NWE0 NDM5 Ym I1 MZK 3 YWU5 MDYz ODE0 MWM3 NGU5 NWU5 NZHH NDK 1 NDEy Yw

PEMANFAATAN KULIT KAKAO DAN DEDAK PADI
SEBAGAI SUBSTRAT ATAU MEDIA PERTUMBUHAN

TRICHODERMA VIRIDE DAN ASPERGILLUS NIGER
UNTUK MEMPRODUKSI ENZIM SELULASE
The Utilization Of Cocoa Feel And Rice Bran As Substrate Or Growth

Media Of Trichoderma Viride And Aspergillus Niger to produce
Cellulase Enzyme
Oleh
HASRIANY
G 311 09 265
PROGRAM STUDI ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN

JURUSAN TEKNOLOGI PERTANIAN
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS HASANUDDIN
MAKASSAR
2014
PEMANFAATAN KULIT KAKAO DAN DEDAK PADI
SEBAGAI SUBSTRAT ATAU MEDIA PERTUMBUHAN
TRICHODERMA VIRIDE DAN ASPERGILLUS NIGER
UNTUK MEMPRODUKSI ENZIM SELULASE
Oleh
HASRIANY
G 311 09 265
Skripsi Hasil Penelitian

Sebagai Salah Satu Syarat Untuk Memperoleh Gelar
Sarjana Teknologi Pertanian
Pada
PROGRAM STUDI ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN

JURUSAN TEKNOLOGI PERTANIAN
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS HASANUDDIN
MAKASSAR
2014
HALAMAN PENGESAHAN
Judul : Pemanfaatan Limbah Kulit Kakao Dan Dedak Padi

Sebagai Substrat Atau Media Pertumbuhan
Trichoderma Viride Dan Aspergillus Niger Untuk
Memproduksi Enzim Selulase
Nama : Hasriany
Nim : G311 09 265
Program Studi : Ilmu dan Teknologi Pangan
Disetujui
1. Tim Pembimbing
Dr. Ir. Mariyati Bilang, DEA Dr. Ir. Jumriah Lankong, MP

Nip. 19840327 198302 2 001 Nip. 19571215 198703 2
001
Mengetahui
2. Ketua Jurusan Teknologi Pertanian 3. Ketua Panitian Ujian Sarjana

Ub. Sekretaris Jurusan
Prof. Dr. Ir. Hj. Mulyati M. Tahir Ir. Nandi K. Kusendar.M.App.Sc

Nip. 19570923 19312 2 001 Nip. 19571103 198406 1 001
Tanggal Lulus: Januari 2014
HASRIANY (G311 09 265) Pemanfaatan Kulit Kakao Dan Dedak Padi
Sebagai Substrat Atau Media Pertumbuhan Trichoderma Viride Dan
Aspergillus Niger Untuk Memproduksi Enzim Selulase dibawah
Bimbingan Mariyati Bilang dan Jumriah Langkong.
RINGKASAN
Sulawesi adalah penghasil kakao terbesar, sehingga limbah dalam bentuk

kulit melimpah selama musim panen. Kulit kakao mengandung banyak
komponen yang biasa dimanfaatkan sebagai media pertumbuhan untuk
kapang Trichoderma viride dan Aspergillus niger yang dapat
memproduksi enzim selulase. Metode fermentasi solid dapat digunakan
untuk memproduksi enzim selulase dimana kapang ditumbuhkan pada
media kulit kakao. Variable perlakuan dalam penelitian untuk
menghasilkan selulase dari substrat kulit kakao dan dedak padi parameter
pertama A= Lama Pemanasan : A1=1210C, 30 menit ; A2=1000C, 90
menit ; A3= 1000C, 60 menit. Parameter ke dua B=Lama
Inkubasi/Fermentasi : B1=24 jam; B2=48 Jam; B3=72 jam; B4=96 Jam.
Parameter substrat untuk pertumbuhan kapang meliputi kadar air, total
gula dan total protein. Hasil penelitian aktivitas tertinggi untuk total
selulase diperoleh dari kapang Aspergillus niger dimana substrat
dipanaskan pada suhu 1000C selama 90 menit setelah inkubasi 96 jam
dan hasil aktivitas tertinggi untuk endoglukanase diperoleh dari kapang
Aspergillus niger dimana substrat dipanaskan pada suhu 1000C selama 60
menit setelah inkubasi 96 jam.
Kata kunci: Fermentasi Media Padat, Selulase, Trichoderma viride,

Aspergillus niger.
HASRIANY (G311 09 265) Utilization Of Cocoa Leather And Rice Bran
As A Growth Substrate Or Media Trichoderma Viride And To
Aspergillus Niger Cellulase Enzyme Powder Under Guidance of
Mariyati Bilang and Jumriah Langkong.
ABSTRACT
Sulawesi is the largest producer of cocoa. Howover it produces the largest

waste cocoa feel in harvest season. Cocoa feel contains many
components that can be used as a growth media for Aspergillus niger and
Trichoderma viride to produce cellulase enzymes . Solid state
fermentation can be used to produce cellulase enzymes where is mold
grow up on media of cocoa skin . In this, there were for Variables applied
to produce cellulase enzyme from cocoa skin and rice bran the frist was
heating time consisted of 1210C , 30 minutes (A1) ; 1000C , 90 minutes
(A2) ; 1000C , 60 minutes (A3) and the second was incubation/
fermentation time consisted of 24 hours (B1); 48 hours (B2) ; 72 hours
(B3); 96 hours (B4) . Substrate parameters the for mold growth were
water content, total sugar and total protein. The results showoed that the
highest activity of total cellulase produced by Aspergillus niger was the
substrate which was heated at 1000C for 90 minutes after 96 hours
incubation and the highest endoglucanase activity produced by Aspergillus
niger was the substrate which was heated at 1000C for 60 minutes after 96
hours incubation .
Keyword: Solid State Fermentation, Cellulase, Trichoderma viride,

