ARTIKEL PENELITIAN

Spektroskopi Raman dengan kedalaman kritis memungkinkan

penggunaan glukosemonitoring non-invasif untuk penggunaan di rumah

Signe M. Lundsgaard-Nielsen 1, Anders Pors 1, Stefan O. Banke 1, Jan E. Henriksen 2,

Dietrich K. Hepp 3, AndersWeber 1 *

1 Sistem RSP, Odense, Denmark, 2 Departemen Endokrinologi, Rumah Sakit Universitas Odense, Odense, Denmark, 3 Endokrinologi dan
Diabetologi, Munich, Jerman

* andersw@rspsystems.com

a1111111111
a1111111111
a1111111111 Abstrak
a1111111111
a1111111111 Salah satu upaya paling ambisius di bidang teknologi diabetes adalah penginderaan glukosa non-invasif. Dalam
beberapa dekade terakhir, sejumlah teknologi berbeda telah dinilai, tetapi tidak satupun dari teknologi ini yang dapat
digunakan secara klinis secara umum. Kami melaporkan pengembangan spektrometer Raman confocal table-top yang
digunakan di rumah pasien
dengan diabetes dan dioperasi untuk waktu yang lama tanpa pengawasan dan tanpa kalibrasi ulang. Sistem ini
AKSES TERBUKA
didasarkan pada pengukuran kadar glukosa pada 'kedalaman kritis' di kulit, khususnya di cairan interstisial yang terletak
Kutipan: Lundsgaard-Nielsen SM, Pors A, Banke SO, Henriksen JE,
di bawah stratum korneum tetapi di atas lapisan jaringan adiposa di bawahnya. Daerah yang dipilih untuk pengukuran
Hepp DK, Weber A (2018) Spektroskopi Raman kedalaman kritis

memungkinkan pemantauan glukosa non-invasif digunakan di rumah. glukosa rutin adalah pangkal ibu jari (tenar). Dalam sebuah studi klinis kecil, 35 pasien dengan diabetes menganalisis
PLoS ONE 13 (5): e0197134. https://doi.org/10.1371/journal. glukosa cairan interstisial mereka selama 60 hari menggunakan metode Raman kedalaman kritis (CDRaman) yang baru

dan levelnya dikorelasikan dengan referensi nilai glukosa darah kapiler menggunakan tongkat jari standar dan tes. produk
pone.0197134
strip. Kalibrasi sistem CD-Raman stabil selama> 10 hari. Kinerja pengukuran untuk kadar glukosa yang ada pada, atau di
Editor: Conor L. Evans, HarvardMedical School, AMERIKA
bawah, kedalaman ~ 250 μ m di bawah permukaan kulit sebanding dengan yang dilaporkan untuk monitor glukosa kontinu
SERIKAT
invasif yang tersedia saat ini. Singkatnya, dengan menggunakan teknologi CD-Raman kami telah mendemonstrasikan
Diterima: 18 Desember 2017
penggunaan pertama monitor glukosa non-invasif yang berhasil di rumah.
Diterima: 26 April 2018

Dipublikasikan: 11 Mei 2018

Hak cipta: © 2018 Lundsgaard-Nielsen dkk. Ini adalah artikel akses

terbuka yang didistribusikan di bawah persyaratan Lisensi Atribusi

Creative Commons , yang mengizinkan penggunaan, distribusi, dan

reproduksi tanpa batas dalam media apa pun, dengan

mencantumkan nama penulis dan sumber aslinya.

Pernyataan Ketersediaan Data: Semua data yang relevan ada di
dalam kertas dan file Informasi Pendukungnya.
Pendanaan: Sistem RSP mendanai pekerjaan ini dan keputusan
untuk menerbitkan dibuat oleh perusahaan. Sistem RSP
memberikan dukungan dalam bentuk gaji untuk penulis SMLN, AP,
SOB dan AW, tetapi tidak memiliki peran tambahan dalam desain
studi, pengumpulan dan analisis data, atau persiapan naskah.
pengantar
Diabetes mellitus, dalam berbagai bentuknya, mempengaruhi semakin banyak orang dan menempatkan beban yang tidak
semestinya pada anggaran perawatan kesehatan nasional. Perkiraan (dari 2015) menyatakan bahwa 415 juta orang di seluruh
dunia menderita diabetes sementara jumlah ini diprediksi akan meningkat menjadi 642 juta pada tahun 2040 [ 1 ]. Untuk
mengontrol pengobatan dianjurkan swa-monitor glukosa darah, yang biasanya dilakukan dengan metode tusuk jari invasif. Pada
pasien diabetes tipe 1, dosis insulin sering didasarkan pada 4 sampai 6 penentuan glukosa darah per hari. Untuk alasan ini,
telah menjadi tujuan jangka panjang untuk mengembangkan teknik yang benar-benar non-invasif untuk mengukur kadar glukosa
darah pasien diabetes. Tren klinis saat ini mendukung sensor tipe Clarke (yaitu, elektrokimia) yang memungkinkan pemantauan

