LAPORAN PRAKTIKUM

BIOKIMIA PETERNAKAN

HILAL ARIF SETIAWAN

202010350311089

LABORATORIUM BIOKIMIA
UNIVERSITAS MHAMMADIYAH MALANG
2021
 DAFTAR ISI

DAFTAR ISI..............................................................................................................................ii
PENDAHULUAN......................................................................................................................1
BAB 1. KARBOHIDRAT......................................................................................................... 1
1.1 Hasil Pengamatan.........................................................................................................2
1.2 Pembahasan..................................................................................................................2
1.3 Kesimpulan.................................................................................................................. 6
1.4 Referensi...................................................................................................................... 7
BAB 2. LEMAK........................................................................................................................ 9
2.1 Hasil Pengamatan.........................................................................................................9
2.2 Pembahasan..................................................................................................................9
2.3 Kesimpulan................................................................ Error! Bookmark not defined.
2.4 Referensi.................................................................................................................... 12
BAB 3. PROTEIN....................................................................................................................15
3.1 Hasil Pengamatan.......................................................................................................15
3.2 Pembahasan................................................................................................................15
3.3 Kesimpulan................................................................................................................ 17
3.4 Referensi.................................................................................................................... 20
BAB 4. AKTIVITAS AMILASE............................................................................................ 21
4.1 Hasil Pengamatan.......................................................................................................21
4.2 Pembahasan................................................................................................................21
4.3 Kesimpulan................................................................................................................ 22
4.4 Referensi.................................................................................................................... 24
BAB 5. SERAT KASAR......................................................................................................... 25
5.1 Hasil Pengamatan.......................................................................................................25
5.2 Pembahasan................................................................................................................25
5.3 Kesimpulan................................................................................................................ 26
5.4 Referensi.................................................................................................................... 28
BAB 6. FENOLAT DAN TANIN DALAM PAKAN.............................................................29
6.1 Hasil Pengamatan.......................................................................................................29
6.2 Pembahasan................................................................................................................29
6.3 Kesimpulan................................................................................................................ 31
6.4 Referensi.................................................................................................................... 33
BAB 7. DEKOMPOSISI BAHAN ORGANIK....................................................................... 34
7.1 Hasil Pengamatan.......................................................................................................34
7.2 Pembahasan................................................................................................................34
7.3 Kesimpulan................................................................................................................ 35
7.4 Referensi.................................................................................................................... 37
PENUTUP................................................................................................................................38
Saran..................................................................................................................................38

ii
 PENDAHULUAN

BIOKIMIA DASAR

Biokimia, berasal dari dua kata, yaitu bio (artinya kehidupan) dan kimia. Biokimia
dapat diartikan sebagai ilmu yang membahas tentang dasar-dasar kimia dari kehidupan.
Biokimia juga dapat diartikan sebagai ilmu yang membahas tentang zat-zat kimia penyusun
tubuh makhluk hidup, serta reaksi-reaksi dan proses kimia, yang berlangsung di dalam tubuh
makhluk hidup. Reaksi dan proses kimia yang berlangsung didalam tubuh makhluk hidup
atau didalam sel, kita namakan metabolisme. Dengan definisi ini dapat dipahami bahwa
biokimia mencakup atau bersinggungan dengan sebagian bahasan dalam biologi sel dan
biologi molekuler.

Biologi sel adalah ilmu yang mempelajari tentang struktur sel dan proses-proses
biologis yang berlangsung di dalamnya. Bahasan proses biologis di tataran molekuler adalah
biokimia. Biologi molekuler adalah ilmu yang mempelajari proses-proses biologis pada
tataran molokuler. Definisi ini sangat bertumpang tindih dengan biokimia. Oleh sebab itu,
pada saat ini hampir tak ada lagi batasan antara biokimia dengan biologi molekuler, sehingga
bidang ilmu ini sekarang sering disebut sebagai biokimia-biologi molekuler.

Tujuan utama mempelajari biokimia adalah untuk mendapatkan pemahaman yang

komprehensif pada tataran molekuler, tentang berbagai proses kimia yang berlangsung di
dalam tubuh makhluk hidup. Dengan demikian dapat pula dipahami apabila biokimia juga
memiliki ketumpang-tindihan yang cukup besar dengan fisiologi, sebab fisiologi
mempelajari berbagai proses dalam tubuh makhluk hidup, yang pada tataran molekuler tentu
saja merupakan cakupan biokimia.

Saat ini biokimia menjadi dasar atau landasan penting bagi berbagai ilmu
pengetahuan hayati lainnya. Mulai dari biologi sel, biologi molekuler, bioteknologi, genetika,
imunologi, mikrobiologi, bahkan taksonomi dan paleonthologi, membutuhkan landasan
berbagasi prinsip biokimia. Pengetahuan aplikatif, antara lain di bidang kesehatan,
lingkungan, pertanian dan peternakan, juga banyak bersinggungan dan membutuhkan
biokimia sebagai dasar atau landasannya. Sehingga dapat dikatakan, biokimia merupakan
ilmu yang esensil untuk hampir seluruh ilmu-ilmu hayati atau Life Sciences.

1
 BAB 1. KARBOHIDRAT

Biokimia Ternak merupakan mata kuliah yang dirancang dari lanjutan Biokimia
Dasar. Mata Kuliah ini lebih spesifik pada proses biokimiawi dalam tubuh ternak berkaitan
dengan faktor lingkungan sekitarnya seperti pakan dan iklim. Biokimia Ternak menjadi
penting dalam pengembangan ilmu peternakan karena menjadi dasar terhadap apa yang akan
dilakukan kepada ternak, terutama pemberian pakan dan manajemen pemeliharaan. Biokimia
Ternak disusun dari berbagai penelitian yang telah dilakukan, sehingga dapat diajarkan
kepada mahasiswa aatau peneliti.
Mata kuliah ini selalu diupdate dengan perkembangan ilmu peternakan yang saat ini
terus terjadi inovasi. Sehingga setiap mahasiswa atau individu dapat termotivasi untuk
melakukan terobosan atau penemuan dalam bidang peternakan. Tidak semua institusi yang
memiliki program studi Ilmu Peternakan memberikan mata kuliah Biokimia Ternak. Oleh
sebab itu, knowledge sharing berkaitan dengan ilmu biokimia ternak akan membantu
pengembangan ilmu peternakan secara mendasar.
Teknologi kini telah merambah ke setiap lini kehidupan manusia. Tak hanya yang
berhubungan dengan jaringan internet dan konteks visioner, teknologi juga telah masuk ke
ranah tradisional seperti peternakan. Teknologi peternakan sendiri kemudian diadaptasi guna
dapat menyesuaikan industri peternakan yang telah ada sejak jaman dahulu, agar dapat
bersaing dengan industri lain dan mengikuti perkembangan zaman.
Penerapan teknologi peternakan ini memiliki maksud agar peternak dan orang yang
membutuhkan hewan ternak dapat bertransaksi dengan lebih mudah. Selain itu, adanya
teknologi juga dapat membantu peternak memaksimalkan hasil ternak yang dimilikinya
sehingga mendapatkan pendapatan yang lebih baik dan menaikan taraf hidup mereka.
Pemanfaatan Biokimia pada bidang peternakan pun sudah sedemikian besar.Dengan
menerapkan pengetahuan cabang-cabang Biologi seperti zoologi,anatomi hewan, fisiologi
hewan, genetika, reproduksi, embriologi, dan molekuler/rekayasagenetika, para peternak dan
masyarakat yang lebih luas telah dapat menikmati hasilnya. Melalui penerapan ilmu-
ilmu tersebut telah banyak dihasilkan ternak varietas unggul, diantaranya adalahayam
penghasil banyak telur, ayam pedaging, sapi pedaging, sapi penghasil banyak susu,
dandomba pedaging.

1.1 Hasil Pengamatan

1.1.1 Tabel Hasail Penentuan Amilum

2
1.1.1 Tabel Hasil Penentuan Amilum
Sampel Warna Absorbansi Amilosa Amilopektin Amilum
Dedak Coklat 0,041
T. Maizena Coklat 0,014
T. Kanji Coklat 0,021
T. Beras Coklat 0,027

1.1.2 Kolom Perhitungan Penentuan Amilum

Jawaban

1. Dedak
y = 0,438x – 0,021
0,041 = 0,438x – 0,021
0,438x = 0,041 + 0,021
0,438x = 0,062
x = 0,062/0,438
x = 0,141
2. T. Maizena
y = 0,438x – 0,021
0,014 = 0,438x – 0,021
0,438x = 0,014 + 0,021
0,438x = 0,035v
x = 0,035/0,438
x = 0,079
3. T.Kanji
y = 0,438x – 0,021
0,021 = 0,438x – 0,021
0,438x = 0,021 + 0,021
0,438x = 0,042
x = 0,042/0,438
x = 0,095
4. T.Beras
y = 0,438x – 0,021

3
 0,027 = 0,438x – 0,021
0,438x = 0,027 + 0,021
0,438x = 0,048
x = 0,048/0,438
x = 0,109

1.1.3 Kolom Komentar Penentuan Amilum

Jawaban
Hasil dari perhitungan tersebut ialah menghasilkan yang mengandung karbohidrat
tertinggi adalah dedak dan mengandung karbohidrat terendah adalah tepung maizena.

