Alokasi karbon ke metabolit utama pada daun yang diterangi

tidak hanya sebanding dengan fotosintesis ketika kondisi gas

(CO2 dan O2) bervariasi

Cyril Abadie, Camille Bathellier dan Guillaume Tcherkez

Research School of Biology, College of Science, Australian National University, 2601 Canberra, ACT , Australia

Penulis untuk korespondensi: Guillaume metabolisme di mana 3-fosfogliserat (PGA) digunakan untuk
Tcherkez Telp: +61 6125 0381 Email:
mensintesis fosfat triosa dan meregenerasi ribulosa-1,5- bifosfat
guillaume.tcherkez@anu.edu.au
(RuBP), dan 2-fosfoglikolat didaur ulang kembali ke PGA. Konsumsi
Diterima: 6 Oktober 2017 Diterima: dan regenerasi RuBP seimbang sehingga kolam metabolik
29 November 2017
terfosforilasi diatur dan fotosintesis beroperasi dalam kondisi mapan
(von Caemmerer & Farquhar, 1981; Sage et al., 1988). Demikian
New Phytologist (2018) 218: 94–106 doi: pula, konversi 2-fosfoglikolat menjadi zat antara fotorespirasi glisin,
10.1111 / nph .14984 serin dan gliserat, dan kemudian menjadi PGA, pada prinsipnya harus
kuantitatif sehingga tidak ada ketidakseimbangan progresif dalam
siklus fotorespirasi yang muncul. Namun, baru-baru ini menunjukkan
Kata kunci: alokasi karbon, pelabelan,
asimilasi nitrogen, resonansi magnetik nuklir
bahwa efektif stoikiometri coeffi- sien antara CO 2 evolusi oleh
(NMR), fotorespirasi, fotosintesis.
Ringkasan
metabolisme photorespiratory dan O2 dikonsumsi oleh RuBP

erimen pertukaran gas, manipulasi CO2 dan O2 biasanya digunakan untuk mengubah menyimpang oksigenasi sangat sedikit dari 2, sehingga glisin
n antara karboksilasi dan oksigenasi. Metabolisme hilir (pemanfaatan produk cenderung menumpuk di daun diterangi (Abadie etal.,2016a). Produk
an fotorespirasi) juga dapat dipengaruhi oleh kondisi gas tetapi hal ini tidak akhir fotosintesis seperti sukrosa juga cenderung terakumulasi dalam
sikan dengan baik. Di sini, kami memanfaatkan bunga matahari sebagai spesies
cahaya, mencerminkan pemanfaatan triosa fosfat yang disintesis oleh
mengakumulasi klorogenat selain gula dan asam amino (glutamat, alanin, glisin, dan
siklus Calvin (Huber, 1989). Oleh karena itu, baik kandungan
13
melakukan pelabelan isotop dengan karbohidrat
CO2 di bawah kondisi CO2/ O2 yang berbeda, dan daun dan asam amino berubah dengan rasio karboksilasi-
ke-oksigenasi. Namun,
13kandunganC untuk menghitung 13pola alokasi C dan laju build-up. Kandungan 13
pengetahuan saat ini tentang reorchestration umum metabolisme daun
olit utama tidak ditemukan sebagai proporsi konstan karbon tetap bersih tetapi,
di luar produk fotosintesis dan fotorespirasi langsung ketika tingkat
erubah secara dramatis dengan CO2 dan O2. Alanin biasanya terakumulasi pada
fotosintesis atau fotorespirasi (rasio CO2/ O2 ) bervariasi masih
spon hipoksia) sementara intermediet photorespiratory akumulasi di bawah kondisi
pada fotorespirasi tinggi, akumulasi glycerate melebihi serin dan glisin build-up.
terpisah-pisah. Selain itu, adalahumum praktikuntuk mengasumsikan
genat relatif lebih penting dalam kondisi normal dan pada COtinggi 2 dan sintesisnya
sintesis fosfoenolpiruvat de novo. Temuan ini menunjukkan bahwa alokasi karbon bahwa jumlah karbon yang diarahkan ke komponen hilir (atau produk
lit selain produk akhir fotosintesis dipengaruhi oleh kondisi gas dan oleh karena ituakhir) adalah proporsi konstan dari input fotosintesis bersih (Penning
esis asimilasi nitrogen bersih bervariasi, menjadi minimal pada tinggi CO 2 dan De Vries, 1983; Hilbert & Reynolds, 1991; Dewar et al., 1998).
da tinggi O2. Untuk pengetahuan kami, analisis fluks yang tepat melalui

sukrosa dan kolam fosfat heksosa di bawahCObervariasi 2/ O2 yang

Pendahuluan rasiobelum pernah dilakukan. Sintesis sukrosa dan translokasi

tampaknya diskalakan untuk fotosintesis, terlepas dari asal perubahan
COfotosintesis2 Asimilasidan fotorespirasi bergantung pada siklus
 secara(yaitu fraksi karbon tetap bersih yang lebih rendah) menjadi
dalam aktivitas fotosintesis (cahaya atau CO 2) (Servaites & Geiger,
gula (Maleszewski & Lewanty, 1972), tetapi 2% O 2 menyebabkan
1974), kecuali pada COrendah di2 mana alokasi karbon ke sukrosa
sedikit perubahan dalam alokasi karbon untuk gula netral
secara proporsional meningkat banyak (Sharkey et al., 1985). Selain
dibandingkan dengan 21% O2 (Nakamura etal.,1997). Kandungan
itu, fotosintesis dalam 100% O2 telah ditemukan
sukrosa daun ditentukan oleh enzim metabolisme gula seperti
menyebabkanproporsional alokasi karbon yang invertase dan siklus sintesis-degradasi yang sia-sia (Geiger, 1979;
lebih rendah
Huber,

94 New Phytologist (2018) 218: 94–106 © 2018 Penulis

www.newphytologist.com
Research
New Phytologist © 2018 New Phytologist Trust
RuBP 1989; Geigenberger & Stitt, 1991), yang keduanya kemungkinan
kandungan sebagian besar daun (% 80 μmol mÀ2 dalam bunga matahari; berubah dengan konteks metabolik. Misalnya,
penurunan
Jacob & Lawlor, 1992) . Oleh karena itu, bahkan perubahan yang sangat kecil dalam ekspresi sukrosa fosfat sintase (SPS)
dansitosol di
metabolismehilir karboksilasi atau oksigenasi per se fruktosa-1,6-bifosfatase (cFBPase) oleh teknologi antisense
dapat memiliki konsekuensi yang meluas pada regenerasi RuBP, N tidak menyebabkan untuk efek yang sama,
denganbiasanya jauh lebih sedikit
jalur asimilasi dan anabolik yang. mulasi intermediet terfosforilasi pada aktivitas SPS
Meskipun penting, saat ini tidak ada pengurangan yang tepat dibandingkan dengan aktivitas cFBPase (Strand et al., 2000).
data titatif pada pola alokasi karbon (termasuk penumpukan Hal ini diduga disebabkan oleh penurunan
laju zat antara fotorespirasi) ketika fotosintesis kandungan pirofosfat (PPi) dan pergeseran rasio UDP-glukosa / heksosa
fosfat, sehingga mendukung sukrosa sintesis ketika

bervariasi sebagai hasilkondisi mapan 13padaCO2 pelabelan CO2 dan padaO2 mol dan fraksi daun. 13C-NMR Di sini, kami

menganalisisdigunakan
SPS yangdiatur ke bawah. Agaknya, ketika fotosintesis bervariasi

untuk melacak dengan tepat nasib karbon tetap di kolam metabolik dan dengan rasio CO 2/ O2 , perubahan ukuran kolam

metabolit termasuk

memeriksa perubahannya denganCO2 dan O2 fraksi mol. NMR ing fosfat anorganik (Pi) dan fruktosa-2,6-bifosfat (efek
analisiskurang sensitif dibandingkan MS tetapi sangat kuantitatif, fektor yang bekerja pada sintesis sukrosa) (Stitt, 1990)
dapat memodulasi
sehingga memungkinkan kita untuk fokus pada metabolit daun yang quanti- fluks sintesis sukrosa bersih.
relatif penting untuk metabolisme karbon (metabolit 'mayor'). Secara umum, tampaknya ada hubungan antara sukrosa
dan untuk menentukanabsolut 13jumlahC (misalnya dalam mmolmÀ2). dan produksi asam amino dan ekspor oleh daun
yang diterangi sehingga
juga mengungkapkan informasi tentang pola isotop intramolekul bahwa sintesis senyawa yang mengandung N diharapkan
dan dengan demikian potensi pemanfaatan kolam metabolisme yang berbeda untuk diskalakan ke laju fotosintesis (Foyer
et al., 2000). Namun, menggunakan

posisi atom C yang berbeda dari molekul. Kami sebelumnya memiliki pelabelan isotop dengan 13C-sitrat, 13CO2 atau 15N-

nitrat dan
memanfaatkan analisis NMR dan perhitungan keseimbangan massa analisis resonansi magnetik nuklir (NMR), telah
terbukti
melacak asal atom karbon yang digunakan untuk de novo glutamat bahwa asimilasi nitrogen (N) itu sendiri dipengaruhi

olehCO2 dan O2 fraksi mol, sehingga de novo sintesis glutamatcenderung untuk

sintesis (Abadie et al., 2017b). Dalam makalah ini, metabolit utama diikuti untuk menghitungnyata 13peningkatanC
mereka sebagai peningkatan fotorespirasi (Gauthier et al., 2010;

alokasi daritetap bersih 13CO2. Kami mengambil keuntungan dari sun-Tcherkez et al., 2012; Abadie et al., 2017b).
Demikian pula, peningkatan
bunga sebagai spesies model, yang mengakumulasi klorogenat dalam laju fotorespirasi telah terbukti terkait dengan
daun (Steck, 1968; Lehman & Rice, 1972) selain konsumsi elektron primer yang lebih tinggi untuk asimilasi N (Bloom et
al.,
metabolit mary yang berasal dari metabolisme gula, photorespira- 2002, 2014; Rachmilevitch et al., 2004). Itu juga telah
demonstrasi
, atau TCAP (Gbr. 1). Klorogenat adalah fenilpropanoid yang menyatakan bahwa sintesis protein dirangsang oleh cahaya
(sebagai lawan
dari disintesis dari erythrose-4-phosphate (E4P) dan PEP (Sup- the dark) sedangkan fosforilasi terjemahan sitosol memulai

