Dasar Dasar Mikrobiologi2015!08!03

PRINSIP DAN
DASAR – DASAR
PENGUJIAN
MIKROBIOLOGI
1
M-BRIO Training Proprietary – dilarang menggandakan dalam
bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo
Pendahuluan
2
1
Sejarah Mikrobiologi
1. Penemuan jasad renik dan penemu
mikroskop oleh Antony van Leeuwenhoek
(1632-1723)
2. Teori abiogenesis oleh John Needham
(1713-1781)
3. Teori biogenesis oleh Lazaro Spallanzani
(1729-1799), John Tyndall (1870), Louis
Pasteur (1822-1895)
4. Penemuan proses fermentasi oleh Louis
Pasteur (1822-1895)
3
5. Teknik isolasi bakteri pada kasus penyakit

antraks oleh Robert Koch (1843-1910)
6. Koch dan rekan-rekannya mengembangakan
beberapa prosedur laboratorium seperti
mewarnai bakteri, membiakkan bakteri,
penggunaan media
4
2
Mikrobiologi
Micros = kecil (renik); Bios = hidup; logos
= ilmu.
Mikrobiologi : ilmu tentang perikehidupan
organisme hidup yang sangat kecil yang
hanya dapat dilihat menggunakan
mikroskop.
Mikroorganisme :
Bakteri, Protozoa, virus, algae, cendawan
5
Morfologi sel bakteri

- Umumnya bakteri berukuran 0,5-1,0 x 2,0-
5,0 μm.
- Bentuk bakteri : bola (kokus), batang
(basilus), spiral (vibrio).
- Penataan bakteri : berpasangan,
gerombol, rantai, atau filamen.
6
3
Morfologi Fungi
Ukuran khamir : lebar berkisar antara 1 –
5 μm, panjang 5 – 30 μm.
Bentuk khamir: bulat, elips, tidak
dilengkapi flagelum.
Khamir bersifat fakultatif
Kapang terdiri dari 2 bagian, yaitu
miselium (kumpulan beberapa filamen
>>hifa) dan spora.
Kapang bersifat fakultatif
7
Medium pertumbuhan
8
4
MEDIA
Nutrisi yang dibutuhkan oleh mikroorganisme

untuk tumbuh.
- Menghitung
- Memperkaya
- Identifikasi
- koleksi mikroba
9
Syarat-syarat media :
Mengandung semua nutrisi yang digunakan oleh
mikroba.
Mempunyai tekanan osmosis.
Mempunyai pH yang sesuai dengan kebutuhan
mikroba.
Tidak mengandung zat yang dapat
menghambat pertumbuhan mikroba.
Harus dalam keadaan steril sebelum
digunakan.
10
5
Jenis-jenis media
1. Berdasarkan fisiknya :
a. Media cair
b. Media padat
c. Media semi padat
11
1.Media Cair
Bentuk cair, tidak mengandung bahan
pemadat
Menumbuhkan/ membiakkan,
menyimpan kultur, uji kemampuan
fermentasi, pengayaan, dan pengujian
lain.
Nutrient broth, Brain Heart Broth, TS
Broth, Lactose broth, SC Broth, LE
Broth, dll.
12
6
2. Media Padat
1,5 - 2 % Agar
Menumbuhkan mikroba, menyimpan kultur
untuk jangka waktu tidak terlalu lama,
mengisolasi dan menghitung mikroba.
Plate Count Agar, Potato Dextrose Agar,
Violet Red Bile Agar, Nutrient Agar, dll.
Tidak larut sempurna dalam air
Pencairan & Pemadatan terus menerus
menurunkan kekuatan agar
13
Bahan Pemadat
Agar
Rumput laut
- Galaktan : polimer dari molekul galaktosa
(tidak dapat dipecah oleh MO)
Tidak digunakan sbg bahan makanan MO
Tidak berpengaruh thd karakteristik MO
Mix dengan medium broth sebelum sterilisasi
Mencair setelah pemanasan 90-100 0C
Memadat 40 0C
Digunakan pada suhu 45 0C
Jika lebih mikroba mati
14
7
Bahan Pemadat
Gelatin
- Polimer asam amino dari kolagen
- 12-15 %
- Jarang digunakan
- Mencair pada T di atas suhu ruang tidak
dapat diinkubasi pada T tinggi
- Dapat dihidrolisis oleh sebagian bakteri
15
3. Media Semi Padat