1.1.4 Tabel Hasil Percobaan Hidrolis Polisakarida

Jenis Asam Warna Absorbansi Substrat Tercena

(%)
HCl Orange 0,076 4.460,5
H2SO4 Orange Tua 0,750 362,1
CH3COOH Hitam 2,697 28,5

Absorbansi t 0 =

1.1.5 Kolom Perhitungan Percobaan Hidrolis Polisakarida

Jawaban
HCl = ( D ( Ro-R ) x 100
R
= ( 1 ( 3.466 – 0,076 ) x 100
0,076
= 44.605 x 100
= 4.460,5

H2SO4 = ( D ( Ro-R ) x 100

4
 R
= ( 1 ( 3.466 – 0,750 ) x 100
0,750
= 3.621 x 100
= 362,1

CH3COOH = ( D ( Ro-R ) x 100

R
= ( 1 ( 3.466 – 2,697 ) x 100
2,697
= 0,285 x 100
= 28,5

1.1.6 Kolom Komentar Percobaan Hidrolisis Polisakarida

Jawaban
Hasil dari perhitungan ini paling tinggi HCl yaitu 4.460,5
1.1.7 Dokumentasi
No Gambar Keterangan
1. Hasil percobaan praktikum
karbohidrat

2. Sampel hasil hidrolisis

polisakarida

5
1.2 Pembahasan
Karbohidrat (‘hidrat dari karbon’, hidrat arang) atau sakarida (dari bahasa Yunani,
sákcharon, berarti “gula”) adalah segolongan besar senyawa organik yang paling
melimpah di bumi. Karbohidrat memiliki berbagai fungsi dalam tubuh makhluk hidup,
terutama sebagai bahan bakar (misalnya glukosa), cadangan makanan (misalnya pati
pada tumbuhan dan glikogen pada hewan), dan materi pembangun (misalnya selulosa
pada tumbuhan, kitin pada hewan dan jamur).( Sirajuddin, S dan Najamuddin, U. 2011)
Bentuk molekul karbohidrat paling sederhana terdiri dari satu molekul gula
sederhana yang disebut monosakarida, misalnya glukosa, galaktosa, dan fruktosa.
Banyak karbohidrat merupakan polimer yang tersusun dari molekul gula yang terangkai
menjadi rantai yang panjang serta dapat pula bercabang-cabang, disebut polisakarida,
misalnya pati, kitin, dan selulosa. Selain monosakarida dan polisakarida, terdapat pula
disakarida (rangkaian dua monosakarida) dan oligosakarida (rangkaian beberapa
monosakarida).
Oleh karena itu, dalam praktikum identifikasi karbohidrat ini dilakukan beberapa uji
yaitu mengenai identifikasi umum adanya karbohidrat pada suatu bahan. Dimana, bahan
yang digunakan dalam hal ini adalah glukosa, fruktosa, sukrosa, maltosa, madu lebah,
tepung maizena, tepung beras, tepung terigu, dan amilum. Dalam identifikasi umum
karbohidrat uji yang digunakan adalah uji molisch, dimana uji molisch ini didasarkan
pada reaksi antara –naftol dengan furtural atau hidroksimetil furtural hasil reaksi asam
sulfat dengan karbohidrat.(Inna pratiwi, 2012)
Hasil dari uji molisch ini bila sampel yang dicobakan adalah terbentuk endapan
berwarna ungu, dari semua sampel (bahan) setelah ditambahkan dengan asam sulfat
pekat semuanya terbentuk endapan berwarna ungu, namun untuk sampel tepung maizena,
tepung beras, tepung terigu, dan amilum terjadi adanya gumpalan. Sedangkan pada
sampel glukosa, fruktosa, sukrosa dan maltosa terbentuk juga adanya cincin.
Dalam pengenalan monosakarida berdasarkan sifat reduksi, yaitu dilakukan dengan
melakukan uji fehling dan uji benedict. Dalam uji fehling aldehid mereduksi larutan
fehling menghasilkan endapan Cu2O yang berwarna kuning atau merah. Dalam
mengetahui adanya endapan yang terjadi bahan dicampurkan dengan larutan fehling lalu
dipanaskan dengan penangas air. Kemudian diamati endapan yang terjadi. Dari hasil

6
 praktikum yang telah dilakukan semua bahan terdapat adanya endapan kecuali dengan
tepung beras dan tepung terigu. Jika dalam mengetahui warna yang terbentuk dilakukan
dengan cara mencampurkan pereduksi fehling panas. Jika terdapat gula pereduksi maka
warna biru dari pereaksi fehling akan hilang dan endapan merah atau kuning dari Cu2O
terbentuk. Dari sampel glukosa dan fruktosa tidak terjadi perubahan warna tetap dengan
warna biru, sedangkan semua monosakarida menurut teori adalah termasuk gula
pereduksi. Kesalahan yang terjadi ini mungkin disebabkan oleh adanya ketidaktelitian
dalam melakukan dan meneteskan zat yang dicampurkan. Sedangkan untuk sampel
sukrosa dan tepung terigu terbentuk warna hijau kebiruan. (Inna pratiwi, 2012)
Prosedur Kerja
Percobaan Hidrolisis Polisakarida

1. Ambil 3 tabung reaksi dan isi masing – masing dengan 3 ml amilum 0,5%.
2. Tambahkan pada tabung 1 : HCL 6M 3ml; tabung 2 : H₂SO₄ 6 M 3 ml dan tabung
3 : 3 ml CH₃COOH 6 M.
3. Panaskan semua tabung pada waterbath pada suhu 100 C selama 15 menit lalu
dinginkan.
4. Ambil 1 ml dari tiap-tiap tabung lalu tambahkan 1 ml NaHCO₃ 2% kemudian
tambahkan 0,25 ml I₂
5. Amati absorbansinya pada λ 640 nm.

Jurnal:
( Bambang,Aristya, 2018 )
( Asdauna, Zahrotun , 2013 )
(Herwono, Pandit dan Setyaningsih, Dwi, 2015 )

1.3 Kesimpulan
1.3.1 Penentuan Amilum
Amilum pada maizena lebih tinggi kadarnnya dibandingkan amilum pada tepung kanji,
karena kandungan protein dan amilosa,amilopektin lebih tinggi dibandingkan pada
tepung kanji.

1.3.2 Hidrolisis Polisakarida

CH₃COOH lebih dapat menerima substrat dibanding H₂SO₄ dan HCI. H₂SO₄ lebih
dapat menerima substrat dibanding HCI. HCI paling sedikit menerima substrat.
7
1.4 Referensi
Pratiwi inna. 2012. karbohidrat. Penerbit swadaya jakarta

8
 BAB 2. LEMAK

2.1 Hasil Pengamatan

2.1.1 Tabel hasil penentuan lemak kasar
Sampel Bahan (g) Gelas Awal (g) Gelas Akhir Lemak (%)
(g)
Sosis Ayam 2 gram 40,01 40,51 25%
Sosis Sapi 2 gram 38,46 39,0 27%
Kornet 2 gram 38,9 39,3 20%
Nuget 2 gram 38,91 39,47 28%

2.1.2 Kolom Perhitungan Penentuan Lemak Kasar

Jawaban
1. Sosis Ayam
L = c – a x 100%
b
= 40,51 – 40,01 x 100%
2
= 25 %
2. Sosis Sapi
L = c – a x 100%
b
= 39,0 – 38,46 x 100%
2
= 27 %
3. Kornet
L = c – a x 100%
b
= 39,3 – 38,9 x 100%
2
= 20 %
4. Nuget
L = c – a x 100%

9
 b
= 39,47 – 38,91 x 100%
2
= 28 %

2.1.3 Kolom Komentar Penentuan Lemak Kasar

Jawaban
Jadi, perhitungan paling tinggi lemak adalah nuget yaitu 28%

2.1.4 Percobaan Penentuan bilangan FFA

Sampel Warna Awal Warna Akhir Volume Titran Angka FFA
(%)
Coconut Kuning Kuning + Merah 1 0,71
Oil 1 Jambu
Cocomut Kuning Kuning + Merah 0,4 0,28
Oil 2 Jambu
Kelapa Kuning Tua Kuning + Merah 0,3 0,27
Sawit Jambu
Minyak Kuning Kuning + Merah 0,5 0,503
Zaitun Jambu

2.1.5 Kolom Perhitungan penentuan bilangan FFA

Jawaban
1. Coconut Oil 1
FFA = a.b.c x 100% .fp
d x 1000
= 1. 0,1 .200 x 100% . 5
14 x 1000
= 0,71
2. Coconut Oil 2
FFA = a.b.c x 100% . fp
d x 1000

10
 = 0,4 . 0,1 . 200 x 100% . 5
14 x 1000
= 0,28
3. Kelapa Sawit
FFA = a.b.c x 100% . fp
d x 1000
= 0,3 . 0,1 . 256 x 100% . 5
14 x 1000
= 0,27
4. Minyak Zaitun
FFA = a.b.c x 100% . fp
d x 1000
= 0,5 . 0,1 . 282 x 100% . 5
14 x 1000
= 0,50

2.1.6 Kolom Komentar Penentuan Bilangan FFA

Jawaban
Jadi, angka FFA tertinggi hasil dari coconut oil 1 dengan volume titran 1 dan hasil FFA
0,71 %.