Information Figs S1, S2). Selain itu, bunga matahari merupakan faktor asi yang luas dipengaruhi olehCO 2 fraksi

mol(Piques et al.,
Bekas tanaman penghasil minyak dengan efisiensi penggunaan karbon yang relatif rendah 2009; Boex-Fontvieille et al.,
2013). Biosintesissel
konsentrasi(Connor & Sadras, 1992; Albrizio & Steduto, 2003) dan bahan penyusun seperti selulosa juga merespon
fotosintesis, dengan

demikian alokasi dan pemanfaatan karbon merupakan sintesis selulosa yang sangat penting pada COtinggi 2 (tetapi

mewakili lebih sedikit ketika

tance dalam spesies ini. Kami menggunakan enam kondisi CO 2/ O2 berbeda yang dinyatakan sebagai rasio fotosintesis
bersih) (Boex-Fontvieille et al.,
untuk menjawab pertanyaan berikut: apakah alokasi karbon hingga 2014). Akhirnya, pemantauan jalur asam trikarboksilat
(TCAP) menggunakan 13pelabelanC-piruvat telah menunjukkan bahwapernapasan

sukrosa, fruktosa dan glukosa peka terhadap kondisi CO 2 dan O2 ; melakukan fluks yang jelas ke asam amino

danklorogenat metabolismemerespons CO2 dan O2, sehinggaterkait fluks

akumulasimewakili proporsi konstan fotosin- dengan dekarboksilasi meningkat dengan fotorespirasi (Tcherkez
tesis; dan melakukan permintaan metabolik yang dihasilkan di N asimila- et al., 2008).
Apakah berbeda dengan fotosintesis bersih? Secara keseluruhan, fluks karbon tampaknya tidak diukur secara ketat untuk
fotosintesis, sebagai hasil dari interaksi metabolik antara fotorespirasi, asimilasi N dan jalur lain
Bahan dan Metode
(interaksi tersebut dibahas lebih lanjut dalam Hodges et al., 2016). Lebih lanjut, meskipun banyak fluks yang disebutkan
sebelumnya (titativitas
bahan tanaman
nonquan dari konversi fotorespirasi, TCAP, dan de novo
biji bunga matahari(Helianthus annuus L., var. XRQ) yang ditaburkan dalam sintesis glutamat) secara numerik kecil
(dibandingkan dengan
campuran foto , dan setelah 14 hari, planlet dipindahkan ke 15l untuk sintesis atau fotorespirasi), dampak potensial
darimereka
pot. Tanaman ditanam di rumah kaca dalam kondisi variasi metabolisme daun yang cukup besar. Faktanya, bahkan
24: 18°C, kelembaban relatif (RH) 60: 55%, 16: 8 jam, siang: malam ketidakseimbangan sekecil 0,1 μmol mÀ2 sÀ1 dalam
daur ulang glisin dalam
fotoperiode, dengan cahaya yang dilengkapi oleh fotorespirasi Lucagrow menghasilkan permintaan berlebih
untukasimilasiN
lampu natrium400W(JB Lighting, Cheltenham, Australia). dari c. 5 mmol mÀ2dÀ1, mewakili hampir 10% dari total daun N
Tanaman disiram setiap 2 hari ditambah sekali seminggu dengan isi. Demikian pula, konsumsi PGA pada tingkat
1,5 glÀ1 larutan nutrisi Peters® Professional Pot Plant Special 0,1 μmol mÀ2 sÀ1 oleh anabolisme kloroplastik (misalnya
untuk mensintesis

(Everris, Geldermalsen, Belanda) dengan N / P2O5/ K2O phosphoenolpyruvate (PEP)) mewakili konsumsi bersih
komposisi 15/11/29 (dan keseimbangan nitrogen nitrat / c. 2 mmol RuBP mÀ2 dÀ1, yaitu, banyak lebih dari total
amonium / urea 8,6 / 2.0 / 4.4) dan elemen jejak.
© 2018 The Authors New Phytologist © 2018 New Phytologist Trust
New Phytologist (2018) 218: 94–106 www.newphytologist.com

New Phytologist
Research 95
New
Research Phytologist 96
Pertukaran gas dan pengambilan sampel

Pertukaran gas di bawah kondisi COterkontrol 2/ O2 yang sesuai - dibentuk dalam ruang yang digabungkan dengan Li-Cor
6400-XT (Li-Cor Biosciences, Lincoln, NE, USA), dengan dinding lunak yang dapat dipotong dengan sangat cepat,
memungkinkan pengambilan sampel instan dengan penyemprotan nitrogen cair, seperti yang dijelaskan sebelumnya
( Tcherkez et al., 2012). Ruang daun disesuaikan dengan individu daun dengan luas permukaan c. 100 cm2. Kondisi
13
pertukaran gas adalah 80% RH dan21-23°suhu udaraC. Pelabelan isotop dilakukan dengan menggunakan CO2 (99%

13C; Sigma-Aldrich) selama 2 jam setelah mencapaistabil fotosintesismenggunakan CObiasa2 (kelimpahan alami) untuk c.
13
60 menit. Untuk semua kondisi CO 2/ O2 , dua rangkaian percobaan dilakukan: dengan CO2, dan dengan COalam2.

Melakukan eksperimen dengan COalami2 sangat diperlukan untuk% 13C perhitunganmenggunakan data NMR. Enam

kondisi CO2/ O2 digunakan dalam penelitian ini (% -μmol molÀ1; diperintahkan dengan meningkatkan rasio karboksilasi-
oksigenasi): 100-380, 21-140, 21-380, 21-800,
Gambar. 1 Redistribusi metabolik utama karbon tetap dalam daun bunga matahari. Gambar tersebut menunjukkan (nama dalam huruf tebal)
metabolit yang paling terlihat oleh 13resonansi magnetC-nuklir (13C-NMR), yaitu, mewakilipaling signifikan 13kolamCsetelah 13CO2
pelabelan(spektrum NMR pada Gambar 2). Jalur metabolisme sangat disederhanakan untuk memfasilitasi pembacaan. Biosintesis
klorogenat selanjutnya dijelaskan dalam Informasi Pendukung Gambar. S2. PEP, fosfoenolpiruvat; RuBP, ribulosa- 1,5-bifosfat; TP, triosa
fosfat; TCAP, jalur asam trikarboksilat.
New Phytologist (2018) 218: 94–106 © 2018 Penulis www.newphytologist.com
2-380, 0-380. Dalam gambar, xsumbumenunjukkan kondisi ini dalam urutan itu.
New Phytologist © 2018 New Phytologist Trust
Kondisi gas yang digunakan dalam penelitian ini diringkas dalam Tabel S1.
Ekstraksi dan analisis NMR
Sampel (100 cm2, yaitu c. 2 g FW) diekstraksi dengan asam perklorat dalam nitrogen cair seperti yang dijelaskan
sebelumnya (Aubert et al., 1994). Singkatnya, sampel digiling dengan nitrogen cair dengan 900 μl asam perklorat 70%
dan 500 μl larutan maleat 0,5 M (yaitu total 125 μmol per sampel, digunakan sebagai standar internal). Serbuk halus
dituang ke dalam tabung centrifuge 50 ml kemudian ditambahkan 10 ml air MilliQ. Setelah sentrifugasi (15.000 g, 15
menit), pellet diekstraksi kembali dengan 3 ml asam perklorat 2% dan disentrifugasi. Kedua supernatan digabungkan, pH-
disesuaikan menjadi 5 dengan kalium bikarbonat dan dikeringkan-beku. Sampel kemudian disuspensi kembali dalam 1ml
air, pH diatur hingga 7 dengan KOH dan disentrifugasi.supernatan
Gambar. 2 13C-resonansi magnetik nuklir (13SpektrumC-NMR) ekstrak daun bunga matahari, menunjukkan sinyal klorogenat. Spektrum rata-rata diperoleh tanpa
ditunjukkan pada (biru) bagian bawah. dan dengan Rasio label spektral (merah) dengan (13C 13pengayaan CO2 di 380 spektrum) μmol molA1 ditunjukkan CO2,21%
di O2atas, 400 (hijau). μmol mPeaks À2 sÀ1 terkait secara fotosintesis dengan radiasi aktif klorogenat (kecuali dan untuk 21 ° C adalah daerah gula) diindikasikan
dengan panah hitam. Penjelasan lengkap tentang puncak yang terkait dengan posisi atom-C individu diberikan dalam Informasi Pendukung Gambar. S1.
Wilayah gugus COOH dan gula secara sederhana ditunjukkan dengan tanda kurung. Perhatikan bahwa sinyal maleat (standar internal) sensitif terhadap pH dan
dengan demikian memiliki perubahan kimiawi yang sedikit berubah-ubah, secara artifisial menyebabkan sinyal dalam rasio (*). Puncak fumarat sangat tinggi
(peningkatan kandungan fumarat pada kelimpahan alami di daun) tetapi tidak diberi label (f). a, alanin C-3; b, senyawa keluarga betaine yang tidak berlabel; s,
serine C-2; g, glisin C-2 + malat C-3. Panah merah berarti posisi C-atom dalam glutamat (C-2, 3 dan 4 dari kiri ke kanan).

Bayswater, Victoria, Australia) dipasangkan denganZIC ®pelindung

(550 μl) dikumpulkan, 50 μl D2O ditambahkan dan sampel
kolom-HILIC (20 9 2.1 mm; Merck SeQuant®) pada30suhu°ovenC,
dituangkanke dalam tabung 5mm NMR (Z107373; Bruker BIOSPIN,
+
Wissembourg, Prancis). Sampel dianalisis dengan spektrometer dengan sistem UHPLC Ultimate 3000 LC (Dionex-Thermo
NMR, Advance 700 Mz (Bruker Biospin). Analisis NMR dilakukan Scientific, Hemel Hempstead, Inggris). Aliquot dari ekstraksi NMR
pada 298 K (25°C) tanpa pemintalan tabung, menggunakan program diencerkan 10 kali dalam air / aconitrile (v / v, 50: 50), dan standar
pulsa karbon (zgig) yang dipisahkan oleh proton (decoupling internal (trifluoromethyl phenylalanine, TFMP) ditambahkan untuk
sequence waltz16) dengan pulsa 90° untuk 13C dari 10 μs pada 50 W, memantau respon sinyal dari LC-MS. Untuk kuantifikasi, kurva
kalibrasi dengan campuran asam amino standar (termasuk TFMP)
akuisisi 0,9 s waktu, 65 k ukuran peluruhan induksi bebas, dan
dilakukan sebelum dan sesudah batch sampel. Baki sampel diatur
penundaan relaksasi (D1) sebesar 1.2s. Untuk mendapatkan rasio
pada 4°C (suhu konstan). Volume injeksi adalah 1 μldan elusi
signal-to-noise yang baik, 20.000 scan dilakukan, mewakili c. 12 jam
À1
analisis per sampel. Karena respon puncak individu pada pergeseran dilakukan pada laju alir 0,3mlmin dengan gradien biner. Fase gerak
kimia yang berbeda tidak sepenuhnya kuantitatif dalam kondisi A adalah asetonitril / air (25: 75, v / v) dan fase gerak B adalah
akuisisi seperti itu (D1 pendek), sinyal dikoreksi menggunakan asetonitril / air (95: 5, v / v) keduanya dengan amonium asetat (5mM).
sampel kalibrasi dengan konsentrasi metabolit standar yang diketahui Gradien yang diterapkan adalah 72% B pada 0 menit, turun menjadi
(Glu, Asp, Ala dan treonin). Dalam praktiknya, faktor koreksi berada 36% B pada 13 menit, dipertahankan selama 2 menit, dan kemudian
dalam kisaran 0,9-1,1 dan dengan demikian tidak terlalu penting. kembali ke 72% B pada 16 menit (total waktu berjalan 21 menit).
Data NMR yang disajikan dalam makalah adalah mean Æ SD dari n Untuk analisis MS, Orbitrap Q Exactive Plus (Thermo Fisher
= 3 ulangan. Scientific, Scoresby, Victoria, Australia) dengan probe HESI-II
dioperasikan dalam polaritas positif menggunakan mode pemindaian
MS lengkap dengan pengaturan berikut: tegangan sumber, 3500V;
LC-MS resolusi, 70000; Target AGC, 1 9 106; massa memindai
A Penelitian 97
Liquid kromatografi kolom (3,5 μm, 200 A, adalah 150 dilakukan 9
2.1mm; menggunakan Merck sebuah ZIC®-HILIC SeQuant®,

