berdarah dengue (DBD). DBD merupakan
penyakit parah yang ditandai dengan kebocoran plasma yang
mengakibatkan efusi pleura, asites, dan syok disertai risiko trombositopenia,
perdarahan, dan disfungsi organ. 2 Saat ini, tidak ada pengobatan khusus
untuk demam berdarah dan pemantauan yang cermat terhadap pasien
untuk perkembangan komplikasi dan penatalaksanaan cairan adalah
satu-satunya strategi penatalaksanaan yang tersedia. Satu-satunya vaksin
dengue berlisensi ditemukan memiliki kemanjuran rendah untuk beberapa
serotipe dan telah diperingatkan karena kemampuannya menyebabkan
penyakit parah pada demam berdarah - individu yang naif. 3,4 Meskipun vaksin
ini mendorong antibodi penawar tingkat tinggi 5 dan virus dengue (DENV) - T
spesifik - respons sel dengan luas dan besaran yang serupa dengan yang
terlihat setelah infeksi alami. 6 Oleh karena itu, tampaknya kita perlu lebih
memahami unsur-unsur dari respon imun pelindung untuk pengembangan
vaksin dengue yang lebih aman dan efektif.
Meskipun masih ada kontroversi mengenai peran sel T dalam
patogenesis infeksi dengue, penelitian yang lebih baru menunjukkan bahwa
DENV - sel T spesifik cenderung memiliki peran protektif. 7-10 Baru-baru ini,
kami melaporkan bahwa pasien dengan DF memiliki DENV yang lebih tinggi
secara signifikan - T spesifik - respons sel dibandingkan dengan bentuk
penyakit yang lebih parah, yang muncul di awal penyakit. 11 Selain itu, kami
juga menemukan DENV yang besarnya - T spesifik - respon sel berbanding
terbalik dengan derajat viremia, lebih lanjut menunjukkan bahwa sel T
memiliki peran protektif pada demam berdarah akut. 11
Terlepas dari luas dan besarnya sebuah T - respons sel, fungsinya juga
telah terbukti sangat penting dalam perlindungan terhadap banyak infeksi. 12-14
Sel T polifungsional yang menghasilkan berbagai jenis sitokin telah terbukti
melindungi dan berkorelasi dengan resolusi viremia, terutama pada infeksi
virus kronis. 15-17 T polifungsional - respons sel telah terbukti berkorelasi
dengan tingkat perlindungan dengan vaksin, bukan dengan patogen - sel T
spesifik yang menginduksi interferon γ ( IFN γ) tanggapan sendiri. 18 Virus
polifungsional - sel T spesifik juga terbukti penting dalam pencegahan
reaktivasi virus pada infeksi seperti sitomegalovirus. 12
Ditunjukkan bahwa pada orang yang secara alami terinfeksi DENV, CD8
+ polifungsional dan CD4 + T - respon sel yang lebih besar dan lebarnya
terlihat untuk alel human leukocyte antigen (HLA)
WIJERATNE ET AL.
terkait dengan perlindungan. 7,9 Kami mengamati bahwa meskipun individu
yang secara alami terinfeksi DENV yang mengakibatkan infeksi dengue
yang tidak terlihat atau parah memiliki besaran DENV yang sama. - T spesifik -
tanggapan sel, mereka berbeda dalam fungsi. Misalnya, saat DENV - sel T
spesifik dari mereka yang menderita demam berdarah sebelumnya
membuat kadar granzim B lebih tinggi, mereka yang menderita penyakit
parah sebelumnya menghasilkan lebih banyak TNF - α. 19 Oleh karena itu,
seperti banyak infeksi lainnya, terlepas dari besarnya dan nafas T - respon
sel, jenis sitokin yang diproduksi oleh virus - sel T spesifik tampaknya
berasosiasi dengan proteksi atau patogenesis. Sementara banyak penelitian
telah dilakukan untuk menjelaskan fungsionalitas T - respons sel pada
demam berdarah, ini telah dibatasi untuk mempelajari T - sel khusus untuk
tipe HLA tertentu dengan menggunakan tetramer / pentamers. 10,20 Sebagai
fungsi DENV - sel T spesifik pada dengue akut belum pernah dinilai
sebelumnya dalam kaitannya dengan keparahan penyakit klinis dan resolusi
viraemia, kami berusaha untuk menentukan apakah polifungsional CD8 + T - tanggapan
sel terhadap DENV dikaitkan dengan penyakit yang lebih ringan dan resolusi
awal dari viraemia.
2 | METODE
2.1 | Perekrutan pasien
Kami merekrut 43 pasien dewasa dengan infeksi dengue akut, selama
wabah tunggal dari National Infectious Diseases Institute setelah mendapat
persetujuan tertulis. Pasien direkrut antara hari ke-3 dan ke-7 penyakit dan
semua gambaran klinis dicatat beberapa kali per hari, dari saat masuk ke
rumah sakit. Pemindaian ultrasonografi dilakukan untuk mengidentifikasi
adanya kebocoran cairan di rongga pleura dan peritoneum. Penuh - jumlah
darah dan hati - tingkat transaminase dilakukan secara serial selama durasi
penyakit. Tingkat keparahan penyakit klinis diklasifikasikan sesuai dengan
kriteria diagnostik demam berdarah WHO 2011. 2 Oleh karena itu, pasien
dengan efusi pleura atau asites atau mereka yang hematokritnya meningkat
20mm Hg atau lebih tinggi dari baseline diklasifikasikan sebagai menderita
DBD. Syok didefinisikan sebagai adanya kulit berkeringat dingin,
dikombinasikan dengan tekanan nadi yang menyempit sebesar 20 mm Hg
atau lebih rendah. Berdasarkan klasifikasi ini, 22 pasien DBD dan 21 pasien
DF.
2.2 | Pernyataan etika
Studi ini disetujui oleh Ethical Review Committee dari The University of Sri
Jayewardenepura. Semua pasien direkrut setelah mendapat persetujuan
tertulis.
WIJERATNE ET AL. |3

