Sistem Deteksi Dan Interpretasi Hasil
Sistem Deteksi Dan Interpretasi Hasil
Langkah selanjutnya dalam ini prosedur adalah untuk mendeteksi apakah probe
telah terikat molekul target dan, jika telah terikat, lokasi relatif dari pengikatan.
Probe berlabel 32P asli menawarkan keunggulan deteksi sederhana dan sensitif.
Interpretasi Hasil
Ketika probe tertentu mengikat targetnya dalam keadaan tidak bergerak pada membran,
pengikatan terdeteksi seperti yang dijelaskan di bagian sebelumnya, dengan hasil akhirnya
adalah visualisasi dari "pita" pada membran atau film. Sebuah band adalah hanya dilihat sebagai
garis yang melintasi lebar jalur. Analisis pita, yaitu, ada atau tidak adanya atau lokasi di jalur,
yang dihasilkan oleh Southern blot bisa langsung atau kompleks, tergantung pada sampel dan
desain prosedur. Gambar 6-19 merupakan penggambaran Hasil Southernblot. Pita yang
ditunjukkan dapat divisualisasikan pada membran atau pada film autoradiografi. Jika suatu lokus
gen memiliki pola restriksi yang diketahui, misalnya pada jalur 1, maka sampel dapat diuji untuk
membandingkan pola restriksinya. Pada gambar, sampel di jalur 3 memiliki pola yang identik,
yaitu, kedua jalur memiliki jumlah pita yang sama, dan pita-pita tersebut semuanya berada di
lokasi yang sama pada gel dan cenderung sangat mirip jika tidak identik secara berurutan.
sampel di jalur 1.
Southern blot tidak dapat mendeteksi penghapusan kecil atau penyisipan nukleotida atau
perbedaan nukleotida tunggal kecuali mereka mempengaruhi spesifik situs pembatasan. Untuk
beberapa pengujian, hibridisasi silang dapat membingungkan hasil. Artefak ini dapat
diidentifikasi dengan kehadiran mereka di setiap jalur dengan ukuran konstan.
Bercak utara (atau Barat) biasanya digunakan untuk analisis ekspresi gen, meskipun dapat juga
digunakan untuk menganalisis ukuran transkrip, pemrosesan transkrip, dan modifikasi protein.
Untuk analisis ini, terutama saat memperkirakan ekspresi, penting untuk menyertakan kontrol
internal untuk mengoreksi kesalahan dalam isolasi, pemuatan gel, atau transfer sampel. Jumlah
ekspresi kemudian ditentukan relatif terhadap pengendalian internal (Gbr. 6-20). Dalam contoh
yang ditunjukkan, transkrip target atau produk protein dinyatakan dalam jumlah yang meningkat,
dari kiri ke kanan. kontrol standar internal (pita bawah) memastikan bahwa sampel memiliki
ekspresi transkrip target produk protein yang rendah dan bahwa sinyal yang rendah bukan karena
kesulitan teknis.