© 2018 The Authors New Phytologist © 2018 New

Phytologist Kepercayaan
New Phytologist (2018) 218: 94–106
www.newphytologist.com
New

Phytologist
New
Penelitian Phytologist 98
kisaran,60-600 m/z;selubung gas, 40; gas tambahan, 10; menyapu gas, 1,5; suhu probe, 300°C; suhu kapiler, 250°C; dan
level S-lens RF, 50. Kalibrasi massal dilakukan dengan larutan kalibrasi ion positif LTQ-ESI (Pierce ®; Thermo Fisher
Scientific) segera sebelum setiap batch analisis. Perangkat lunak Xcalibur digunakan untuk menangani data LC-MS. Data
LC-MS yang disajikan dalam makalah adalah mean Æ SD sebesar n = 6 ulangan.
Perhitungan
Persentase dalam 13C dihitung sebagai rasio sinyal NMR dari posisi atom C yang diperoleh pada 13pelabelanC (13S) hingga

% 13yang C = diperoleh 13S /12S 9 dengan 1,1 / 99 biasa 9 100, CO di mana 2 (kelimpahan alami) (12S): 99 dan 1.1

singkatan dari pengayaan isotop di inlet CO2. Perhitunganakumulasi fluksuntuk glisin, serin dan gliserat dilakukan dengan
 menggunakan persamaan keseimbangan massa dan konvergensi solusi persamaan diferensial yang menjelaskan 13kolamC

(lihat Gambar. S3 untuk rincian perhitungan). Tingkat oksigenasi diperkirakan sebagai vdi o = 2vcC*/ctidak adanya saya,di
À À2 À1
mana dari C* hari respirasi ciberbasis CO(40 2 kompensasi μmol mol 1), titik dan v0.5 c = μmol (A + Rmd) / (1 s À ),

C*/ cdengan i), di mana C* Rd adalah hari respirasi (penelitian ini, dan Rd diperoleh dengan menggunakanLaisk

metode(untuk penjelasan terbaru tentang metode ini, lihat Tcherkezaliran et al., 2017). Perhatikan bahwa vo tidak

digunakan untuk menghitung 13alokasi C dan tidak kritis sama sekali. Nilai vo yang tepat (dengan Γ* dan cc ditentukan dengan

konduktansi internal) hanya akan mengubah skala pada Gambar. S12.

Hasil
metabolit utama di ekstrak daun
13
C-NMR dalam ekstrak daun bunga matahari ditunjukkan pada Gambar. 2. Bahkan pada 13C kelimpahan alami (warna
biru) , ada puncak yang terlihat terkait dengan fumarat (atom C 2 + 3), gula dan klorogenat, menunjukkan jumlah mereka
yang relatif tinggi di daun. Klorogenat secara formal diidentifikasi menggunakan 13nilai pergeseran kimiaC dan
perbandingan dengan au standar thentic (Gbr. S4; Tabel S2). Setelah 13pelabelanC, terdeteksi 13C sebagian besar
ditemukan pada gula, tetapi juga pada klorogenat, serin, glisin, glutamat dan alanin (spektrum merah pada Gambar 2).
Beberapa gugus COOH juga diberi label tetapi resolusi spektral (lebar puncak) terlalu buruk untuk mengidentifikasi
mereka secara tepat. Mempertimbangkan 13metabolit C yang diamati dalam penelitian ini, gugus COOH ini sebagian besar
berhubungan dengan malat, glisin, serin, dan klorogenat. Semua atom C yang terlihat dalam klorogenat tampaknya diberi
label (panah hitam pada Gambar 2 dan pembesaran pada Gambar. S5), menunjukkan 13pelabelanC dalam prekursor E4P
dan PEP. Jumlah kedua senyawa ini tetap terlalu kecil untuk terlihat oleh 13
C-NMR di sini (biasanya < 10 μmol mÀ2).
13
Perlu dicatat bahwa dua metabolit tampaknya tidak sensitif terhadap C pelabelan (yaitu dengan tingkat turnover sangat

lambat): fumarat dan metabolit dengan puncak pada 53,4 ppm (mungkin sesuai dengan magnesium fitat atau CH x-NH2

kelompok metabolit dari keluarga betaine; huruf 'b' pada Gambar 2).
Fotosintesis dan metabolisme gula

Seperti yang diharapkan, fotosintesis bersih (dinotasikan sebagai A)meningkat sebagai CO1 μmol 2: Om2 À2rasio sÀ1

meningkat. Namun, lebih rendah dari pada 2% O2, saat menunjukkan 0% O2, A dampaknya adalah kondisi hipoksia pada

metabolisme fotosintetik (Gbr. 3a). Total karbon yang diasimilasi selama waktu percobaan (2 jam dengan 13CO2)

meningkat 13C sebagai rasio CO2 : O2 meningkat, dan yang paling melimpah ditemukan sukrosa (Gbr. 3b). Fruktosa,
13 13
glukosa dan metabolit lainnya mewakili sebagian kecil daun C. C tidak terlihat dalam ekstrak perklorik (sebagian besar

mewakili gula dan pati yang diekspor, dan sebagian kecil lainnya seperti protein atau CO 2 yang diasimilasi hilang oleh

respirasi hari) selalu mewakili c. 30%bersih karbon, kecuali pada COrendah2 (140μmol molÀ1), di mana ia mewakili
hampir 50%. Ketika diplotkan terhadap karbon berasimilasi bersih, jumlah 13C yang ditemukan dalam fruktosa daun dan
glukosa tampak hampir linier, sedangkan yang ditemukan dalam sukrosa bersifat hiperbolik, menunjukkan efek jenuh

pada fotosintesis tinggi (Gambar 3c). Secara khusus, 13C (800μmol molÀ1) adalah jumlah sukrosa pada COtinggi2 biasanya
13
rendah (panah pada Gambar 3c), menunjukkan perubahan redistribusi karbon dalam kondisi seperti itu. % C dalam
sukrosa juga menurun pada fotosintesis tinggi (Gambar 3d) yang menunjukkan penurunan pergantian. Efek ini terlihat di
semua posisi atom-C sukrosa (Gbr. S6a, b). Menariknya, posisi rata-rata% 13C di seluruh posisi sukrosa simetris (baik
fruktosil dan gugus glukosil) memiliki profil datar, dengan tidak ada perbedaan yang signifikan antara posisi C-atom (Gbr.
S6, inset). Hal ini menunjukkan bahwa sumber triosa fosfat yang digunakan untuk mensintesis heksosa dan sukrosa
kemungkinan memilikiintramolekulhomogen 13distribusiC yang, dan bahwa perbedaan antara posisi dalam sukrosa adalah
hasil dari 13redistribusiC oleh metabolisme gula, seperti isomerisasi fosfat triosa dan aldolisasi. , dan isomerisasi antara
glukosa-6-fosfat dan fruktosa-6-fosfat.
13
% C dalam glukosa mengendap dan selalu relatif rendah (beberapa%) (Gbr. 3e), hanya mencerminkan pengenceran
isotop oleh kandungan glukosa yang sangat besar secara alami dalam daun bunga matahari (data tidak ditampilkan). % 13C

dalam fruktosa menunjukkan peningkatan yang cukup besar pada CO tinggi lated dari 2 (Gbr. 13C 3f). alokasi Diharapkan

(diperoleh nilai % 13C dari integral dalam gula di adalah gula yang dihitung pada spektrum NMR setelah 13pelabelanC,
dinyatakan sebagai persentase integral spektrum total) dan kandungan total (dari spektrum NMR pada kelimpahan alami).
Perbandingan diharapkan% sukrosa 13C dengan itu kurang diamati 13C-diperkaya nilai (Gambar. Dari S7) menunjukkan

diharapkan dan bahwa ini pada tinggi 13C deple- CO2,

13
tion cocok hampir sempurna yang lebih tinggi dari yang diperkirakan C- pengayaan fruktosa. Hal ini menunjukkan
13
bahwa pada COtinggi2, terjadi perubahan distribusi kolam aktif / tidak aktif, sehingga lebih banyak C-sukrosa dibelah
untuk menghasilkan fruktosa bebas.