Aspergillus niger
KATA PENGANTAR
Puji syukur saya haturkan ke hadirat Allah SWT, karena dengan
karunia-Nya saya dapat menyelesaiakan tugas akhir yang berjudul
“Pemanfaatan Kulit Kakao dan dedak Padi sebagai Substrata tau
Media Pertumbuhan Kapang Trichoderma viride dan Aspergillus
niger”. Meskipun banyak hambatan yang saya alami dalam proses
pengerjaannya, tapi saya bersyukur dapat menyelesaikan tugas akhir ini
Tidak lupa saya sampaikan terimakasih kepada dosen pembimbing
yang telah membantu dan membimbing, serta memotivasi saya dalam
mengerjakan tugas akhir ini. saya juga mengucapkan terimakasih kepada
ketua jurusan teknologi pertanian dan ketua program studi ilmu dan
teknologi pangan.
Tentunya ada hal-hal yang ingin penulis berikan kepada para
pembaca dari penulisan tugas akhir ini. Penulis berharap tugas akhir ini
dapat meberikan informasi kepada pembaca mengenai pemanfaatan
limbah pertanian. Karena itu saya berharap semoga tugas akhir ini dapat
menjadi sesuatu yang berguna bagi penulis maupun yang membacanya.
Penulis menyadari bahwa dalam menyusun tulisan ini masih jauh
dari kesempurnaan, untuk itu penulis sangat mengharapkan kritik dan
saran yang bersifat membangun guna sempurnanya tulisan ini.
Makassar, Januari 2013
Penulis
UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih kepada semua pihak yang telah membantu
penulis dalam menyelesaikan skirpsi ini sehingga dapat terselesaikan
“terima kasih kepada”
1. Ketua Jurusan dan sekertari jurusan Teknologi Pertanian
2. Ketua Program Studi dan sekertaris Program Studi Ilmu dan
Teknologi Pangan Universitas Hasanuddin
3. Dr. Ir. Mariyati BIlang, DEA dan Dr. Ir. Jumriah Langkong, MP selaku
pembimbing I dan pembimbing II yang dengan sabar membimbing,
mendorong, memotivasi dan senantiasa memberikan masukan
kepada penulis selama pelaksanaan penelitian hingga penulisan
skripsi ini.
4. Prof Dr. Ir. H. Jalil Genisa, Ms dan Dr. rer-nat. Zaenal, S.TP,
M.Foodtech selaku dosen penguji yang senangtiasa memberikan
saran dan masukan dalam penyusunan skiripsi ini
5. Dosen-dosen dan seluruh staf Jurusan Teknologi Pertanian yang
telah memberikan ilmu, semangat, bimbingan serta motivasi selama
perkuliahan hingga penyusunan skiripsi.
6. Ibu Ati selaku laboran yang selalu membantu penulis selama
penelitian berlangsung.
7. Pak Amir dan Bu Yuli yang selalu membantu dalam pengurusan
berkas.
8. Kepada Seluruh Keluarga Mahasiswa Jurusan Teknologi Pertanian
Universitas Hasanuddin, terima kasih karena kalian telah
memberikan warna pada penulis selama penulis menjadi mahasiswa
Teknologi Pertanian.
9. Terima kasih kepada kelurga besarku yang selalu memberikan
semangat dan bantuannya baik moral maupun materi.
10. Kepada seluruh rekan-rekan “OBOR 09” yang dari awal menjadi
mahasiswa hingga sekarang yang selalu memberikan semangatnya
kepada penulis terima kasih atas kebersamaannya selama ini.
11. Sahabat-sahabat “The Tc” yang memberikan semangat yang begitu
luar biasa, dukungan kalian sangat berarti untuk ku.
12. Terima kasih kepada “Teletubies” Yuyun, Amrida, Anita, yang
selalu memberikan bantuannya selama ini.
13. Sahabat “The Texa 09” Aliya, Lukman, Ucenk, Ahmad, Rahma,
Ndhy, Acha, Asri, Ikki, Vano, Fischer, Amma, Unnu, Nul Pia,
Halim, Mustar, Irha, Tono, Yoland, Hikma, Icha, Hamsah, Erick,
Adhi yang selalu memberikan semangat, dukungan selama masa
perkuliahan hingga sekarang. Kalian takkan pernah terlupakan
semoga kita tetap menjadi saudara. Teman seperjuangannku di
laboratorium “ Upi, Nira, K’ Aan, K’ Arni terima kasih bantuanya
selama penelitian.
14. Teman-teman seperjuanganku yang memberikan semangatnya
Riska Vivi Alfira, Noviyanti, Surya Azhar Akbar terima kash atas
semua semangatnya kalian tidak akan terlupakan
15. Terimah kasih kepada kepada sahabat “Pepromeno” Dila, Fandi,
Fadli, Ancha, Arief, Firman, Anas , Ince dan sahabat-sahabat
peperomeni yang tidak sempat penulis sebutkan namanya terimah
kasih selalu mendukung penulis, memberikan semangat kepada
penulis terimah kasih tak terhingga buat kalian atas semuanya.
Kupersembahkan skiripsi ini buat Ayahanda tercinta Mustafa dan
Ibunda tercinta Fahirah yang selama ini dengan penuh kesabaran,
ketulusan serta kasih sayang dalam merawat, membimbing, dan
membesarkan penulis serta senantiasa memberikan dukungan, semangat,
doa serta pengorbanannya yang dilakukan tak ternilai harganya.

RIWAYAT PENULIS
Nama lengkap Hasriany. Lahir di Ujung
Pandang pada tanggal 28 Agustus 1991.
Anak bungsu dari enam bersaudara dari
pasangan Mustafa dan Fahirah.
Pendidikan formal yang pernah dijalani adalah :
1. Sekolah Dasar Inpres Tangkala I(1998 –
2003)
2. Sekolah Lanjutan Tingkat Pertama Negeri 16 Makassar (2003 – 2006)
3. Sekolah Menengah Kejuruan Darussalam Makassar (2006-2009)
4. Pada Tahun 2009 terdaftar sebagai mahasiswa Teknologi Pertanian, Universitas
Hasanuddin Makassar melalui jalur SPMB Program Strata Satu (S1)
Selama menjalani studi penulis aktif dalam organisasi Himpunan Mahasiswa
Teknologi Pertanian (Himatepa UH).
DAFTAR ISI
DAFTAR ISI .................................................. ................................................. xi
DAFTAR TABEL .......................................... ................................................. xiii
DAFTAR GAMBAR ...................................... ................................................. xiv
DAFTAR LAMPIRAN ................................... ................................................. xv
I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang ................................... ................................................. 1
B. Rumusan Masalah ............................. ................................................. 4
C. Tujuan Penelitian ............................... ................................................. 5
D. Manfaat Penelitian ............................. ................................................. 5
II. TINJAUAN PUSTAKA

A. Enzim ................................................. ................................................. 6
B. Selulase (E.C.3.2.1) ........................... ................................................. 8
C. Trichoderma Viride ............................. ................................................. 13
D. Aspergillus Niger ................................ ................................................. 14
E. Fermentasi Media Padat (Solid State Fermentation ............................. 15
F. Komposisi Media ................................ ................................................. 19
F.1. Kulit Kakao .................................. ................................................. 19
F.2. Dedak.......................................... ................................................. 20
III. METODOLOGI PENELITIAN

A. Waktu dan Tempat ............................. ................................................. 22
B. Alat dan Bahan ................................... ................................................. 22
C. Prosedur Penelitian ............................ ................................................. 23
D. Perlakuan Penelitian .......................... ................................................. 27
E. Pengolahan Data ............................... ................................................. 28
F. Parameter Pengamatan ..................... ................................................. 28
G. Prosedur Analisa ................................ ................................................. 29
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Analisa Awal Substrat Pertumbuhan Jamur ......................................... 36
1. Kadar Air ................................... ................................................. 36
2. Kandungan Gula ....................... ................................................. 36
3. Total Protein ............................. ................................................. 37
B. Isolasi Mikroba ................................... ................................................. 38
C. Penambahan Larutan Mineral (Penentuan Kondisi Pertumbuhan
jamur .................................................. ................................................. 38
D. Evolusi Berat Kering ........................... ................................................. 39
E. Analisa Enzimatik ................................ ................................................. 40
1. Total Selulase ................................ ................................................. 40
2. Endoglukanase .............................. ................................................. 43
V. KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan ........................................ ................................................. 48
B. Saran.................................................. ................................................. 48
DAFTAR PUSTAKA ..................................... ................................................. 49

