Segera sambungkan labu ke bohlam penyuling pada kondensor, dengan ujung kondensor direndam

dalam larutan asam standar yang mengandung 5-7 tetes indikator di penerima, putar labu untuk
mencampur konten secara menyeluruh. Lalu panaskan sampai semua NH3 telah disuling (lebih dari
atau sama dengan 150 ml distilat). Lepaskan penerima, cuci ujung kondensor, dan titrasi kelebihan
standar asam dalam distilat dengan larutan NaOH standar. Jalankan tekad kosong pada reagen.

Perhitungan

The miliequivalents (meq) dari NH3 didistilasi sama dengan perbedaan antara meq asam awalnya
hadir dalam labu destilasi dan meq asam yang tersisa setelah distilasi, yang ditentukan oleh titrasi
dengan NaOH standar. Dengan demikian, meq NH3 = (ml std asam x nor �malityacid) - (ml std NaOH
x normalitas NaOH). Karena meq N dalam sampel protein sama dengan meq NH3, gram N adalah
dihitung dengan mengalikan nya dengan 0,014007 (gram N dalam 1 meq), sebagai berikut: g N =
meq N x 0,014007. Dengan demikian, persentase nitrogen bisa dihitung dari ungkapan berikut:

Seperti dibahas dalam Bab 2, berat nitrogen dalam sampel bisa dikonversi menjadi protein dengan
menggunakan faktor yang sesuai berdasarkan persentase nitrogen dalam protein. Faktor konversi
nitrogen-ke-protein yang paling umum adalah 6,25, meskipun nilai ini agak beragam tergantung
pada sumber protein (lihat Tabel 2.1). Sebagai contoh cara menghitung % protein dalam sampel 1,0-
g dari produk makanan, asumsikan 50 ml asam standar 0,1121 N , awalnya dalam tabung
pengumpulan NH3 dan bahwa 20 ml NaOH standar 0,1231 N diperlukan untuk mentitrasi asam yang
tersisa setelah netralisasi parsial oleh NH3. Kemudian,

Isolasi Lactalbumin dan Globulin

Untuk menyiapkan serum susu, ukur 400 ml susu skim segar menjadi a gelas besar dan panas sampai
40 ° C. Tambahkan 10% larutan asam laktat perlahan dari biuret, diaduk kuat-kuat dengan batang
pengaduk berujung karet, sampai bentuk endapan flokulan. Biarkan endapan (kasein) mengendap
dan tuang cairan supernatan melalui filter. Casein dibuang. Panaskan filtrat lagi hingga 40 ° C,
tambahkan beberapa tetes larutan fenolftalein, dan dengan hati-hati menetralkannya menjadi
merah muda pudar dengan tipis suspensi Ca (OH) 2 dalam air. Saring endapan melalui a filter
bergalur besar. Endapan ini disebut endapan netralisasi serum susu dan sebagian besar terdiri dari
fosfat. Tambahkan encer (1%) HCI ke filtrat sampai netral ke lakmus. Prosedur berikut membutuhkan
300 ml filtrat (serum susu).

Salting Out Globulin

Encerkan 50 ml serum dengan volume air yang sama. Hangat sampai 30 ° C; pertahankan pada 30 ° C
dan jenuh larutan dengan kristal MgS04 (sekitar 40 g). Endapan yang terbentuk adalah globulin.
Semua binatang globulin digarami dari larutan netral mereka pada saturasi dengan MgS04.

Salting Out Lactalbumin dan Globulin

Encerkan 50 ml serum dengan volume air suling yang sama, hangat hingga 30 ° C, dan jenuh dengan
kristal (NH4hS04 (sekitar 80 g akan dibutuhkan) pada suhu ini. Endapan yang terbentuk adalah
campuran globulin dan laktalbumin. Tentukan dengan inspeksi kerabat jumlah protein yang
diasinkan dalam prosedur ini dan prosedur globulin sebelumnya.