13Pola pelabelan C klorogenat dan prekursornya

% 13C dalam klorogenat selalu < 7% tetapi bervariasi denganCOatmosfer2 dan O2 di fraksi mol.maksimum 13PengayaanC

dalam klorogenat tidak diamati pada fotosintesis tinggi (oksigen rendah) tetapi di bawah COambien 2 dan O2 (kondisi

'biasa') atautinggi CO2 (Gbr. 4a). Efek ini diamati tidak hanya untuk seluruh-
New Phytologist (2018) 218: 94–106 © 2018 The Authors www.newphytologist.com
New Phytologist © 2018 New Phytologist Trust
(a)
(b)
(c)
(d) (e ) (f)

Gbr. 3 13fiksasidan 13PolaCpola pelabelan C pada gula daun bunga matahari dalam kondisi gas yang berbeda. (a)CObersih 2 Asimilasi. (b, c)
À2
13C jumlah (mmol m ) yang diwakili oleh C berasimilasi bersih, gula, klorogenat, metabolit lain yang diwakili dalam spektrum NMR, dan pati
+ karbon yang diekspor (b), dan hubungan antara bersih terasimilasi 13C dan 13C ditemukan dalam sukrosa daun (abu-abu tua), glukosa
(abu-abu muda) dan fruktosa (putih) (c). (d-f) 13C persentase sukrosa (d), glukosa (e) dan fruktosa (f). Dalam (b), perhatikan bahwa
13
jumlahC yang diwakili oleh klorogenat dan senyawa lain adalah kecil. Sisipan dalam (b) adalah perbesaran dari jumlah 13C dalam senyawa
lain yang ada di daun. Dalam (c), garis kontinyu melambangkan proporsionalitas regresi linier y = ax; kemiringan yang diperoleh adalah 0,39
(sukrosa), 0,087 (glukosa) dan 0,044 (fruktosa). Garis putus-putus adalah singkatan dari regresi hiperbolik. Semua regresi adalah kondisi
signifikan (P <0,05). Huruf berdiri untuk kelas statistik (ANOVA, P <0,05) ketika kondisi gas dibandingkan. (% -μmol molÀ1, masing-masing)

diurutkan dengan meningkatkan rasio karboksilasi-ke-oksigenasi dari kiri ke kanan. A perbesaran x-axis menunjukkan dari O 2 dan 13C

COkonten 2
di chlorogenate ditunjukkan pada Gambar. 4. Nilai yang ditampilkan adalah sarana Æ SD.
molekul rata-rata% 13C (Gbr. 4a) tetapi juga untuk semua posisi C-atom (Gbr. S8a). Hal ini menunjukkan bahwa

penggunaan PEP dan E4P untuk sintesis klorogenat terhalang oleh fotorespirasi tinggi (total tinggi 13CO2 atau COrendah2)

dan oksigen yang sangat rendah. Karenanya, kandungan yang diwakili oleh akumulasi klorogenat lebih tinggi dalam

kondisi 'biasa' dan pada COtinggi2 (Gbr. 4b). Akibatnya,chlorogenate tidak berhubungan sama sekali dengan karbon
berasimilasi bersih dan mewakili 13alokasiC <1% (Gambar. 4c).
13
PengayaanC di intermediet tesis chlorogenate syn, fenilalanin dan quinate, ditentukan dengan menggunakan LC-
© 2018 The Authors New Phytologist © 2018 New Phytologist Kepercayaan
New Phytologist (2018) 218: 94-106 www.newphytologist.com

New Phytologist
MS (jumlah mereka terlalu rendah untuk memungkinkan analisis oleh NMR). Fenilalanin dan kuinat mengikuti pola yang
sama seperti pada klorogenat, dengan maksimal% 13C dalam kondisi 'biasa' (Gbr.4d). Meskipunrelatif rendah
13 13
pengayaanC yangdari kolam klorogenat, molekul C-klorogenat yang terbentuk selama pelabelan dikaitkan dengan
13 13
{ C- C} penggandengan, menunjukkan pelabelan simultan dalam posisi atom C yang berdekatan (Gbr. S5). Ini juga
terjadi pada fenilalanin dan kuinat, di manaM + 9 dan M + massa7, masing-masing, diamati oleh LC-MS dan meningkat
di bawah 21/380, 21/800 dan
Research 99
New
Research Phytologist 100
(a) (b)
(c) (d)
Gbr. 4 13Pelabelan C dalam klorogenat dan zat antara sintesis klorogenat daun bunga matahari. (a-c) Analisis 13kandunganC dalam
13
klorogenat oleh resonansi magnetik inti (NMR): (a)% C dalam klorogenat; (b) 13JumlahC diwakili oleh klorogenat daun karena klorogenat
pada kelimpahan alami (1,1%; menetas kasar) atau berlabel (menetas halus); dan (c) hubungan antara total bersih berasimilasi 13C dan 13C
diwakili oleh label klorogenat. (d)% 13C dalam fenilalanin dan kuinat diukur dengan LC-MS. Dalam (b), perhatikan bahwa tidak ada pelabelan

dalam klorogenat yang ditemukan pada 0% O2 (% 13C tidak lebih dari 1,1%) dan dengan demikian hanya ada klorogenat 'alami' (menetas
kasar). Dalam (c), garis kontinyu mewakili garis proporsionalitas 1% (yaitu y = 0,01x). Huruf berdiri untuk kelas statistik (ANOVA, P <0.05)
ketika kondisi gas dibandingkan (dalam (b), kelas statistik mengacu pada pelabelan 13C (menetas halus), bukan total 13C). Dalam (a), kondisi
(b) dan (% -μmol (d), sumbu x molÀ1menunjukkan) memerintahkan O2 oleh
dan CO2
meningkatkan rasio karboksilasi-ke-oksigenasi dari kiri ke kanan. Nilai yang ditampilkan adalah sarana Æ SD.

2/380 kondisi CO2/ O2 (Gbr. S9a, b). Ini menunjukkan pelabelan simultan dari posisi atom-C yang berdekatan. Namun, ini
adalah
fotosintesis), jumlah 13C-serine lebih bervariasi, dan maksimal dalam kondisi 'biasa'. 13C-glycerate senilai repre- mencatat
fenilalanin yang menunjukkan pengayaan tertentu

sented c.2 mmol mÀ2 kecuali pada oksigen rendah (< 0,5 mmol mÀ2) padaM + 3 (Gbr. S9a), menunjukkan tice, 13C3-PEP)

sinyal(terlepas dari penambahan COa 132/ OC3 2 kondisi unit) (dalam praktik selama sintesis korismat dari shiki-

dan COrendah2 (c. 1,2 mmol mÀ2). Fluks karbon total yang diwakili oleh akumulasi gliserat, serin atau glisin (keluar dari
siklus fotorespirasi) dihitung dengan mempertimbangkan iso- mate (jalur ingat pada Gambar. S2).
pengenceran topik (lihat Gambar. S3 untuk rincian lebih lanjut). Untuk dekonvolusi sinyal NMR glisin dan ser-Line-fitting
juga memungkinkan kita untuk masuk
, fluks yang dihitung didasarkan pada posisi C-atom terlihat menentukan proporsi molekul sederhana, ganda atau triply (C-

2). Bahkan, untuk glycerate, perhitungan menghasilkan hasil yang sama 13C-label pada setiap posisi C-atom di

chlorogenate. Sebagai
terlepas dari Posisi C-atom yang digunakan (Gbr. S11), menunjukkan bahwa diharapkan, ada peningkatan umum pada
{13C-13C} kopling
tidak ada bias sebagai hasil dari potensi heterogen intramolec- dengan fotosintesis, menunjukkan peningkatan
13
pelabelanC di E4P dan
ular 13distribusiC di intermediet fotorespirasi. PEP ini terkumpul saat input fotosintesis meningkat (Gbr. S8b).
setuju denganintramolekulagak homogen 13distribusiC yangNamun, {13C-13C} koplingkurang terlihat pada oksidasi rendah
dalam fosfat triosa (lihat sebelumnya; Gambar S6). Gen akumulasi, dengan demikian mengikuti pola yang terlihat untuk%
13
C
(pembentukan) fluks selalu sangat kecil (Gbr. 5b), jauh lebih kecil dari 0,1 μmol mÀ2 sÀ1 untuk glisin dan serin. Fluks yang
 diamati semuanya
Penumpukan zat antara fotorespirasi
sangat dekat dengan nol pada oksigen rendah, dan akumulasi serin dan gliserat maksimal dalam kondisi 'biasa'. Glycine
build- Tiga intermediet fotorespirasi terlihat dalam penelitian ini:
up tampaknya berkorelasi dengan fotorespirasi (meningkat sebagai glisin bersih, serin dan gliserat (Gbr. 1; lihat Gbr. S10
untukNMR
fotosintesismenurun) (Gbr. 5a). konsisten dengan identifikasi gliserat). Jumlah 13C (dikoreksi untuk
jumlah total murni glisin dan serin yang diukur dengan kelimpahan LC-MS ral) yang diwakili oleh gliserat selalu lebih
besar dari
(Gbr. 5, inset), yang cenderung meningkat sebagai fotorespirasi yang di glisin dan serin (Gambar 5a). Faktanya, glisin
direpresentasikan
meningkat. Yang mengatakan, efek ini lebih jelas untuk glisin <0,5 mmol 13C mÀ2 (yaitu <1% dari tanpa memandang
karbon berasimilasi bersih

daripada serin, sehingga glisin: rasio serin meningkat dari kurang dari CO 2/ O2 kondisi ). Sementara akumulasi 13
C-glisin% 0,2 mol molÀ1 di rendah fotorespirasi untuk% 1 mol molÀ1 pada peningkatan dengan peningkatan fotorespirasi
(penurunan
fotorespirasi tinggi Perbedaan jelas dalam konten glisin
New Phytologist (2018) 218:. 94-106 © 2018 Penulis www.newphytologist.com
New Phytologist © 2018 New Phytologist Trust
(a) (b) (c)

Gambar.5 13polaC-label di glycerate, serin, glisin dan alanin dalam daun bunga matahari di bawah kondisi gas yang berbeda. 13
jumlahC (dalam mmol 13C mÀ2)
À2 À1
dialokasikan untuk senyawa ini selama pelabelan (a), fluks penumpukan yang dihitung (e nilaidalam μmol m s ; lihat bagian Bahan dan Metode untuk rincian

perhitungan) (b), dan total jumlah daun di glisin (abu-abu terang) dan serin (abu-abu gelap) diukur dengan LC-MS (c) sumbu x menunjukkan O 2 dan CO2 kondisi.
(% -μmol molA1)memerintahkan dengan meningkatkan karboksilasi-to-oksigenasi rasio dari kiri ke kanan Nilai yang ditampilkan adalah mean Æ SD.