LAMPIRAN ................................................... ................................................. 53
DAFTAR TABEL
NO Judul Halaman
1 Enzim yang dihasilkan mikroba dan aplikasinya 7
2 Metode yang digunakan untuk menentukan 11
aktivitas enzim selulase
3 Komposisi Kimia kulit buah kakao 20
4 Kandungan zat gizi dedak padi 21
5 Komposisi subtrat media fermentasi 26
6 Matriks perlakuan penelitian 28
DAFTAR GAMBAR
No Judul Halaman
1 Pengelompokkan enzim selulase berdasarkan 9
spesifikasi substrat
2 Tahapan Hidrolisis Selulase 10
3 Diagram Alir Penelitian 35
4 Diagram Alir Pembuatan Larutan Spora 36
5 Penurunan berat kering media fermentasi oleh 39
kultur trichoderma viride
6 Penurunan berat kering media fermentasi oleh 39
kultur aspergillus niger
7 Hubungan Suhu dan Waktu Pemanasan Media 41
Serta Waktu Inkubasi terhadap Aktivtas Total
Selulase
8 Pengaruh lama inkubasi terhadap aktivitas 44
endoglukanase
9 Shaker substrat 63
10 Penyaringan substrat 63
12 Perendaman dalam air es 64
DAFTAR LAMPIRAN
No Judul Halaman
1 Hasil Pengukuran Berat Kering Media Fermentasi 53
2 Kurva Standar Aktivitas Enzim Selulase 54
3 Rumus Perhitungan Aktivitas Enzim Selulase 55
4a Tabel Hasil Analisa Total Selulase dari Kultur 55
Trichoderma Viride
4b Tabel Hasil Analisa Sidik Ragam Aktivitas Total 55
Selulase dari kultur Trichoderma Viride
4c Uji Lanjutan BJND Pengaruh Suhu dan Lama 56
Pemanasan terhadap Aktivitas Total Selulase dari
kultur Trichoderma Viride
4d Uji Lanjutan BJND Pengaruh Lama Inkubasi 56
Aktivitas Total Selulase dari kultur Trichoderma
Viride
4e Uji Lanjutan BJND Analisa Pengaruh Interaksi Suhu 56
dan Lama Pemanasan dan Lama Inkubasi Aktivitas
Total Selulase dari kultur Trichoderma Viride
5a Tabel Hasil Analisa Total Selulase dari Kultur 57
Aspergillus Niger
5b Tabel Hasil Analisa Sidik Ragam Aktivitas Total 57
Selulase dari kultur Aspergillus Niger
Pemanasan terhadap Aktivitas Total Selulase dari
kultur Aspergillus Niger
Aktivitas Total Selulase dari kultur Aspergillus Niger
Total Selulase dari kultur Aspergillus Niger
6a Tabel Hasil Analisa aktivitas endoglukanase dari 59
Kultur Trichoderma Viride
6b Tabel Hasil Analisa Sidik Ragam Aktivitas 59
endoglukanase dari kultur Trichoderma Viride
Pemanasan terhadap Aktivitas endoglukanase dari
kultur Trichoderma Viride
Aktivitas endoglukanase dari kultur Trichoderma
Viride
endoglukanase dari kultur Trichoderma Viride
7a Tabel Hasil Analisa endoglukanase dari Kultur 61
Aspergillus Niger
7b Tabel Hasil Analisa Sidik Ragam Aktivitas 61
endoglukanase dari kultur Aspergillus Niger
Pemanasan terhadap Aktivitas endoglukanase dari
kultur Aspergillus Niger
Aktivitas endoglukanase dari kultur Aspergillus
Niger
7e Uji Lanjutan BJND Analisa Pengaruh Interaksi Suhu dan 62
Lama Pemanasan dan Lama Inkubasi Aktivitas
endoglukanase dari kultur Aspergillus Niger
I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Di Indonesia Kakao adalah tanaman yang mempunyai nilai
ekonomi yang tinggi, sebagai komoditi ekspor. Namun tanaman
tersebut mempunyai limbah yang sangat tinggi terutama pada kulit
buahnya. Sehingga perlu dilakukan penanganan karena kulit kakao
mengandung gula pereduksi 4,80 %, protein 1,87 %, lemak 0,32 %,
pektin 4,80 %, serat kasar 26,81 %, karena kandungan kulit kakao
yang begitu banyak sehingga kulit kakao tersebut dapat dimanfaatkan
menjadi bahan yang bernilai ekonomi (Pahlevi, 1987).
Dedak merupakan limbah yang di hasilkan dari pabrik
penggilingan beras, dimana limbah ini biasanya dimanfaaatkan untuk
pakan ternak,karena kandungan dari dedak yang yang terdiri dari
protein 12,9%, lemak 13 %, serat 11,4 %, kalsium 0,07 %, Phospor
0,21 % magnesium 0,22 % sehingga menjadi sumber nutrisi bagi
tenak.
Fermentasi media padat merupakan suatu proses di mana
produk fermentasi kasar digunakan secara langsung sebagai sumber
enzim. Dimana fermentasi media padat memiliki kebutuhan energi
lebih rendah dibanding dengan fermentasi media cair dan
produktivitasnya lebih tinggi. Dalam fermentasi media padat melibatkan
mikroorganisme pada substrat yang lembab atau kadar air yang
rendah (Murty et all). Dalam meproduksi enzim ada baiknya

menggunakan mikroorganisme karena mikroorganisme dapat
memproduksi enzim lebih dari satu jenis enzim. Media partumbahan
mikroorganisme digunakan dalam fermentasi media padat ini adalah
kulit kakao dan dedak padi karena dalam kulit kakao terdapat karbon
dan nitrogen yang dapat dipenuhi untuk pertumbuhan mikrooganisme
selama proses fermentasi berlangsung. Selain karbon dan nitrogen
perlunya juga penambahan mineral dan garam-garam ke dalam
fermentasi tersebut.
Mikroorganisme adalah sumber enzim yang paling banyak
digunakan dibandingkan dengan tanaman dan hewan. Sebagai
sumber enzim, mikroorganisme lebih menguntungkan karena
pertumbuhannya cepat, dapat tumbuh pada substrat yang murah, lebih
mudah ditingkatkan hasilnya melalui pengaturan kondisi pertumbuhan
dan rekayasa genetik, serta mampu menghasilkan enzim lebih dari
satu jenis enzim. Beberapa mikroorganisme (Kapang) yang dapat
mendegradasi bahan-bahan yang mengandung selulosa melalui
aktivitas metabolisme dan ditumbuhkan ke dalam media pertumbuhan
diantaranya adalah Trichoderma viride dan Aspergillus niger.
Mikroorganisme (kapang) membutuhkan media pertumbuhan
yang mengandung C,N dan Mineral. Media pertumbuhan yang dapat
memenuhi kebutuhan nutrisi C, N dan mineral yang baik bagi
pertumbuhan kapang dapat diperoleh dari kulit kakao dan dedak padi
sebagai sumber C,N, dan mineral dengan tingkat kelembaban

(kadar air) yang relative rendah. Sehingga mempunyai potensi yang
tinggi untuk dimanfaatkan sebagai media pertumbuhan mikroba.
Enzim sangat dibutuhkan dalam industri. Salah satu enzim yang
banyak digunakan dalam industri adalah enzim selulase. Enzim
selulase dalam industri pangan digunakan untuk melembutkan
sayur-sayuran, mengeluarkan kulit dari biji-bijian seperti gandum,
mengeluarkan agar-agar dari rumput laut dengan menguraikan dinding
sel daun rumput (Beg et al, 2001). Karena peranannya yang sangat
penting, ada baiknya diproduksi enzim selulase dengan harga yang
murah karena enzim biasanya dijual dengan harga yang relatif mahal.
Enzim berdasarkan keberadaannya dibagi menjadi dua yaitu
enzim konstitutif dan induktif. Enzim konstitutif ialah enzim yang
dibentuk terus-menerus oleh sel tanpa peduli apakah substratnya ada
atau tidak sedangkan enzim induktif (enzim adaptif) ialah enzim yang
dibentuk karena adanya rangsangan substrat atau senyawa tertentu
yang lain (Timotius,1982).
Penelitian ini bertujuan untuk memproduksi enzim selulase dari
substrat kulit kakao dan dedak padi dengan menggunakan metode
fermentasi padat dengan isolate kapang Trichoderma viride dan
Aspergillus niger.
B. Rumusan Masalah
Indonesia merupakan negara penghasil kakao terbesar
khususnya di Sulawesi selatan, sehingga limbah kulit kakao dari
perkebunan kakao rakyat biasa berlimpah yang hanya dimanfaatkan
sebagai pupuk di perkebunan kakao itu sendiri dan dimanfaatkan
sebagai pakan ternak. Salah satu manfaat kulit kakao dapat digunakan
sebagai media atau substrat untuk memproduksi enzim selulase
dengan menggunakan mikroorganisme (Trichoderma viride dan
Aspergillus niger) dengan sistem fermentasi padat atau Solid State
Fermentation (SSF), yaitu metode fermentasi dengan kondisi substrat
yang tidak larut dan tidak terdapat air bebas di sekitar permukaan
media. Selain kulit kakao ditambahkan pula dedak padi sebagai
sumber nitrogen untuk pertumbuhan kapang, kulit kakao dan dedak
padi mengandung selulosa sehingga dapat menginduksi enzim yang
diinginkan dalam penelitian ini yaitu enzim selulase. Di dalam
memproduksi enzim dengan memanfaatkan mikroorganisme
dibutuhkan lingkungan media atau substrat yang sesuai untuk
pertumbuhan jamur sehingga perlu dikaji perbandingan substrat antara
kulit kakao dan dedak padi yang sesuai untuk pertumbuhan
mikroorganisme. Agar nutrisi terutama karbon dan nitrogen pada kulit
kakao dan dedak padi dapat digunakan secara optimum oleh kapang
maka perlu dikaji mengenai suhu dan lama pemanasan terhadap
substrat yang digunakan, selain dari suhu pemanasan perlu juga dikaji
mengenai inkubasi terbaik untuk produksi enzim selulase.
C. Tujuan Penelitian
Tujuan dari penelitian ini adalah sebagai berikut:
1. Untuk mengetahui perbandingan substrat (kulit kakao dan dedak
padi) yang baik untuk pertumbuhan kapang.
2. Untuk mempelajari suhu dan lama pemanasan substrat yang baik
untuk pertumbuhan kapang
3. Untuk mempelajari lama waktu fermentasi dalam memproduksi
enzim selulase
4. Menguji aktivitas enzim sellulosa yang dihasilka.
D. Manfaat Penelitian
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan nilai ekonomi
terhadap limbah kulit kakao serta memberikan informasi bagaimana
cara memproduksi enzim selulase oleh kapang Trichoderma viride dan
Aspergillus niger melalui fermentasi padat.