Peran khusus dari para penulis ini adalah glukosa terus menerus di

PLOSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197134 11 Mei 2018 1/11


diartikulasikan di bagian 'kontribusi penulis'. Proyek ini telah
menerima dana dari penelitian dan inovasi program
European Union's Horizon 2020 di bawah perjanjian hibah
No.
738973.
Ketertarikan yang bersaing: Kami memiliki minat berikut. Sistem
RSP mendanai pekerjaan ini dan keputusan untuk menerbitkan
dibuat oleh perusahaan. Signe M. Lundsgaard-Nielsen, Anders Pors,
Stefan
O. Banke dan AndersWeber dipekerjakan oleh Sistem RSP. Ini tidak
mengubah kepatuhan kami pada semua kebijakan PLOS ONE tentang
berbagi data dan materi, seperti yang dijelaskan secara online dalam
panduan untuk penulis.
PLOSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197134 11 Mei 2018
Spektroskopi Raman memungkinkan glukosemonitoring non-invasif
cara invasif minimal [ 2 , 3 ]. Namun, tusukan kulit tetap diperlukan, dengan ketidaknyamanan yang terkait bagi pengguna dan
peningkatan risiko infeksi; sementara sensor ini juga mengalami masalah biokompatibilitas yang membatasi masa pakainya hingga
beberapa minggu [ 4 ].
Selama beberapa dekade telah menjadi tujuan untuk mengembangkan teknik non-invasif untuk mengukur kadar glukosa
darah pasien diabetes, tetapi solusi praktis untuk penggunaan umum sejauh ini belum dikembangkan. Mayoritas pendekatan
didasarkan pada pengukuran optik glukosa di jaringan seperti kulit [ 5 , 6 , 7 ]. Di antara teknik spektroskopi, seperti fluoresensi,
absorbansi dan Raman telah menarik perhatian yang cukup besar. Terlepas dari kenyataan bahwa hamburan Raman yang
tidak elastis adalah proses yang lemah dan dengan demikian menghasilkan sinyal yang buruk, spesifisitas kimia yang tinggi
terkait, gangguan minimal dari kandungan air jaringan dan hanya latar belakang fluoresensi sederhana menjadikan teknik ini
salah satu kandidat paling menjanjikan untuk pemantauan glukosa noninvasif [ 8 ]. Sejak studi kelayakan pertama mengukur
glukosa darah dengan spektroskopi Raman inframerah dekat pada tahun 1997 [ 9 ] beberapa kelompok telah mendukung
klaim ini dengan pengukuran kuantitatif kadar glukosa in vivo [ 10 - 14 ]. Laporan ini dapat dianggap sebagai bukti konsep
hanya dalam arti bahwa semua pengukuran dilakukan dalam lingkungan yang terkendali sementara kemampuan prediksi
model kalibrasi dinilai hanya dengan validasi silang.
Dalam makalah ini kami menjelaskan desain dan pengembangan instrumen Raman dekat-inframerah confocal untuk
penentuan glukosa intermiten. Instrumen ini menggunakan prinsip baru Raman kedalaman kritis di mana pengukuran diambil
dari cairan interstisial dalam wilayah kulit yang ditentukan. Perlu dicatat bahwa berbeda dengan karya sebelumnya yang juga
menggunakan konfigurasi confocal untuk menyelidiki bagian kulit yang hidup [ 10 , 14 ], pekerjaan saat ini adalah yang pertama
dari jenisnya yang secara sistematis mempelajari hubungan antara kedalaman probing dan kinerja prospektif glukometer
berbasis Raman, sehingga memungkinkan kami untuk menentukan kedalaman kritis dari mana sinyal Raman harus diperoleh.
Selain itu, kami melaporkan studi pertama yang tidak terkontrol di mana sistem telah digunakan oleh pasien diabetes di rumah
mereka selama 60 hari untuk mendapatkan pengukuran glukosa darah yang akurat.
Material dan metode
Peralatan
Spektrum direkam menggunakan konfigurasi Raman confocal custom-built dengan dimensi eksternal 475mm (l) x 212mm (h)
x 361mm (w). Gambar 1 menampilkan diagram skematik dari komponen internal.
Sinar laser dihasilkan oleh laser dioda gelombang kontinyu yang memancarkan pada panjang gelombang 830nm dengan
kekuatan 300mW (I0830MU0350MF-NL dari Innovative Photonic Solutions, New Jersey, USA). Sebelum sinar laser berinteraksi
dengan kulit, sinar laser terlebih dahulu dikolimasi dan dikirim melalui filter pembersihan untuk menghilangkan lobus samping
spektral dan fluoresensi latar belakang yang tidak diinginkan. Kemudian, lampu eksitasi dialihkan oleh cermin dichroic dan
difokuskan dengan kuat ke tenar (pangkal ibu jari) oleh lensa probe (f-number = 0,55). Thenar ditempatkan pada jendela
magnesium fluorida setebal 500μm yang merupakan satu-satunya bukaan pada penutup yang tidak tembus cahaya. Interaksi
cahaya eksitasi dengan kulit menghasilkan cahaya tersebar Rayleigh, serta latar belakang fluoresensi broadband, dan foton
Raman spesifik molekul; ini semua dikumpulkan dan disusun oleh lensa probe. Cahaya Rayleigh, bagaimanapun, ditekan oleh
cermin dichroic dan filter long-pass, hanya memungkinkan panjang gelombang di atas 850nm untuk mencapai celah
spektrometer. Sebelum cahaya memasuki spektrometer, itu difokuskan ke celah masuk 50μm x 100μm yang juga berfungsi
sebagai lubang jarum dalam pengaturan confocal kami. Spektrometer memiliki fnumber 1,3 dengan resolusi spektral 9cm- 1 dalam
rentang pengukuran 300-1800cm- 1
(spektrometer WP830 yang dikonfigurasi khusus dariWasatch Photonics, North Carolina, USA).
2/11
 Spektroskopi Raman memungkinkan glukosemonitoring non-invasif