2.3 | Serologi anti - CD8 - BV650 (klon SK1), anti - IFN - γ - APC (klon 4S. B3), anti - CD107a - FITC
(klon H4A3), anti - TNF - α - BV605 (tiruan Mab11). Anti - MIP1 - β - PE (klon
Infeksi dengue akut dikonfirmasi dalam sampel serum dengan polymerase
24006) dibeli dari Sistem R&D dan Kit Noda Sel Mati Sel Mati Aqua LIVE /
chain reaction (PCR) dan identifikasi antibodi dengue. Tes antibodi demam
MATI, untuk eksitasi 405 nm berasal dari Thermo Fisher Scientific.
berdarah dilakukan dengan menggunakan imunoglobulin penangkapan
Pewarnaan intraseluler dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya. 25,26 Singkatnya,
komersial M (IgM) dan IgG ELISA (Panbio,
- Brisbane, Australia). 21 Berdasarkan
kepada
kriteria WHO, pasien dengan rasio IgM: IgG lebih dari 1.2 dianggap sebagai
infeksi dengue primer, sedangkan pasien dengan rasio IgM: IgG kurang dari
menentukan ekspresi CD107a, sel mononuklear darah tepi (PBMC) diwarnai
1.2 dikategorikan sebagai infeksi dengue sekunder. Uji imunosorben terkait
dengan anti - CD107a -
enzim IgM dan IgG spesifik DENV (ELISA) juga dilakukan untuk
2 fluorescein isothiocyanate (FITC) antibodi monoklonal selama 30 menit pada
menentukan DENV semikuantitatif. - titer IgM dan IgG spesifik dan hasilnya
1 hingga 2 × 10 6 / mL dalam RPMI 1640 ditambah 10% fetal calf serum
- dalam unit PanBio.
dilaporkan -
(FCS), sebelum distimulasi dengan antigen. PBMC kemudian distimulasi
dengan DENV - NS3 atau DENV - NS5 15 - mer tumpang tindih peptida selama
16 jam menurut pabrikan ' s instruksi di hadapan Brefeldin A dan Monensin
(Biolegend) seperti dijelaskan sebelumnya. 25,27 PBMC diwarnai dengan anti - CD3
dan - CD8, diserap dan difiksasi dengan Cytofix / Cytoperm (Biolegend) dan

2.4 | Penilaian viral load secara kualitatif dan kemudian diwarnai untuk TNF intraseluler - α, IFN γ, atau MIP - 1 β seperti yang

kuantitatif dijelaskan sebelumnya. 25,26 LIVE / DEAD Aqua Dead Cell Stain yang dapat
diperbaiki digunakan menurut produsen ' Protokol untuk mengecualikan sel
Serotipe dan kuantifikasi virus DENV dilakukan seperti yang dijelaskan
mati.
sebelumnya. 22 RNA diekstraksi dari sampel serum menggunakan QIAamp
Viral RNA Mini Kit (Qiagen) sesuai pabrikan ' protokol. Multipleks kuantitatif
nyata - waktu PCR dilakukan seperti yang dilaporkan sebelumnya
menggunakan CDC nyata - waktu uji PCR untuk mendeteksi DNV.
Sampel diperoleh dengan menggunakan Jambu Biji - Easy Cyte 12 HT
Selanjutnya, teknik tersebut dimodifikasi untuk mengukur DENV. Primer
Flowcytometer (Merck) dan dianalisis dengan FCS Express 6 Flow Research
oligonukleotida, ganda -
Edition. Strategi gerbang hierarkis digunakan untuk gerbang sel T hidup,
tunggal, CD3 +, dan CD8 + (Gambar S1 dan S2). Setiap antibodi dititrasi untuk
probe berlabel untuk semua DENV 1 sampai 4 serotipe (Life Technologies,
menentukan konsentrasi optimal yang akan digunakan dengan
India) digunakan dan ini didasarkan pada urutan yang diterbitkan. 23 Untuk
membandingkannya dengan kontrol Fluoresensi Minus One (FMO). Gerbang
mengukur virus, kurva standar serotipe DENV diproduksi seperti yang
untuk TNF - α, MIP1 - β, IFN - γ, dan produksi CD107a di DENV - NS3 - dan DENV - NS5
dilaporkan sebelumnya di Fernando et al. 22
- sel terstimulasi ditetapkan menggunakan kontrol yang tidak distimulasi
(Gambar S2). Setelah gerbang untuk masing-masing fungsi efektor dibuat,
data dianalisis menggunakan gerbang kombinasi Boolean untuk menguji 15
pola respons untuk empat fungsi yang diuji seperti yang dijelaskan
2.5 | Peptida
sebelumnya. 28 Kontrol yang tidak distimulasi digunakan di semua pengujian.
Array peptida yang mencakup NS3 (DENV3, Philippines / H87 / 1956, NS3
protein, NR - 2754) dan protein NS5 (DENV2, New Guinea C, protein NS5,
NR - 2746) dari NIH Biodefense dan Emerging Infections Research Resource
Repository, NIAID, NIH digunakan dalam penelitian ini. DENV - Array peptida
NS3 terdiri dari 105, 14 -
2.7 | Analisis statistik
sampai 17 - mer peptida sedangkan protein NS5 terdiri dari 156 peptida. Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan versi PRISM
Peptida disusun kembali seperti yang dilaporkan sebelumnya. 24 DENV - NS3 6. Karena data tidak terdistribusi normal, perbedaan rata-rata dibandingkan
dan - Peptida NS5 dikumpulkan secara terpisah untuk mewakili DENV - NS3 dengan menggunakan Mann - Whitney U tes (dua - berekor). Peringkat
dan - Protein NS5. Konsentrasi akhir dimetil sulfoksida kurang dari 0,5%. Spearman - koefisien korelasi urutan digunakan untuk mengevaluasi korelasi
antar variabel. Perbedaan frekuensi tersebut bermacam kombinasi sitokin
tunggal, ganda, dan tripel -

memproduksi DENV - sel T spesifik pada pasien DF dan DBD dianalisis

2.6 | Tes sitokin intraseluler
Antibodi monoklonal berikut dari Biolegend digunakan dalam penelitian ini
setelah pengoptimalan dengan pengenceran serial: anti - CD3 - APC Cy7 (klon
OKT3),
menggunakan Holm - Metode sidak. Proporsi relatif sitokin tunggal, ganda,
tripel, dan empat kali lipat - memproduksi DENV - NS3 - dan DENV - NS5 - sel T
spesifik pada pasien dengan DF dan
4| WIJERATNE ET AL.