2.1.7 Dokumentasi

No Gambar Keterangan
1. Pembuangan larutan bawah
atau air dengan corong pisah
(fase eter lemak).

11
 2. Sampel hasil penentuan FFA

2.2 Pembahasan
Asam Lemak bebas terbentuk karena proses oksidasi, hidrolisa enzim selama
pengolahan dan penyimpanan. Dalam bahan pangan, asam lemak bebas dengan kadar
lebih besar dari berat lemak akan menghasilkan rasa yang tidak diinginkan dan kadang-
kadang dapat meracuni tubuh. Dengan proses netralisasi minyak sebelum digunakan
dalam bahan pangan, maka jumlah asam lemak dapat dikurangi sampai kadar
maksimum 0,2% (Girindra,1993)
Asam lemak bebas di dalam minyak goreng merupakan asam lemak berantai
panjang yang tidak terseterifiksi. Asam lemak bebas mengandung asam lemak jenuh
berantai panjang. Semakin banyak konsumsi asam lemak bebas akan meningkatkan
kadar Low Density Lipoprotein (LDL) dalam darah yang merupakan kolestrol jahat.
Banyaknya asam lemak bebas didalam minyak menunjukkan penurunan kualitas
minyak (Sopianti dkk., 2017).
Minyak dan lemak adalah trigliserida atau triasilgliserol, kedua istilah ini berarti
triester dari gliserol. Perbedaan antara suatu lemak dan suatu minyak bersifat
sembarang, pada temperatur kamar lemak berbentuk padat dan minyak berbentuk cair.
Sebagian besar gliserida pada hewan adalah berupa lemak, sedangkan gliserida dalam
tumbuhan cenderung berupa minyak, karena itu biasa terdengar ungkapan lemak
hewani (lemak babi, lemak sapi) dan minyak nabati (minyak jagung, minyak bunga
matahari). Kebanyakan minyak dan lemak yang terdapat dalam alam merupakan
trigliserida campuran artinya, ketiga bagian asam lemak dari gliserida itu tidaklah sama.
Hampir semua asam lemak yang terdapat dalam alam mempunyai jumlah atom karbon
yang genap karena asam ini dibiosintesis dari gugus asetil berkarbon dua dalam asetil
koenzim A (Fessenden, 1986).
Produksi Asam Lemak Bebas Lemak hewan dan nabati yang masih berada dalam
jaringan, biasanya mengandung enzim yang dapat menghidrolisa lemak. asaemua
enzim, yang termasuk golongan lipase, mampu menghidrolisa lemak netral(trigliserida).
Sehingga menghasilkan asam lemak bebas dan gliserol, namun enzim tersebut inaktif
oleh panas. Dalam organisme hidup, enzim pada enzim pada umumnya berada dalam
bentuk zinogen inaktif, sehingga lemak yang terdapat dalam jaringan lemak tetap
bersifat netral dan masih utuh. Dalam organ tertentu, miasalnya hati dan pankreas,
kegiatan proses metabolisme cukup tinggi, sehingga menghasilkan sejumlah asam
12
lemak bebas. Jika organisme telah mati, koordinasi mekanisme sel-sel akan rusak.
Enzim lipase mulai bekerja dan merusak molekul lemak. Kecepatan hidrolisa oleh
enzim lipase yang terdapat dalam jaringan relatif lambat pada suhu rendah, sedangkan
pada kondisi yang cocok, proses hidrolisa ole enzim lipase akan lebih intensif daripada
dengan enzim lipolitik yang dihasilkan oleh bakteri. ( ketaren,2005).
Rantai asam lemak, yang mengandung sedikitnya satu ikatan rangkap, akan
membentuk isomer geometris. Sebagian besar asam lemak tidak jenuh dalam bentuk
isomer cis yang bersifat tidak stabil, sedang isomer trans bersifat lebih stabil.2,3 Proses
hidrogenasi lebih mudah terjadi pada bentuk cis dibandingkan bentuk trans. Minyak
yang mempunyai ikatan rangkap berbentuk cair dan apabila terhidrogenasi pada ikatan
rangkapnya berubah wujud dari cair menjadi padat di suhu kamar.2 Oleh karena itu
minyak menjadi susah untuk dituang bila dipakai lagi. Hal ini menurunkan
kualitasnya.2 Kualitas minyak yang lain adalah kemampuan minyak untuk tidak terurai
pada suhu tinggi.3 Minyak kelapa dan sawit mempunyai ikatan jenuh paling banyak
dibandingkan dengan minyak yang lain. Minyak ini lebih stabil terhadap pengaruh
pemanasan dan oksidasi karena mempunyai banyak ikatan rangkap.2 Omega 9 atau
asam oleat adalah bagian dari minyak yang berbentuk cair yang disebut olein. Omega 9
memiliki ikatan rangkap dan mempunyai pengaruh positif terhadap kesehatan, tetapi
akan menjadi tidak bermanfaat apabila dipanasi. Oleh karena itu, apabila ingin
mendapatkan manfaat dari minyak goreng yang mengandung omega 9 sebaiknya
langsung diminum bukan untuk menggoreng.Kandungan asam lemak bebas (free fatty
acid, FFA) dalam minyak juga merupakan ukuran kualitas minyak. FFA dinyatakan
dengan bilangan asam atau angka asam. (Asri S, 2013)
Prosedur Kerja
I. Penentuan Lemak Kasar Metode (Acid Hidrolisis)
1. Haluskan bahan lalu timbang dengan teliti 2 g bahan.
2. Masukkan ke dalam tabung reaksi lalu tambahkan 4 ml etanol 96% dan 2 ml HCL
(1 : 4).
3. Panaskan dalam waterbath pada suhu 70℃ selama 30 menit lalu dinginkan.
4. Tuang larutan ke dalam corong pisah yang pada bagian atas diletakkan corong dan
kertas saring untuk menyaring larutan.
5. Tambahkan 20 ml kloroform dan 20 ml aquades.
6. Gojog larutan selama 1 menit lalu biarkan hingga terpisah menjadi dua larutan.
7. Buang larutan yang bagian bawah dengan memutar kran corong pisah hingga
yang tertinggal pada corong pisah adalah larutan yang bagian atas (fase eter
lemak).
8. Tampung fase eter lemak tersebut dalam beaker gelass yang telah diketahui
bobotnya.
9. Panaskan beaker glass tersebut dalam oven hingga kering pada suhu 80℃.

13
 10. Dinginkan beker gelas tersebut dalam desikator kemudian timbang.
11. Menghitung kadar lemak dengan rumus :
Lemak (%) = c – a . 100%
b
Keterangan :
a: bobot gelas kimia kosong (awal)
b: bobot sampel
c: bobot gelas kimia akhir

II.Penentuan Bilangan Asam Lemak (FFA)

1. Timbang 14 g sampel dan masukkan ke dalam erlenmaer lalu tambahkan 25 ml
etanol netral panas dan 2 ml indikator pp.
2. Ambil 5 ml sample untuk dititrasi dan pindahkan ke dalam erlenmeyer yang lain,
tambahkan 5 tetes indikator pp.
3. Titrasilah dengan larutan NaOH 0,1 N sampai terjadi perubahan warna menjadi
merah jambu.
4. Hitung volume titran yang diperlukan.
5. Penentuan bilangan FFA dengan rumus
Bilangan FFA (%) = a.b.c . 100% . fp
d.100

Jurnal:
(Febriyanti, D. (2019).
(Teresa, S., Widodo, S., & Winarni, T. I. (2018).

2.3 Referensi
Lam TKT, Carpentier A, Lewis GF, Van de Werve G, Fentus IG, Giacca A.
Mechanisms of the free fatty acid-induced increase in hepatic glucose production.
American Journal Physiology - Endocrinology and Metabolism 2003; 284: E863 ±
E873.

14
 BAB 3. PROTEIN

3.1 Hasil Pengamatan

3.1.1 Tabel Hasil Penentuan Protein Terlarut
Sampel Warna Absorbansi Protein Terlarut
(%)
Susu Segar Putih 2,694 14,68%
Susu UHT 2 Putih 2,908 16,12%
Susu UHT 3 Putih 3,894 16,04%
Yogurt Putih 2,724 15,10%

3.1.2 Kolom Perhitungan Penentuan Protein Terlarut

Jawaban
1. Susu Segar
y = 0,00018x + 0,00536
2,694 = 0,00018x + 0,00536
0,00018 x = 2,694 – 0,00536
X = 2,688
0,00018
X = 14,68%
2. Susu UHT 2
y = 0,00018x + 0,00536
2,908 = 0,00018x + 0,00536
0,00018 x = 2,908 – 0,00536
X = 2,902
0,00018
x = 16,22
3. Susu UHT 3
y = 0,00018x + 0,00536
2,894 = 0,00018x + 0,00536
0,00018x= 2,894 – 0,00536
x = 2,888
0,00018

15
 x = 16,04 %
4. Yogurt
y = 0,00018x + 0,00536
2,724 = 0,00018x + 0,00536
0,00018x = 2,724 – 0,00536
x = 2,718
0,00018
X = 15,18 %
3.1.3 Kolom Komentar penentuan protein terlarut
Jawaban
Yang memiliki protein terlarut paling tinggi adalah susu UHT 2 yaitu 16,122 % dan
yang paling rendah adalah susu segar yaitu 14,68 %.