Gambar 1. Skema presentasi spektrometer Raman portabel. Output dari laser dioda (daya kontinu 300mW) pertama-tama dikolimasi, lobus
samping spektral yang tidak diinginkan dan fluoresensi disaring, kemudian dialihkan oleh cermin dichroic dan akhirnya difokuskan (oleh lensa f / 0,55)
tepat di bawah permukaan kulit. Sementara cahaya pantulan / tersebar intens, fluoresensi, dan foton Raman yang dihasilkan dikumpulkan oleh lensa f /
0.55, cermin dichroic dan filter long-pass memastikan bahwa hanya dua kontribusi terakhir ke spektrum yang difokuskan (oleh f / 1.3) pada celah masuk
spektrometer.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197134.g001

Detektor berpasangan muatan (1024x64 piksel) dalam spektrometer distabilkan suhu pada 15˚C̊. Perlu dicatat
bahwa semua filter dan cermin berasal dari Semrock (New York, AS), sedangkan lensa dibuat khusus untuk
meminimalkan penyimpangan optik dan memaksimalkan hasil.

Selektivitas kedalaman di perangkat kami adalah konsekuensi dari desain confocal, di mana fokus / kedalaman
pengumpulan ('kedalaman kritis', atau CD) di bawah permukaan kulit dapat dikontrol dengan mengubah jarak antara
lensa probe dan bidang referensi tangan (lihat Gambar 1 ). Dalam studi ini, kami menggunakan rentang jarak kira-kira.
150 hingga 300μm dari bidang referensi di permukaan kulit ke titik fokus di cairan interstisial. Ilustrasi distribusi
kepadatan sinyal Raman yang diharapkan di kulit (dihitung sebagai kuadrat dari insiden fluks) ditampilkan di

Gambar 2 untuk CD 150, 200, 250, dan 300μm.

Simulasi diperoleh dengan memodelkan sinyal Raman di Zemax OpticStudio 16.5 (Zemax LLC, Seattle, WA), di
mana kekasaran permukaan dan ketidakhomogenan kulit ditangani dengan memasukkan hamburan permukaan
Trowbridge-Reitz [ 15 ] dan hamburan massal Henyey-Greenstein [ 16 ]. Penting untuk dicatat bahwa ketebalan dan sifat
optik yang tepat dari berbagai lapisan kulit berbeda-beda pada setiap orang Gambar 2 sebaiknya hanya dianggap
sebagai ilustrasi umum dari interaksi ringan dari pengaturan optik kami dan pengaruh memvariasikan CD. Untuk detail
lebih lanjut tentang model kulit, kami merujuk ke S1 Lampiran . Simulasi menunjukkan bahwa kekasaran dan kekeruhan
pada kulit menyebabkan peningkatan volume dari mana foton Raman terkumpul saat CD meningkat. Selain itu, dengan
rata-rata stratum corneum (SC) yang diukur dari tenar yang mencakup 166μm awal kulit (lihat Protokol), jelas bahwa
sebagian besar sinyal Raman harus berasal dari kompartemen interstisial kulit dengan CD yang meningkat. Karena
sinyal glukosa dinamis (yang mencerminkan kadar darah) diharapkan hanya dari komponen kulit ini, simulasi
menunjukkan bahwa pemantau glukosa CD berbasis Raman confocal harus fokus dan mengumpulkan cahaya dari
bawah lapisan SC.

PLOSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197134 11 Mei 2018 3/11

 Spektroskopi Raman memungkinkan glukosemonitoring non-invasif

Gambar 2. Simulasi distribusi kepadatan akuisisi sinyal. Panel (A) - (D) menunjukkan distribusi kepadatan simulasi sinyal Raman yang dihasilkan di kulit
untuk kedalaman pengumpulan masing-masing 150, 200, 250, dan 300μm. Kulit dimodelkan sebagai media keruh yang menampilkan hamburan massal dan
permukaan.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197134.g002

Protokol studi
Spektrum Raman direkam dari tenar 41 pasien diabetes berusia antara 20 hingga 60 tahun yang direkrut dari Odense
University Hospital, Department of Endocrinology, Denmark. Untuk semua pasien, ketebalan SC pada thenar diukur
menggunakan sistem tomografi koherensi optik (Callisto, Thorlabs Inc. New Jersey, USA). Ketebalan SC rata-rata
adalah 166 +/- 40μm (x +/- SD). Enam pasien dengan ketebalan SC lebih besar dari 206μm dikeluarkan dari analisis
data selanjutnya. Kelompok yang tersisa dari 35 pasien terdiri dari 14 laki-laki dan 21 perempuan, 32 di antaranya
menderita diabetes tipe 1 dan 3; CD perangkat Raman ditetapkan untuk setiap pasien sesuai dengan kriteria pemilihan
yang dijelaskan dalam Hasil dan berada dalam kisaran 140 hingga 320μm.