DBD, dihitung seperti yang dijelaskan sebelumnya. 28 Perbedaan antara
sitokin tunggal, ganda, triple, dan quadruple - memproduksi sel T pada pasien
DF dan DBD dianalisis menggunakan Mann - Whitney U
tes (dua - berekor).
3 | HASIL
3.1 | Karakteristik klinis dan laboratorium
pasien
Gambaran klinis dan laboratorium pasien ditunjukkan pada Tabel 1.
Kesimpulannya, 22 dari 43 pasien menderita DBD dan 21 menderita DF.
Sembilan belas dari 22 (86,4%) pasien DBD menunjukkan asites dan 10 dari
22 (45,4%) mengalami efusi pleura. Tidak ada pasien yang mengalami syok
dan hanya satu dari 43 pasien yang mengalami manifestasi perdarahan.
Durasi median penyakit ketika direkrut untuk penelitian untuk pasien dengan
DF adalah 5, (IQR, 4 - 5) hari dan untuk penderita DBD adalah 6 (IQR, 5 - 7
hari.
0% - 3,5% dari sel CD8 + T) dan DENV - NS5 - T spesifik - respons sel (median,
0,32; IQR, 0% - 1,48% dari sel CD8 + T) dibandingkan dengan pasien dengan DF
yang menunjukkan ekspresi CD107a lebih rendah setelah DENV - NS3 (median,
0; IQR, 0% - 1,14% dari sel CD8 + T) dan DENV - Stimulasi NS5 (median, 0; IQR,
0% - 0,69% dari sel CD8 + T) (Gambar 1B). Sepuluh dari 21 (47,6%) dari mereka
dengan DF dan 13 dari 22 (59,1%) dari mereka dengan DHF meningkatkan
regulasi CD107a sebagai tanggapan terhadap NS3. Hanya dua pasien dengan
DF memiliki tingkat ekspresi lebih dari 3% sedangkan tujuh pasien dengan DBD
memiliki tingkat ekspresi lebih dari 3%. Ketika dirangsang dengan NS5, 7 dari
21 (33,3%) dari mereka dengan DF mengekspresikan CD107a dibandingkan
dengan 13 dari 22 (59,1%) dari mereka dengan DBD. Namun, tampaknya tidak
ada perbedaan dalam MIP -
1 β produksi pada pasien dengan DBD untuk kedua DENV - NS3 (median,
0,09; IQR, 0% - 1,3% dari sel CD8 + T) dan - NS5 (median, 0,09; IQR, 0% - 1,25%
dari sel CD8 + T) dibandingkan dengan DF (untuk NS3, median, 0,11; IQR,
0% - 1,23% dan untuk NS5, median, 0; IQR, 0% - 0,65% dari sel CD8 + T)
(Gambar 1D).

3.2 | Frekuensi produksi berbagai sitokin oleh DENV - T TABEL 1 Gambaran klinis dan laboratorium pasien DF dan DBD

spesifik - sel
respon pada demam berdarah akut DBD (n = 22) DF (n = 21)

Selama infeksi dengue sekunder akut, kualitas dan kuantitas memori T - respon Temuan klinis N (%) N (%)

sel terhadap DENV yang menginfeksi sebelumnya cenderung membentuk Muntah 5 (22,7) 5 (23,8)
respon imun pada infeksi dengue berikutnya. Untuk menilai fungsionalitas
Sakit perut 12 (54,5) 9 (42,9)
DENV - T spesifik - respon sel dalam kaitannya dengan keparahan penyakit
Hepatomegali 4 (18.2) 0
klinis, kami awalnya menilai kemampuannya untuk menghasilkan sitokin
Manifestasi perdarahan 1 (4,5) 0
yang berbeda. Tanggapan untuk DENV - NS3 dan - NS5 pool dari 15 - peptida
mer diselidiki sebagai T - respon sel pada dengue akut, karena ini telah Efusi pleura 10 (45,5) 0

terbukti menjadi dua protein utama yang menginduksi CD8 + T - tanggapan Asites 19 (86,4) 0

sel. 7,29,30 Jumlah trombosit terendah,

3
sel / mm

<20.000 11 (52,4) 0

DENV - NS3 - sel CD8 + T spesifik pasien dengan DF menghasilkan lebih 20.000 - 50.000 7 (33.3) 1 (4.8)

banyak secara signifikan ( P =. 045) IFN γ ( median = 50.000 - 100 000 2 (9,5) 9 (42,9)

0,28; IQR, 0% - 0,51%) dibandingkan dengan pasien DBD (median, 0; IQR, > 100 000 1 (4,5) 11 (52,4)
0% - 0,24%) (Gambar 1A). DENV - NS5 - sel CD8 + T spesifik pasien dengan Jumlah limfosit terendah
DF juga menghasilkan lebih banyak secara signifikan ( P =. 046) IFN γ ( median, <750 2 (9,5) 3 (14,3)
0,21; IQR, 0% 0.87%) dibandingkan dengan DBD (median, 0; IQR 0% - 0,28%)
750 1500
- 8 (38.1) 10 (47.6)
(Gambar 1A). Meski frekuensi
- TNF - α memproduksi DENV - NS3 - spesifik
> 1500 11 (52,4) 8 (38.1)

Serotipe yang menginfeksi

DENV1 0 0
Sel CD8 + T secara signifikan lebih tinggi ( P =. 003) pada pasien dengan DF
DENV2 19 (90,5) 16 (76,2)
(median, 0,2; IQR, 0% - 0,87%) dibandingkan dengan pasien DBD (median,
0; IQR, 0% - DENV3 0 0

0%) (Gambar 1C) tidak ada perbedaan signifikan yang terlihat untuk DENV - NS5 DENV4 0 0

- sel CD8 + T spesifik antara pasien DF dan DBD ( P =. 17). Sebaliknya, Aviraemia 2 (9,5) 5 (23,8)

meskipun tidak signifikan, ekspresi CD107a lebih tinggi pada pasien DBD Tidak meyakinkan 0 1 (4.7)
untuk kedua DENV - NS3 (median, 0,61; IQR, Singkatan: DENV, virus dengue; DF, demam berdarah; DBD, demam berdarah dengue.
WIJERATNE ET AL. |5

GAMBAR 1 Produksi keseluruhan sitokin oleh DENV - NS3 - dan DENV - NS5 - sel T spesifik pada pasien DF dan DBD. IFN γ ( A), CD107a (B), TNF - α ( C), dan MIP - 1 β ( D) diukur
dengan pewarnaan sitokin permukaan dan intraseluler pada pasien DF (n = 21) dan DBD (n = 22). Bilah kesalahan menunjukkan median dan IQR. DENV, virus dengue; DF,
demam berdarah; DBD, demam berdarah dengue; IFN γ, interferon γ; IQR, rentang interkuartil; MIP - 1 β, protein inflamasi makrofag - 1 β; TNF - α, faktor nekrosis tumor - α. * P <. 05 dan
** P <. 001