3.1.4 Tabel Hasil Percobaan Denaturasi Protein

No Tabung Hasil Percobaan Penjelasan
Pemanasan Koagulasi Karena hasil padat
sempurna
Etanol Flokulasi Membentuk flok ( bulat
berselaput )
HgCl Flokulasi Membentuk flok ( bulat
berselaput )
Asam Sulfat Presipitasi Membentuk bulat –bulat

3.1.5 Dokumentasi
No Gambar Keterangan
1. Tabung 1 : Pemanasan
Tabung 2 : Etanol
Tabung 3 : HgCl
Tabung 4 : Asam Sulfat

2.

16
 Sampel hasil penentuan
protein terlarut

3.2 Pembahasan
Pengaruh Perlakuan Terhadap Kadar Perombakan Laktosa Set Yogurt. Hasil
penelitian mengenai pengaruh penggunaan bit (Beta vulgaris L.) terhadap kadar
perombakan laktosa disajikan pada Tabel 1. Berdasarkan Tabel 1, dijelaskan bahwa
semakin tinggi konsentrasi penggunaan bit, menghasilkan kadar perombakan laktosa
set yogurt yang cenderung menurun.(Hartati, 2017)
Pengaruh Perlakuan Terhadap Kadar Asam Laktat Set Yogurt. Hasil penelitian
mengenai pengaruh tingkat penggunaan bit (Beta vulgaris L.) terhadap kadar asam
laktat set yogurt disajikan pada Tabel 1. Berdasarkan Tabel 1, dijelaskan bahwa
penggunaan bit pada pembuatan set yogurt menghasilkan kadar asam laktat set yogurt
yang cenderung menurun. (Hartati,2017)
Hasil penelitian menunjukkan bahwa semakin meningkatnya jumlah penggunaan
bit nyata menurunkan kadar asam laktat set yogurt yang dihasilkan, hal ini sesuai
dengan penelitian Damunupola, dkk., (2014) yang mengemukakan bahwa penggunaan
bit menurunkan jumlah kadar asam laktat dari 0,91% menjadi 0,80%. Tingkat
penggunaan bit semakin meningkat pada pembuatan set yogurt pada penelitian ini
menghasilkan kadar perombakan laktosa set yogurt nyata menurun dari 2% hingga 4%,
yaitu dengan kisaran 29,46% dan 21,04%, diikuti dengan pembentukkan kadar asam
laktat yang dihasilkan pada kisaran 0,67% hingga 0,88%. Proses pembuatan yoghurt
diawali dengan berkembangnya Streptococcus thermophillus akan menghasilkan
karbondioksida dan format yang akan merangsang pertumbuhan L.bulgaricus (Siti,
2009). Streptococcus thermophillus memulai fermentasi laktosa menjadi asam laktat
dan menyebabkan pH menjadi menurun dan keadaan asam ini mendukung untuk
berkembangnya Lactobacilus bulgaricus dan Lactobacilus acidhophilus (Buckle, dkk,
2009). Lactobacillus acidophilus dapat memanfaatkan laktosa dan sukrosa untuk
aktivitas metabolismenya (Addion, dkk, 2008). L.acidophilus dapat menghasilkan asam
laktat dan komponen flavor dan asetaldehid (Saloff-Coste,1994).
Hasil penelitian menunjukkan bahwa kadar asam laktat semua perlakuan
penggunaan bit pada pembuatan set yogurt telah memenuhi standar mutu yogurt yang
ditetapkan oleh Badan Standardisasi Nasional Indonesia (2009) tentang yogurt, yaitu
dengan kisaran 0,5%2%. Pengaruh Perlakuan Terhadap Kadar Protein Terlarut Set
Yogurt. Hasil penelitian mengenai pengaruh penggunaan bit (Beta vulgaris L.) terhadap
kadar protein terlarut dengan empat perlakuan disajikan pada Tabel 1. Berdasarkan

17
Tabel 1, dijelaskan bahwa semakin tinggi konsentrasi penggunaan bit, menghasilkan
kadar protein terlarut set yogurt yang cenderung menurun. Pada saat proses fermentasi,
protein susu akan dihidrolisis menjadi polipeptida dan asam amino dengan bantuan
enzim protease yang dihasilkan oleh bakteri starter. Dalam hal ini L. bulgaricus dan L.
acidophilus merupakan bakteri asam laktat dengan aktivitas proteolitik yang tinggi,
disamping itu S. thermophilus merupakan penghasil peptidase yang kuat (Tarboush,
1995). Lactobacillus sp. mempunyai aktivitas proteolitik yang cukup tinggi dimana
sifat proteolitiknya dapat menghidrolisis kasein dalam susu full cream menjadi
peptidapeptida dan asam-asam amino bebas dengan bantuan enzim protease (Saloff-
Coste, 1994). Hasil penelitian menunjukkan bahwa semakin meningkat konsentrasi
penggunaan bit pada pembuatan set yogurt dari 2% hingga 6% berpengaruh tidak nyata
terhadap kadar protein terlarut set yogurt yang dihasilkan yaitu dengan kisaran 52,47%
hingga 55,80%. Hasil penelitian ini didukung oleh Hartati (2007) bahwa kadar protein
terlarut set yogurt dari susu kambing sebesar 39,05% hingga 61,26%.
Uji Denaturasi Protein. Pada percobaan kali ini mengenai uji denaturasi protein
yang kami lakukan, pada uji protein ini kami menguji adanya kandungan protein yang
terkandung dari dari larutan albumin bermacam konsentrasi yaitu dari larutan albumin
1% sampai larutan albumin 5%. Identifikasi protein pada percobaan kali ini dilakukan
dengan metode denaturasi protein, yaitu perubahan struktur protein yang menyimpang
dari struktur alamiahnya yang mengakibatkan hilangnya banyak sifat biologis dari
suatu protein. Penyebab terjadinya denaturasi protein adalah karena adanya perubahan
suhu atau pH yang terlalu ekstrem.
Pada percobaan ini dibuat tiga larutan protein yang dimasukkan dalam tiga tabung
yang berbeda dengan larutan protein yang sama yaitu larutan albumin tetapi dengan
penambahan larutan yang berbeda, yaitu larutan buffer asetat dengan pH 4,7 kemudian
larutan NaOH 0,1 M danlarutan HCl 0,1 M. Pada tabung ke-I ditambahkan dengan
larutan HCl 0,1 M, kemudian dipanaskan. Setelah ditambah dengan HCl dan
dipanaskan tidak terjadi perubahanyang jelas pada larutan protein. Hal ini terjadi
karena penambahan HCl yang bersifat sebagai asam kuat menyebabkan pH larutan
protein menjadi sangat asam.Setelah dipanaskan lalu larutan di dinginkan kemudian di
tambahkan larutan buffer asetat agar larutan yang di uji terjadi perubahan menjadi
larutan keruh dan endapan putih.
Pada tabung ke-II ditambahkan dengan NaOH 0,1 N kemudian dipanaskan.
Penambahan larutan NaOH ini tidak menyebabkan perubahan pada larutan protein.Hal
ini disebabkan karena larutan NaOH bersifat sebagai basa kuat, sehingga terjadi
perubahan pH yang sangat extrem pada larutan protein menjadi basa.Sama halnya
dengan larutan sebelumnya dengan menggunakan larutan HCl, pada percobaan kedua
ini setelah dipanaskan lalu larutan di dinginkan kemudian di tambahkan larutan buffer
asetat agar larutan yang di uji terjadi perubahan menjadi larutan keruh dan endapan
putih.
Pada tabung ke-III ditambahkan dengan buffer asetat kemudian
dipanaskan.Penambahan buffer asetat dan pemanasan ini menyebabkan timbulnya
endapan putih.Endapan putih yang terbentuk mengindikasikan terjadinya denaturasi
protein. Denaturasi ini disebabkan karena buffer asetat sangat kuat mempertahankan
18
pHnya pada pH 4,7 sehingga dapat merusak keseimbangan zwitter ion ke kondisi asam
di bawah titik isoelektrik. Perubahan struktur yang diakibatkan proses denaturasi adalah
perubahan konfigurasi protein a-heliks menjadi memanjang. Hal ini disebabkan karena
rusaknya ikatan hidrogen dan ikatan nonpolar yang terjadi pada struktur berlipat dari
protein.
Tabung dengan penambahan buffer asetat yang larut dan mengendap sempurna
lebih banyak dibandingkan dengan penambahan HCl 0,1 M, dan NaOH 0.1 M. Pada
tabung dengan penambahan HCl 0.1 M juga terdapat endapan yang banyak tetapi
termasuk pengendapan sebagian karena masih terdapat pemisahan lapisan antara
larutan yang mengendap dengan larutan berwarna bening pada bagian atas tabung,
begitu juga dengan penambahan NaOH 0.1 M mengendap sebagian dan pada bagian
atas masih terdapat larutan berwarna kuning bening. Pada percobaan ini, setelah larutan
tersebut didinginkan lalu pada tabung pertama dan kedua ditambahkan dengan Buffer
asetat pH 4,7 (1 M), Pada hal ini terjadi proses denaturasi karena terjadi endapan. Pada
pH buffer 4,5 dan pH albumin 4,5 hal inilah yang membuat ikatan lebih cepat, dan
membentuk endapan lebih banyak.
Denaturasi protein meliputi ganguan dan kerusakan yang mungkin terjadi pada
struktur sekunder dan sruktur tersier protein. Pada struktur protein tersier terdapat
empat jenis interaksi yang membentuk ikatan pada rantai samping seperti ikatan
hydrogen, jembatan garam, ikatan disulfida dan interaksi hidrofobik non polar, yang
kemungkinan mengalami gangguan. Denaturasi yang umum ditemukan adalah proses
presipitasi dan koagulasi protein seperti asam amino, protein yang larut dalam air akan
membentuk ion yang mempunyai muatan positif dan negatif. Dalam suasana asam
molekul protein akan membentuk muatan positif, sedangkan dalam suasana basa akan
membentuk ion negatif. pada titik isolistrik protein mempunyai muatan psitif dan
negatif yang sama, sehingga tidak bergerak kearah elektroda positif maupun negatif,
apabila ditempatkan diantara dua elektroda tersebut.(Anggi.F, 2014)
Namun pada percobaan yang kami lakukan tidak sesuai dengan teori seperti
yang telah dijelaskan diatas, tabung yang ditambahkan dengan HCl memiliki endapan
lebih sedikit disbanding dengan tabung yang ditambahkan dengan NaOH.Hal ini
mungkin disebabkan karena kesalahan pada praktikan dalam melakukan percobaan,
bisa juga disebabkan larutan yang dipakai sudah tekontaminasi oelh zat-zat lain
sehingga hasil percobaan yang dihasilkan tidak sesuai. (Anggi.F, 2014)
Prosedur Kerja
1 Penelitian Protein Terlarut (Metode Lowry)
1. Masukkan 1 ml sampel ke dalam tabung reaksi.
2. Tambahkan 3 ml aquades dan 5,5 ml lowry, homogenkan dan diamkan selama 10
menit.
3. Tambahkan 0,5 ml folin : aquades (1:1)
4. Homogenkan kemudian absorbansi pada λ 650 nm.
5. Penentuan kadar protein dengan menggunakan persamaan regresi standar bovine
serum albumin (BSA)
y = 0,0018x + 0,00536
2 Percobaan Denaturasi Protein
19
 1. Ambil 4 tabung reaksi dengan 1 mili albumin 0,5%
2. Panaskan taung 1 hinga mendidih selama 2 menit, tambahkan tabung 2 dengan
etanol 95% 5 tetes, tambahkan tabung 3 dengan larutan HgCI₂ 1% 5 tetes,
tambahkan tabung 4 dengan asam sulfat pekat 5 tetes.
3. Kocok kuat-kuat masing-masing tabung, amati hasil percobaan.
3.3 Kesimpulan
Pada percobaan penentuan protein terlarut yang memiliki kandungan protein paling
tinggi adalah susu UHT dengan hasil 16,122% dan yang paling rendah adalah susu segar
dengann hasil 14,68%.
3.4 Referensi
Casparus, J. O., & Reinhard, V. (2012). Products and Applications of Biopolymers. InTech.
Rijeka: InTech. https://doi.org/10.5772/1802