0,5 % agar
Menyimpan kultur mikroba
Pertumbuhan MO menyebar ke seluruh
media tapi tidak mengalami pencampuran
sempurna.
Mencegah/menekan difusi oksigen
kondisi anaerob atau sedikit oksigen
Thioglycolate medium
16
8
Jenis-jenis media
2. Berdasarkan komposisi :
a. Media alami : media yang tersusun
dari bahan-bahan alami, seperti
kentang, daging, telur, air kelapa, dll.
b. Media semi sintesis : media yang
tersusun dari bahan-bahan alami dan
bahan-bahan sintesis, contohnya :
17
Pepton 10 gr
Ekstrak daging 10 gr
NaCl 5 gr
Aquadest 1000 ml
c. Media sintesis : media yang disusun dari

senyawa kimia, contohnya :
K2HPO4 0.5 gr
KH2PO4 0.5 gr
MgSO4. 7H2O 0.1 gr
NaCl 0.1 gr
FeSO4. 7H2O 0.01 gr
MnSO4. 7H2O 0.01 gr
18
9
3. Berdasarkan sifatnya :
a. Media umum : media yang digunakan untuk
pertumbuhan satu atau lebih mikroba,
contohnya PCA, PDA, dll.
b. Media pengayaan (enrichment) : media yang
berfungsi untuk mempercepat suatu bakteri,
contohnya RVS, TBB, Frasher, dll.
c. Media selektif : media yang berfungsi
menumbuhkan bakteri tertentu dan
menghambat bakteri tertentu, contohnya Mc
Conkey, EMB, XLD, dll.
19
d. Media diferensial : media yang digunakan

untuk pertumbuhan mikroba yang bertujuan
mengetahui sifat dari mikroba tersebut,
contohnya Mc Conkey Agar, BPA, dll.
e. Media identifikasi : media yang digunakan

untuk mempelajari/membuktikan satu atau
lebih funsi metabolik khas dari mikroba yang
diperlukan untuk identifikasi, contohnya TSI
Agar.
20
10
Larutan Pengencer
Mengencerkan contoh yang akan dianalisa
atau mikroba yang akan ditumbuhkan (dilusi).
Mengandung buffer: mempertahankan
keseimbangan fisiologis mikroba.
PH netral = Larutan garam fisiologis 0.85%,
buffer fosfat (KH2PO4), Buffered Peptone
Water.
PH basa = Alkaline Peptone Water
21
Bahan Tambahan Media

Indikator Asam-Basa
- Phenol Red
- Neutral Red
Antibiotik
- Menghambat pertumbuhan mikroba non-
target/kontaminan
22
11
TEKNIK ASEPTIK
23
Teknik Aseptik
Suatu teknik yang dilakukan di laboratorium
mikrobiologi yang bertujuan untuk meminimalisasi
terjadi kontaminasi, yaitu dengan cara :
1. Menggunakan APD
2. Membersihkan meja kerja sebelum dan
sesudah dengan menggunakan desinfektan
3. Menggunakan Laminar Air Flow/Biosafety
Cabinet
24
12
Sterilisasi
Suatu proses untuk membunuh mikoba, baik sel
vegetatif maupun spora.
Beberapa teknik sterilisasi :
A. Mekanik/Filtrasi
- 0,22-0,45 µ
- Bahan yang mudah rusak dengan pemanasan
25
B. Fisik
- Pemanasan
• Pemijaran : ose, pinset,dll
• Panas Kering (oven,160-180 0C selama 2 jam) : alat
gelas
• Uap air panas bertekanan : autoklaf (121 0C, 15 psi, 15 ‘)
: medium
-Penyinaran
• UV, X, gamma, dll
• UV : membunuh mikroba pada permukaan LAF
C. Kimiawi
* Desinfektan : alkohol, formalin, khlor, dll
26
13
KULTUR MIKROBA
Prosedur
SR 02
Kelompok Resiko MO
27
Kultur Mikroba
Mengetahui sifat dari mikroba, harus

dipisahkan satu dengan yang lain dari
kutur campuran
Kultur Campuran : Biakan yang terdiri dari
lebih dari satu species
Kultur murni : biakan yang hanya terdiri
dari satu spesies tunggal.
28
14
Kultur Mikroba
Peremajaan kultur murni dengan memindahkan
ke medium baru Sub Kultur
Piaraan Kultur yang disimpan Stock Kultur
Kultur mikroba disimpan dalam L.Es pada T 40C
Dorman : tidak dapat tumbuh & berkembang
biak tetapi tidak mati
Bagaimana penanganan & pemeliharaan MO ?
29
Kultur Mikroba & Cara Isolasi