Berdasarkan rasio IgM dan IgG, 35 dari 43 pasien dapat diklasifikasikan
sebagai demam berdarah primer atau sekunder, berdasarkan pedoman
WHO. 2 Dari 35 pasien, 17 menderita infeksi dengue primer dan 18
menderita infeksi dengue sekunder. Tidak ada perbedaan dalam produksi
sitokin (IFN γ, TNF - α, dan MIP - β) pada mereka yang menderita demam
berdarah primer dibandingkan dengan demam berdarah sekunder, jika
dirangsang dengan NS3 atau NS5. Namun, meskipun tidak signifikan, ada
kecenderungan peningkatan ekspresi CD107a pada pasien dengue
sekunder dibandingkan dengan dengue primer untuk NS3 dan NS5.
berfungsi dengan menentukan frekuensi 15 kombinasi IFN yang berbeda γ, TNF
- α, CD107a, dan MIP - 1 β
produksi oleh DENV - NS3 - ( Gambar 2A) dan DENV - NS5 (Gambar 2B) - sel
CD8 + T spesifik pada pasien DF dan DBD. Untuk mengoreksi beberapa
koreksi, data dianalisis menggunakan Holm - Metode sidak. Sedangkan
DENV - NS3 - sel T spesifik yang menghasilkan kombinasi CD107a / IFN γ / MIP
- 1 β secara signifikan lebih tinggi pada pasien dengan DBD ( P =. 049), DENV -
NS3 - sel T spesifik yang menghasilkan TNF - α sendiri secara signifikan lebih
tinggi ( P =. 02) pada pasien dengan DF (Gambar 2A). DENV - NS5 -

sel T spesifik yang menghasilkan kombinasi TNF - α /

MIP - 1 β dan yang menghasilkan TNF - α sendiri secara signifikan lebih tinggi
pada mereka dengan DF ( P =. 03 dan P =. 02, masing-masing; Gambar 2B).
3.3 | Asosiasi DENV - penyakit dan sel CD8 + T
polifungsional spesifik
Secara keseluruhan, pada pasien dengan DF, DENV - NS3 - sel T spesifik yang
kerasnya
memproduksi IFN γ sendiri (median, 0,21; 0% - 0,61% dari sel CD8 + T) lebih sering

Untuk menilai polifungsionalitas DNV - sel T responsif kami menilai dibandingkan yang memproduksi TNF - α

kemampuan sel T untuk menghasilkan banyak sitokin atau kemampuannya (median, 0,1; IQR, 0% - 0,45% dari sel CD8 + T). Frekuensi DENV - NS3 - sel T
untuk menjalankan efektor tertentu spesifik pada pasien dengan DF adalah sebagai
6| WIJERATNE ET AL.

GAMBAR 2 Frekuensi tunggal,

sitokin ganda, rangkap tiga, dan rangkap empat - memproduksi

DENV - NS3 - dan

DENV - NS5 - sel T spesifik pada pasien DF dan DBD.

Lima belas kombinasi sitokin - memproduksi sel T
dinilai dengan pewarnaan sitokin intraseluler pada
pasien dengan DF (n = 21) dan DHF (n = 22) dengan
menggunakan Boolean.

gerbang kombinasi. Bilah kesalahan menunjukkan

median dan IQR. DENV, virus dengue; DF, demam
berdarah; DBD,
demam berdarah dengue

demam; IFN γ, interferon γ; IQR, rentang interkuartil;

MIP - 1 β, protein inflamasi makrofag - 1 β; TNF - α, faktor
nekrosis tumor - α. * P <. 05

berikut: IFN γ> MIP - 1 β> TNF - α> CD107a> CD107a / MIP - 3.4 | Hubungan antara jumlah sitokin - memproduksi sel T dan
1 β> CD107a / TNF - α> CD107a / TNF - α / MIP - 1 β memproduksi klinis
sel. Frekuensi DENV - NS3 - sel T spesifik pada pasien DBD adalah sebagai keparahan penyakit
berikut: CD107a> CD107a / MIP -
Selanjutnya, kami membandingkan kualitas DENV - T spesifik - respon sel
1>β MIP 1> IFN.
- β Frekuensi
γ sel T spesifik DENV NS5 pada pasien
- DF
- adalah
pada pasien DF dan DBD dengan menghitung frekuensi single, double,
sebagai berikut: TNF> IFN> CD107a / MIP 1> MIP 1> CD107a>
-α TNF / MIP
γ
triple, dan quadruple efektor DENV - NS3 - dan DENV - NS5 - CD8 + T tertentu -
1. Frekuensi sel -T spesifik
β - β NS5 pada pasien DBD-αadalah sebagai
DENV - β
berikut: CD107a / MIP 1> CD107a>
- - IFN> MIP 1 β. Oleh karena itu, tanda
proporsi sel terlepas dari kombinasi fungsi sitokin / efektor dalam DENV - sitokin
tangan sitokin DENV - NS3 - - β γ
spesifik - memproduksi CD8 + T - populasi sel (Gambar 3). Kami tidak
-
menemukan perbedaan yang signifikan antara DENV single, double, triple,
-
dan sel T spesifik -
DENV NS5 tampak sangat berbeda pada mereka dengan
dan quadruple - NS3 - dan DENV - NS5 - CD8 + T tertentu - proporsi sel dalam
DF dibandingkan dengan DBD, dengan DENV. - NS3 - dan DENV - NS5 - sel T
DENV - sitokin spesifik - memproduksi CD8 + T - populasi sel pada pasien DF
spesifik secara dominan mengekspresikan CD107a dan MIP - 1 β dan mereka
dan DBD ( P>. 05).
yang DF memproduksi IFN secara dominan γ dan TNF α.
-
WIJERATNE ET AL. |7

GAMBAR 3 Proporsi
sel T polifungsional pada pasien DF dan DBD.
Proporsi single, double, triple, dan quadruple

sitokin - memproduksi (A) DENV - NS3 - dan (B) NS5 - sel

T spesifik dibandingkan pada pasien dengan DF (n =
21) dan DBD (n = 22). DENV, virus dengue; DF,
demam berdarah; DBD, demam berdarah dengue