Para pasien dilengkapi dengan perangkat CD-Raman di atas meja kami (seperti yang dijelaskan dalam Gambar 1 )

dan diinstruksikan tentang cara menggunakan perangkat di rumah. Setiap pasien yang terdaftar dalam penelitian ini dapat
dengan bebas memilih 30 hari analisis dalam jangka waktu 60 hari, di mana setiap hari analisis mencakup empat sesi
pengukuran (dipilih dengan tepat sepanjang hari); yang juga termasuk penentuan glukosa referensi yang dilakukan dalam
darah kapiler dengan HemoCue 201 RT (HemoCue AB, Ängelholm, Swedia). Setiap sesi terdiri dari dua sub-sesi dengan
waktu perolehan masing-masing 2 dan 1 menit dan spektrum Raman yang dihasilkan merupakan pembobotan dari kedua
spektrum tersebut sesuai dengan waktu akuisisi. Perlu dicatat bahwa total waktu akuisisi 3 menit dipilih berdasarkan
kinerja, sedangkan pengaruh dari pemisahan tersebut belum diteliti dalam penelitian ini. Di antara dua sub-sesi, tangan
telah dikeluarkan dari perangkat untuk memastikan bahwa kinerja prospektif tidak terlalu bergantung pada pencapaian
lokasi pengukuran yang tepat pada tenar. Karena sangat penting dalam penggunaan kehidupan nyata bahwa model
kalibrasi dapat mencakup variasi lateral seperti lokasi pengukuran di tenar, kami tidak berusaha untuk mengukur (atau
membatasi) skala perpindahan antara sub-sesi.

PLOSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197134 11 Mei 2018 4/11

 Spektroskopi Raman memungkinkan glukosemonitoring non-invasif

dan sesi. Perlu dicatat bahwa gerakan tangan yang tidak disengaja selama akuisisi tidak terdeteksi secara langsung,
tetapi selalu menghasilkan spektrum rawan kesalahan yang dapat dihilangkan selama analisis data. Penelitian ini disetujui
oleh National Danish Committee on Health Research Ethics dan Danish Medicines Agency, dan ada persetujuan tertulis
dari semua peserta. Protokol penelitian tersedia untuk umum di ClinicalTrials.gov, dengan pengenal NCT03368209.

Analisis data
Analisis spektrum Raman yang diukur dan korelasi dengan kadar glukosa darah dipusatkan di Matlab R2017a
(MathWorks, Natick, Massachusetts, USA) menggunakan PLS Toolbox (Eigenvector Research Inc., Manson,
Washington, USA).
Sebagai langkah pertama, kami mengecualikan data spektral jenuh dan spektrum rawan kesalahan karena kesalahan
penempatan tangan atau gangguan dari cahaya sekitar. Kedua, sesi pengukuran di mana referensi glukosa darah dilaporkan
melebihi 30 mmol / L dikeluarkan agar sesuai dengan grid kesalahan konsensus [ 17 ] dan rentang pengukuran referensi
glukometer Hemocue 201RT. Tidak ada kriteria eksklusi data lain yang digunakan dalam penelitian ini, dan sisa spektrum
Raman yang digunakan dalam analisis data berikut dapat ditemukan di Set Data S1 dengan S2 Lampiran memberikan
deskripsi yang menyertai berbagai bidang data.

Setelah pengambilan data, spektrum pertama kali dihaluskan dengan algoritma urutan 1 Savitsky-Golay 15 poin,
kemudian dikoreksi untuk berbagai intensitas dan latar belakang menggunakan 6 th order EMSC (koreksi pencar perkalian
diperpanjang [ 18 ]), dan akhirnya berpusat pada kejam. Konsentrasi glukosa darah referensi dipusatkan pada mean sebelum
analisis. Kami mencatat bahwa jumlah titik yang digunakan untuk perataan dan urutan EMSC agak tinggi, tetapi nilai dipilih
berdasarkan kinerja prediksi optimal keseluruhan dari model kalibrasi. Kami memperkirakan bahwa penerapan teknik deteksi
outlier di masa mendatang dapat mengurangi nilai parameter ini.

Untuk evaluasi kuantitatif glukometer CD-Raman kami, data dibagi menjadi satu set kalibrasi (analisis
25 hari awal) dan set validasi independen (5 hari terakhir analisis), dengan korelasi antara spektrum
Raman dan konsentrasi glukosa darah sedang ditentukan melalui regresi parsial kuadrat terkecil (PLS).
Pilihan 25 hari kalibrasi merupakan konsekuensi dari peningkatan model PLS hingga saat ini. Berdasarkan
set kalibrasi, kami menghitung model PLS untuk setiap pasien, di mana jumlah optimal variabel laten (LV)
ditentukan dari minimalisasi serentak root-mean-square error (RMSE) kalibrasi dan 10 kali lipat validasi
silang ( CV, blok yang berdekatan). Untuk validasi lebih lanjut (validasi silang dan independen) dari model
PLS, 2 dan RMSE. Perlu dicatat bahwa perilaku temporal dan kisaran nilai glukosa darah sangat
bergantung pada pasien diabetes. Beberapa pasien diatur dengan sangat baik dengan nilai glukosa dalam
kisaran 4-10 mmol / L, dengan episode hiperglikemik sesekali, sementara yang lain menunjukkan kisaran
glukosa yang lebih luas dari 1-30 mmol / L dengan hipo-, eu-, dan periode hiperglikemik diamati. Perilaku
yang berbeda di antara pasien merupakan tantangan untuk mengukur kinerja menggunakan parameter
validasi tunggal. Untuk mengatasi masalah ini, kami telah mengembangkan parameter kinerja gabungan
yang disebut Inter-Subject Unified Performance (ISUP):

