Prosedur percobaan
Dilarutkan 3 g baktoagar dan 0,1 g NaCl dengan
100 mL aquades dalam erlenmeyer 250 mL
kemudian dididihkan hingga terbentuk larutan
jernih. Tutup mulut erlenmeyer dengan sumbat
kapas yang dibungkus kertas coklat (bagian
kasar menghadap kapas yang licin diluar).
Diautoklaf temperatur 1210C tekanan 15 psi
selama 15 menit
Dilarutkan 5 g susu skim dengan 50 ml dengan
akuades dalam erlenmeyer 100 ml, ditutup
dengan sumbat dan diautoklaf temperatur
1210C tekanan 15 psi selama 10 menit
Kedua bahan yang sudah disetrilkan
selanjutnya didinginkan sampai temperatur
350C kemudian di campur secara aseptik
dengan dituang kedalam cawan petri
Dibiarkan pada temperatur kamar selama 24
jam
Perlakuan dilakukan secara aseptik dilap meja
dengan alkohol 70% di kelilingi oleh lampu
spiritus yang menyala dan dikerjakan didekat
lampu spiritus
Diambil 0,1 ml sampel cair dan diambil dengan
pipet volume dengan tip yang steril dimasukkan
kedalam tabung reaksi yang berisis 9,9 ml
akuades steril divortek hingga homogen
Dilakukan hal yang sama seperti sebelumny
tetapi menggunakan sampel hasil pengenceran
sebelumnya dan seterusnya terus diulangi
Inokulasi masing-masing sampel hasil
pengenceran pada media selektif mikroba
penghasil protease dengan cara: di ambil satu
media padat yang disiapkan mingu sebelumnya,
dipanaskan bibir cawan secara merata didekat
lampu spiritus yang menyala dengan udara
yang steril. Diambil sampel hasil pengenceran
0,1 ml dan diteteskan di atas media pada
kemudian diratakan dengan spreader yang
Analisa prosedur
Digunakan baktoagar dan NaCl sebagai bahan
pembuat media selektif padat karena enzim
protease dapat diproduksi dalam media
tersebut dengan pH awal berkisar antara 4,0 -
10,0 atau kondisi asam sampai alkali.
Dididihkan untuk mempercepat reaksi dan
pembentukan agar-agar.
Ditutup dengan sumbat dan diautoklaf
bertujuan untuk mensterilkan bahan pembuat
media selektif dari mikroba-mikroba yang
mengganggu.
Digunakan susu skim bertujuaan untuk
mengemulsi protein yang tidak dapat larut
sempurna dalam media air sehingga
menghasilkan larutan atau media yang keruh
agar mempermudah mengamati adanya
mikroba penghasil protease karena aktivitas
proyease menyebabkan protein dari susu skim
terdegradasi menghasilkan zona transparan
(bening) pada media.
Di autoklaf selama 10 menit untuk menghindari
protein dalam susu rusak dan terjad reaksi
mailard
Untuk mendapatkan media padat selektif yang
tetap steril dan tidak terkontaminasi oleh
mikroba lain
Untuk melihat apakah media tersebut
terkontaminasi atau tidak
Untuk menjaga kondisi media sselektif tetap
steril dan menjaga agar tidak terkontaminasi
dengan mikroba lain.
Untuk mengencerkan sampel 10^2 dalam
keadaan tetap steril agar tidak terkontaminasi
dengan mikroba yang lain
Untuk mendapatkan pengenceran sampel 10^4
hingga 10^16
Inokulasi dilakukan untuk menyeleksi mikroba
penghasil enzim protease.
Dilakukan di dekat lampu spiritus yang enyala
agar tetap steril dan menjaga agar tidak
terkontaminasi dengan mikroba lain.
Diratakan dengan spreader yang telah steril dan
tidak terlalu panas suhunya diharpkan agar
mikroba tumbuh secara merata dengn
sempurna
telah diseetrilkan sebelumnya. Ditutup
sekeliling cawan dengan plastik wrap.