0,2% NS3 - sel T spesifik pada pasien dengan DF adalah penghasil P =. 018), tetapi tidak pada penderita DBD. Kami selanjutnya menganalisis
sitokin / efektor empat kali lipat (IFN γ, TNF - α, hubungan antara T polifungsional - respons sel dan derajat viremia. Kami
CD107a, dan MIP1 β) sedangkan DENV hanya 0,04% - NS3 - hanya menemukan itu pada pasien DBD, NS5 - sel T spesifik yang
sel T spesifik pada pasien DBD mengekspresikan keempat efektor. mengekspresikan kombinasi CD107a / MIP - 1 β / IFN γ, berkorelasi positif dan
Selanjutnya 4,6% dari DENV - NS5 - sel T spesifik merupakan penghasil signifikan dengan derajat viremia (Spearman r = 0,44, P =. 046). Tidak ada
sitokin / efektor empat kali lipat pada pasien DF dan hanya 0,4% pada kombinasi sitokin lain yang berhubungan dengan derajat viremia.
pasien DBD. Karena itu, DENV - NS3 - dan NS5 - sel T spesifik dari mereka
dengan DF lebih cenderung menjadi polifungsional. Mayoritas NS3 - sel T
spesifik pada pasien dengan DF (78,6%) dan DBD (68,9%) adalah
penghasil sitokin / efektor tunggal. Tren serupa terlihat untuk tanggapan
terhadap NS5, dengan 76,6% dari mereka dengan DF dan 77,1% dari
4 | DISKUSI
mereka dengan DBD, hanya menghasilkan satu sitokin / efektor. Hanya

Dalam penelitian ini, kami telah menunjukkan sitokin quadruple - /

efektor - mengekspresikan, DENV polifungsional - NS3 - dan
21,4% dari sel T spesifik
- NS3 pada pasien dengan DF dan
DENV - NS5 - sel T spesifik lebih sering pada mereka yang mengalami DF bila
23,4% pada penderita DBD menghasilkan dua sitokin / efektor dan untuk
dibandingkan dengan mereka yang menderita DBD. Selain itu, hierarki
NS5, hanya 22,7% penderita DF dan
produksi sitokin berbeda secara signifikan pada mereka yang menderita
18,1% penderita DBD, menghasilkan dua.
demam berdarah parah dan ringan. Misalnya, pada mereka dengan DF,
DENV - NS3 -, dan NS5 - sel T spesifik mengekspresikan IFN γ>

3.5 | Hubungan antara fungsionalitas DENV - sel T spesifik dan

TNF - α> MIP - β> CD107a, penderita DBD didominasi oleh CD107a> MIP - 1 β> IFN
γ> TNF - α. Produksi IFN secara keseluruhan γ atau TNF - α oleh DENV - NS3 - dan
viremia
DENV - NS5 - sel T spesifik secara signifikan lebih tinggi pada pasien dengan
Dalam penelitian kami sebelumnya, kami menemukan IFN itu γ - memproduksi DF. Oleh karena itu, produksi TNF preferensial - α dan IFN γ, yang merupakan
DENV - NS3 - sel T spesifik berbanding terbalik dengan derajat viremia. 11 Namun,dua sitokin antivirus yang manjur oleh sel CD8 + T, dibandingkan dengan
dalam penelitian ini, kami tidak mengamati hubungan seperti itu dengan IFN γ, kapasitas degranulasinya tampaknya dikaitkan dengan penyakit klinis yang
tetapi malah menemukan bahwa DENV keseluruhan - NS5 - MIP tertentu - 1 β memproduksi
lebih ringan. Namun, dalam penelitian ini, kami hanya menyelidiki
sel CD8 + T berkorelasi negatif dengan derajat viremia pada pasien DF fungsionalitas CD8 + T - respons sel pada pasien dengan
(Spearman r = - 0,51,
8| WIJERATNE ET AL.

infeksi DENV2 akut, karena ini adalah satu-satunya serotipe yang
bersirkulasi selama periode waktu ini di Sri Lanka. 31 Meskipun dalam
penelitian kami sebelumnya, kami tidak mengamati adanya perbedaan
frekuensi IFN γ memproduksi DENV - sel T spesifik pada infeksi DENV1 dan
DENV2 akut, penting untuk mempelajari polifungsi DENV -
Sel T yang ditentukan oleh ex vivo ELISpot berkorelasi terbalik dengan viraemia,
kami percaya bahwa kami tidak melihat pengamatan serupa, karena kami hanya
menyelidiki sel CD8 + T dalam penelitian ini dibandingkan dengan DENV secara
keseluruhan. - T -
respons sel dalam penelitian kami sebelumnya. 11

Pada individu sehat yang secara alami terpapar DENV, mayoritas

T spesifik - respons sel selama infeksi dengan serotipe DENV yang berbeda. terkena DENV - sel T spesifik menghasilkan dua sitokin, terlepas apakah
mereka disimulasikan dengan diawetkan - atau serotipe - peptida spesifik. 7

Meskipun frekuensi keseluruhan DENV - NS3 - dan DENV - NS5 - sel T

spesifik rendah untuk semua sitokin yang dievaluasi, mereka sebanding Namun, kami menemukan bahwa pada infeksi akut hanya 18,1% menjadi