ISUP ¼ ð SEBUAH þ B MARD Þ kemiringan R 2 1 ½ mM ?? = Y median; ð1Þ

dimana SEBUAH dan B adalah distribusi persentase sampel di zona A dan B di grid kesalahan konsensus, MARD adalah MARD yang

dihitung dalam persentase, lereng adalah kemiringan dari kesesuaian linier terbaik

di kisi kesalahan konsensus, R 2 adalah koefisien korelasi dan Y median adalah referensi median

PLOSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197134 11 Mei 2018 5/11

 Spektroskopi Raman memungkinkan glukosemonitoring non-invasif

nilai glukosa. Parameter kinerja komposit dievaluasi pada hasil validasi silang atau independen dan dirancang untuk
memberi bobot pada keberadaan sampel di zona A dan B, bersama dengan MARD rendah, kemiringan tinggi, dan
koefisien korelasi tinggi. Selain itu, ISUP memperhitungkan bahwa kadar glukosa pada beberapa pasien umumnya
diatur dengan baik dengan juga menimbang median konsentrasi glukosa darah.

Hasil
Kohort dari 35 pasien dibagi menjadi 3 kelompok untuk penentuan kinerja analitis pada kedalaman 140-200 μm, 240-270
μm, dan 280–320 μm di bawah bidang referensi. Kualitas data diungkapkan oleh parameter ISUP seperti yang dijelaskan
dalam Metode (Analisis Data). Batas kedalaman 320 μm dipilih karena penurunan sinyal secara bertahap di bawah
ambang batas ini. Plot kotak masuk Gambar 3 menunjukkan median ISUP untuk tiga kelompok pasien, di mana skor 0,5
ditetapkan sebagai ambang antara kinerja yang dapat diterima dan yang buruk. Pilihan ambang batas didukung oleh hasil
yang divalidasi silang untuk setiap pasien, bersama dengan vektor regresi model kalibrasi dan perbandingan dengan
spektrum Raman dari larutan glukosa referensi. Data kinerja di Gambar 3 menunjukkan korelasi positif antara CD dan
ISUP. Kedalaman koleksi optimal 250-300 μm dipilih untuk penelitian selanjutnya; yang konsisten dengan simulasi yang
ditunjukkan pada Gambar 2 . Oleh karena itu masuk akal untuk mengasumsikan bahwa probe terutama mengumpulkan
sinyal Raman dari kompartemen cairan interstisial di bawah SC.

Pada 15 pasien, dengan ISUP di atas 0,5 dan CD dalam kisaran 240–320 μm, lima hari data divalidasi secara
independen dengan mengacu pada nilai glukosa kapilernya seperti yang dijelaskan dalam Metode. Pada kisi
kesalahan konsensus yang ditunjukkan pada Gambar 4 , validasi independen diwakili dengan kemiringan 0,69,
MARD 25,8% dengan 93% prediksi di area A + B. Perbandingan validasi silang dan independen ditunjukkan di Tabel
1 . Karena kinerja kedua metode validasi hampir identik, hal ini menunjukkan kesesuaian metode validasi silang dan
kemampuan prediksi model PLS yang dihasilkan.

Gambar 3. Plot kotak kinerja versus kedalaman koleksi. 35 pasien dikelompokkan menjadi tiga rentang kedalaman seperti yang ditunjukkan:
140-200 um, n = 14; 240–270 um, n = 12; 280–320 um, n = 9. Kotak tersebut menunjukkan kuartil atas dan bawah serta median. Ambang batas 0,5
didukung oleh hasil CV dan penilaian kemiripan glukosa untuk vektor regresi, di atas nilai ini kinerjanya memuaskan.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197134.g003

PLOSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197134 11 Mei 2018 6/11

 Spektroskopi Raman memungkinkan glukosemonitoring non-invasif

Gambar 4. Validasi independen dari lima hari terakhir analisis. Konsentrasi glukosa yang diukur diplot sebagai fungsi nilai referensi dalam kisi
kesalahan konsensus. Kedalaman kritis pengukuran adalah 240–320 um dan ISUP lebih besar dari 0,5.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197134.g004

Gambar 5 menunjukkan hasil yang diperoleh dari satu pasien (ID pasien: 15), sedangkan sisa hasil untuk 14
pasien lainnya dapat ditemukan di S1 Gambar dan S2 Gambar . Pasien perwakilan adalah individu dengan kinerja
rata-rata dengan CD 250μm, ISUP 1,9 dan MARD dari validasi independen 27,6%. Gambar 5A menunjukkan
perbandingan antara spektrum Raman rata-rata dari thenar, spektrum larutan referensi glukosa dan vektor regresi
model kalibrasi PLS. Terlihat bahwa keberadaan glukosa tidak segera terlihat dalam spektrum tenar mentah, yang
terdiri dari latar belakang fluoresensi yang luas yang dilapisi oleh puncak Raman yang khusus untuk kulit. Sebaliknya,
vektor regresi menunjukkan spektrum yang jelas

Tabel 1. Kinerja validasi silang (CV) dan validasi independen (IV).

