Nama : Miftah Septahadi Yusup

NPM : 411119054
Kelas : 2B – D3 TLM
Matakuliah : Biologi Molekuler

Isolasi DNA Genom (DNA Extraction Kit)

 Sampel : Darah dimasukan 200 ul pada tabung mikrotube steril.

 + 20 ul Proteinase K : Enzim yang akan menghancurkan protein di membran sel
darah.
 Inkubasi selama 5 menit pada 60oC.
 + 200 ul GSB Buffer homogenkan, Inkubasi kembali pada Suhu 60oC selama 5 menit
Setiap 2 menit Invert (menghomogenkan supaya sel darah merahnya tercampur
dengan buffer lisis dan GSB buffer). Penambahan GSB buffer bertujuan untuk
pelisisan sel secara kimia.
 + 5 ul RNAse (tip putih) homogenkan, simpan pada suhu ruang selama 5 menit.
Penambahan RNAse berfungsi untuk menghilangkan RNAnya (memurnikan DNA
dari protein).
 + 200 ul etanol absolute Invert selama 10 detik.
 Pindah sampel ke GS kolom (Membran) yang terdapat Colection tubenya,
 Sentrifuge 16000 rpm selama 1 menit.
 + 400 ul W1 Buffer, Sentrifuge 16000 rpm selama 30 detik.
 + 600 ul Wash Buffer, Sentrifuge 16000 rpm selama 30 detik.
 Penambahan etanol absolute, W1 Buffer, Wash Buffer, bertujuan untuk pemurnian
dari RNA protein lipid dan sebagainya.
 Tahap pengeringan untuk memastikan pada colection tubenya sudah tidak ada lagi
etanol absolute, W1 Buffer,dan Wash Buffer yang tersisa. Dengan cara melakukan
sentifugasi tanpa penambahan larutan apapun, sentrifuge 16000 rpm selama 30 detik.
 Pindahkan GS kolom ke mikrotube baru, + 50 ul elution buffer (Tris Cl dan EDTA)
yang sudah di pansakan pada suhu 60oC, yang berfungsi untuk, mengelusi, mencuci
atau melepaskan DNA yang terikat pada membran tertampung pada mikrotube.
 Kemudian inkubasi diamkan pada suhu ruang selama 3 menit, sentrifuge 16000 rpm
selama 30 detik. Beri label.
 Cek menggunakan alat elekroforesis gel agaros