dengan frekuensi antigen - sel T spesifik terlihat pada fase akut dari infeksi 23,3% dari DENV - sel T spesifik menghasilkan dua sitokin / efektor,
virus lain seperti influenza, 32 campak, 33 dan kemungkinan karena downregulasi T - jalur pensinyalan reseptor sel yang
terlibat dalam sitokin selama demam berdarah akut. 38 Meski frekuensi
Ebola. 34 Oleh karena itu, meskipun kami mengamati frekuensi DENV yang rata-rata sitokin tunggal - / efektor - memproduksi sel T antara 0,1% dan 1,9%
rendah - CD8 + T tertentu - respons sel, frekuensi yang lebih rendah ini mungkin dari CD8 + T - populasi sel, frekuensi rata-rata sel T yang menghasilkan
penting dalam mengendalikan virus, seperti yang terlihat pada infeksi virus akut. kombinasi TNF - α /
Dalam penelitian kami sebelumnya, kami telah menunjukkan bahwa penderita
IFN γ, TNF - α / MIP - 1 β, atau IFN γ / MIP - 1 β kurang dari 0,3% dari semua sel
demam berdarah ringan memiliki frekuensi DENV yang lebih tinggi - T spesifik - tanggapan
sel, 11,25 sedangkan, sebagian besar pasien dengan penyakit parah tidak memiliki CD8 + T. Namun, CD107a / MIP - 1 β Mengekspresikan sel CD8 + T pada
virus yang terdeteksi - T spesifik - pasien DBD adalah antara 1,2% dan 1,5% dari semua sel CD8 + T. Ekspresi
CD107a pada permukaan sel CD8 + T telah terbukti menjadi penanda yang
tanggapan sel. Dalam studi ini, DENV - sel T spesifik menghasilkan IFN yang jauh andal untuk kemampuan sitotoksik sel-sel ini. 42 Meskipun ekspresi CD107a
lebih tinggi γ dan TNF - α pada mereka dengan penyakit yang lebih ringan, lebih oleh sel CD8 + T dianggap terkait dengan perlindungan, 43 telah terbukti
lanjut menunjukkan bahwa DENV - menyebabkan patogenesis penyakit pada beberapa infeksi. 44 Misalnya,
sel T spesifik tampaknya berasosiasi dengan penyakit yang lebih ringan. dalam
Ada beberapa spekulasi bahwa sitokin proinflamasi diproduksi oleh
DENV - sel T spesifik berkontribusi pada keparahan penyakit klinis dengan Leishmaniasis kulit, CD107a yang mengekspresikan sel T sitotoksik sangat
menyebabkan disfungsi endotel. 20,35,36 Sangat kesal - reaktif, aktif pada lesi dan pada model tikus, ditunjukkan bahwa perforin - tikus yang
mengalami defisiensi, tidak mengalami lesi kulit bila dibandingkan dengan
tikus liar - ketik tikus. 44 Lebih lanjut, diperlihatkan bahwa perkembangan
DENV - CD8 + T tertentu - klon sel, yang menghasilkan sitokin seperti TNF - α, dianggap
berkontribusi pada kebocoran vaskular. Memang anti - TNF - α pengobatan penyakit tidak terkait dengan derajat parasitemia, melainkan dengan tingkat
pada model tikus dengue terbukti meningkatkan kelangsungan hidup pada keberadaan sel T sitotoksik pada lesi kulit. 44 Namun, meskipun kami
infeksi DENV eksperimental. 37 Namun, DENV telah terbukti - T spesifik - respon menemukan bahwa CD107a mengekspresikan atau CD107a / MIP - 1 β / IFN γ mengekspr
sel tidak ada atau hadir dalam frekuensi yang sangat rendah ketika pasien DENV - sel T spesifik lebih tinggi pada pasien DBD, tidak ada hubungan
memasuki fase kritis penyakit, dan TNF tersebut - α dengan derajat viremia. Oleh karena itu, tampaknya ekspresi CD107a
mungkin tidak selalu melindungi dan DENV - sel T spesifik yang lebih bersifat
sitotoksik, berbeda dengan yang memproduksi IFN γ dan TNF - α, dikaitkan
produksi oleh sel T tidak berhubungan dengan penyakit yang parah. 20,25,38,39 Memang
dengan patogenesis penyakit.
terbukti bahwa anak-anak yang memiliki frekuensi DENV lebih tinggi - sel T
spesifik yang memproduksi TNF - α, IFN γ, dan interleukin - 2 lebih cenderung
mengalami perkembangan infeksi subklinis daripada penyakit simptomatik. 40
Pada infeksi virus influenza manusia dan hewan, TNF - α terbukti memiliki Dalam studi ini, kami menggunakan peptida yang tumpang tindih dari NS3 -

efek antivirus yang lebih manjur daripada IFN γ atau IFN α. 41 Sebab, DENV3 untuk menilai tanggapan NS3 pada pasien dengan infeksi DENV2
keduanya TNF - α dan IFN γ produksi oleh DENV - sel T spesifik tampaknya akut. Meskipun ada beberapa kekhawatiran bahwa penggunaan peptida dari
penting dalam mengurangi keparahan penyakit, daripada menyebabkan serotipe yang berbeda dapat menyebabkan respons yang berbeda terhadap
patogenesis penyakit. Namun, tidak ada TNF - α atau IFN γ produksi sel CD8 serotipe lain yang menginfeksi, karena kesamaan urutannya, banyak

+ T berkorelasi dengan derajat viremia. Sebaliknya, itu MIP - 1 β memproduksi penelitian sebelumnya telah menggunakan pendekatan yang serupa. 20,27,45 Selain

sel CD8 + T pada pasien DF, yang berkorelasi terbalik dengan derajat itu, juga diperlihatkan HLA itu - A * 11 - Epitop NS3 - tanggapan tetramer spesifik

viremia. Meskipun kami sebelumnya telah melaporkan IFN itu γ - memproduksi (spesifik untuk DENV2) serupa pada pasien dengan infeksi DENV1 atau
DENV2 akut. 20