Kultur mikroba dapat dibekukan dengan cara
Liofilisasi
Isolasi mikroba adalah tehnik pemisahan/

pemurnian mikroba, dapat dilakukan dengan cara :
1. Isolasi pada medium agar dalam cawan
2. Isolasi pada agar tegak/ agar miring
3. Isolasi pada medium cair
30
15
Kultur Murni
Pelet (Lypo – disk)
Stik (kwik – stick)
Cultiloop
Berbeda cara penanganan

dan persiapannya
31
Faktor-Faktor yang Mempengaruhi

Pertumbuhan Mikroba
32
16
Sumber Nutrisi
Carbon T
Nitrogen E
Oksigen R
Fosfor G
A Sifat MO
Sulfur
N
Air T
Hidrogen U
Fe, Ca, Na, Mg, K N
dll G
33
Waktu Reproduksi
Fase Pertumbuhan Mikroba
Stationary phase
Decline phase
Lag phase Log phase
34
17
Fase Pertumbuhan Mikroba
Lag phase
Belum ada pertumbuhan populasi karena sel mulai
beradaptasi dengan medium sehingga siap untuk
membelah diri.
Logaritma phase
Sel membelah diri dengan laju yang cepat & konstan.
Stationary phase
-Terjadinya penumpukan racun akibat metabolisme sel
- kandungan nutrien mulai habis
Decline phase
-Sel menjadi mati akibat penumpukan racun
- nutrisi habis, mengalami penurunan jumlah sel secara
eksponensial. M-BRIO Training Proprietary – dilarang menggandakan dalam 35
Aerob Anaerob
Mutlak ada O2 Mutlak tidak ada O2
Kebutuhan
O2
Mikroaerofil Fakultatif
Sedikit O2 Ada/tidak O2
36
18
Penggolongan Mikroorganisme
Mesofil
25 - 40 0C
Psikrofil Termofil
0 – 30 0C 50 atau lebih 0C
Aktivitas
Suhu
37
Suhu
Suhu dapat mempengaruhi mikroba dalam dua cara yang
berlawanan :
1) Apabila suhu naik maka kecepatan metabolisme naik dan
pertumbuhan dipercepat dan Sebaliknya.
2) Apabila suhu naik atau turun secara drastis, tingkat
pertumbuhan akan terhenti, komponen sel menjadi tidak aktif dan
rusak, sehingga sel-sel menjadi mati.
suhu yang berkaitan dengan pertumbuhan mikroorganisme

digolongkan menjadi tiga, yaitu :
1) Suhu minimum : suhu yang apabila berada di bawahnya maka
pertumbuhan terhenti.
2) Suhu optimum : pertumbuhan berlangsung paling cepat dan
optimum. (Disebut juga suhu inkubasi)
3) Suhu maksimum : suhu yang apabila berada di atasnya maka
pertumbuhan tidak terjadi.
M-BRIO Training Proprietary – dilarang menggandakan dalam 38
19
• : 6,5-7,5
Bakteri
PH • Y&M : 3-4
• Jumlah air yang

terikat dalam bahan
Aw pangan
• Aw bakteri : 0,9
• Aw Y&M : 0,7
Kondisi lembab dan kadar air yang tinggi sangat menguntungkan untuk
pertumbuhan mikroba,,
39
Jumlah dan Jenis Mikroorganisme

dalam suatu produk tergantung pada
Kondisi lingkungan (substrat, kadar air, pH,

dll).
Kualitas mikrobiologi tempat penanganan &
pengolahan (ruangan, personil, alat)
Kondisi pengemasan, penanganan,
penyimpanan (kemasan, ruangan, personil)
M-BRIO Training Proprietary – dilarang menggandakan dalam 340

