BAB 3.

METODE KEGIATAN

3.1 Waktu dan Tempat

Kegiatan Praktikum sterilisai ruangan dan alat-alat kultur jaringan di
lakukan pada tanggal 16 maret 2017 di lab kultur jaringan Politeknik Negeri
Jember.

3.2 Alat dan Bahan

1. Botol untuk larutan stock
2. Petridish
3. Pinset dan scalpel
4. Kertas tissue
5. Aluminium foil
6. Aquadest disterilkan dalam tabung kultur
7. Aquadest
8. Botol kultur dari gelas
9. Oven
10. Autoclave
11. Alkohol
12. Detergen

3.3 Tahap Metode Kegiatan

a.       Sterilisasi alat gelas standart
1.      Botol dicuci bersih dengan sabun cair menggunakan spons dan sikat hingga
bersih lalu bilas dengan air bersih
2.      Botol dikering anginkan dengan menggunakan lap bersih, susun rapi kedalam
oven
3.      Lalu masukkan ke dalam autoclave pada suhu 121o C selama 60 menit pada
tekanan 175 psi (pound per square inch)
4.      Untuk botol-botol yang mempunyai tutup autoclaveable,jangan ditutup terlalu
kencang karena selama pemanasan terjadi pemuaian
5.      Alat-alat yang disterilkan sebelum pemanasan adalah pinset,gunting,kertas
saring, petridish,botol kosong,pipet
6.      Alat-alat dan kertas saring dibungkus rapi dengan kantong plastik yang
disealer sebelum dimasukkan ke dalam autoclave. Alumunium foil tidak
dianjurkan sebagai pembungkus karena uap air tidak dapat masuk kedalam
pembungkus.
7.      Alat-alat seperti pinset,gunting,gagang scalpel dibungkus dengan plastik yang
telah disealer
8.      Petridish dan tutup botol disterilkan dengan pembungkus plastik yang sudah
disealer
9.      Selanjutnya autoclave dibuka dan peralatan yang telah disterilisasi diambil
10.  Kering anginkan semua peralatan,simpan dengan rapid an ditempat yang
bersih

              B. Sterilisasi Ruang

1.      Sapu bersih lantai dan dinding ruang transfer dengan sapu yabg telah di
sediakan
2.      Pel lantai dengan larutan desinfektan (alkohol 90%-70% larutan phenol, dll)
3.      Semprot diding ruang dengan alkohol 95-70%  tau cukup dengan lampu
UV(Ultra Violet) bila ada selam satu jam sebelum ruang tersebut di pergunaan
4.      Di dalam sterilisisasi ruangan, untuk semua ruangan kultur jaringan di
bersihakan dan di gunakan alkohol 70% dan di semprot dengan formalin 5% ke
seluruh ruangan tersebut.

C. Sterilisasi Botol kuljar (dari gelas)

1.      Rendam botol kultur ke dalam bak yang berisi air yang telah di beri ditergen
secukupnya agar kotoran mudah menghilan.
2.      bersihkan botol-botol kultur dari semua kotoran (sisa label dan kotoran
lainnya dengan menggosok menggunakan sikat pembersihan botol.
3.      Bilas botol yang teah di cuci dengan air bersih/air mengalir agar sisa diterge
hilang
4.      Taruh botol-botol yang telah di cuci dalam posisi terbalik dalam bak agar
cepat atus, serta botol-botol tersebut di lap dengan kain bersih.
5.      Seterilkan botol-botol kultur dengan cara memanasakan ke dalam oven pada
suhu 160oC selama + 2-3 jam.
6.      Bersihkan tempat penyimpanan botol kultur (dari gelas) dengan menyemprot
alkohol 70%  agar tempat tersebut tetap steril.
7.      Setelah botol selesai dari oven tunggu sebentar, agar semua botol kultur
tersebut dingin dan di pindahkan ke tempat yang telah di sediakan pada poin ke 6
serta dalam penyusuanan di lakukan penumpukan dengan cara miring.