glutamat)
antara COtinggi2 dan 100% O2 diwakili c. 0,6 mmol mÀ2,
menunjukkan bahwa fluks akumulasi glisin yang dihasilkan dari Akumulasiterlihat dalam semua kondisi tetapi tinggi pada oksigen
rendah, mencapai hampir 0,3 μmol mÀ2 sÀ1 di bawah 0%
fotorespirasi tinggi adalah ≤ 0,05 μmol mÀ2 sÀ1, yang secara efektif
ditemukan oleh keseimbangan massa isotop (Gbr. 5b). Secara
O2
keseluruhan, fluks penumpukan total (gliserat + serin + glisin) (Gbr. 5b). Karena alanin biasanya terakumulasi di bawah hipoksia,
hal ini menunjukkan bahwa daun yang diterangi mengalami kondisi
mewakili fluks karbon ≤ 0,7 μmol C mÀ2 sÀ1 (nilai maksimal, diamati
dalam kondisi 'biasa'), terhitung 1-10 % dari fluks karbon diwakili hipoksia saat mengalami atmosfer pada 0 atau 2% O 2. Glutamat juga
oleh oksigenasi (Gbr. S12). terakumulasi dalam jumlah kecil (Gbr. 6a) dengan laju yang rendah
(Gbr. 6b), biasanya < 0,06 μmol mÀ2 sÀ1, terlepas dari kondisi gasnya.
Namun, ketika dinyatakan sebagai proporsi asimilasi bersih, fluks
13Pelabelan C dalam metabolit hilir (alanin, malat,alanin dan
 13 dihitung menggunakan C-atom posisi C-3 dan dikalikan dengan 3
untuk akumulasi C-glutamat meningkat fotosintesis menurun,
(dengan asumsi tidak ada distribusi intramolekul heterogen), sehingga
kecuali pada 2% O2,di mana nilai itu sama dengan yang ditemukanposisi
di atom C-4 tidak diperhitungkan (berasal dari bikarbonat dan
komposisi isotop sulit ditentukan). Oleh karena itu, ini mewakili
21% O2 380 μmol molÀ1 (Gbr. 6b, sisipan). Jumlah 13C dalam malat

(a) (b) (c)

Gambar. 6 Pola pelabelan pada malat dan glutamat pada daun bunga matahari dalam kondisi gas yang berbeda. (a) 13JumlahC (dikoreksi untuk kelimpahan
alami) dialokasikan untuk glutamat (dihitung sebagai 5/3 kali jumlah yang diamati dalam C-2 + C-3 + C-4) dan malat (dihitung sebagai tiga kali jumlah yang
diamati di C -2, jadi tidak termasuk posisi C-4); (b)nyata 13fluksC menjadi glutamat (dalam μmol 13C mÀ2 sÀ1) dan malat (dalam μmol malat mÀ2 sÀ1) sintesis; (c)
sintesis glutamat dan malat:% C (glutamat) dan% mol (malat). Huruf berdiri untuk kelas statistik (ANOVA, P <0,05) saat membandingkan kondisi gas. Sumbu x
menunjukkan kondisi O2 dan CO2 (% -μmol molÀ1diatur) yangdengan meningkatkan rasio karboksilasi-ke-oksigenasi dari kiri ke kanan. Nilai yang ditampilkan
adalah sarana Æ SD.

© 2018 Penulis New Phytologist © 2018 New Baru

Phytologist Trust
New Phytologist (2018) 218: 94–106
www.newphytologist.com Phytologist
Penelitian 101
Baru
Penelitian Phytologist 102
13 13
potensi fluks C-PEP ke aktivitas anaplerotik. The hasil-ing C-fluks agak variabel, meskipun cenderung lebih tinggi

pada fotosintesis rendah dan menurunkan di bawah 0% O 2 (Gambar. 6b). Ketika dinyatakan sebagai proporsi fotosintesis
bersih, jelas meningkat hingga 1,6% karena penurunan fotosintesis (Gbr. 6b, inset).
Diskusi
Apakah metabolisme sukrosa diubah pada fotosintesis tinggi (CO tinggi 2 atau rendah O2)? Meskipun terjadi
peningkatan secara umum dalam jumlah total 13C dalam gula daun serta pati + karbon yang diekspor karena fotosintesis

meningkat dengan rasio CO2 : O2 , alokasi karbon (sebagai%terasimilasi karbon) ke gula daun tidak tetap konstan
( Gambar 3c). Juga telah ditemukan bahwa komitmen metabolik untuk sintesis pati meningkat dengan mengorbankan

sukrosa selama pertumbuhan pada COtinggi2, ketika produksi sukrosa (atau ekspor) diubah, atau di bawah batasan fosfor
sedang (Stitt, 1991; Rao & Terry, 1995 ; Sun et al., 2011). Kami sebelumnya menunjukkan sedikit penurunan kandungan

sukrosa pada COtinggi2 di Arabidopsis mawar(Abadie et al., 2016b). Di sini, kami memberikan penjelasan tentang

fenomena ini dimana fluks sintesis sukrosa dialihkan ke akumulasi fruktosa pada COtinggi 2. Karena tidak ada peningkatan
bersamaan terlihat pada glukosa, ini menunjukkan bahwa sukrosa dibelah oleh sukrosa sintase (Susy) daripada oleh
invertase, sehingga menghasilkan fruktosa dan UDP-glukosa, yang terakhir didaur ulang menjadi sukrosa oleh sukrosa
fosfat sintase (SPS). Dalam Arabidopsis, fosfoproteomik telah menunjukkan bahwa fosforilasi SPS bervariasi dengan

CO2/ O2,SPS-1F isoformlebih disukai pada fotosintesis rendah dan SPS-4F pada aktivitas fotosintesis tinggi (Boex-

Fontvieille et al., 2014; Abadie et al., 2016b). Sebaliknya, pada 0% O2, terjadi juga penurunan alokasi karbon untuk
sukrosa, mungkin sebagai akibat dari efek hipoksia. Faktanya, hipoksia mungkin telah menghambat sintesis ATP sitosol
dan dengan demikian UDP-glukosa, substrat sintesis sukrosa oleh SPS (Planchet et al., 2017). Secara keseluruhan, hasil
kami menunjukkan bahwa perubahan keseimbangan antara aktivitas Susy dan SPS mungkin berasal dari perubahan yang
diamati dalam perputaran sukrosa ketika kondisi gas bervariasi.
Tingkat
akumulasi zat antara fotorespirasi Akumulasi zat antara fotorespirasi adalah pertanyaan lama yang baru-baru ini menarik
perhatian karena potensi dampaknya pada efisiensi fotosintesis. Namun, pengukuran tepat dari tingkat di mana
intermedium fotorespirasi terakumulasi masih menjadi bahan perdebatan (untuk review, lihat Tcherkez, 2013). Di sini,
kami menemukan bahwa tiga zat antara fotorespirasi yang terlihat (glisin, serin, dan gliserat) terakumulasi (Gbr. 5), dan ini
sesuai dengan pengamatan kami sebelumnya bahwa glisin tidak sepenuhnya digunakan oleh konversi menjadi serin
(melalui glisin dekarboksilase serin hidroksimetil. kompleks transferase) sehingga koefisien stoikiometri efektif antara

oksigenasi (produksi glisin vo) danCO2 evolusi(serin sintesis) sedikit lebih tinggi dari 2 (Abadie et al., 2016a). Hasil ini
memberikan bukti langsung lebih lanjut bahwa serine dan

gliserat juga terakumulasi dan bahwa penumpukan fluks karbon sangat sensitif terhadap kondisi CO 2 dan O2 . Perlu dicatat

bahwa ketidakseimbangan rata-rata dalam pemanfaatan glisin ditemukan c. 3% (sehubungan dengan vo) di Abadie et al.

(2016a), sementaraini penelitianmenemukan bahwa c. 0,5%. Saat ini ada dua kemungkinan penjelasan. Pertama, varietas
bunga matahari berbeda (XRQ dalam penelitian ini vs Sunrich) dan spektrum metabolit yang terakumulasi (seperti serin

dan gliserat) berbeda. Pada varietas bunga matahari lain (Mennonite), menggunakan 14CO2 label, Atkins & Canvin (1971)
menunjukkan bahwa serin mewakili sebanyak 12% radioaktivitas daun sedangkan glisin dan glikolat + gliserat masing-
masing hanya mewakili 4% dan 5%. Kedua, meskipun keseimbangan NPK serupa, kondisi pemupukan berbeda, di mana
urea dimasukkan dalam campuran nutrisi dalam penelitian ini, mungkin menyebabkan perbedaan dalam pemanfaatan N
oleh metabolisme.
Pengukuran langsung alokasi karbon kami menggunakan 13metode pelabelanC menunjukkan bahwa laju akumulasi glisin
dan serin memiliki urutan yang sama besarnya (c. 0,05 μmol mÀ2 sÀ1) sebagai asimilasi N yang diperkirakan secara

bersamaan menggunakan glutamat denovo sintesis(Gbr. 6b). Daunnya juga mengandung 13gliserat berlabelC dalam jumlah

yang lebih besar dari serin dan glisin (Gbr. 5). Akumulasi gliserat sebagai akibat fotorespirasi menyiratkan bahwa
beberapa atom karbon yang diperlukan untuk pemulihan PGA dan RuBP hilang (yaitu siklus fotorespirasi tidak ditutup).
Agaknya, ini harus dikompensasikan dengan penggunaan fosfat triosa yang lebih rendah untuk sintesis pati dan sukrosa
(Geiger & Servaites, 1994).
Sintesis klorogenat oleh jalur shikimate dipengaruhi oleh kondisi gas

Menariknya,maksimal 13nilai fluksC dalam gliserat ditemukan terjadi dalam kondisi 'biasa' dan pada COtinggi 2, di mana
sintesis klorogenat juga maksimal. Lebih lanjut, metabolomik telah menunjukkan kovarianasi antara kuinat (antara sintesis

kloroogenat) dan gliserat, serta peningkatan kafeat dan caffeoylquinate ketika CO 2/ O2 menurun (Abadie et al., 2016a). Di
sini, kami menemukan bahwa kuinat dan fenilalanin mengikuti pola isotop yang sama dengan total 13C dalam klorogenat
(Gbr. 4). Dengan kata lain, tampaknya ada rangsangan jalur shikimate saat gliserat terakumulasi. Karena klorogenat
membutuhkan metabolit kloroplastik serta ATP (shikimate kinase), kovariat antara 13kandunganC dalam klorogenat dan
gliserat dapat mencerminkan persaingan antara daur ulang fotorespirasi (gliserat kinase) dan metabolisme sekunder untuk
ATP kloroplastik. Sebagai alternatif, produksi PGA (dan triose fosfat) yang sedikit lebih rendah oleh daur ulang
fotorespirasi dapat menyebabkan sedikit ketidakseimbangan dalam aktivitas transaldolase dan / atau transketolase selama
siklus Calvin, dan dengan demikian kelebihan E4P dapat digunakan untuk sintesis klorogenat. Faktanya, sedikit penurunan
aktivitas transketolase pada daun tembakau transgenik telah terbukti menyebabkan penurunan asam amino aromatik dan
metabolit hilir yang signifikan seperti fenilpropanoid (Henkes et al., 2001). Hubungan antara klorogenat dan gliserat juga
bisa menjadi hasil kompartementalisasi. Gliserat diangkut oleh protein antiport (glikolat-gliserat
New Phytologist (2018) 218: 94–106 © 2018 Penulis www.newphytologist.com
New Phytologist © 2018 New Phytologist Trust
saat ini translocator) dari amplop kloroplas (Pick et al., 2013) tetapi
tidak diketahui dan tidak ada peptida transit kloroplastik juga dapat ditranslokasi menggunakan alternatif, tergantung
cahaya
diidentifikasi dengan pasti di salah satu dari mereka. jalur yang beroperasi pada mutan antiporter (Walker et al.,
Karena beberapa zat antara sintesis klorogenat tampaknya 2016). Dengan demikian, efisiensi pengangkutan gliserat
mungkin bergantung