20
 BAB 4. AKTIVITAS AMILASE

4.1 Hasil Pengamatan

4.1.1 Tabel Hasil Penentuan Aktifitas Enzim Amilase
Sampel Warna Absorbansi Aktifitas Enzim
( U/ml )
Air Liur Sapi 4 Bening 1,812 -2,75
Air Liur Sapi 6 Kuning 1,356 29,65
Air Liur Sapi 6 Kuning 1,775 0,73
Air Liur Sapi 10 Hitam 1,890 -6,77

4.1.2 Kolom Perhitungan Penentuan Aktifitas Enzim Amilase

Jawaban
1. Air Liur Ph 4
= ( D ( Ro-R )) x 100
R
= ( 1 ( -0,05 )) x 100
1,812
= -2,75
2. Air Liur Ph 6 ( 1 )
= ( D ( Ro-R )) x 100
R
= ( 1 ( 1,762 – 1,356 )) x 100
1,356
= ( 1 ( 0,403 )) x 100
1,356
= 29,65
3. Air Liur Ph 6 ( 2 )
= ( D ( Ro – R )) x 100
R
= ( 1 ( 1,762 – 1,775 )) x 100
1,775
= ( 1 ( -0,013 )) x 100

21
 1,775
= -0,73
4. Air Liur Ph 10
= ( D ( Ro – R )) x 100
R
= ( 1 ( 1,762 – 1,890 )) x 100
1,890
= ( 1 ( - 0,128 )) x 100
1,890
= -6,77
4.1.3 Kolom Komentar Penentuan Aktifitas Enzim Amilase
Jawaban
Dari perhitungan aktifitas enzim diatas enzim aktifitasnya tertinggi adalah air liur sapi
Ph 6 kelompok 2 yaitu 29,65 dengan absorbansi 1,356.

4.1.4 Dokumentasi
No Gambar Keterangan
1.
Sampel hasil penentuan enzim
amilase.

4.2 Pembahasan
Saliva mengandung enzim amilase. Amilase merupakan enzim yang bertugas
sebagai katalisator sistem pencernaan dalam proses hidrolisis amilum yang
menghasilkan glukosa/maltosa. Amilosa merupakan polisakarida yang berbeda dan
pola tindakan, yang banyak digunakan dalam industri. Mereka memiliki kekhususan
substrat yang berbeda.
Amilase adalah biokatalis yang paling penting, karena kemampuan mereka
untuk memanfaatkan spektrum yang luas darisubstrat, stabilitasnya tinggi terhadap
ekstrim suhu, pH, kofaktor dan inhibitor.(Amutha et al.,2008)

22
 Enzim memiliki kekuatan katalitik besar dan mempercepat reaksi dengan
mengurangi energi selama satu juta kali untuk aktivasi. Enzim mudah menjadi
terdenaturasi dan kehilangan katalitik kegiatan. Pada suhu umum lebih tinggi dari 40 °
C dan pH ekstrim harus dihindari setiap saat. Persiapan enzim juga harus disimpan
pada rendah suhu, tetapi tidak harus dibekukan, karena pembekuan dan pencairan
mungkin penyebab kehilangan dari kegiatan. (Ahmad,2013)
Suhu mempengaruhi aktivitas katalisis enzim. Diluar suhu optimum aktivitas
enzim menjadi tidak maksimal. Bila suhu terlalu rendah, enzim menjadi tidak aktif,
karena tidak terjadi benturan antara molekul enzim dengan substrat. Sedangkan bila
suhu terlalu tinggi, dimana benturan yang terjadi semakin banyak maka struktur tiga
dimensi dari enzim tersebut akan terganggu sehingga enzim akan mengalami denaturasi,
atau dapat dikatakan enzim akan kehilangan sifat alamiahnya.(Ahmad,2013)
Berdasarkan dari data hasil percobaan, diperoleh perubahan absorbansi per
menit dari larutan obsorbansi larutan blanko dan absorbansi larutan uji dapat dilihat
dari kurva Gambar . Adapun kurva dari hasil percobaan memperlihatkan laju reaksi
dari enzim semakin cepat seiring bertambahnya suhu ini terlihat pada kenaikan suhu
38ºC namun ketika suhu mengalami kenaikan hingga 100ºC terjadi penurunan laju
reaksi. Kedua keadaan ini diakibatkan oleh benturan antara enzim dan substrat. Pada
keadaan 38ºC, terlihat peningkatan laju reaksi akibat adanya gerak termodinamik yang
secara perlahan membentuk produk dan pada titik optimum ( suhu optimum ) yaitu
38oC dapat dikatakan membentuk secara sempurna karena enzim amilase yang
merupakan enzim yang terdapat tubuh memilki suhu optimum 38oC. Dan apabila suhu
mengalami kenaikan hingga 100oC, pada keadaan ini perbenturan antara enzim dan
substrat terus berlangsung namun keadaan ini tidak menambah laju reaksi namun
mengurangi laju reaksi ini disebabkan karena enzim mengalami denaturasi sehingga
bangun tiga dimensinya berubah secara bertahap. Jika suhu jauh lebih tinggi dari suhu
optimum, maka makin besar deformasi struktur tiga dimensi tersebut dan makin sukar
bagi substrat untuk menempati secara tepat di bagian aktif molekul enzim. Akibatnya,
kompleks E-S akan sukar terbentuk, sehingga produk juga makin sedikit dan ini terlihat
dari hasil kurva laju reaksi yang semakin menurun. (Mahdavi et.,al, 2010)
Prosedur Kerja
1. Masukkan ke dalam erlenmayer dengan 7,5 ml larutan buffer pH 4 dan 1,5 ml
larutan amilum 0,5% dan 3 ml larutan NaCI 0,09%. Kocok hingga homogen lalu
letakan pada masing-masing inkubator pada suhu 37℃ selama 5 menit.
2. Masukkan 1 ml larutan enzim ke dalam erlenmayer dan inkubasi larutan pada suhu
37℃ selama 10 menit.
3. Ambil 1 ml larutan dari erlenmayer dan pindahakan ke dalam tabung reaksi.
4. Tambahkan dengan reagen sebanyak 2 ml iodin 0,01 N, homogenkan dan biarkan
selama 5 menit.
5. Baca absorbansi pada λ 560 nm.
6. Tentukan aktifitas enzim amilase dengan rumus
23
 Aktifitas amilase (U/ml) = (D(ro)).......... sek drong

Keterangan :
D : Fp (Faktor Pengenceran)
Ro : Aborbansi blanko
R : Absorbansi sampel

Jurnal:
(Ahmad,2013).
(Amutha et al.,2018).