Di ringkasan, kita diselidiki polifungsional

DENV - NS3 - dan DENV - NS5 - T spesifik - tanggapan sel
WIJERATNE ET AL.
pada pasien dengue akut dan ditemukan DENV itu -
sel T spesifik yang memproduksi empat sitokin / efektor lebih sering pada
pasien dengan DF, dan mereka memiliki fenotipe fungsional yang berbeda.
Sedangkan DENV - sel T spesifik pada pasien dengan penyakit ringan lebih
disukai memproduksi IFN γ> TNF α> MIP 1 β> CD107a, penderita penyakit
berat memiliki fenotipe
- fungsional
- CD107a> MIP -
1 β> IFN γ> TNF - α. Oleh karena itu, hasil kami menunjukkan bahwa tidak
hanya besarnya T - respon sel, tetapi juga fenotipe fungsional DENV - sel T
spesifik berhubungan dengan tingkat keparahan penyakit.
UCAPAN TERIMA KASIH
Pendanaan disediakan oleh Center for Dengue Research, University of Sri
Jayewardenapura, National Science Foundation, Sri Lanka (NSF / RG /
2016 / HS / 05) dan oleh Medical Research Council (UK). GSO menerima
dukungan dari National Institute for Health Research (NIHR) Oxford
Biomedical Research Center (BRC).
KONFLIK KEPENTINGAN
Penulis menyatakan bahwa tidak ada konflik kepentingan.
KETERSEDIAAN DATA
Semua data ditampilkan dalam manuskrip, gambar, dan Informasi
Pendukung.
ORCID
Gathsaurie N. Malavige http://orcid.org/0000-0001-
9201-0449
REFERENSI
1. Bhatt S, Gething PW, Brady OJ, dkk. Distribusi global dan beban demam
berdarah. Alam. 2013; 496 (7446): 504 - 507. https: //
doi.org/10.1038/nature12060
2. SIAPA YANG MENCARI. In: WHO, ed. Panduan lengkap untuk
pencegahan dan pengendalian demam berdarah dan perdarahan dengue
demam Serius No. 60 New Delhi, India: Organisasi Kesehatan Dunia; 2011: 24 - 26.
3. Halstead SB. Masalah keamanan dari uji klinis Fase 3 siaran langsung -
vaksin demam berdarah tetravalen demam kuning chimeric yang dilemahkan.
Hum Vaccin Immunother. 2018; 14 (9): 2158 - 2162. https: // doi. org / 10.1080 /
21645515.2018.1445448
4. Kertas posisi WHO. Vaksin demam berdarah: Kertas posisi WHO, September 2018 - Rekomendasi.
Vaksin. 2018; 37 (35): 4848 - 4849.
5. Leo YS, Wilder - Smith A, Archuleta S, dkk. Imunogenisitas
dan keamanan vaksin dengue tetravalen rekombinan (CYD -
TDV) pada individu berusia 2 tahun - 45 tahun: uji coba terkontrol secara acak
fase II di Singapura. Hum Vaccin Immunother.
2012; 8 (9): 1259 - 1271. https://doi.org/10.4161/hv.21224
|9
6. Weiskopf D, Angelo MA, Bangs DJ, dkk. Respons sel CD8 + T manusia yang
diinduksi oleh vaksin demam berdarah tetravalen hidup yang dilemahkan
diarahkan melawan epitop yang sangat terkonservasi. J Virol. 2015; 89 (1): 120 - 128.
https://doi.org/10.
1128 / JVI.02129 14 -
7. Weiskopf D, Angelo MA, de Azeredo EL, dkk. Analisis virus dengue secara
komprehensif - tanggapan spesifik mendukung HLA - peran pelindung terkait untuk sel
CD8 + T. Proc Natl Acad Sci. 2013; 110 (22): E2046 - E2053.
https://doi.org/10.1073/pnas.1305227110
8. Weiskopf D, Cerpas C, Angelo MA, dkk. CD8 + T manusia - sel
tanggapan terhadap 4 serotipe virus dengue dikaitkan dengan pola target protein
yang berbeda. J Infeksi Dis. 2015; 212 (11): 1743 - 1751.
https://doi.org/10.1093/infdis/jiv289
9. Weiskopf D, Bangs DJ, Sidney J, dkk. Infeksi virus dengue menimbulkan sel CX3CR1 +
sitotoksik CD4 + T yang sangat terpolarisasi terkait dengan kekebalan pelindung. Proc
Natl Acad Sci. 2015; 112 (31): E4256 -
E4263. https://doi.org/10.1073/pnas.1505956112
10. Rivino L, Kumaran EA, Thein TL, dkk. Virus - T spesifik
limfosit menjadi rumah bagi kulit selama infeksi dengue alami.
Sci Translat Med. 2015; 7 (278): 278ra35 - 278ra35. https: // doi. org / 10.1126 /
scitranslmed.aaa0526
11. Wijeratne DT, Fernando S, Gomes L, dkk. Kuantifikasi respon sel T spesifik virus
dengue dan korelasinya dengan viral load dan keparahan klinis penyakit pada
infeksi dengue akut.
PLOS Abaikan Tropic Dis. 2018; 12 (10): e0006540. https://doi.org/
10.1371 / journal.pntd.0006540
12. Choi YJ, Kim SB, Kim JH, dkk. Polifungsi sel T CD8 (+) yang terganggu pada
pasien sepsis berat dengan reaktivasi sitomegalovirus manusia. Exp Mol Med. 2017;
49 (9): e382. https://doi.org/10.1038/emm.2017.146
13. Yamamoto T, Iwamoto N, Yamamoto H, dkk. Polyfunctional CD4 + T - induksi sel
dalam antibodi penetral - pengendalian infeksi virus simian immunodeficiency. J
Virol.
2009; 83 (11): 5514 - 5524. https://doi.org/10.1128/JVI.00145 - 09
14. Kasprowicz V, Ward SM, Turner A, dkk. Mendefinisikan arah dan kualitas virus
influenza - lintas sel CD8 + T spesifik - reaktivitas pada individu yang terinfeksi
virus hepatitis C. J Klinik Invest. 2008; 118 (3): 1143 - 1153. https://doi.org/10.
1172 / JCI33082
15. Snyder LD, Chan C, Kwon D, dkk. T polifungsional - sel
tanda tangan untuk memprediksi perlindungan dari sitomegalovirus setelah transplantasi
paru. Am J Respir Crit Perawatan Med. 2016; 193 (1): 78 - 85.
https://doi.org/10.1164/rccm.201504 - 0733OC
16. Seder RA, Darrah PA, Roederer M. T - kualitas sel dalam memori
dan perlindungan: implikasi untuk desain vaksin. Nat Rev Immunol. 2008; 8 (4):
247 - 258. https://doi.org/10.1038/nri2274
17. Taruhan MR, Nason MC, SM Barat, dkk. HIV nonprogressor lebih disukai
mempertahankan HIV yang sangat fungsional - sel CD8 + T tertentu. Darah. 2006;
107 (12): 4781 - 4789. https://doi.org/10.1182/ blood - 2005 - 12 - 4818
18. Panagioti E, Klenerman P, Lee LN, van der Burg SH, Arens R. Fitur sel T yang
efektif - menginduksi vaksin melawan infeksi virus kronis. Immunol depan. 2018;
9: 276. https://doi.org/10. 3389 / fimmu. 2018.00276
19. Jeewandara C, Adikari TN, Gomes L, dkk. Fungsi respons sel T memori spesifik
virus dengue pada individu yang dirawat di rumah sakit atau yang mengalami
infeksi dengue ringan atau subklinis. PLOS Abaikan Tropic Dis. 2015; 9 (4):
e0003673. https: // doi.org/10.1371/journal.pntd.0003673
10 |
20. Mongkolsapaya J, Duangchinda T, Dejnirattisai W, dkk. Respon sel T pada
demam berdarah dengue: silang - sel T reaktif suboptimal? J Immunol. 2006; 176