II. TINJAUAN PUSTAKA
A. Enzim
Enzim digunakan dalam sebagian besar sektor industri,
terutama industri makanan. Selain itu, enzim juga digunakan dalam
industri deterjen, farmasi, dan tekstil. Lebih dari 2000 enzim telah
diisolasi, tetapi hanya 14 enzim yang diproduksi secara komersial.
Kebanyakan dari enzim ini adalah hidrolase, misalnya amilase,
protease, pektinase, dan selulase. Enzim penting lainnya adalah
glukosa isomerase dan glukosa oksidase. Alasan digunakannya enzim
dalam industri adalah enzim mempunyai kelebihan antara lain :
 Kemampuan katalitik yang tinggi, mencapai 109-1012 kali laju reaksi
non-aktivitas enzim
 Spesifikasi substrat yang tinggi
 Reaksi dapat dilakukan pada kondisi yang lunak, yaitu pada tekanan
dan temperatur rendah (Fowler, 1988)
Enzim dibedakan menjadi dua eksoenzim dan endoenzim
berdasarkan tempat kerjanya, ditinjau dari sel yang membentuknya .
Ekoenzim adalah enzim yang aktivitasnya diluar sel sedangkan
endoenzim adalah enzim yang aktivtasnya didalam sel. Selain
ekoenzim dan endoenzim, dikenal juga enzim konstitutif dan induktif.
Enzim konstitutif ialah enzim yang dibentuk terus-menerus oleh sel
tanpa peduli apakah substratnya ada atau tidak sedangkan enzim

induktif (enzim adaptif) ialah enzim yang dibentuk karena adanya
rangsangan substrat atau senyawa tertentu yang lain misalnyan
pembentukan enzim beta-galaktosida pada Escherichia coli yang
induksi oleh laktosa sebagai substratnya. Tetapi, ada senyawa lain
juga yang dapat menginduksi enzim tersebut walaupun tidak
meruapakn substratnya, yaitu melibiosa. Tanpa adanya laktosa atau
melibiosa, maka enzim beta-galaktsida tidak disintesis, tetapi
sintesisnya akan dimulai bila ditambahkan laktosa atau
melibiosa (Timotius,1982).
Enzim yang dapat dihasilkan oleh beberapa mikroorganisme
dan pengaplikasinnya dalam industri menurut fowler, (1988) dapat
dilihat pada tabel berikut:
Tabel 01. Beberapa enzim yang dihasilkan mikroba dan aplikasinya

Enzim Sumber Aplikasi
Amylase Bacillus subtilis Tekstil, pelarutan pati,
Aspergillus oryzae produksi glukosa
Penicillium roqueforti
Aspergillus niger
Penicillinase Bacillus subtilis Degradasi penisilin
Invertase Aspergillus oryzae Industri permen
Saccharomyces
cerevisiae
Selulase Aspergillus niger Pengurang viskositas,
Trichoderma sp. membantu sistem
pencernaan
Pektinase Aspergillus niger Klarifikasi wine dan
jus buah
Protease Clostridium sp. Pelunak, membantu
sistem pencernaan
Sumber: Fowler, 1988.
Kebanyakan enzim mikroba yang digunakan secara komersial
adalah ekstraseluler, dimana enzim diproduksi dalam sel kemudian
dikeluarkan atau berdifusi dari ke enam enzim tersebut Amylase,
penicilinase, invertase, selulase, pektinase, dan protease sehingga
memungkinkan untuk direcovery. Seleksi organisme produser adalah
kunci dalam pengembangan proses sistem mikrobial.
Berikut ini hal-hal yang perlu diperhatikan dalam memilih
mikroorganisme :
 Sumber organisme stabil
 Mudah tumbuh dan berkembang sehingga biaya produksi rendah
 Produktivitas enzim tinggi
 Tidak mengeluarkan racun
Dari semua hal tersebut, yang paling penting adalah stabilitas
strain dan produktivitas enzim yang tinggi (Fowler, 1988).
B. Selulase (E.C. 3.2.1)
Enzim selulase merupakan enzim yang dapat memutuskan
ikatan glukosida β-1,4 di dalam selulosa. Enzim terdiri dari
komponen enzim yaitu selobiohidrolase (CBH), endoglukanase dan
p-glukosidase yang bekerja secara sinergi memecah selulosa di
alam (Anonim, 1999).
Selulase merupakan suatu komplek enzim yang terdiri dari
beberapa enzim yang bekerja bertahap atau bersama-sama
menguraikan selulosa menjadi glukosa. Ada empat kelompok enzim

utama yang menyusun selulase berdasarkan spesifitas substrat
masing-masing enzim (Enari, 1983).
Gambar 01. Pengelompokan enzim selulase berdasarkan spesifitas

substrat
Selulase merupakan kumpulan dari beberapa enzim yang
bekerja bersama untuk hidrolisis selulosa. Mikroorganisme tertentu
menghasilkan partikel yang dinamakan selulosom. Partikel ilmiah
yang akan terdisintegrasi menjadi enzim-enzim, yang secara sinergis
mendegradasi selulosa (Belitz dkk, 2008). Sedikitnya ada tiga enzim
yang terlibat dalam mendegradasi atau hidrolisis selulosa, yaitu endo
β-glukanase, ekso β-glukanase, dan β-glukosidase.
Reaksi hidrolisis selulosa oleh selulase sebagai berikut:

Tahapan-tahapan hidrolisis selulosa oleh selulase dapat
dilihat pada gambar 02 faktor C1 sangat diinhibasi oleh produknya
sehingga selobiase diperlukan agar hidrolisis selulosa dapat
berlangsung. Selobiase juga diinhibasi oleh produknya, hidrolisis
selulosa hanya dapat dilakukan jika tersedia selobiase dalam jumlah
besar atau glukosa yang terbentuk segera dipisahkan.
Gambar 02. Tahapan hidrolisis selulosa (Sumber Ghori, 2001)

Metode yang biasa digunakan untuk penentuan aktivitas
enzim selulase tersaji pada tabel 02 dibawah ini, (Enari, 1983).
Tabel 02. Metode yang digunakan untuk menentukan aktivitas enzim

selulase
Aktivitas enzim Substrat Produk yang diukur
yang diukur
Total selulase Selulosa kristralin: - gula reduksi
- kapas - glukosa
- avicel
- kertas saring
Aksi sinergistik - kapas - gula reduksi

dari - avicel - penurunan berat
selobiohidrolase - hidroselulase - penurunan optical
dan - dyed avicel density
endoglukanase - dyed kertas - warna dari olisakarida
saring dapat larut
endoglukanase
- Carboxy Methyl - gula reduksi
Cellulose (CMC) - penurunan viskositas
dan Hidroxy
Ethyl Cellulose
selobiohidrolase (HEC)
- gula reduksi
- Kapas
- Avicel
- Selulosa amorf
β- Glukosidase - Selobiosa
- glukosa
- P-nitrofenil β-D- - p-nitrofenol
glukosa - saligenin
- Salisin
Sumber : Enari (1983)
Menurut Tsao et al. (1978) dan Enari (1983), pengukuran
aktivitas total selulase dilakukan untuk mengukur aktivitas campuran
enzim yang menghidrolisis bahan yang mengandung selulosa dan
menghasilkan glukosa sebagai produk akhir. Aktivitas selulase
menggambarkan pengaruh sinergisme antara enzim yang berbedah

dan pengaruh hambatan dari produk akhir. Substrat yang digunakan
adalah selulosa tak larut, sehingga diperlukan waktu reaksi yang cukup
lama agar enzim dapat berdifusi ke dalam serta selulosa.
Substrat yang digunakan untuk penentuan aktivitas total
selulase adalah kertas saring (Whatman no 1) dan avicel, sedangkan
produk yang diukur adalah glukosa. Enzim yang menghidrolisis subtrat
ini dikenal dengan nama Filter Paperase (FP-ase) dan aviselase.
Pengukuran aktivitas enzim selulase pada substrat tergantung pada
enzim β-glukosidase yang ada sehingga untuk menghindaari kesalahan
interprestasi pengukuran FP-ase, pengukuran aktivitas β-glukosidase
perlu dilakukan . Menurunnya produksi enzim akibat terhambatnya
produksi enzim oleh glukosa yang dihasilkannya. Hal ini disebut
dengan efek glukosa dimana glukosa umumnya menghambat
pembentukan enzim katabolit (Gong dan Tsao, 1979)
Menurut Mandels et all (1976) aktivitas enzim FP-ase
dinyatakan dengan banyaknya gula pereduksi (sebagai glukosa) yang
dihasilkan selama esei. Aktivitas FP-ase per unit volume akan
berkurang dengan bertambahnya konsentrasi enzim dan waktu
inkubasi serta akan meningkat dengan meningkatnya konsentrasi
selulosa. Karbosimetilselulosa (CMC) adalah turunan selulosa dapat
larut yang digunakan sebagai substrat bagi enzim endoselulase. Enzim
yang dapat menghidrolisis CMC sering disebut juga sebagai
karboksimetilselulase (CMC-ase) (Gong dan Tsao, 1979).