4.3 Kesimpulan
Pada percobaan aktivase enzim amylase dapat diketahui bahwa enzim amylase
optimum ada terdapat pada air liur ph 6.
4.4 Referensi
Murray, RK. Biokimia Harper. Jakarta : EGC. 2007
Atiyeh Mahdavi, Reza Hassan Sajedi, Mehdi Rassa, Vahab Jafarian, Characterization
of an α-amylase with broad temperature activity from an acid-neutralizing Bacillus
cereus strain. Iranian Journal of Biotehknologi. 2010; vol 8 : 103-111.

24
 BAB 5. SERAT KASAR

5.1 Hasil Pengamatan

5.1.1 Percobaan Penentuan Serat Kasar
Sampel Bahan (g) Gelas Awal (g) Gelas Akhir Serat Kasar
(g) ( %)
Daun Setaria 2 gram 1,785 1,976 9,55 %
Daun Jagung 2 gram 1,514 1,973 22,95%

5.1.2. Kolom Perhitungan Penentuan Serat Kasar

Jawaban
1. Daun Setaria
R = c- b x100%
a
= 1,976 – 1,785 x 100%
2
= 9,55%
2. Daun Jagung
R = c-b x 100%
a
= 1,973 – 1,514 x 100%
2
= 22,95 %

5.1.3 Kolom Komentar Penentuan Serat Kasar

Jawaban
Dari perhitungan diatas dapat dilihat bahwa kandungan serat kasar yang paling tinggi
adalah pada daun jagung yaitu 22,95 %.

5.1.4 Dokumentasi
No Gambar Keterangan

25
 1. Penyaringan serat kasar
daun setaria

2. Serat kasar sebelum

dikeringan

3. Serat kasar setelah

dikeringkan pada
suhu110°C

5.2 Pembahasan

Penentuan Kadar Protein Kasar. Kadar protein kasar dapat ditentukan dengan
metode Kjeldahl. Metode ini terdiri dari tiga tahap yaitu destruksi, distilasi dan titrasi.
Mula-mula sampel ditimbang sebanyak 1 gram dan dimasukkan kedalam labu
Kjeldahl (dapat juga menggunakan tabung reaksi). Kemudian ditambahkan dengan 1
gram CuSO4 dan ditambah dengan 2,5 mL H2SO4 pekat. Selanjutnya cuplikan
didestruksi selama 2 jam pada suhu 100 ºC. Setelah hasil destruksi didinginkan,
kemudian dimasukkan kedalam labu bulat yang telah diberi batu didih dan ditambah
dengan 50 mL aqua DM serta 15 mL NaOH 50 % w/v dan dilakukan distilasi. Distilat
ditampung dalam erlenmeyer yang berisi 10 mL HCl 0,02 N; 4 tetes metil merah dan
4 tetes metilen biru hingga volume total mencapai 40 mL. Kemudian larutan dalam

26
erlenmeyer dititrasi dengan larutan NaOH yang telah distandarisasi dengan larutan
H2C2O4 0,02 N. Titik akhir titrasi ditandai dengan perubahan warna dari ungu
menjadi hijau. Volume NaOH yang digunakan untuk titrasi dicatat.
Analisis Serat Kasar Yang disebut serat kasar adalah semua zat organik yang
tidak dapat larut dalam H2SO40,3 N dan dalam NaOH 1,5 N yang berturut-turut
dimasak selama 30 menit (selulosa, lignin, sebagian dari pentosan-pentosan)
(Anggorodi, 1994). Analisa bahan makanan terhadap kadar serat kasarnya dilakukan
sebagai berikut (Anggorodi, 1994): sampel ditimbang kira-kira sebanyak 0,5-1 gram
(x gram), dimasukkan ke dalam gelas piala 600 ml dan ditambahkan 50ml
H2SO40,3N lalu dipanaskan di atas pemanas listrik selama 30 menit. Selanjutnya
ditambahkan 25 ml NaOH 1,5 N dan terus dimasak selama 30 menit. Cairan disaring
melalui kertas saring yang bobotnya telah diketahui (a gram) serta sudah dikeringkan
dalam alat pengering pada suhu 105 - 110oC selama satu jam, kemudian dimasukkan
ke dalam corong Buchner. Penyaringan dilakukan dalam labu penghisap yang
dihubungkan dengan pompa vakum. Selama penyaringan endapan dicuci berturut-
turut dengan aquades panas secukupnya, 50 ml H2SO4 0,3N, aquades panas
secukupnya dan terakhir dengan 25 ml acetone. Kertas saring dan isinya dimasukkan
ke dalam cawan porselen dan dikeringkan selama satu jam dalam oven pada suhu
105oC, kemudian didinginkan dalam eksikator dan ditimbang (b gram). Selanjutnya
cawan porselen serta isinya dibakar atau diabukan dalam tanur listrik pada suhu 400-
600oC sampai abu menjadi putih seluruhnya, kemudian diangkat dan didinginkan
dalam eksikator dan ditimbang (c gram).

Prosedur Kerja
Analisis Lemak Kasar
1. Haluskan bahan dengan baik lalu keringkan.
2. Timbang 2 g bahan kering, lalu ekstraksi lemaknya dengan soxlhet, jika bahan
diperkirakan rendah lemak tidak perlu dilakukan ekstraksi lemak.
3. Pindahkan bahan ke dalam erlenmeyer 600 ml lalu tambahkan 200 ml H₂SO₄ 0,255
N dan tutuplah dengan pendingin balik, tunggu sampai tetesan jarum pertama
(didihkan selama 30 menit)
4. Saring suspensi melalui kertas saring dan residu yang tertinggal dalam erlenmeyer
dicuci dengan aquades mendidih, cuci residu dalam kertas saring sampai air cucian
tidak bersifat asam lagi, (uji dengan indikator mm).
5. Pindahkan residu dari kertas saring ke dalam erlenmeyer kembali dengan spatula
dan sisanya dicuci dengan larutan 200 ml NaOH 0,293 N. Didihkan dengan
pendingin balik selama 30 menit.

27
 6. Saringlah melalui kertas saring kering yang telah diketahui massanya, sambil
dicuci dengan aquades panas lalu kemudian 100 ml K₂SO₄ 10% lalu cuci lagi
dengan aquades mendidih dan 15 ml etanol 95%.
7. Keringkan bahan beserta kertas saringnya pada suhu 110℃ selama 1 jam,
dinginkan dalam desikator dan timbang.
Tentukan kadar serat kasar dengan rumus.
Serat kasar (%) = c – b . 100%
a
Keterangan :
a : bobot sampel
b : bobot kertas saring kosong (awal)
c : bobob kertas saring akhir

Jurnal:
(Welker et al., 2015)

5.3 Kesimpulan
Pada praktikum penentuan serat kasar kita dapat mengetahui kandungan serat kasar
yang paling tinggi terdapat pada daun jagung yaitu 22,95%.
5.4 Referensi

Welker, C., Balasubramanian, V., Petti, C., Rai, K., DeBolt, S., & Mendu, V. (2015).
Engineering Plant Biomass Lignin Content and Composition for Biofuels and
Bioproducts. Energies, 8(8), 7654–7676. https://doi.org/10.3390/en8087654

28
 BAB 6. FENOLAT DAN TANIN DALAM PAKAN

6.1 Hasil Pengamatan

6.1.1 Tabel Hasil Penentuan Fenolat Dalam Pakan
Sampel Warna Absorbansi Fenolat (mg/100g)
Kulit Pisang Hijau Tua 1,205 423,84
Daun Pepaya Hijau Tua 1,791 629,89
Daun Paitan Hijau Tua 2,296 811,38
Daun Pepaya Hijau Tua 2,099 740,21