secara bersamaan dipengaruhi oleh kondisi CO2/ O2 (fenilalanin, pada kondisi gas (tetapipengetahuan kita, ini belum
sejauhkuinat, dan kafeat), ada kemungkinan bahwa beberapa langkah shiki- didokumentasikan).
jalur pasangan adalah titik kontrol metabolik di asal jalur shikimate itu sendiri juga bisa diatur olehfoto
polayang terlihat di sini. 3-Deoxy-D-arabino heptulosonate-7-fosfat sintetis dan kondisi fotorespirasi. Misalnya,bervariasi
sintase yang(DAHPS) adalah langkah pertama dari jalur tersebut, dan telah menjadi produksi PEP yang dapat menjadi
penyebab perubahan yang diamati yang
terbukti dapat dikendalikan oleh redoks melalui tioredoksin (Entus et al., Alokasi karbon ke klorogenat. PEP dapat
disintesis pada tahun
2002). Juga, sintase 3-dehidrokuinat adalah NAD+-tergantung pada metabolisme kloroplastik dan sitosol dan, padaterakhir
enzim yangdan dengan demikian dapat bergantung padaNADbebas kloroplastik + kasus, PEP memasuki kloroplas melalui
translokentrasi PEP / fosfat
(meskipun NADH hanya mewakili beberapa% dari total tor (Gambar S2, dan lihat Tzin & Galili, 2010; Tohge et al.,
2013).
Kloroplastik NAD, termasuk dalam cahaya; Heber & Santarius, Potensi, PEP dapat disintesis oleh enolase dari 2-
1965). fosfogliserat, oleh piruvat Pi dikinase (PPDK) dari piru-
Diambil secara keseluruhan, hasil kami menunjukkan bahwa ada regulasi vate, dan oleh PEP karboksiginase dari
oksaloasetat. Sitosolik dan

fluks melalui jalur shikimate oleh CO2 dan O2 menderita penyakit plastidic glikolisis aktif dalam terang, sehinggaproduksi
tionsPEP.Ini mungkin melibatkan perubahan yang didorong fotorespirasi pada PEP oleh enolase yang terjadi pada daun
yang diterangi, dan pada kenyataannyaantisense
ketersediaan, remobilisasi dan regulasi pasca-translasi oleh teknologi telah menyarankan bahwa aktivitas enolase sangat
penting untuk
kondisi redoks, tetapi pekerjaan lebih lanjut diperlukan untuk memperjelas jalur shikimate ini (Voll et al., 2009).
Pengaturanenolase
aspek. aktivitas tidak didokumentasikan dengan baik (walaupun hipoksia telah terbukti meningkatkan aktivitas enolase
sitosol pada jagung; Lal et al., 1994). Aktivitas PPDK telah terbukti meningkat dalam cahaya dibandingkan dengan gelap

melalui fosforilasi danyang hampir signifikan (P = CO0,052)2/ O2 efektelah ditemukan (Abadie et al.,

Metabolisme hilir dipengaruhi oleh kedua CO2 dan O2, menyebabkan perubahan hasil fotosintesis asimilasi N
bersih
2016b). PEP carboxykinase terlibat dalam glukoneogenesis dan salah
satu efek yang paling terlihat dari oksigen rendah adalah peningkatan yang tidak terkait dengan perubahan fosforilasinya
dengan

biosintesis alanin, biomarker kondisi hipoksia (untuk CO 2/ O2, sehingga keterlibatan dalam pengendalianproduk PEP
tinjauan, lihat Limami et al., 2014). Di bawah kondisi kami, meskipun tion agak tidak mungkin.
gas masuk berada pada 0% O2, atmosfer di sekitar daun Variasi dalam daur ulang kolam metabolik yang disimpan juga
dapat mempengaruhi 13penumpukanC dalam klorogenat. Di sini, kami

tidak sepenuhnya anoxic; melainkan c. 0,03% O2,hanya karenaO2 evolusi oleh fotosintesis. Metabolomik kami

sebelumnya menemukan bahwa molekul berlabel penuh adalahisotop penting

analisistelah menunjukkan bahwa oksigen gas rendah memicu spesies hipoksia di kuinat dan fenilalanin (Gbr. S9a, b),
menunjukkan
respon pada daun yang diterangi, dengan reorchestration nitrogen kating yang sepenuhnya kolam kloroplastik PEP dan
E4P yang diserahkan
dan metabolisme sulfur (Abadie et al., 2017a). Dalam penelitian ini, telah digunakan untuk mensintesis kuantisasikuinat
dan fenilalanin baru
absolutdengan menggunakan 13pelabelanC yang menunjukkan molekul alanin. Namun, penampakan yang jelas dariM +
spesies isopopik3 dalam fenilalanin menunjukkan bahwaPEP yang berlabel penuh di

akumulasibawah 0,3 μmol mÀ2 sÀ1, 0% O2 cukup besar, c. yaitu 1,4% dari fotosintesis bersih. Impor- (13C3-PEP)

dikombinasikan dengan shikimate nonlabel secara 5 kali

, produksi alanin menggunakan piruvat dan dengan demikian meningkatkan sintase enolpyruvylshikimate-3-phosphate
(EPSP) untuk sintesis
hipoksia dengan mengorbankan ukuran konsumsi jalur lainnya EPSP (dan kemudian korismat dan fenilalanin). Artinya,
PEP (seperti sintesis klorogenat) (Gbr. 4) atau piruvat (TCAP 'tua' (lambat berbalik) shikimate (atau kuinat) adalahremobi-
sintesisdan glutamat; Gbr. 6). lized, dan remobilisasi seperti itu tampaknya bergantung pada
Glutamat juga dipengaruhi oleh kondisi gas dan kondisi gas (Gbr. S9, inset). Pada pandangan pertama, remobiliza-
sented lebih 13C (di mmol mÀ2)di fotosintesis yang tinggi (21% tion tidak muncul untuk konsisten dengan sintesis
bersamaan sepenuhnya 13C-berlabel quinate, fenilalanin dan

380 μmol molÀ1 CO2, atau 2% O2) dibandingkan dengan fotoresis tinggi (COrendah2 atau 100% O2) (Gbr.6). Namun,

ketika klorogenat, karena semua tahap enzimatik hingga fenomenal yang

diekspresikan sebagai% dari fotosintesis bersih, ia mewakili lebih banyak di lalanin yang diyakini terjadi di kompartemen
yang sama
fotorespirasi tinggi, yang berarti bahwa alokasi karbon ke gluta- (kloroplas; Maeda & Dudareva, 2012). Dengan demikian,
baik ingatan

meningkat. Efek stimulasi COrendah2 pada karbonat shikimat (atau kuinat) berasal dari vakuola atau
alokasi ke glutamat dan zat antara TCAP telah menjadi sitosol dan masuk ke kloroplas, atau ada sitosol yang
diamati pada beberapa spesies (Gauthier et al., 2010; Tcherkez et al., EPSP sintase dalam bunga matahari, mengkonsumsi

sitoplasma 13C3-
2012; Abadie et al., 2017b). Hasil saat ini menunjukkan PEP yang sama (berasal dari triosa fosfat) dannonlaserasi

efekdariCO2 dan O2 fraksi molyang, menunjukkan bahwa diremobilisasigluta- beled shikimate. Genom XRQ bunga
matahari mengandung tiga
regulasi sintesis pasangan yang dipengaruhi oleh sekuens gen fotorespirasi yang diprediksi akan mengkodesintase EPSP
permintaandan ketersediaan karbon melalui fotosintesis. Ini akan (Ha4g0122731, Ha15g0497011 dan Ha16g0520001)

menjelaskan mengapa pada 2% O2, alokasi karbon ke glutamat muncul (Badouin et al., 2017), tetapi lokalisasi
subselulernya
mirip dengan kondisi 'biasa'.
© 2018 The Authors New Phytologist © 2018 New Phytologist Trust
New Phytologist (2018) 218: 94–106 www.newphytologist.com
Baru Phytologist
Penelitian 103
Baru
Penelitian Phytologist 104
(a) (b)
Gbr. 7 Net nitrogen (N) demand driven dengan sintesis metabolit pada daun bunga matahari dalam kondisi gas yang berbeda. (a)
13
Permintaan N bersih didorong oleh sintesis C-alanine, 13C-glutamat dan akumulasi asimilasi fotorespirasi (eGly + eSer) tanpa (hitam) atau

dengan (putih) remobilisasi 12C kerangkadiperhitungkan (dengan asumsi bahwa glutamat dan alanin neosintesis masing-masing diberi
makan oleh 80% dan 20% karbon remobilisasi). (b) Kelas fotosintesis (ANOVA, menghasilkan P <0,05) bersih ketika asimilasi N,
membandingkan kondisi yang dihitung. Sebagai rasio sumbu x menunjukkan permintaan N bersih O 2 dan CO (putih 2 kondisi bar di (a)) (%
-μmol ke net COmol2 À1asimilasi.) diurutkan oleh Huruf yang meningkatkan karboksilasi tegakan-ke-
untuk statistik
rasio oksigenasi dari kiri ke kanan. Nilai yang ditampilkan adalah sarana Æ SD.
New Phytologist (2018) 218: 94–106 © 2018 Penulis www.newphytologist.com New Phytologist © 2018 New Phytologist Trust Flux
yang
dihitung di sini kemudian digunakan untuk menghitung foto- Selanjutnya, ini menekankan interaksi antara karbon dan
hasil sintetis nitrogen dari jaring asimilasi nitrogen (kebutuhan N bersih
metabolisme, di mana akumulasi fotorespirasi dibagi dengan asimilasi bersih) (Gbr. 7). Perantara asimilasi nitrogen bersih
mengarah pada permintaan tambahan dalam asimilasi nitrogen. Bahkan dihitung di sini adalah jumlah glisin, serin, alanin
dan gluta-
meskipun fluks yang terlibat di sini terlihat agak kecil pada sekilas akumulasi pasangan. Itu tidak termasuk klorogenat
karena tidak ada
(< 0,5 μmol mÀ2 sÀ1), dampak pada asimilasi N terbukti, persyaratan N bersih, fenilalanin dideaminasi untuk membentuk
cin-
dengan peningkatan 15N (Gauthier et al. ., 2010) dan 13alokasiC namate (dan kemudian caffeate) (Maeda & Dudareva,
2012). Sementara
(studi ini) ke N berasimilasi dengan meningkatnya fotorespirasi. Faktanya, kebutuhan N (dalam μmol mÀ2 sÀ1) jauh lebih

