Column Chromatography (CC)

Kromatografi Kolom (KK)

sumardi
APPLICATIONS
►Seperation of mixture of components Pemisahan campuran
senyawa
►Proses Pemurnian
►Isolation of metabolites Isolasi metabolit
►Memperkirakan formulasi suatu obat
Pendahuluan
 Fase diam dan gerak pada kolom, biasanya
digunakan:
 » Solid – S.P
 » Liquid – M.P
Prinsif
Adsorption/Adsorpsi
 Campuran komponen senyawa yang larut dalam fase gerak
akan melewati kolom
 Komponen senyawa bergerak tergantung afinitas relatifnya
Tipe Kolom
1- Gravity Columns/ Kolom Graviti:
Fase gerak melewati fase diam berdasarkan gaya gravitasi.
2- Flash Columns (Air or nitrogen pressure)
Kolom Flash:
Fase gerak didorong oleh tekanan udara atau nitrogen
dengan bantuan adaptor.
3-Low and Medium Pressure Columns
(pumped)/Tekanan rendah-sedang pada
kolom:
Gerakan fase gerak diakselerasikan dengan menggunakan
pompa sehingga menghasilkan tekanan rendah atau
sedang. Peningkatan kecepatan aliran akan
memperpendek watu pemisahan.
4-Vacuum Columns [Vacuum liquid
chromatography (VLC)]Cair Vakum:

adsorben/fase diam dipacking kering

didalam tabung sintered glass. Sampel
dibuat dalam bentuk kering diletakkan
diatas adsorben. Kemudian fase gerak
ditambahkan masing-masing sebagai
fraksi.
5- High pressure Columns (HPLC):
In this columns we use very fine silica gel so great increaser in
separation power. However, the flow rate of the mobile phase is
severely decreased. High pressure pumps are used to push the
solvent through the column which in this case must be made of
stainless steel.
Persyaratan CC/KK
 Fase Diam (Stationary Phase)
Kriteria nya adalah:
◘ Butiran fase diam bentuk granul
◘ Stabilitas mekanik yang tinggi
◘ inert
◘ dapat digunakan untuk memisahkan senyawa kimia
secara luas
◘ harga terjangkau dan tidak mahal
Fase Diam
 Kesuksesan CC/KK sangat tergantung dari fase diamnya
1. Bebas Pengotor
2. Jumlah senyawa yang dipisahkan
3. Panjang kolom yang digunakan
4. Perbedaan afinitas antar komponen
5. Kualitas adsorben yang digunakan
Fase Gerak
Fase gerak bertindak sebagai:
▫ Solvent
▫ Developer
▫ Eluent
COLUMN CHARACTERISTICS
Column - Neutral glass
Column dimensions - length & diameter ratio (10:1,30:1 or
100:1)
Skema KK/CC
Pengemasan Kolom
» Pada dasar kolom dipasang gelas wol/cotton wol atau kapas
atau bahan terbuat dari asbes
» fase diam dipacking
» di atas fase diam, dipasang paper disc
2 cara teknik packing kolom
1.Dry packing/packing kering
2.Wet packing/packing basah
Dry Packing Technique/Teknik Packing
Kering
 Adsorbent /fase diam di pack ke dalam kolom dalam bentuk
kering
 masukkan solvent sampai tercapai kesetimbangan
Kekurangan: gelembung udara dapat
terperangkap dalam MP dan SP, → cracks
appear in the adsorbent layer.
Pengemasan Kolom Cara Kering
Wet Packing Technique/Teknik Packing
Basah
» ideal & common technique
Adsorbent + M.P dicampur dalam beaker gelas, perlahan
dimasukkan ke dalam kolom
◊ Fase diam terpacking lebih seragam dan tidak ada crack pada
kolom
Pengemasan Kolom Cara Basah
 Memasukkan Sampel
Sampel dilarutkan dalam fase gerak, kemudian
dimasukkan kedalam kolom sekali saja. → eluted
ELUTION PROCEDURES
Two techniques
1)Isocratic elution techniques
2)Gradient elution techniques
Isocratic elution techniques/Teknik
Elusi Isokratis

(Iso artinya – sama)

Campuran beberapa pelarut atau kepolarannya sama, digunakan
selama proses pemisahan
 Gradient elution techniques/Teknik Elusi Gradient

( gradient – gradually)
 Pelarut digunakan gradient, kepolarannya ↑ atau kekuatan
eluennya ↑ selama proses pemisahan.
 Contoh: benzene, then chloroform, then ethyl acetate then
chloroform
DETECTION OF COMPONENTS
Colored components- :Visually
Colorless components- Different properties which can be
used are – uv / visible detector, flourescence detector, RI
detector, Flame ionization detector…
Untung & Rugi CC/KK
Keuntungan
» Berbagai tipe campuran dapat dipisahkan
» Jumlah senyawa hasil pemisahannya banyak
» Bebas memilih MP
» Dapat dibuat otomatis
Kerugian
 ↑ banyak memerlukan fase gerak
 Time consuming
 Teknik yang digunakan bisa komplikasi dan mahal