CV IV

MARD (%) 27.3 25.8

Lereng 0.65 0.69

SEBUAH (%) 54.1 58.3

B (%) 39.8 35.2

C (%) 5.4 5.9

D (%) 0.7 0.6

E (%) 0 0

Jumlah sampel 1530 338

Pasien 15 15

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197134.t001

PLOSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197134 11 Mei 2018 7/11

 Spektroskopi Raman memungkinkan glukosemonitoring non-invasif

Gambar 5. Spektrum Raman dan prediksi independen untuk pasien dengan kinerja rata-rata. ( A) Spektrum Raman rata-rata dari daerah
tenar (biru), spektrum Raman glukosa dalam larutan air (merah), dan vektor regresi model kalibrasi PLS (hitam). (B) Plot konsentrasi glukosa
yang diprediksi secara independen dan nilai referensi sebagai fungsi waktu dari hari terakhir kalibrasi. Garis putus-putus hanya untuk panduan.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197134.g005

tanda tangan glukosa, dengan puncak yang signifikan pada pita Raman spesifik-glukosa pada 514 cm- 1

dan 1123 cm- 1. Gambar 5B menunjukkan pengukuran dari set validasi independen sebagai fungsi waktu dari hari terakhir
kalibrasi. Untuk pasien ini, analisis selama lima hari terakhir diperpanjang selama periode sepuluh hari secara total dan
jelas bahwa kinerja prediktif tidak menurun selama waktu ini; dengan demikian, kalibrasi stabil selama minimal 10 hari.

Diskusi
Dalam makalah ini kami melaporkan pengembangan dari confocal table-top, spektrometer Raman kedalaman kritis yang
dapat digunakan di rumah pasien dengan diabetes dan dioperasikan untuk waktu yang lama (setidaknya 60 hari) tanpa
pengawasan. Dalam sebuah studi klinis kecil, kami telah menunjukkan bahwa spektrum Raman yang diperoleh dari tenar 35
pasien diabetes dapat dikorelasikan dengan nilai glukosa darah; mendemonstrasikan itu, dengan pengumpulan data spektral
pada kedalaman kira-kira. 250μm kemampuan analitis CD-Raman diverifikasi dengan jelas dengan kalibrasi yang
dipertahankan setidaknya selama 10 hari. Adanya kedalaman pengukuran kritis sejalan dengan pandangan yang diterima
secara luas bahwa perlu untuk menyelidiki di luar SC untuk mengukur kadar glukosa dinamis. Probing melebihi kedalaman ~
300μm belum diteliti dalam pekerjaan ini karena sinyal Raman yang menurun untuk meningkatkan kedalaman probing (akibat
dari kekeruhan kulit) dan risiko sinyal yang tidak diinginkan dari jaringan adiposa yang mendasarinya. Kami juga mencatat
bahwa kalibrasi mungkin valid selama lebih dari 10 hari, tetapi data yang diperoleh saat ini tidak mendukung klaim yang
melebihi jangka waktu ini.

Pemilihan data yang diperoleh dengan kedalaman kritis lebih dari 240μm dan ISUP lebih besar dari 0,5 memberikan
validasi independen 93% untuk pembacaan di zona A dan B dari grid kesalahan konsensus dan keseluruhan MARD 25,8%;
kinerja yang mendekati perangkat pemantauan kontinu invasif saat ini yang biasanya menunjukkan MARD antara 10-30% dan
90–98% pembacaan di zona A + B [ 2 , 3 ].

Secara umum, ada beberapa faktor yang dapat mempengaruhi akurasi sistem CD-Raman dalam mengukur
konsentrasi glukosa interstisial. Salah satu faktor tersebut adalah jeda waktu perubahan konsentrasi glukosa antara
kompartemen kapiler dan interstisial yang dapat bervariasi dalam kaitannya dengan kinetika difusi glukosa. Secara
umum diterima bahwa interstisial

PLOSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197134 11 Mei 2018 8/11

 Spektroskopi Raman memungkinkan glukosemonitoring non-invasif

konsentrasi glukosa tertunda dibandingkan dengan nilai darah selama situasi transien [ 19 , 20 ]. Jeda waktu telah
dilaporkan hingga 45 menit, tergantung pada lokasi pengukuran dan teknik yang digunakan [ 21 ]. Waktu jeda yang
terkait dengan kompartemen IF, tepat di bawah SC, kemungkinan besar mendekati 5 menit [ 22 ]. Akhirnya, bias yang
cukup besar dapat diperkenalkan dengan metode referensi kapiler [ 23 , 24 ].

Seperti yang telah kami tunjukkan, kalibrasi didasarkan pada model PLS individual untuk setiap pasien. Untuk
pengembangan lebih lanjut dari sistem CD-Raman, perlu untuk menetapkan strategi kalibrasi global yang dapat
menangani karakteristik individu pasien, termasuk perbedaan dalam sifat optik pada kulit. Kami sedang menyelidiki
kemungkinan untuk menerapkan teknik pembelajaran mesin, kategorisasi, dan model regresi non-linier. [ 12 , 25 ].