tinggi pada 0% O2 karena

kebutuhan asimilasi daun N berlipat ganda pada fotorespirasi tinggi akibat akumulasi alanin, hasil tertinggi adalah 100%

dibandingkan dengan kondisi 'biasa' (Gbr. 7). Asimilasi nitrogen O 2, yang berarti bahwa pemicu fotorespirasi tinggi yang

relatif tinggi

bukanlah satu-satunya jalur yang dipengaruhi olehCO2 dan O2 mol kebutuhandalam asimilasi N (studi ini, sekitar1,4%
darifotosintesis bersih
fraksi: kami tunjukkan di sini perubahan dalam sukrosa dan sis sekunder). Meskipun permintaan N yang dihitung di sini
tentu saja di bawah
metabolisme, sehingga mengubah kebutuhan dalam nukleotida (diketik (sintesis protein, dan asam amino lainnya tidak
secara khas, UTP diperlukan untuk sintesis sukrosa, dan ATP untuk kloro), urutan besarnya dalam 0,05-
sintesis genate) dan PEP. Kami mengantisipasi semua metabolisme ini 0,3 μmol mÀ2 sÀ1 dan mencocokkan nilai asimilasi
N yang diperoleh
perubahan untuk memiliki dua konsekuensi signifikan bagi tanaman menggunakan hasil bagi asimilasi (Rachmilevitch et
al., 2004).kita
Neraca karbon. Pertama, laju respirasi hari (hasil nonfotorespirasi dengan jelas menunjukkan bahwa dalam kondisi
'biasa',penting

CO2 evolusidalam cahaya) harus bervariasi secara bersamaan dengan proporsi permintaan N yang diwakili oleh akumulasi

CO2 dan O2 fraksi mol(untuk review, lihat Tcherkez et al., fotorespirasi intermediet glisin dan serin. Yaitu, foto
2017). Kedua, jika akumulasi metabolisme torespiratory interme- photorespiratory bertanggung jawab untuk kelebihan
kebutuhan di N dari
diates tidak diimbangi oleh lebih rendah triose fosfat utiliza- c.2 mmol N mÀ2 dÀ1, yang cukup besar jika dibandingkan
dengan
tion, hal ini dapat berdampak pada regenerasi RuBP dan menyebabkan kandungan N daun (c. 50 mmol N mÀ2). Namun
demikian, kami mengakui
penurunan progresif dalam fotosintesis (Harley & Sharkey, 1991; bahwa akumulasi serin juga bisa disebabkan oleh
Geiger & Servaites, 1994). Efek terakhir mungkin dari jalur metabolisme penting selain fotorespirasi, seperti sitosan
dalam kondisi alami dan sementara yang mendorong sintesis fosfoserin fotoresplasma (untuk review, lihat Ros et al.,

Pembajakan, seperti COinternal rendah2 setelah penutupan stomata. Kami 2014). Karena korelasi antara glisin dan total
serin

diketahui bahwa penelitian kami dilakukan pada bunga matahari, yang kandungannya di seluruh kisaran kondisi CO 2/ O2 ,

kami menyarankan bahwa

mengakumulasi metabolit seperti klorogenat (sementara spesies lain berkontribusi pada jalur sitoplasma adalah marginal
under
dapat mengakumulasi senyawa sekunder lainnya, seperti kondisi glukosino- kami

, yang terdapat pada Brassicaceae, misalnya). Tapi, pada prinsipnya, hasil kami harus berlaku di lain C 3 spesies, mengingat

miripinflu- Perspektif

ence dari CO2 dan O2 pada glutamat biosintesis dalam berbagai spesies (Abadie etal.,2017b). Namun, sangat mungkin
bahwa penelitian ini menunjukkan bahwa sebagian besar fluks karbon dalammetabolisme

dampakCO2 dan O2 pada metabolisme N bervariasi tergantung tidak hanya sebanding dengan fotosintesis bersih (masukan
C).
sumber dan ketersediaan nitrogen. Misalnya,dan

nutrisi berbasis nitratamonium telah terbukti memiliki efek yang berbeda padaCO 2 titik kompensasidan dengan demikian

pada rasio karboksilasi terhadap oksigenasi (Guo et al., 2005). Demikian pula, ketersediaan sulfur kemungkinan akan

mempengaruhi respons metabolik terhadap CO2 dan O2 karena keterlibatan metabolisme satu karbon dalam fotorespirasi.
Dampak dari kondisi nutrisi tersebut akan dibahas dalam studi selanjutnya.
Ucapan Terima Kasih
Kami berterima kasih kepada Australian Research Council atas dukungannya melalui Future Fellowship yang diberikan
kepada GT berdasarkan kontrak FT140100645. Kami menghargai dukungan fasilitas NMR dari Research School of
Chemistry (ANU) untuk menyediakan akses gratis ke instrumen. Kami berterima kasih kepada Sophie Blanchet
(Universitas Paris-Sud, Prancis) untuk membantu ekstraksi perklorik.
Kontribusi penulis
CA melakukan eksperimen dan analisis NMR. CB dan CA melakukan analisis LC-MS. Semua penulis membahas
hasilnya. GT menulis makalahnya.
Referensi
Abadie C, Blanchet S, Carroll A, Tcherkez G. 2017a. Analisis
efek pasca-fotosintesis gas O2 metabolismepada metabolisme primer di daun yang menyala. Biologi Tumbuhan Fungsional 44: 929-940. Abadie C,
Boex-Fontvieille ERA, Carroll AJ, Tcherkez G. 2016a. Stoikiometri in vivo dari metabolisme fotorespirasi. Tanaman Alam 2: 15220. Abadie C,
Lothier J, Boex-Fontvieille E, Carroll AJ, Tcherkez G. 2017b. langsung
Penilaiandari asal metabolisme atom karbon dalam glutamat dari daun yang diterangi menggunakan 13C-NMR. Baru 216: 1079-1089. Ahli
FitologiAbadie C, Mainguet S, Davanture M, Hodges M, Zivy M, Tcherkez G. 2016b.
Perubahan bersama dalam fosfoproteom dan metabolom di bawahCO2/ O2 yang kondisi gasberbeda pada mawar Arabidopsis. Fisiologi Tumbuhan dan Sel
57: 1544-1556. Albrizio R, Steduto P. 2003. Fotosintesis, respirasi dankarbon konservatif
efisiensi penggunaandari empat bidang tanaman yang ditanam. Meteorologi Pertanian dan Hutan 116: 19-36. Atkins Pertukaran gas, CA,Canvin

ekstraksi, DT. 1971. dan Fotosintesis fraksinasi pertukaran ion danCO2 evolusi dari 14C-diberi label
oleh cakram daun:
produk fotosintesis. Jurnal Botani Kanada 49: 1225-1234. Aubert S, Gout E, Bligny R, Douce R. 1994. Berbagai efek gliserol padatanaman
metabolisme sel. Studi resonansi magnetik nuklir Fosfor-31. Jurnal Kimia Biologi 269: 21420-21427. Badouin H, Gouzy J, Grassa CJ, Murat F,
Staton SE, Cottret L, Lelandais- Bri`ere C, Owens GL, Carr`ere S, Mayjonade B et al. 2017. Genom bunga matahari memberikan wawasan tentang
metabolisme minyak, pembungaan, dan evolusi Asterid. Alam 546: 148-152. Bloom A, Burger M, Kimball B, Pinter P. 2014. Asimilasi nitrat dihambat
oleh peningkatan CO2 pada gandum yang ditanam di lapangan. Perubahan Iklim Alam 4: 477-480. Bloom AJ, Smart DR, Nguyen DT, Searles PS.
2002. Asimilasi nitrogen dan
pertumbuhan gandum di bawah peningkatan karbon dioksida. Prosiding National Academy of Sciences, USA 99: 1730-1735. Boex-Fontvieille E,
Davanture M, Jossier M, Zivy M, Hodges M, Tcherkez G.
2014. Aktivitas fotosintesis mempengaruhi biosintesis selulosa dan fosforilasi protein yang terlibat di dalamnya dalam Arabidopsis Daun-daun. Jurnal
Botani Percobaan 65: 4997-5010. Boex-Fontvieille E, Daventure M, Jossier M, Zivy M, Hodges M, Tcherkez G.
2013. Kontrol fotosintesis inisiasi terjemahan sitoplasma daun Arabidopsis oleh fosforilasi protein. PLoS ONE 8: e70692.
von Caemmerer S, Farquhar GD. 1981. Beberapa hubungan antara
biokimia fotosintesis dan pertukaran gas daun. Planta 153: 376-387. Connor D, Sadras V. 1992. Fisiologi ekspresi hasil dalam bunga matahari.
Lapangan
Penelitian Tanaman 30: 333-389. Dewar RC, Medlyn BE, McMurtrie RE. 1998. Analisis mekanistikcahaya
efisiensi penggunaandan karbon. Tumbuhan, Sel & Lingkungan 21: 573-588. Entus R, Poling M, Herrmann KM. 2002. Regulasi redoks Arabidopsis 3-
Deoxy-d-arabino-Heptulosonate 7-Phosphate synthase. Fisiologi Tumbuhan 129: 1866-1871. Foyer CH, Ferrario-M e ́ ry S, Huber SC. 2000. Regulasi
fluks karbon dalam sitosol: koordinasi sintesis sukrosa, reduksi nitrat dan biosintesis asam organik dan asam amino. Masuk: Sharkey T, Govindjee X, eds.
Fotosintesis: fisiologi dan metabolisme. Kemajuan dalam fotosintesis dan respirasi, vol. 9. Dordrecht, Belanda: Springer, 177-203. Gauthier PPG,
Bligny R, Gout E, Mah ́e A, Nogu ́es S, Hodges M, Tcherkez
GGB. 2010. folio Penelusuran isotopmenunjukkan bahwa asimilasi nitrogen menjadi glutamat sebagian besar tidak bergantungCOsaat ini pada2
asimilasipada daunditerangi Brassica napus yang. Baru 185: 988-999. Ahli FitologiGeigenberger P, Stitt M. 1991. Siklus sintesis dansukrosa yang
"sia-sia"
degradasiterlibat dalam pengaturan partisi antara sukrosa, pati dan respirasi pada kotiledon dari bibitberkecambah Ricinus communis L. yangketika
pengangkutan floem dilakukan terhambat. Planta 185: 81-90. Geiger DR. 1979. Pengendalian partisi dan ekspor karbon dalam daun
tumbuhan tingkat tinggi. Botanical Gazette 140: 241-248. Geiger DR, Servaites JC. 1994. Regulasi harian metabolisme karbon fotosintetik padaC3