Menurut Lindner et al (1983), kelinieran hubungan antara gula
pereduksi yang dihasilkan dengan waktu hidrolisis terutama
dipengaruhi oleh konsentrasi enzim, derajat substansi CMC dan
kepekaan pereaksi penentu gula pereduksi. Poulsen dan Petersen
(1985) menerangkan bahwa semakin besar konsentrasi enzim yang
digunakan maka semakin tidak linier grafik hubungan antara waktu esei
dengan gula pereduksi yang dihasilkan selama hidrolisis. Hal ini
disebabkan terbatasnya substrat yang dapat dihidrolisis oleh enzim.
Untuk mendapatkan hasil pengujian yang baik walaupun substrat CMC
bersifat dapat larut disarankan untuk menggunakan enzim dengan
faktor pengenceran setinggi mungkin. Karboksimeti selulosa
merupakan turunan dari selulosa dengan derajat substitusi yang dapat
diatur besarnya tergantung kepada tujuan penggunaanya (Nicholson
dan Merrits, 1983).
C. Trichoderma Viride
Trichoderma viride adalah kapang berfilamen yang sangat
dikenal sebagai organisme selulolitik dan menghasilkan enzim-enzim
selullolitik, termasuk enzim selobiohidrolase, endoglukanase dan
ß-glukosidase (Deacon, 1997). Kelebihan dari Trichoderma viride selain
menghasilkan enzim selulolitik yang lengkap, juga menghasilkan enzim
xyloglukanolitik (Tribak et al., 2002). Keberadaan enzim ini akan
semakin mempermudah enzim selulolitik dalam memecah selulosa.

Trichoderma viride merupakan jamur yang potensial
memproduksi selulase dalam jumlah yang relative banyak untuk
mendegradasi selulase sehingga mudah dicerna oleh ternak. Enzim ini
berfungsi sebagai agen pengurai yang spesifik untuk menghidrolisis
ikatan kimia dari selulase dan turunannya. Selain itu Trichoderma viride
mempunyai kemampuan meningkatkan protein bahan pakan dan pada
bahan berselulosa dapat merangsang keluarnya enzim selulase
(Poesponegoro, 1976).
D. Aspergillus Niger
Aspergillus niger merupakan salah satu kapang genus
Aspergillus, family Moniliaceae,ordo Moniliales, dan subdivisi
Eumycophyta yang bersifat aerobic sehingga dalam
pertumbuhannya memerlukan oksigen dalam jumlah yang cukup
dan untuk pertumbuhan memerlukan suhu optimum
sekitar 35 – 37oC (Fraizier and Westhoff, 1981).
Untuk pertumbuhan Aspergillus niger menggunakan nutrisi
yang ada di sekitarnya misalnya molekul-molekul sederhana seperti
gula yang terlarut dapat langsung diserap oleh hifa, tetapi
polimer-polimer seperti pati dan sellulosa akan dipecah terlebih dahulu
oleh enzim-enzim ekstraseluler yang dihasilkannya menjadi molekul
sederhana yang diserap (Moore and Landacker, 1983).

Aspergillus niger merupakan jenis kapang yang menghasilkan
banyak macam enzim ekstraseluler, seperti α-amilase, glukoamilase,
β-glukosidase dan sellulase (Saha, 1991). Kompiang et all (1995)
menyatakan bahwa Aspergillus niger memproduksi enzim
pendegradasi pati yang akan memecah pati menjadi glukosa yang
selanjutnya digunakan sebagai sumber karbon oleh kapang selama
proses fermentasi. Aspergillus niger juga merupakan kapang aerobic
yang dapat menghasilkan enzim sellulase untuk membantu pencernaan
dan memperbaiki efisiensi penggunaan pakan.
E. Fermentasi Media Padat (Solid State Fermetation)
Fermentasi berasal dari kata latin “fervere” yang berarti
mendidih yang menunjukkan adanya aktivitas pada ekstrak
buah-buahan atau larutan malt biji-bijian. Kelihatan seperti mendidih
karena terbentuknya gelembung-gelembung CO2 akibat dari proses
katabolisme secara anaerobik dari gula yang ada dalam
ekstrak (Retno Wijayanto & Tri Wuri Hadayani, 2008).
Menurut jenis mediumnya, proses fermentasi dibagi menjadi
dua golongan, yaitu fermentasi medium padat dan medium cair.
Fermentasi medium padat adalah proses fermentasi yang substratnya
tidak larut dan tidak mengandung air bebas, tetapi cukup mengandung
air untuk keperluan mikroorganisme. Sebaliknya fermentasi medium
cair adalah proses fermentasi yang substratnya larut atau tersuspensi
dalam fase cair (Chahal, 1985).

Fermentasi medium padat secara alami umumnya berlangsung
pada medium dengan kadar air berkisar antara 60 sampai 80 %,
karena pada keadaan ini medium mengandung air yang cukup untuk
pertumbuhan mikroba (Aidao et al,1982).
Pada fermentasi padat ini, substrat fermentasi dicampur
dengan cairan yaitu air atau air dengan kandungan mineral tertentu,
biasanya sampai 50 %, sehingga diperoleh substrat semi padat. Pada
fermentasi ini tidak semua substrat dapat dicapai oleh mikroba.
Biasanya mikroba tumbuh pada daerah tertentu yaitu permukaan
sehingga bagian substrat ditengah atau dibawah biasanya tak
ditumbuhi mikroba (Thenzawidjaja, 1989).
Menurut Frost dan Moss (1987), fermentasi padat memiliki
beberapa kelebihan disbanding fermentasi cair ,yaitu :
- Medium yang digunakan relative sederhana
- Ruang yang dibutuhkan relative kecil dibandingkan dengan
rendemen yang dihasilkan.
- Ekstraksi enzim lebih mudah, yaitu dengan menambahkan pelarut
langsung.
- Kondisi tumbuh kapang mendekati keadaan yang biasa dijumpai di
alam
- Inokulasi dapat langsung dari spora tanpa melalui media inokulum.
- Rendahnya kadar air, yang memperkecil kemungkinan untuk
tumbuhnya bakteri yang tidak diinginkan.

Selain kelebihan-kelebihan tersebut, fermentasi padat juga
memiliki beberapa kekurangan (Frost dan Moss, 1987), yaitu:
- Hanya terbatas untuk pertumbuhan kapang saja
- Sukar mengukur beberapa parameter proses karena kultur kurang
homogen
- Sebagian substrat (kecuali beras) umumnya memerlukan pra-
perlakuan (misalnya delignifikasi).
Sistem fermentasi padat umumnya diidentikkan
dengan pertumbuhan mikroorganisme dalam partikel pada substrat
dalam berbagai variasi kadar air. Substrat padat bertindak sebagai
sumber karbon, nitrogen, mineral, dan faktor-faktor penunjang
pertumbuhan, dan memiliki kemampuan untuk menyerap air, untuk
pertumbuhan mikroba (M. Saban Tanyildizi dkk, 2007).
Nathalia (2011) berpendapat bahwa media fermentasi
biasanya diberikan perlakuan fisik berupa pemanasan dan
perendaman. Perlakuan fisik ini menyebabkan media terdegradasi .
Mikroorganisme yang tumbuh melalui sistem fermentasi padat
berada pada kondisi pertumbuhan di bawah habitat alaminya,
mikroorganisme tersebut dapat menghasilkan enzim dan metabolisme
yang lebih efisien dibandingkan dengan sistem fermentasi cair. Sistem
fermentasi padat memiliki lebih banyak manfaat dibandingkan dengan
sistem fermentasi cair, diantaranya tingkat produktivitasnya tinggi,
tekniknya sederhana, biaya investasi rendah, kebutuhan energi rendah,