Sebagai kesimpulan, studi klinis kecil yang menggunakan CD-Raman untuk mengukur glukosa interstisial ini menunjukkan bahwa

perubahan paradigma dalam perawatan diabetes sekarang dapat dicapai. Saat ini kami sedang merancang uji klinis tambahan yang akan

digunakan untuk mengevaluasi lebih lanjut keberhasilan pendekatan spektroskopi baru ini. Di masa mendatang kami akan mengecilkan

pengaturan Raman untuk mengurangi jejak perangkat dan pada akhirnya memungkinkan perangkat yang dapat dikenakan untuk pemantauan

kadar glukosa darah terus menerus non-invasif, seperti yang dibahas sebelumnya oleh MS Wróbel [ 8 ].

Informasi pendukung
S1 Gambar. Spektrum Raman dan vektor regresi untuk 14 pasien yang menampilkan ISUP di atas 0,5 dan kedalaman

kritis dalam kisaran 240-320 μm.

(TIF)

S2 Gambar. Prediksi independen dari konsentrasi glukosa dan nilai referensi sebagai fungsi waktu dari hari
terakhir kalibrasi untuk 14 pasien, semuanya menampilkan ISUP di atas 0,5 dan kedalaman kritis dalam kisaran
240–320 μm.
(TIF)

S1 Lampiran. Penjelasan rinci tentang model kulit yang digunakan dalam simulasi.

(PDF)

S2 Lampiran. Penjelasan bidang data di Set Data S1 .

(PDF)

Set Data S1. Spektrum Raman yang belum diproses dan informasi terkait untuk 35 pasien yang terlibat dalam

analisis data.

(TIKAR)

Ucapan Terima Kasih

Kami berterima kasih kepada perawat proyek, Vibe Vestergaard, di Departemen Endokrinologi di Rumah Sakit
Universitas Odense, atas kerja kerasnya dengan pasien. Terima kasih kepada Dr. Christopher J. Stanley, Cambridge,
Inggris untuk revisi naskahnya. Proyek ini telah menerima dana dari penelitian dan inovasi program European Union's
Horizon 2020 di bawah perjanjian hibah No 738973.

Kontribusi Penulis
Konseptualisasi: Signe M. Lundsgaard-Nielsen, Anders Pors, Stefan O. Banke, Dietrich K.
Hepp, Anders Weber.

Kurasi data: Signe M. Lundsgaard-Nielsen.

PLOSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197134 11 Mei 2018 9/11

 Spektroskopi Raman memungkinkan glukosemonitoring non-invasif

Analisis formal: Signe M. Lundsgaard-Nielsen.

Penyelidikan: Stefan O. Banke, Jan E. Henriksen.

Metodologi: Signe M. Lundsgaard-Nielsen, Stefan O. Banke.

Administrasi proyek: Stefan O. Banke.

Sumber: Signe M. Lundsgaard-Nielsen, Jan E. Henriksen.

Perangkat lunak: Signe M. Lundsgaard-Nielsen, Anders Pors.

Pengawasan: Stefan O. Banke.

Validasi: Stefan O. Banke, Anders Weber.

Visualisasi: Signe M. Lundsgaard-Nielsen, Anders Pors.

Penulisan - draf asli: Signe M. Lundsgaard-Nielsen, Anders Pors.

Menulis - meninjau & mengedit: Signe M. Lundsgaard-Nielsen, Anders Pors, Stefan O. Banke, Jan
E. Henriksen, Dietrich K. Hepp, Anders Weber.

Referensi
1. Federasi Diabetes Internasional. Atlas Diabetes IDF. 7 th ed. Brussels, Belgia: Federasi Diabetes Internasional; 2015. ISBN:
978-2-930229-81-2. Tersedia dari: http://www.diabetesatlas.org .

2. Vashist SK. Sistem glukosemonitoring berkelanjutan: tinjauan. Diagnostik. 2013; 3: 385–412. https: // doi.org/10.3390/diagnostics3040385 PMID:
26824930

3. Rodbard D. Pemantauan glukosa berkelanjutan: tinjauan keberhasilan, tantangan, dan peluang. Ada Technol Diabetes. 2016; 18 (2): S2-3 –
S2-13.

4. Dungel P, Long N, Yu B, Moussy Y, Moussy F. Mempelajari efek reaksi jaringan pada fungsi sensor glukosa yang ditanamkan. J Biomed
Mater Res Bagian A. 2007; 85A (3): 699–706.

5. Ferrante do Amaral CE, Wolf B. Perkembangan saat ini dalam glukosemonitoring non-invasif. Med Eng Phys. 2008; 30: 541–549. https://doi.org/10.1016/j.med
PMID: 17942360

6. Tura A, Maran A, Pacini G. Glukosemonitoring non-invasif: penilaian teknologi dan perangkat sesuai dengan kriteria kuantitatif. Diabetes Res
Clin Pract. 2007; 77: 16–40. https://doi.org/10.1016/j. diabres.2006.10.027 PMID: 17141349

7. Vashist SK. Teknologi glukosemonitoring non-invasif dalam manajemen diabetes: tinjauan. Anal Chim Acta. 2012; 750: 16–27. https://doi.org/10.1016/j.aca.20
PMID: 23062426

8. Wróbel MS. Glukosemonitoria darah non-invasif dengan spektroskopi Raman: prospek miniaturisasi perangkat. Seri Conf IOP: Mater Sci
Eng. 2015; 104: 012036.