tumbuhan. Ulasan Tahunan Fisiologi TumbuhanMolekuler Tumbuhan Biologi 45: 235-256. Guo S, Schinner K, Sattelmacher B, Hansen UP. 2005.
COterlihat berbeda2 yang Poin kompensasidalamtumbuh di nitrat dan amonium Phaseolus vulgaris yang dan hubungannya denganCOnon-fotorespirasi 2

evolusi. Physiologia Plantarum 123: 288-301. Harley PC, Sharkey TD. 1991. Sebuah peningkatan model C3 fotosintesis pada tinggi
CO2:terbalik O2 sensitivitas dijelaskan oleh kurangnya masuk kembali glycerate ke kloroplas. Penelitian Fotosintesis 27: 169-178. Heber U, Santarius
KA. 1965. Kompartmentasi dan reduksi nukleotida piridin dalam hubungannya dengan fotosintesis. Biochimica et Biophysica Acta 109: 390-408.
Henkes S, Sonnewald U, Badur R, Flachmann R, Stitt M. 2001. kecil
Penurunanaktivitas transketolase plastid dalam transforman tembakau antisense memiliki efek dramatis pada fotosintesis dan metabolisme fenilpropanoid.
Sel Tumbuhan 13: 535-551. Hilbert DW, Reynolds JF. 1991. Sebuah model yang mengalokasikan pertumbuhan antara protein daun,
struktur pucuk, dan biomassa akar untuk menghasilkan aktivitas yang seimbang. Annals of Botany 68: 417-425. Hodges M, Dellero Y, Keech O, Betti
M, Raghavendra AS, Sage R, Zhu XG, Allen DK, Weber APM. 2016. Perspektif untuk pemahaman yang lebih baik tentang integrasi metabolisme
fotorespirasi dalam jaringan metabolisme primer tumbuhan yang kompleks. Jurnal Botani Eksperimental 67: 3015-3026. Huber SC. 1989. Mekanisme
biokimia untuk pengaturan akumulasi sukrosa
dalam daun selama fotosintesis. Fisiologi Tumbuhan 91: 656-662. Jacob J, Lawlor DW. 1992. Ketergantungan fotosintesis bunga matahari dan
daun jagung pada pasokan fosfat, aktivitas ribulosa-1,5-bifosfat karboksilase / oksigenase, dan ukuran kolam ribulosa-1,5-bifosfat. Fisiologi Tumbuhan 98:
801-807. Lal SK, Kelley PM, Elthon TF. 1994. Pemurnian dan ekspresi diferensial
enolase dari jagung. Fisiologi Plantarum 91: 587-592. Lehman RH, Beras EL. 1972. Pengaruh defisiensi nitrogen, kalium dan sulfur pada asam
klorogenat dan scopolin pada bunga matahari. American Midland Naturalist 87: 71-80. Limami AM, Diab H, Lothier J. 2014. Metabolisme nitrogen
pada tanaman di bawahrendah
tekanan oksigen. Planta 239: 531-541. Maeda H, Dudareva N. 2012. Jalur shikimate danasam amino aromatik
biosintesispada tumbuhan. Review Tahunan Biologi Tanaman 63: 73-105. Maleszewski S, Lewanty Z. 1972. Pengaruh konsentrasi oksigen pada
penggabungan 14C ke dalam produk fotosintesis di cemara Balsam. Zeitschrift f€ur Pflanzenphysiologie 67:305-310.
© 2018 The Authors New Phytologist © 2018 New Phytologist Kepercayaan
New Phytologist (2018) 218: 94-106 www.newphytologist.com

New Phytologist
Penelitian 105
New
Penelitian Phytologist 106
Tcherkez Nakamura T, Osaki M, Shinano T, Tadano T. 1997. Difference in system of
G, Mah ́e A, Gu ́erad F, Boex-Fontvieille ERA, Gout E, Lamothe M, current photosynthesized carbon distribution to carbon and nitrogen

Barbour MM, Bligny R. 2012 . Short-term effects of CO2 and O2 on citrate compounds between rice and soybean. Soil Science and Plant Nutrition 43:
metabolism in illuminated leaves. Plant, Cell & Environment 35: 2208–2220. 777–788.
Tohge T, Watanabe M, Hoefgen R, Fernie AR. 2013. Shikimate and Penning De Vries FWT. 1983. Modeling of growth and production. In:
phenylalanine biosynthesis in the green lineage. Frontiers in Plant Science 4: 62. Lange OL, Nobel PS, Osmond CB, Ziegler H, eds. Encyclopedia of plant
Tzin V, Galili G. 2010. The biosynthetic pathways for shikimate and aromatic physiology, vol. 12D. Physiological plant ecology. Berlin, Germany:
Springer,
amino acids in Arabidopsis thaliana. Arabidopsis Book 8: e0132. 117–150.
Voll LM, Hajirezaei MR, Czogalla-Peter C, Lein W, Stitt M, Sonnewald U, Pick TR, Br ̈autigam A, Schulz MA, Obata T, Fernie AR, Weber
APM. 2013.
B ̈ornke F. 2009. Antisense inhibition of enolase strongly limits the metabolism PLGG1, a plastidic glycolate glycerate transporter, is required for
of aromatic amino acids, but has only minor effects on respiration in leaves of photorespiration and defines a unique class of metabolite transporters.
transgenic tobacco plants. New Phytologist 184: 607–618. Proceedings of the National Academy of Sciences, USA 110: 3185–3190.
Walker BJ, South PF, Ort DR. 2016. Physiological evidence for plasticity in Piques M, Schulze WX, H ̈ohne M, Usadel B, Gibon Y, Rohwer J,
Stitt M.
glycolate/glycerate transport during photorespiration. Photosynthesis Research 2009. Ribosome and transcript copy numbers, polysome occupancy and
129: 93–103. enzyme dynamics in Arabidopsis. Molecular Systems Biology 5: 314. Planchet E, Lothier J, Limami A. 2017. Hypoxic respiratory
metabolism in
plants: reorchestration of nitrogen and carbon metabolisms. In: Tcherkez G,
Supporting Information Ghashghaie J, eds. Plant respiration: metabolic fluxes and carbon balance. Dordrecht, the Netherlands: Springer, 215–
233. Rachmilevitch S, Cousins AB, Bloom AJ. 2004. Nitrate assimilation in plant
Additional Supporting Information may be found online in the Supporting Information tab for this article: shoots depends on
photorespiration. Proceedings of the National Academy of Sciences, USA 101: 11506–11510. Rao IM, Terry N. 1995. Leaf phosphate status,
photosynthesis, and carbon
Fig. S1 Chemical structure of chlorogenate.
partitioning in sugar beet (IV. Changes with time following increased supply of phosphate to low-phosphate plants). Plant Physiology 107: 1313–1321.
Fig. S2 Simplified biosynthetic pathway of chlorogenate. Ros R, Mu ̃noz-Bertomeu J, Krueger S. 2014. Serine in plants: biosynthesis,
metabolism, and functions. Trends in Plant Science 19: 564–569.
Fig. S3 Modelling used to compute build-up rates. Sage RF, Sharkey TD, Seemann JR. 1988. The in-vivo response of the ribulose-
1,5-bisphosphate carboxylase activation state and the pool sizes of photosynthetic metabolites to elevated CO 2 in Phaseolus vulgaris L. Planta 174:
Fig. S4 NMR identification of chlorogenate.
407–416. Servaites JC, Geiger DR. 1974. Effects of light intensity and oxygen on
Fig. S5 Isotopic pattern in chlorogenate. photosynthesis and translocation in sugar beet. Plant Physiology 54: 575–578. Sharkey TD, Berry
JA, Raschke K. 1985. Starch and sucrose synthesis in

Phaseolus vulgaris as affected by light, CO2, and abscisic acid. Plant Physiology

Fig. S6 Positional % 13C in sucrose.

77: 617–620. Steck W. 1968. Metabolism of cinnamic acid in plants: chlorogenic acid
Fig. S7 Relationship between expected and observed % 13C. formation. Phytochemistry 7: 1711–1717. Stitt M. 1990. Fructose-2,6-
bisphosphate as a regulatory molecule in plants.
Fig. S8 Intramolecular 13C pattern in chlorogenate. Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology 41: 153–185. Stitt M.
1991. Rising CO2 levels and their potential significance for carbon flow
in photosynthetic cells. Plant, Cell and Environment 14: 741–762.
Fig. S9 13C enrichment in phenylalanine and quinate.
Strand A, Zrenner R, Trevanion S, Stitt M, Gustafsson P, Gardestrom P. 2000.
Decreased expression of two key enzymes in the sucrose biosynthesis pathway,
Fig. S10 NMR identification of glycerate. cytosolic fructose-1,6-bisphosphatase and sucrose phosphate synthase, has remarkably different
consequences for photosynthetic carbon metabolism in transgenic Arabidopsis thaliana. The Plant Journal 23: 759–770.
Fig. S11 Comparison of glycerate build-up rates.
Sun J, Zhang J, Larue CT, Huber SC. 2011. Decrease in leaf sucrose synthesis
leads to increased leaf starch turnover and decreased RuBP regeneration-limited
Fig. S12 Total carbon flux associated with metabolite build-up. photosynthesis but not Rubisco-limited photosynthesis in Arabidopsis null
mutants of SPSA1. Plant, Cell & Environment 34: 592–604.
Table S1 Summary of gaseous conditions used in this study Tcherkez G. 2013. Is the recovery of (photo) respiratory CO2 and
intermediates
minimal? New Phytologist 198: 334–338. Tcherkez G, Bligny R, Gout E, Mahe A, Hodges M, Cornic G. 2008.
Table S2 NMR chemical shifts of chlorogenate
Respiratory metabolism of illuminated leaves depends on CO2 and O2 conditions. Proceedings of the National Academy of Sciences, USA 105: 797–802.
Please note: Wiley Blackwell are not responsible for the content Tcherkez G, Gauthier P, Buckley TN, Busch FA, Barbour MM,
Bruhn D,
or functionality of any Supporting Information supplied by the Heskel MA, Gong XY, Crous K, Griffin KL et al. 2017. Leaf day
respiration: low CO2 flux but high significance for metabolism and carbon balance. New Phytologist 216: 986–1001.
authors. Any queries (other than missing material) should be directed to the New Phytologist Central Office.
New Phytologist (2018) 218: 94–106 © 2018 The Authors www.newphytologist.com
New Phytologist © 2018 New Phytologist Trust