jumlah air yang dibuang sedikit, recovery produknya lebih baik, dan
busa yang terbentuk sedikit. Sistem fermentasi padat ini dilaporkan
lebih cocok digunakan di negara-negara berkembang. Manfaat lain dari
sistem fermentasi padat adalah murah dan substratnya mudah didapat,
seperti produk pertanian dan industry
makanan (M. Saban Tanyildizi dkk, 2007).
Aktivitas biologis mikroba pada sistem fermentasi media padat
akan menurun bila kadar air media sekitar 12 %, sehingga semakin
mendekati nilai maka aktivitas mikroba akan semaki
tertahan (Troller, 1980).
Selama proses fermentasi berlangsung, selama itu juga berat
kering akan semakin menurun, penurunan berat kering ini karena
substrat dikonsumsi oleh mikroorganisme. Sehingga semakin
menurunnya berat kering maka pertumbuhan jamur pada media
fermentasi berlangsung (Purwoko, 2007).
Waktu fermentasi berpengaruh terhadap aktivitas enzim yang
dihasilkan, aktivitas enzim yang cenderung meningkat kemudia
menurun lagi disebabkan karena produksi enzim yang terhenti yang
disebabkan oleh mekanisme represi “feed back” yatiu gangguan
terhadap sisi aktif enzim oleh produk hasil degradasi (Rose, 1980).
F. Komposisi Media
Media fermentasi yang baik adalah media yang dapat
mensuplai kebutuhan unsur dasar-dasar sel mikroba. Unsur utama
penunjang pertumbuhan mikroba dan perkembangan mikroba adalah
senyawa karbon (C), Nitrogen (N), sulfur (S), dan
Phospor (P) (Hardjoko, 1989).
1. Kulit Kakao
Kulit kakao dapat dimanfaatkan sebagai campuran bahan
makanan ternak. Kandungan proteinnya mencapai 20,4%. Kulit kakao
jika dibenamkan dalam tanah akan meningkatkan jumlah hara yang
tersedia. Disamping itu, kulit kakao juga dapat digunakan sebagai
sumber gas bio, dan bahan dasar pembuat
pektin (Nasrullah dan A. Ella, 1993).
Kulit kakao adalah limbah agroindustri yang dihasilkan
tanaman kakao yang terdiri dari 74 % kulit buah, 2 % plasenta
dan 24 % biji. Hasil analisa proksimat mengandung 22 % protein
dan 3,9 % lemak (Nasrullah dan A. Ella, 1993). Hasil penelitian Ashadi
(1998) menunjukkan bahwa serat kasar kulit kakao
mengandung 20.11 % lignin, 31.25 % selulosa,
dan 48.64 % hemiselulosa. Kulit buah kakao terdiri dari plasenta,pulp.
Menurut Opeke (1984) bahwa kulit buah kakao itu 52-60 % dari buah.
Menurut Harjoauwito (1984) kulit buah kakao
mengandung 7.15 % pectin, sedangkan Opeke mengatakan 5.3 %.

Komposisi kimia kulit buah kakao menurut Pahlevi (1987)
sebagai berikut
Tabel. 03. Komposisi kimia kulit buah kakao

Komponen Persentase
Kadar air 14,37
Gula pereduksi 4,80
Protein kasar 1,87
Lemak 0,32
Pectin 4,80
Serat kasar 26,81
Lain-lain 47,01
Sumber : Pahlevi (1987)
2. Dedak
Dedak padi merupakan hasil samping dari pemisahan beras
dengan sekam (kulit gabah) pada gabah yang telah dikeringkan melaui
proses pemisahan dengan digiling tau ditumbuk yang dapat digunakan
sebagai pakan ternak. Proses pemisahan menjadi dedak ini akan
mendapatkan 10 % dedak padi, 50 % beras daan sisanya hasil ikutan
seperti butir beras, sekam dan sebagainya, akan tetapi persentase ini
tergantung pada umur dan varietas padi yang ditanam (Grist, 1972).
Hal ini juga didukung oleh produksi padi yang terus meningkat yaitu
mencapai 57 juta ton pada tahun 2007 sehingga perkiraan produksi
hasil samping dedak mencapai lebih dari 5 juta ton (BPS, 2008).
Hartadi dkk (1997) menyatakan bahwa dedak memiliki
kandungan lemak 14,1 %, protein kasar 13,8 %, sedangkan menurut
National Research Council (1994) dedak padi mengandung energi
metabolis sebesar 2100 kkal/kg, protein kasar 12,9 %, lemak 13 %,

serat kasar 11,4 %, Ca 0,07 %, P 0,21 % serta Mg 0,22 %. Enkaras
(2012) juga mengemukakan bahwa dedak padi mengandung selulosa
dan hemiselulosa sebanyak 7,5 %.
Dedak merupakan limbah dari penggilingan padi dan
merupakan sumber energi bagi ternak ayam. Kandungan nutrisinya
cukup baik, namun kandungan serat kasarnya tinggi (Rasyaf, 1994).
Kandungan zat nutrisi dedak dapat dilihat pada table berikut:
Tabel 04. kandungan zat gizi dedak

Komponen Jumlah
Kadar air (%) 9,70

Kadar protein (%) 13,30
Kadar lemak (%) 15,80
Kadar abu (%) 10,40
Karbohidrat
Total (%) 50,80
Serat (%) 11,80
Vitamin (mg/100)
Niacin 29,80
Thiamin 2,26
Riboflavin 0,29
Piridoksin 2,50
Mineral (mg/100 g)
Ca 76,000
P 1386,00
Fe 19,40
K 1495,00
Sumber : Houston & Kohler di dalam Widyawati (1990)
III. METODOLOGI PENELITIAN
A. Waktu dan Tempat
Penelitian ini dilaksanan pada bulan Januari 2013 sampai Juni
2013 di Labortorium Mikrobiologi dan Bioteknologi Pangan, Kimia
Analisa dan Pengawasan Mutu, Pengolahan Pangan, Program Studi
Ilmu dan Teknologi Pangan, Jurusan Teknologi Pertanian, dan
Laboratorium Terpadu Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas
Hasanuddin, Makassar.
B. Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah timbangan
analitik, erlemeyer, alat penangas, refrigerator, freezer, sentrifuge,
inkubator, autoklaf, spektrofotometer, mikroskop, magnetic stirer,
shaker, tabung reaksi, gelas ukur, labu takar, pingset, oven, timbangan
digital, pipet tetes, pipet volum, batang pengaduk, kain saring, oven,
pH-meter, laminar flow, hemacitometer, pipet ependolf.
Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah
Dedak, kulit kakao kering, Kultur jamur Trichoderma viride, Aspergillus
niger, PDA (Potato Dextro Agar), NaNO3, KH2PO4 KCL,
CaCl2.2H2O,FeSO4,Twin 80, pereaksi DNS (Dinitro Salicilic Acid),
kertas saring Whatman No 1, glukosa, Larutan CMC , buffer sitrat
acetat 50 mM pH 5, alkohol 95 %, aquadest, kapas, alumunium foil,
kapas, kertas label, air bersih, tissue roll.

C. Prosedur Penelitian
1. Penelitian Pendahuluan
Penelitian yang dilakukan terbagi atas dua, yaitu penelitian
pendahuluan dan penelitian utama. Penelitian pendahuluan meliputi
analisa awal komposisi substrat, percobaan penambahan air mineral
pada media fermentasi, perhitungan total spora dalam agar miring.
2. Penelitian Utama
Penelitian utama dilakukan dengan mengambil perlakuan
terbaik dari penelitian pendahuluan yang dijadikan acuan dalam
pembuatan media fermentasi dalam memproduksi enzim, selanjutnya
enzim tersebut dianalisa produktivitasnya dan evolusi berat kering.
D. Prosedur Kerja
1. Penyiapan alat dan bahan
1.1. Pencucian dan sterilisasi
1. Semua ala-alat gelas dibersihkan dengan sabun kemudian dicuci
dengan air bersih.
2. Alat-alat gelas yang sudah bersih dicuci dikeringkan dengan tissue
roll .
3. Untuk tabung reaksi yang telah dibilas kemudian dibungkus
dengan kertas dan setelah dibungtkus disterilkan dalam autoklaf
pada tekanan 1 atm (1210C) selama 15 menit.

1.2. Peremajaan Kultur Kapang
1. Ditimbang media PDA sebanyak 3 gr diencerkan dengan aquadest
sebanyak 100 ml dalam erlemeyer 250 ml
2. Didihkan PDA yang telah dilarutkan selama 15 menit atau sampai
dengan warna media bening
3. Ditutup dengan kapas erlemeyer yang berisi media setelah itu
disterilisasi pada autoclave pada tekanan 1 atm (121 0C) selama
15 menit
4. Dimasukkan kedalam tabung reaksi yang sudah disterilkan dengan
tinggi 1/3 tabung lalu ditutup dengan kapas dan alumunium foil.
5. Disimpan tabung reaksi dengan posisi miring
2. Persiapan bahan penelitian
2.1. Pengambilan bahan substrat pertumbuhan jamur
Bahan substrat pertumbuhan jamur terdiri dari kulit buah kakao
yang berasal dari limbah kakao perkebunan rakyat di Kabupaten
Soppeng. Dedak padi berasal dari limbah hasil penggilingan padi
rakyat di Jl. Laikang, Sudiang, Makassar.
2.2. Pengeringan bahan media pertumbuhan
1. Kulit kakao dipotong menjadi empat bagian memanjang.
2. Direndam selama 1 jam kemudian ditiriskan, dilakuakan sebanyak
3 kali untuk menghilangkan getah pada kulit kakao tersebut
3. Selanjutnya kulit kakao dikeringkan dalam oven blower pada suhu
600C mendapatkan kadar air keseimbangan.