9. Berger AJ, Itzkan I, FeldMS. Kelayakan mengukur konsentrasi glukosa darah dengan spektroskopi Raman inframerah dekat.
SpectrochimActa, Bagian A. 1997; 53: 287–292.

10. Enejder AMK, Scecina TG, Oh J, Hunter M, ShihWC, Sasic S, dkk. Spektroskopi Raman untuk pengukuran glukosa noninvasif. J. Biomed
Opt. 2005; 10 (3): 031114. https://doi.org/10.1117/1.1920212
PMID: 16229639

11. Lipson J, Bernhardy J, Blok U, FreemanWR, Hofmeister R, Hristakeva M, dkk. Persyaratan untuk kalibrasi dalam glukosemonitoring noninvasif
dengan spektroskopi Raman. J Diabetes Sci Technol. 2009; 3 (2): 233–241. https://doi.org/10.1177/193229680900300203 PMID: 20144354

12. Barman I, Kong CR, Dingari NC, Dasari RR, Feld MS. Pengembangan model kalibrasi yang kuat menggunakan mesin vektor pendukung
untuk pemantauan spektroskopi glukosa darah. Anal Chem. 2010; 82: 9719–
9726. https://doi.org/10.1021/ac101754n PMID: 21050004

13. Kong CR, Barman I, Dingari NC, Kang JW, Galindo L, Dasari RR, dkk. Perangkat spektroskopi Raman berbasis optik non-pencitraan
baru untuk pengukuran analisis darah transdermal. AIP Adv. 2011; 1: 032175.

14. Scholtes-TimmermanMJ, Bijlsma S, Fokkert MJ, Slingerland R, van Veen SJ. Spektroskopi Raman sebagai alat yang menjanjikan untuk
glukosemonitoring di tempat perawatan noninvasif. J Diabetes Sci Technol. 2014; 8 (5): 974–979. https://doi.org/10.1177/1932296814543104 PMID:
25037192

15. Trowbridge TS, Reitz KP. Representasi ketidakteraturan rata-rata permukaan kasar untuk refleksi sinar. J Opt Soc Am. 1975; 65 (5): 531–536.

PLOSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197134 11 Mei 2018 10/11

 Spektroskopi Raman memungkinkan glukosemonitoring non-invasif

16. Henyey LG, Greenstein JL. Radiasi difus di galaksi. Astrophys J. 1941; 93: 70–83.

17. Parkes JL, Slatin SL, Pardo S, Ginsberg BH. Kisi kesalahan konsensus baru untuk mengevaluasi signifikansi klinis dari ketidakakuratan
dalam pengukuran glukosa darah. Perawatan Diabetes. 2000; 23 (8): 1143–1148. PMID: 10937512

18. Martens H, Stark E. Koreksi sinyal multiplikasi diperpanjang dan pengurangan interferensi spektral: metode praproses baru untuk spektroskopi
inframerah dekat. J PharmBiomed Anal. 1991; 9 (8): 625–635. PMID: 1790182

19. Steil GM, Rebrin K, Hariri F, Jinagonda S, Tadros S, Darwin C, dkk. Dinamika glukosa cairan interstisial selama hipoglikemia yang diinduksi
insulin. Diabetologia. 2005; 48: 1833–1840. https://doi.org/10.1007/ s00125-005-1852-x PMID: 16001232

20. Wentholt IME, Hart AAM, Hoekstra JBL, Devries JH. Hubungan antara interstitial dan glukosa darah pada pasien diabetes tipe 1: penundaan
dan fenomena push-pull ditinjau kembali. Ada Technol Diabetes. 2007; 9 (2): 169–175. https://doi.org/10.1089/dia.2006.0007 PMID: 17425443

21. Cengiz E, TamborlaneWV. Kisah dua kompartemen: interstitial versus glukosemonitoring darah. Ada Technol Diabetes. 2009; 11 (1): S-11
– S-16.

22. Nielsen JK, Christiansen JS, Kristensen JS, Toft HO, Hansen LL, Aasmul S, dkk. Evaluasi klinis dari mikrosensor berbasis seumur hidup
fluoresensi yang diinterogasi transkutan untuk pembacaan glukosa berkelanjutan. J Diabetes Sci Technol. 2009; 3 (1): 98–109 https://doi.org/10.1177/1932296
PMID:
20046654

23. Kos S, Meerkerk A van, Linden J van der, Stiphout T, Wulkan R. Validasi perangkat glukosa POCT generasi baru dengan penekanan pada
aspek-aspek penting untuk kontrol glikemik dalam perawatan rumah sakit. Clin Chem Lab Med. 2012; 50 (9): 1573–1580. https://doi.org/10.1515/cclm-2011-09
PMID: 23092803

24. Pemberontak A, Beras MA, Fahy BG. Akurasi pengukuran glukosem di tempat perawatan. J Diabetes Sci Technol. 2012; 6 (2):
396–411. https://doi.org/10.1177/193229681200600228 PMID: 22538154

25. Byrne HJ, Knief P, KeatingME, Bonnier F. Spektral pra dan pasca pemrosesan untuk spektroskopi inframerah dan Raman jaringan dan sel
biologis. ChemSoc Rev. 2016; 45 (7): 1865–1878. https://doi.org/
10.1039 / c5cs00440c PMID: 26463830

PLOSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197134 11 Mei 2018 11/11