6.1.2 Kolom Perhitungan Penentuan Fenolat

Jawaban
Fenolat
a. kulit pisang
y= 0,00281x + 0,01348
1,205 =0,00281x + 0,01348
0,0281x = 1,205 – 0,01348
X = 423,84
b. daun pepaya
y= 0,00281x + 0,01348
1,791 =0,00281x + 0,01348
0,0281x = 1,791 – 0,01348
X = 629,89
c. daun paitan
y= 0,00281x + 0,01348
2,296 =0,00281x + 0,01348
0,0281x = 2,296 – 0,01348
X = 811,38
d. daun pepaya
y= 0,00281x + 0,01348
2,099 =0,00281x + 0,01348
0,0281x = 2,009 – 0,01348
X = 740,21

29
6.1.3 Tabel Hail Penentuan Tanin dalam Pakan
Sampel Warna Absorbansi Tanin
Kulit pisang Kuning 2,367 1.145,63
Daun pepaya Hijau 2,462 1.189,32
Daun paitan Hijau 2,500 376,70
Daun pepaya Hijau tua 2,099 509,70

6.1.4 Kolom Perhitungan Penentuan Tanin

Jawaban
a. kulit pisang
y= 0,00206x + 0,00661
2,367 = 0,00206x + 0,00661
X = 1.145,63
b. daun pepaya
y= 0,00206x + 0,00661
2,462 = 0,00206x + 0,00661
X = 1.189,32
c. daun paitan
y= 0,00206x + 0,00661
2,500 = 0,00206x + 0,00661
X = 376,70
d. daun pepaya
y= 0,00206x + 0,00661
1,059 = 0,00206x + 0,00661
X = 509,70

30
 6.1.5 Dokumentasi
No Gambar Keterangan
1. Sampel hasil penentuan fenolat
dalam pakan

6.2 Pembahasan
Proses destilasi yang digunakan adalah hidrodestilasi. Metode destilasi dengan
air (hidrodestilasi) dapat menghasilkan minyak atsiri yang lebih banyak karena rimpang
yang akan didestilasi kontak langsung dengan air mendidih. Berdasarkan hasil destilasi
diatas persen rendemen minyak jahe gajah yang didapatkan hanya 0,18 %. Penelitian
sebelumnya minyak jahe gajah didapatkan rendemen 2 %. Perbedaan hasil rendemen
yang didapatkan karena perbedaan umur tanaman, musim pemanenan, tanah, tempat
penanaman , dan metode destilasi yang digunakan.
Pada pengukuran kadar fenol total dibutuhkan sampel yang dapat terlarut
sempurna dengan reagen Folin-Ciocalteu dan larutan Na2CO3. Sampel minyak jahe
yang digunakan secara langsung tidak dapat terlarut sempurna, sehingga dilakukan
penarikan senyawa fenol dengan fraksinasi [Fuentes et al., 2012). Hasil fraksinasi fase
metanol/air dipisahkan untuk penetapan kadar fenol total. Penentuan panjang
gelombang maksimum tidak dilakukan dengan scanning campuran reagen Folin-
Ciocaletu dengan larutan standar dan larutan uji karena campuran tersebut tidak
menghasilkan spektra dengan puncak yang pasti.
Penentuan panjang gelombang dilakukan dengan membandingkan absorbasni
dari tiga panjang gelombang yang telah ditentukan, sehingga penentuan panjang
gelombang dan waktu inkubasi dapat dilakukan secara bersama. Panjang gelombang
yang dipilih adalah 725 nm karena menghasilkan absorbansi yang tertinggi pada
standar dan sampel dibandingkan dengan dua panjang gelombang yang lain. Waktu
inkubasi yang dipilih adalah 120 menit karena pada waktu tersebut sudah tidak ada
perubahan absorbansi setelah direaksikan dengan Folin-Ciocalteu, hal ini menandakan
bahwa reaksi telah berhenti atau sempurna.
Berdasarkan persamaan yang didapatkan regresi y = 0,0827x + 0,162. dapat
menetapkan kadar fenol dengan memasukkan hasil pengukuran absorbansi pada larutan
fraksi metanol/air minyak jahe yang telah direaksikan dengan Folin-Ciocalteu dan
Na2CO3 sebagai nilai (x). Kadar fenol total yang diperoleh dalam fraksi
diinterpretasikan dalam milligram ekuivalen asam galat per gram minyak (mg GAE/g
minyak) sehingga didapatkan kadar fenol total minyak jahe gajah 0,626 ± 0,027 mg
GAE/g minyak.
Menurut penelitian sebelumnya panjang gelombang pengujian aktivitas
antioksidan menggunakan metode DPPH adalah 515-520 nm. Berdasarkan hasil yang

31
diperoleh, maka panjang gelombang yang didapatkan sesuai dengan kriteria panjang
gelombang di atas. Panjang gelombang maksimum dipilih karena pada panjang
gelombang maksimum dapat memberikan absorbansi yang maksimum.
Berdasarkan hasil pengujian aktivitas antioksidan yang dilakukan, dapat dilihat
pada Tabel 1. bahwa nilai IC50 vitamin C paling kecil, hal ini menunjukkan bahwa
metode yang dilakukan telah benar. Nilai IC50 minyak jahe gajah 5,766 µl/ml,
sehingga pada konsentrasi tersebut larutan uji dapat meredam DPPH sebesar 50%.
Semakin kecil nilai IC50 maka semakin besar kemampuan antioksidannya karena
hanya dengan konsentrasi yang kecil telah mampu meredam radikal bebas DPPH
sebesar 50%. Kemampuan meredam radikal bebas minyak jahe gajah apabila
dibandingkan dengan vitamin C sangat jauh karena vitamin C yang digunakan adalah
sintetis yang dapat dipastikan memiliki aktivitas antioksidan.
Aktivitas antioksidan pada minyak jahe gajah dikontribusi oleh adanya
kandungan senyawa fenol total. Pada umumnya aktivitas antioksidan minyak jahe
disebabkan oleh adanya efek sinergis senyawa organik yang kompleks seperti β-
sesquiphellandrene, zingiberene, α-farnesen, benzene, sitral, dan kamfen.
Penentuan Kadar Tanin (Metode FeCb). Uji Biokimia dengan menggunakan
FeCb Uji biokimia merupakan uji kualitatif untuk menduga adanya senyawa tanin pada
ekstrak daun gambir. Uji biokimia yang dilakukan dalam penelitian ini yaitu
menambahkan ekstrak dengan reagen FeCK ditunjukkan dengan perubahan warna yaitu
warna hijau kehitaman atau biru tinta. Uji biokimia dengan menggunakan FeCb
digunakan untuk menentukan apakah sample mengandung gugus fenol ditunjukkan
dengan warna hijau kehitaman atau biru tua setelah ditambahkan dengan FeCb,
sehingga apabila uji biokimia dengan FeCb memberikan hasil positif dimungkin kan
dalam sampel terdapat senyawa fenol dan dimungkinkan salah satunya adalah tanin.
Karena tanin merupakan senyawa polifenol. Hal ini diperkuat oleh Harbourne, (1987)
cara klasik untuk mendeteksi senyawa fenol sederhana yaitu menambahkan ekstrak
dengan larutan FeCb 1% dalam air, yang menimbulkan warna hijau, merah, ungu, biru
dan hitam kuat. Terbentuknya warna hijau kehitaman atau biru tinta pada ekstrak
setelah ditambahkan dengan FeCb karena tanin akan membentuk senyawa kompleks
dengan ion Fe3+. (Komalasari et al.,2015)
Prosedur Kerja
I. Penentuan Kadar Fenol (Metode Folin C)
1. Timbang 5 gram bahan kemudian maserasi dengan metanol sebanyak 25 ml lalu
diamkan selama 24 jam.
2. Saring larutan hasil maserasi.
3. Ambil fittrat sebanyak 1 ml sampel ditambah dengan 5 ml aquades dan 2 ml folin c
dan 2 ml Na₂CO₃ 10% kemudian di homogenisasi dan didiamkan selama 30 menit.
4. Ukur absorbansinya pada λ 646 nm.
5. Penentuan kadar fenolik ditentukan dengan persamaan regresi standar.
6. y = 0,00281x + 0,01348

32
 II. Penentuan Kadar Tanin (Metode FeCb)
1. Timbang 5 g bahan kemudian maserasi dengan etanol sebanyak 25 ml lalu diamkan
selama 24 jam.
2. Saring larutan hasil maserasi.
3. Ambil sebanyak 5 ml sampel atau standar ditambah dengan 1,5 ml FeCl₃ 0,1 M dan
1,5 ml K₃Fe(CN)₆ 0,008 kemudian dihogenisasikan dan didiamkan selama 30 menit.
4. Ukur absorbansinnya pada λ 620 nm.
5. Penentuan kadar fenolat ditentukan dengan persamaan regresi standar.
6. y = 0,00206x + 0,00661

Jurnal:
(Fuentes et al., 2012).
(Komalasari et al.,2015)

6.3 Kesimpulan
Pada praktikum penentuan fenolat dapat diketahui sampel yang memiliki fenolat
tertinggi terdapat pada daun paitan ,daun papaya(4),daun papaya(2), yaitu
811,38;740,21;629,89. Percobaan penentuan tannin sampel yang mengandung tannin paling
besar adalah daun papaya yaitu 1.189,32 dan yang terendah adalah daun paitan yaitu 3763,70.
6.4 Referensi
Cahyani YN. Perbandingan Kadar Fenol Total dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Metanol Daun Kopi Robusta (Coffea cenephora) dan Arabika (Coffea arabica).
Skripsi. Jember: Fakultas Farmasi Universitas Jember; 2015.
Ratnasari FA. Penentuan Kadar Fenol Total pada Ekstrak Daun Tanaman
Menggunakan Metode Spektroskopi NIR dan Kemometrik. Skripsi. Jember:
Fakultas Farmasi Universitas Jember; 2016.
Fuentes E, ME Báez, M Bravo, C Cid, & F Labra. Determination of total phenolic
content in olive oil samples by uv–visible spectrometry and multivariate
calibration. Food Anal Methods. 2012. 5(6): 1311-1319.