4. Selanjutnya kulit kakao dipotong-potong (dicincang) kira-kira
dengan ukuran 1 x 1 cm.
2.3. Analisa awal substrat
Kulit kakao yang telah dikeringkan, dianalisa komposisi
awalnya. Analisa yang dilakukan meliputi kadar air, kadar protein dan
total gula. Analisa yang dilakukan pada dedak padi meliputi kadar
protein dan total gula.
2.4. Penyiapan biakan murni
Mikroorganisme yang digunakan adalah Trichoderma viride
dan Aspergillus niger yang berasal dari Laboratorium Mikrobilogi
pangan , Ilmu dan Teknologi Pangan, Jurusan Teknologi Pertanian,
Fakultas Pertanian, Universitas Hasanuddin, Makassar. diremajakan
pada media agar miring PDA yang diinkubasi pada suhu 30 0C selama
3 x 24 jam.
3. Produksi enzim
4.1. Pembuatan Media Produksi Enzim
Medium Produksi : Kulit kakao, dedak, larutan mineral terdiri
dari: NaNO3 20 gram, KH2PO4 3 gram, MgSO4 0,5 gram, KCL 0,5
gram, CaCl2.2H2O 0,2 gram, FeSO4.7H2O 0,01 gram. Semua bahan
dimasukkan dalam erlemeyer volume 250 ml, kemudian diberi
perlakuan yaitu disterilkan dalam autoklaf selama 30 menit pada suhu
1210C, pemanasan 1000C selama 60 menit, dan pemanasan 1000C
selama 90 menit. Komposisi media dapat dilihat pada tabel berikut:

Table 07. Komposisi Substrat Media Fermentasi
No. Kulit Dedak Larutan
Proporsi kakao mineral
Media
1 5 gram 2 gram 15 ml
4.2. Penyiapan suspensi spora
Suspensi spora disiapkan yaitu dengan menambahkan dengan
aquadest steril ke dalam media agar miring dan permukaan agar yang
ditumbuhi spora digosok perlahan-lahan dengan jarum inokulasi steril.
Jumlah spora dihitung dengan menggunakan cytometer di bawah
mikroskop.
4.3. Produksi Enzim
Larutan spora yang didapatkan kemudian diinokulasi pada
medium produksi sebanyak 1 ml dan difermentasi pada suhu 30 0C
selama 4 x 24 jam, kemudian kultur dihentikan dengan larutan twin 80
0,1 % sebanyak 60 ml, selama fermentasi media dilakukan perhitungan
berat kering kultur setiap 24 jam, demikian pula uji aktivitas enzim
filtrate paperase dan endoglukanase.
5. Isolasi Enzim
Setelah kultur dihentikan selanjutnya dishaker selama 15 menit
dengan kecepatan 200 rpm, kemudian di saring. Filtrat enzim hasil
saringan disentrifus dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit.
Filtrat yang mengandung enzim tersebut dimasukkan kedaalam botol
tertutup dan disimpan dalam freezer untuk dibekukan pada suhu -200C.
D. Perlakuan Penelitian
Enzim selulase yang diperoleh dari kultur Trichoderma viride
dan Aspergillus niger.
A. Suhu Pemanasan dan Waktu Pemanasan Media
A1 = Pemanasan suhu 121 0C selama 30 menit
A2= Pemanasan suhu 100 0C selama 60 menit
A3= Pemanasan suhu 100 0C selama 90 menit
B . Lama Inkubasi
B1 = 24 jam
B2 = 48 jam
B3 = 72 jam
B4 = 96 jam
E. Pengolahan Data
Pengolahan data dilakukan dengan Rancangan Acak Lengkap
(RAL) pola faktorial dengan dua kali ulangan.
Table 06. Matriks Perlakuan Penelitian

A A1 (Pemanasan A1 (Pemanasan A1 (Pemanasan
1210C selama 1000C selama 1000C selama
B 30 menit) 60 menit) 90 menit)
B1 (Inkubasi Pemanasan Pemanasan Pemanasan

24 jam) 1210C selama 1000C selama 1000C selama
30 menit + 60 menit + 90 menit +
inkubasi 24 jam inkubasi 24 jam inkubasi 24 jam
F. Parameter Pengamatan
Parameter pengamatan yang dilakukan pada penelitian ini
adalah :
1. Pengamatan awal susbtrat pertumbuhan mikroorganisme yaitu kadar
air, kadar protein,dan total gula.
2. Evolusi berat kering
3. Aktivitas enzimatik
G. Prosedur Analisa
1. Kadar Air
a. Cawan kosong dikeringkan selama 15 menit dan didinginkan
dalam desikator, kemudian ditimbang.
b. Sampel diitimbang sebanyak 2 gram di dalam cawan.
c. Cawan beserta isisnya dimasukkan dalam oven pada suhu
1000C-1020C selama 3 jam. Hindarkan kontak antara cawan
dengan dinding oven.
d. Pindahkan cawan dari oven kedalam desikator, lalu dinginkan.
Setelah dingin timbang kembali.
e. Keringkan kembali ke dalam oven sampai diperoleh berat yang
tetap. Kadar air sampel dihitung dengan menggunakan rumus:
Berat sampel setelah dikeringkan (gram) : W1
Kehilangan berat (gram) : W2
W2
Persen kadar air (dry basis) : x100%
W1
2. Protein
a. Pindahkan 10 ml susu atau larutan protein ke dalam erlemeyer
125 ml dan tambahkan 20 ml aquadest dan 0,4 ml larutan jenuh
(K-oksalat : Air = 1:3. Perhatian: K-oksalat beracun) dan 1 ml
phenolphthalein 1 %. Diamkan selama 2 menit.
b. Titrasilah larutan contoh dengan 0,1 n NaOH sampai mencapai
warna seperti standar di bawah ini, atau sampai warna merah

jambu.
c. Warna standar : 10 ml susu + 10 ml aquadest + 0,4 ml K-oksalat
jenuh + 1 tetes 0,01 % indikator rosanilin – chlorida.
d. Setelah warna tercapai, tambahkan 2 ml larutan formaldehid 40
% dan titrasilah kembali dengan larutan NaOH sampai seperti
warna standar tercapai. Catatlah titrasi kedua ini.
e. Buatlah titrasi blanko yang terdiri daro: 20 ml aquadest + 0,4 ml
larutan K-oksalat + 1 ml indikator phenolphtalein + 2 ml larutan
formaldehid, dan titrasilah dengan larutan NaOH.
f. Titrasi terkoreksi yaitu titrasi kedua dikurangi blanko merupakan
titrasi formol. Untuk mengetahui % protein, harus dibuat
percobaan serupa dengan menggunakan larutan yang telah
diketahui kadar protein (misalnya dengan cara Kjeldhal)
g. Kadar protein sampel dapat dihitung dengan rumus :
Titrasi _ formol
h. % N = N .NaOHx14.008
gram(bahan) x10
3. Total gula Metode Luff Schrool (Sudarmadji dkk, 1997)
a. Ditimbang dengan teliti kurang lebih 0,5 gram sampel kedalam
tabung reaksi 50 ml bertutup.
b. Ditambahkan 40 ml HCL 3 % kemudian direbus dalam air
mendidih selama 3 jam.
c. Didinginkan, kemudian ditambahkan 2 tetes indikator
Phenolphtalin (PP), kemudian ditambahkan NaOH 30 % tetes