(6): 3821 - 3829.
21. Sang CT, Cuzzubbo AJ, Devine PL. Evaluasi enzim penangkapan komersial - uji
imunosorben terkait untuk mendeteksi antibodi imunoglobulin M dan G yang
diproduksi selama infeksi dengue. Clin Diagnostik Lab Immunol. 1998; 5 (1): 7 - 10.
22. Fernando S, Wijewickrama A, Gomes L, dkk. Pola dan penyebab keterlibatan hati
pada infeksi dengue akut. BMC Infeksi Dis.
2016; 16: 319. https://doi.org/10.1186/s12879 - 016 - 1656 - 2
23. Santiago GA, Vergne E, Quiles Y, dkk. Kinerja analitis dan klinis dari CDC real
time RT - Tes PCR untuk mendeteksi dan mengetik virus dengue. PLOS Abaikan
Tropic Dis.
2013; 7 (7): e2311. https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0002311
24. Malavige GN. Ex vivo ELISpot assay untuk menyelidiki T spesifik virus dengue - tanggapan
sel. Metode Mol berbagai. 2018; 1808: 173 - 179. https://doi.org/10.1007/978 - 1 - 4939 - 8567
- 8_15
25. Malavige GN, Jeewandara C, Alles KM, dkk. Penekanan respon imun spesifik
virus oleh IL - 10 pada infeksi dengue akut. PLOS Abaikan Tropic Dis. 2013; 7 (9):
e2409. https: // doi. org / 10.1371 / journal.pntd.0002409
26. Park SH, Shin EC. Analisis fungsional ex vivo langsung dari HCV -
sel T tertentu. Metode Mol berbagai. 2019; 1911: 349 - 361. https: //
doi.org/10.1007/978 - 1 - 4939 - 8976 - 8_24
27. Chu H, George SL, Stinchcomb DT, Osorio JE, CD Partidos. CD8 + T - respons sel
dalam flavivirus - individu naif setelah imunisasi dengan hidup - kandidat vaksin
demam berdarah tetravalen yang dilemahkan. J Infeksi Dis. 2015; 212 (10):
1618 - 1628.
https://doi.org/10.1093/infdis/jiv258
28. Ritz N, Strach M, Yau C, dkk. Analisis komparatif sel T polifungsional dan sitokin
yang disekresikan yang diinduksi oleh Bacille Calmette - Imunisasi Guerin pada
anak-anak dan dewasa. PLOS One.
2012; 7 (7): e37535. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0037535
29. Simmons CP, Dong T, Chau NV, dkk. T awal - tanggapan sel untuk
Epitop virus dengue pada orang dewasa Vietnam dengan infeksi virus dengue
sekunder. J Virol. 2005; 79 (9): 5665 - 5675.
30. Appanna R, Huat TL, Lihat LL, Tan PL, Vadivelu J, Devi S. Cross -
T reaktif - respon sel terhadap daerah nonstruktural virus dengue di antara pasien
demam berdarah dan demam berdarah dengue di Malaysia. Clin Vaccin Immunol. 2007; 45. Mongkolsapaya J, Dejnirattisai W, Xu XN, dkk. Sin antigenik asli dan apoptosis
14 (8): 969 - 977.
31. Wijewickrama A, Fernando S, Jayerathne GSB, dkk. Munculnya virus Dengue
serotipe 2 menyebabkan epidemi dengue terbesar di Sri Lanka. bioRxiv. 2018:
329318. https: // doi.org/10.1101/329318
32. Hoji A, Rinaldo CR Jr. Sel CD8 + T manusia khusus untuk virus influenza A M1
menunjukkan ekspresi kematangan yang luas -
penanda fenotipik dan reseptor kemokin terkait.
Imunologi. 2005; 115 (2): 239 - 245. https://doi.org/10.1111/j.
1365 - 2567.2005.02135.x
33. Ota MO, Ndhlovu Z, Oh S, dkk. Protein hemagglutinin merupakan target utama
virus campak - HLA tertentu - A2 - membatasi respons sel CD8 + T selama campak
dan setelah vaksinasi. J Infeksi Dis. 2007; 195 (12): 1799 - 1807.
https://doi.org/10.1086/518006
34. Sakabe S, Sullivan BM, Hartnett JN, dkk. Analisis respon sel T CD8 (+) selama
tahun 2013 - Epidemi Ebola 2016 di Afrika Barat. Proc Natl Acad Sci AS. 2018;
115 (32): E7578 - E7586. https://doi.org/10.1073/pnas.1806200115
WIJERATNE ET AL.
35. Dong T, Moran E, Vinh Chau N, dkk. Pro tinggi - inflamasi
sekresi sitokin dan hilangnya persilangan aviditas tinggi - sitotoksik reaktif T - sel
selama infeksi virus dengue sekunder. PLOS One. 2007; 2 (12): e1192.
36. Mathew A, Rothman AL. Memahami kontribusi imunitas seluler terhadap
patogenesis penyakit dengue. Immunol Rev. 2008; 225: 300 - 313.
37. Atrasheuskaya A, Petzelbauer P, Fredeking TM, Ignatyev G. Anti -
Pengobatan antibodi TNF mengurangi kematian pada infeksi virus dengue
eksperimental. FEMS Immunol Med Microbiol. 2003; 35 (1): 33 - 42.
https://doi.org/10.1111/j.1574 - 695X.2003.tb00646.x
38. Chandele A, Sewatanon J, Gunisetty S, dkk. Karakterisasi respon sel T CD8
manusia pada pasien yang terinfeksi virus dengue dari India. J Virol. 2016; 90
(24): 11259 - 11278. https: // doi.org/10.1128/JVI.01424 - 16
39. Malavige GN, Huang LC, Salimi M, Gomes L, Jayaratne SD, Ogg GS. Seluler dan
sitokin berkorelasi dengan infeksi dengue yang parah. PLOS One. 2012; 7 (11):
e50387. https://doi.org/10. 1371 / journal.pone.0050387
40. Palka S, Endy TP, Thomas S, dkk. Produksi sitokin intraseluler oleh virus dengue - sel
T spesifik berkorelasi dengan infeksi sekunder subklinis. J Infeksi Dis. 2011; 203
(9): 1282 - 1291. https://doi.org/10.1093/infdis/jir012
41. Seo SH, Webster RG. Faktor nekrosis tumor alfa memberikan anti yang kuat - efek
virus influenza pada sel epitel paru. J Virol. 2002; 76 (3): 1071 - 1076.
42. Aktas E, Kucuksezer UC, Bilgic S, Erten G, Deniz G. Hubungan antara ekspresi
CD107a dan aktivitas sitotoksik.
Imunologi seluler. 2009; 254 (2): 149 - 154. https://doi.org/10. 1016 /
j.cellimm.2008.08.007
43. Wolint P, Betts MR, Koup RA, Oxenius A. Sitotoksisitas langsung tetapi tidak
dengan degranulasi membedakan subset efektor dan memori sel CD8 + T. J
Exper Med. 2004; 199 (7): 925 - 936. https://doi.org/10.1084/jem.20031799
44. Novais FO, Carvalho LP, Graff JW, dkk. Sel T sitotoksik memediasi patologi dan
metastasis di leishmaniasis kutan.
PLOS Patogen. 2013; 9 (7): e1003504. https://doi.org/10.1371/
journal.ppat.1003504
dalam patogenesis demam berdarah dengue. Nat Med. 2003; 9 (7): 921 - 927.
INFORMASI PENDUKUNG
Informasi pendukung tambahan dapat ditemukan online di bagian Informasi
Pendukung.
Bagaimana mengutip artikel ini: Wijeratne DT, Fernando
S, Gomes L, dkk. Asosiasi virus dengue - T polifungsi spesifik - respon
sel dengan keparahan penyakit klinis pada infeksi dengue akut.
Immun Inflam Dis. 2019; 1 - 10.
https://doi.org/10.1002/iid3.271