Memisahkan Globulin dari Albumin

Encerkan 50 ml serum dengan volume yang sama dari jenuh (NH4) 2S04 solusi yang memiliki pH 7,0.
Diamkan selama 1 jam. Saring endapan, yaitu globulin. Untuk filtrat tambahkan larutan H2S04 5%
setetes demi setetes dengan mengaduk sampai koagulasi terjadi. Koagulumnya adalah albumin.

Koagulasi Panas Protein Serum

Encerkan 50 ml serum dengan volume air yang sama, tambahkan 0,3 ml 10% asam asetat, dan
panaskan perlahan sampai 75 ° C dalam bak air. Rekam suhu di mana kekeruhan pertama muncul
dan di mana koagulasi terjadi. Tahap-tahap dalam koagulasi panas protein ditunjukkan, yaitu, (a)
denaturasi seperti yang ditunjukkan oleh kekeruhan dan (b) aglutinasi partikel koloid terdenaturasi.
Sekarang angkat suhu larutan hingga mendidih dan mendidih selama 5 menit. Saring dari bahan
terkoagulasi sementara solusinya masih panas, agar memudahkan penyaringan. Tes filtrat untuk
protein sebagai berikut: Untuk 10 ml filtrat air-bersih tambahkan 1 ml asam asetat 10%; lalu
tambahkan, setetes demi setetes, dengan gemetar setelah setiap penambahan, larutan potassium
ferrocyanide 5%. Tes positif untuk protein ditunjukkan oleh kekaburan yang berbeda.

Penentuan Kandungan Protein dan Asam Amino Manis kentang

Seperti dibahas sebelumnya, pada bagian tentang nilai gizi protein, kandungan asam amino esensial
telah digunakan sebagai salah satu ukuran kualitas protein. Skor protein tersebut dinyatakan sebagai
nilai persentase, yaitu rasio kuantitas setiap amino esensial asam dalam protein uji dengan jumlah
setiap asam amino esensial dalam protein referensi. Jelas, pilihan protein referensi memengaruhi
skor protein uji. Evaluasi kualitas protein oleh Pendekatan ini membutuhkan penentuan kadar
protein dan asam amino dari suatu bahan. Prosedur umum dijelaskan di bagian ini,

menggunakan ubi jalar sebagai contoh.

Protein dan Bahan Kering

Sampel untuk analisis diperoleh dengan memotong colokan berdiameter 3 mm dari bagian tengah
(khatulistiwa) dari tiga sampai lima ubi jalar dengan a penggerek gabus. Kjeldahl N ditentukan pada
colokan (ditimbang ke terdekat 0,1 mg) dan dilaporkan sebagai protein setelah dikalikan dengan
6,25. Kering materi ditentukan dengan mengeringkan sampel 6-8-g dalam oven vakum di 60 ° C
selama 16-18 jam.

Ekstraksi Protein

Kupas dan potong dadu enam hingga delapan kentang manis dan campur 300 g dalam Waring
blender dengan 600 ml air dingin selama 4 menit dengan kecepatan tinggi. Saring agar dihasilkan
bubur melalui pelon untuk menghilangkan dinding dan serat sel. Centrifuge pada 300 g selama 25
menit pada suhu 4 ° C; ini akan mengendapkan sebagian besar pati butiran. Pelet pati disuspensi
ulang dan disentrifugasi pada 16.000 g selama 10 menit. Supernatan dari masing-masing sentrifugasi
digabungkan, dan protein kemudian dikoagulasi dengan menambahkan asam trikloraktat hingga
12% konsentrasi dan pemanasan hingga 50 ° C. Koagulum diendapkan oleh sentrifugasi pada 10.000
g selama 25 menit, kemudian diekstraksi dengan campuran dari aseton-eter (1: 1) sampai ekstraknya
tidak berwarna. Keringkan protein bubuk semalaman pada suhu 18 ° -20 ° C di sungkup dan simpan
di tempat yang dievakuasi desikator. Lakukan analisis Kjeldahl N pada residu.