33
 BAB 7. DEKOMPOSISI BAHAN ORGANIK

7.1 Hasil Pengamatan

7.1.1 Tabel hasil penentuan kreatinin urin
7.1.1 Tabel Hasil Penentuan Kreatinin Urin
Sampel Warna T1 T2 Kreatinin
Sapi Kuning 0,067 0,070 16,6
Kambing Kuning 0,069 0,087 100
Domba Kuning 0,075 0,094 105
Domba Kuning 0,080 0,0802 11,11

7.1.2 Kolom Perhitungan Penentuan Kreatinin Urin

Jawaban
a. urine sapi
K = A sampel/ A strandart xkonsetransi standart x 50 ( ml )
= 0,070 – 0,067 / 0,112 – 0,094 x 2 x 50
= 0,166 x 2 x 50
= 16,6
b. urine kambing
K = A sampel/ A strandart xkonsetransi standart x 50 ( ml )
= 0,087 – 0,069 / 0,112 – 0,094 x 2 x 50
= 1 x 2 x 50
= 100
c. urine domba 3
K = A sampel/ A strandart xkonsetransi standart x 50 ( ml )
= 0,094 – 0,075 / 0,112 – 0,094 x 2 x 50
= 1,05 x 2 x 50
= 105
d. urine domba 4
K = A sampel/ A strandart xkonsetransi standart x 50 ( ml )
= 0,0802 – 0,080 / 0,112 – 0,094 x 2 x 50
= 0,011 x 2 x 50
= 11,11

34
 7.1.3 Dokumentasi
No Gambar Keterangan
1.

7.2 Pembahasan
Penentuan kreatinin dalam urine dan serum menggunakan kromatografi kinerja
tinggi (KCKT) telah diteliti oleh Harmoinen et al. (1991) dan Tsai dan Syu (2005).
Dalam metode ini kolom penukar kation (LichroCART®RP-18 column) digunakan
untuk memisahkan kreatinin dari senyawa lainnya dalam isocratic buffer system.
Kreatinin dideteksi secara spektrofotometri pada 234 nm. Pada umumnya metode
KCKT memerlukan complicated assay system dalam pelaksanaannya. Hal yang sama
juga dilakukan oleh Johns et al. (2001) yang mengembangkan metode isokratik KCKT
menggunakan kolom silica-based strong cationexchange (CS103-10 SynChropak) dan
matrik 5 mM litium asetat pada pH 4.9. Pada metode ini, preparasi sampel melalui
serangkaian perlakuan yang rumit yaitu deproteinasi dengan asetonitril, evaporasi, dan
pelarutan kembali dalam fase gerak yang diikuti dengan kuantisasi menggunakan
deteksi UV pada 234 nm. Metode elektrokimia juga dapat digunakan untuk mendeteksi
kreatinin. Misalnya amperometri biosensor yang didasarkan pada metode enzimatis.
Metode ini mencakup tiga tahapan proses yaitu konversi kreatinin menjadi kreatin,
kreatin menjadi sarcosine, sarcosine menjadi glycine dan H2O2 . Peroksida yang
terbentuk inilah yang kemudian dijadikan acuan untuk menentukan kreatinin secara
elektrokimia. Tiga tahapan proses konversi di atas menunjukkan kekomplekan dan
sensitivitas yang rendah untuk sistem amperometri (Stefan et al. 2003).
Reaksi Jaffe merupakan metode yang paling populer untuk penentuan kreatinin
dalam urin dan serum. Dalam metode ini, kreatinin direaksikan dengan asam pikrat
pada suasana basa yang membentuk senyawa berwarna merah-orange dan dideteksi
secara spektofotometri pada panjang gelombang 490- 520 nm (Staden 1983).
Keuntungan reaksi Jaffe yaitu sederhana dan mudah. Namun karena dilakukan dengan
metode batch, maka jumlah sampel dan reagen yang digunakan sangat banyak sehingga
pembentukan senyawa kreatinin-pikrat memerlukan waktu yang cukup lama yaitu

35
sekitar 30 menit. Selain itu, kontaminasi yang besar dari lingkungan dapat terjadi pada
metode batch sehingga memerlukan pengontrolan yang ketat. Metode ini memiliki
sensitivitas yang rendah dengan limit deteksi sebesar 0,2 M (Faria & Pasquini 1992).
Untuk mengatasi hal ini, dapat digunakan metode online dan otomatis yaitu sequential
injection analysis (SIA). Sistem ini dikontrol dengan komputer dan biasanya terdiri dari
syringe pump, holding coil, katup multiposisi, dan detektor. Semua komponen tersebut
dihubungkan satu sama lain menggunakan pipa kapiler PTFE. Operasional sistem ini
diawali dengan pembentukan segmensegmen antara reagen dan sampel di holding coil
yang selanjutnya didispensikan menuju sel alir (flow cell) detektor. SIA ini hanya
memerlukan jumlah reagen yang sangat sedikit, analisis secara cepat dan otomatis, serta
menghasilkan limbah yang jumlahnya sedikit sehingga analisis menggunakan metode
ini akan menghemat pemakaian reagen dan lebih bersahabat dengan lingkungan
(Ruzicka & Marshall 1990). Akan tetapi, pembentukan segmen di holding coil
mengurangi keefektifan/ kesempurnaan reaksi antara sampel dan reagen yang
mengakibatkan sensitivitas yang rendah.
Atas dasar hal tersebut di atas, maka dalam penelitian ini dikembangkan suatu
sistem yang disebut dengan Sequential Injection-Flow Reversal Mixing (SI-FRM).
Sistem ini merupakan modifikasi dari SIA dengan menempatkan mixing coil pada
katup multiposisi (multiposition valve/ selection valve) sebagai tempat berlangsungnya
flow reversal. Segmen-segmen antara reagen dan sampel di holding coil akan dialirkan
secara berulang-ulang menuju mixing coil secara otomatis (flow reversal) sehingga
diperoleh hasil reaksi yang sempurna dan memberikan sensitivitas yang tinggi ketika
dialirkan menuju detektor. Beberapa parameter yang mempengaruhi metode ini
dilakukan optimisasi yang mencakup konsentrasi asam pikrat dan NaOH, laju alir flow
reversal, laju alir produk reaksi ke detektor, jumlah flow reversal, volume dan jumlah
segmen di holding coil. Untuk keseluruhan proses, kreatinin dapat dideteksi dalam
waktu 5 menit secara on-line dan otomatis dengan hanya membutuhkan 200 L reagen
dan 100 L sampel.
Prosedur Kerja
Praktikum Biokimia Kreatinin Dalam Urin
1. Dipipet sebanyak 50 μL larutan aquades (blanko), 50 μL larutan standar dan 50 μL
sampel urine dalam aquades dengan perbandingan 1 : 49, masing-masing
dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berbeda.
2. Tambahkan 1000 μL reagen 1 (NaOH) pada tiap tabung reaksi dan homogenkan.
3. Inkubasi masing-masing tabung reaksi selama 5 menit pada suhu ruang.
4. Tambahkan reagen 2 (Asam Pikrat) sebanyak 250 μL dan homogenkan.
5. Inkubsi masing-masing tabung reaksi selama 1 menit pada suhu ruang dan baca
absorbansinya (A1) kemudian inkubasi lagi selama 2 menit dan baca
absorbansinya(A2) pada λ 505 nm.
Δ A = A2 – A1

36
 Kreatin (mg/dL) = Δ A sampel x Konsentrasi standart x 50 ( μL sampel)
Δ A standart
Konversi : Kadar kreatin sebesar 1 mg/dL sebanding dengan 88,4 μM, 0,001% atau
10 ppm.

Jurnal:
(Stefan et al. 2013).
(Johns et al. 2011).

7.3 Kesimpulan
Pada praktikum penentuan kreatinin urin dapat diketahui bahwa kreatinin urin yang
paling besar adalah urine domba,dengan kondisi ginjal yang kurang baik atau bermasalah.
7.4 Referensi
Casparus, J. O., & Reinhard, V. (2012). Products and Applications of Biopolymers. InTech.
Rijeka: InTech. https://doi.org/10.5772/1802

37
 PENUTUP

Saran
Semoga Praktikum tahun depan bisa lebih optimal lagi, untuk laporan semoga sistem
dan formatnya di perbarui agar lebih efektif. Untuk alat dan bahan praktikum serta seluruh
proses praktikum dilakukan sepenuhnya agar mahasiswa memahami keseluruhannya.

38