20
TOTAL MIKROBA
BERDASARKAN KELOMPOK
Total mikroba
- Prinsip hitungan cawan menggunakan
Plate Count Agar (PCA) sebagai media
pemupukan.
- Semua bakteri, kapang, khamir dapat
tumbuh.
41
TOTAL MIKROBA
Total bakteri
- Perhitungan menggunakan Nutrient
Agar (NA), media yang mengandung
nitrogen, tetapi tidak mengandung
karbohidrat.
- Baik untuk pertumbuhan bakteri,
tetapi kapang dan khamir tidak dapat
tumbuh.
42
21
TOTAL MIKROBA
Total spora bakteri
- Perhitungan jumlah spora bakteri, suspensi
contoh dipanaskan terlebih dahulu untuk
membunuh sel vegetatif bakteri, kapang,
dan khamir maupun spora kapang dan khamir
- Jumlah spora dihitung menggunakan metode
hitungan cawan setelah contoh dipanaskan
pada suhu tertentu.
43
TOTAL MIKROBA
Total kapang dan khamir
- Perhitungan jumlah kapang dan khamir dengan

metode hitungan cawan menggunakan media PDA
- PDA merupakan suatu medium yang mengandung

sumber karbohidrat dalam jumlah cukup sehingga baik
untuk pertumbuhan kapang dan khamir, tetapi kurang
baik untuk pertumbuhan bakteri. Dengan menurunkan
pH PDA menjadi sekitar 3,5 pertumbuhan bakteri
terhambat disebut Acidified Potato Dextrose Agar
(APDA).
44
22
Keselamatan kerja di
Lab. mikrobiologi
45
Asumsi Dasar
Perlakukan semua MO sebagai yang memiliki potensi membahayakan

kesehatan manusia.
Yang Harus Dilakukan :
1. Cuci tangan terlebih dahulu dengan sabun sebelum bekerja

laboratorium.
2. Selalu menggunakan jas laboratorium yang bersih dan APD lainnya
selama berada di laboratorium.
3. Tidak makan, minum dan merokok di dalam laboratorium.
4. Sebelum mulai kerja, semprot tangan dengan alkohol 70 %.
5. Meja kerja dibersihkan dengan alkohol 70 % sebelum dan sesudah
bekerja.
6. Beri label pada kultur atau media (nama kultur/media, tanggal dibuat).
7. Sterilisasikan peralatan bekas kultur dan media yang sudah tercemar.
8. Jangan memipet dengan mulut.
9. Jika kultur atau media tumpah, segera dilap dengan alkohol 70 %.
10.Setelah selesai bekerja, semprot kembali tangan dengan alkohol 70 %
kemudian cuci tangan pakai sabun
46
23
Teknik dasar
analisis
mikrobologi
47
1. Teknik Dilusi
• Sangat penting di dalam analisa mikrobiologi.

Hampir semua metode perhitungan jumlah
mikroba mempergunakan teknik ini.
• 1 : 10, 1 : 100, 1 : 1000, dst.
• Kelebihan teknik ini adalah digunakan untuk

mendeteksi jumlah populasi mikroba yang
tinggi dengan pengenceran bertingkat.
48
24
2. Teknik Pour Plate
•Suatu teknik menumbuhkan mikroorganisme

pada media agar dengan cara mencampurkan
media agar yang masih cair dengan sample.
•Teknik ini biasa digunakan pada uji TPC,

Y&M, Enterobacteriaceae, Coliform, dll.
•Kelebihan teknik ini adalah mikroorganisme

yang tumbuh dapat tersebar merata pada
media agar.
49
3. Teknik Spread Plate

• Suatu teknik menumbuhkan mikroorganisme pada media
agar dengan cara menuangkan sample di atas media agar
yang telah memadat dan diratakan menggunakan hockey
stick.
• Bedanya dengan pour plate adalah pencampuran sample

dilakukan setelah media agar memadat sedangkan pour
plate kultur dicampurkan ketika media masih cair (belum
memadat).
• Teknik ini biasa digunakan pada uji S.aureus, B.cereus,
dll.
• Kelebihan teknik ini adalah mikroorganisme yang tumbuh

dapat tersebar merata pada bagian permukaan media
agar. 50
25
4. Teknik Streak Plate
• Suatu teknik menumbuhkan mikroorganisme pada media
agar dengan cara menstreak (menggores) permukaan agar
yang telah memadat dengan jarum ose yang telah
diinokulasikan dengan sample.
• Dengan teknik ini mikroorganisme yang tumbuh akan

tampak dalam goresan-goresan inokulum bekas dari streak
jarum ose.
• Teknik ini biasa digunakan pada uji Salmonella,

L.monocytogenes, Vibrio, dll.
M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

51
M-BRIOdalam
Training Proprietary
bentuk apapun–tanpa
dilarang
ijin menggandakan
tertulis dari dalam Biotekindo
Embrio
5. Teknik Transfer Aseptik
• Suatu teknik memindahkan atau mentransfer

sample dari satu medium ke medium lain secara
aseptik agar tidak terjadi kontaminasi.
• Teknik transfer aseptis, yaitu :

1) Inoculating (inokulasi) dengan jarum ose
2) Pipetting (mentransfer dengan pipet)
52
26
1) Inoculating (inokulasi) dengan jarum ose
a) Bakar jarum ose dari bagian pangkal dalam

terus hingga ke bagian lup (ujung) sampai
berpijar merah.
b) Biarkan selama beberapa detik sampai pijar
menghilang, kemudian segera ambil tabung
reaksi/cawan yang berisi MO.
c) Segera masukkan jarum ose ke dalam tabung
reaksi/cawan, lalu segera keluarkan dan lakukan
di dekat pembakar bunsen.
d) Jarum ose dibakar kembali untuk membunuh
bakteri yang sudah diinokulasikan.
53
2) Pipetting (mentransfer dengan pipet)
a) Gunakan pipet steril
b) Usahakan ketika memasukkan pipet yang berisi

sample ke dalam tabung/cawan petri jangan
sampai menyentuh dinding tabung/cawan dan
lakukan di dekat pembakar bunsen.
c) Ganti dengan pipet baru dalam melakukan dilusi

yang berbeda.
54
27
Pengambilan contoh
dalam uji mikrobologi
55
PENGAMBILAN CONTOH
DALAM UJI MIKROBIOLOGI
Prosedur Pengambilan Contoh

REPRESENTATIF
Peralatan Steril
Teknik Aseptik
o Bahaya terhadap kesehatan
Organisme berbahaya sample semakin
banyak
o Keseragaman
Homogen sample semakin sedikit
56
28
Penetapan Penerimaan Produk
Sampel defektif:
Mengandung mikroorganisme berbahaya
Mengandung mikroorganisme dalam
jumlah lebih tinggi dari yang ditetapkan
57
The N
58
29

Dasar Dasar Mikrobiologi2015!08!03

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Dasar Dasar Mikrobiologi2015!08!03

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PRINSIP DAN

5. Teknik isolasi bakteri pada kasus penyakit

Morfologi sel bakteri

Nutrisi yang dibutuhkan oleh mikroorganisme

3. Media Semi Padat

c. Media sintesis : media yang disusun dari

d. Media diferensial : media yang digunakan

e. Media identifikasi : media yang digunakan

Bahan Tambahan Media

Mengetahui sifat dari mikroba, harus

Kultur Mikroba & Cara Isolasi

Isolasi mikroba adalah tehnik pemisahan/

Berbeda cara penanganan

Faktor-Faktor yang Mempengaruhi

bentuk apapun tanpa ijin tertulis dari PT. Embrio Biotekindo

suhu yang berkaitan dengan pertumbuhan mikroorganisme

• Jumlah air yang

Jumlah dan Jenis Mikroorganisme

Kondisi lingkungan (substrat, kadar air, pH,

M-BRIO Training Proprietary – dilarang menggandakan dalam 340

- Perhitungan jumlah kapang dan khamir dengan

- PDA merupakan suatu medium yang mengandung

Perlakukan semua MO sebagai yang memiliki potensi membahayakan

1. Cuci tangan terlebih dahulu dengan sabun sebelum bekerja

• Sangat penting di dalam analisa mikrobiologi.

• 1 : 10, 1 : 100, 1 : 1000, dst.

• Kelebihan teknik ini adalah digunakan untuk

•Suatu teknik menumbuhkan mikroorganisme

•Teknik ini biasa digunakan pada uji TPC,

•Kelebihan teknik ini adalah mikroorganisme

3. Teknik Spread Plate

• Bedanya dengan pour plate adalah pencampuran sample

• Kelebihan teknik ini adalah mikroorganisme yang tumbuh

• Dengan teknik ini mikroorganisme yang tumbuh akan

• Teknik ini biasa digunakan pada uji Salmonella,

M-BRIO Training Proprietary - dilarang menggandakan

5. Teknik Transfer Aseptik

• Suatu teknik memindahkan atau mentransfer

• Teknik transfer aseptis, yaitu :

a) Bakar jarum ose dari bagian pangkal dalam

2) Pipetting (mentransfer dengan pipet)

a) Gunakan pipet steril

b) Usahakan ketika memasukkan pipet yang berisi

c) Ganti dengan pipet baru dalam melakukan dilusi

Prosedur Pengambilan Contoh

Anda mungkin juga menyukai