demi tetes hingga netral (larutan berubah menjadi merah muda).
d. Diteteskan sedikit HCl 3 % hingga warna kembali seperti semula.
e. Dituangkan kedalam labu ukur 250 ml sambil dibilas dengan air
hingga tanda garis, kemudian disaring. Hasil saringannya dipipet
sebanyak 1 ml kedalam Erlemeyer 250 ml.
f. Ditambahkan 10 ml larutan Luff Schrool dengan pipet gondok dan
25 ml air suling beberapa butir batu didih.
g. Dipanaskan memakai pendingin tegak, diusahakan mendidih
dalam 3 menit, kemudian didihkkan terus selama 10 menit.
h. Didinginkan cepat (dilakukan dalam bak berisi es)
i. Setelah dingin ditambahkan 10 ml larutan KI 20 % dan 15 ml
H2SO4 25 % dan perlahan-lahan.
j. Dititrasi secepatnya dengan larutan tio 0,1 N dengan kanji 0,5 %
sebanyak 5 ml sebagai indikator. Titrasi bereaksi warna berubah
menjadi putih susu (a ml).
k. Buat uji blanko (35 ml air suling + 10 ml larutan Luff Schrool +
beberapa butir batu didih dalam erlemeyer). Didihkan selama 10
menit (Stopwatch) pakai pendingin tegak).
l. Didihkan cepat kemudian tambahn 10 ml larutan KI 20 % dan 15
ml H2SO4 25 %, titrasi dengan Tio 0,1 N (pakai indikator kanji) =
(b/ml).
N dihitung dengan perhitungan:
Selisih antara pentera blanko = b ml dengan pentera contoh a ml

dilihat dalam daftar Luff Schrool.
Rumus:
PxGlukosa(mg ) xN
Total Gula = x100%
mg ( sampel)
4. Uji aktivitas enzim selulase (Jatinder et al, 2006)
a. Pembuatan Kurva standart
1. Dibuat dari larutan glukosa dengan konsentrasi 0,01; 0,02; 0,03;
0,04; 0,05 dan 0.06 % yang dilarutkan dalam buffer.
2. Dimasukkan ke dalam tabung reaksi larutan glukosa sebanyak
1 ml dan air pengganti enzim 1 ml.
3. Diinkubasi dalam waterbath pada suhu 550C selama 15 menit.
4. Setelah 15 menit reaksi dihentikan dengan penambahan DNS
(Dinitro Salicylic Acid) sebanyak 0,5 ml. selanjutnya dipanaskan
dalam air mendidih 1000C selama 5 menit, setelah itu
didinginkan di dalam air dingin
5. Selanjutnya warna yang terbentuk dibaca pada
spektrofotometer dengan panjang gelombang 540 nm.
b. Pengukuran Aktivitas Endoglukanase (CMC-ase) Merujuk
Pada Metode Mandels et,al (1976)
1. Dibuat larutan CMC 1 % yang dilarutkan dalam buffer sitrat 50
mM pH 5,5.
2. Dimasukkan larutan CMC 1 ml kedalam tabung reaksi
ditambahkan buffer sitrat 50 mM pH 5 sebanyak 1 ml dan

larutan enzim sebanyak 0,5 ml kemudian di vortekx.
3. Diinkubasi dalam waterbath pada suhu 550C selama 15 menit,
setelah itu reaksi enzimatis dihentikan dengan mencelupkan
tabung reaksi kedalam air es.
4. Kemudian ditambahkan DNS 0,5 ml, selanjutnya divortekx.
5. Dipanaskan dalam air mendidih pada 1000C selama 5 menit,
setelah itu didinginkan di dalam air dingin.
6. Selanjutnya warna yang terbentuk di baca pada
spektrofotometer dengan panjang gelombang 540 nm.
c. Pengukuran Aktivitas FP-ase (Total Selulase) Merujuk Pada
Metode Mandels et,al (1976)
1. Dipotong-potong kertas saring 1 x 6 cm sebanyak 50 mg,
dicelupkan kedalam buffer sitrat 50 mM pH 5,5 sebanyak 1 ml
kedalam tabung reaksi, ditambahkan filtrate enzim sebanyak
0,5 ml, kemudian di vortekx.
2. Diinkubasi dalam waterbath pada suhu 550C selama 60 menit.
3. Reaksi enzimatis dihentikan dengan penambahan pereaksi
DNS sebanyak 0,5 ml
4. Dipanaskan dalam air mendidih 1000C selama 5 menit, setelah
itu didinginkan di dalam air dingin, kemudian di vortekx
5. Selanjutnya warna yang terbentuk dibaca pada
spektrofotometer dengan panjang gelombang 540 nm

Substrat Kulit kakao Analisa Awal Komponen
+ dedak padi Substrat
Penambahan Larutan Mineral

A = Suhu dan Waktu
pemanasan
A1= Pemansan 1210C selama Sterilisasi pada suhu dan waktu
30 menit berbeda
A1= Pemansan 1000C selama
60 menit
A1= Pemansan 1000C selama Penambahan Larutan Spora Tricodema Viride
90 menit Aspergillus Niger
B= Lama Inkubasi Setiap 24 jam, kultur diamati:

B1=24 Jama Inkubasi selama 96 jam - Berat kering kultur
B2=48 Jam - Aktivitas enzimatik
B3=72 Jam
B4=96 Jam Ekstraksi kultur dengan larutan
Twin 80
Penyaringan Ampas Kultur
Filtrat
Sentrtfugasi Endapan
Supernatan
Pengemasan dalam botol
Pembekuan
- Filtrat Paperease
Analisa Aktivitas Enzimatik
(TotalSelulase)
- Endoglukanase
Diagram Alir Penelitian

Jenis kultur jamur
Trichoderma viride Kultur Jamur
Aspegillus niger
Penyiapan biakan Ditumbuhkan pada

muni media agar miring
Inkubasi pada suhu 300c

selama 3 x 24 jam
Pen yiapan Suspensi Spora Pemisahan Spora

dengan Larutan
Pengenceran Spora
Dengan Cytometer, di Perhitungan Jumlah Spora

bawah mikroskop
Larutan Spora
Gambar 04. Diagram Alir Pembuatan Lautan Spora

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Analisa Awal Substrat Pertumbuhan Mikroba
Analisa awal yang dilakukan terhadap substrat yang digunakan
untuk pertumbuhan mikroba yaitu analisa kadar air, total protein dan
total gula. Analisa ini dilakukan untuk mengetahui kondisi dari substrat
pertumbuhan kapang (mikroba), sehingga diciptakan lingkungan yang
baik untuk pertumbuhan mikroba.
1. Kadar Air
Kadar air substrat sangat berpengaruh terehadap kondisi
pertumbuhan jamur, maka dari itu dilakukan analisa awal meliputi kadar
air pada kulit kakao dimana pengeringan ini dilakukan untuk
mendapatkan kadar air keseimbangan, kadar air kulit kakao yang
didapatkab adalah 19,4 %. Dari hasil analisa menunjukkan bahwa
bahwa kadar air kulit kakao yang digunakan cukup baik untuk
pertumbuhan mikroorganisme karena kadar air yang didapatkan
relative rendah, yang dapat memperkecil tumbuhnya mikroorganisme
yang tidak diinginkan. Hal ini sesuai dengan pendapat Frost dan Moss
(1987) bahwa rendahnya kadar air, memperkecil kemungkinan untuk
tumbuhnya bakteri yang tidak diinginkan.
2. Kandungan Gula
Fermentasi akan berjalan apabila terdapat nutrisi dari media
pertumbuhan yang digunakan itu terpenuhi, senyawa karbon

merupakan sumber nutrisi yang paling dibutuhkan oleh mikroorganisme
agar mikroorganisme dapat tumbuh dengan baik. Total senyawa
karbon yang terdapat pada substrat pertumbuhan mikroba adalah 0.63
gram/7 gram subtrat pertumbuhan mikroorganisme, dimana senyawa
karbon tersebut diperoleh dari kulit kakao sebanyak 0.060 gram/gram
kulit kakao, dan 0.030 gram/gram dedak padi. Senyawa karbon
sangatlah berperan dalam proses fermentasi dari haasil analisa total
gula dan protein dapat dikatakan bahwa kulit kakao dan dedak padi
merupakan substrat yang baik digunakan untuk pertumbuhan
microorganism, hal ini sesuai dengan pendapat Hardjoko dkk (1989)
bahwa media fermentasi yang baik adalah media yang dapat mensuplai
kebutuhan unsur dasar-dasar sel mikroba. Unsur utama penunjang
pertumbuhan mikroba dan perkembangan mikroba adalah senyawa
Karbon (C), Nitrogen (N), Sulfur (S), dan Phospor (P).
3. Total Protein
Selain senyawa karbon sumber nutrsi yang digunakan adalah
Nitrogen, total Nitrogen (N) yang terdapat pada substrat pertumbuhan
mikroorganisme sebanyak 4.043 gram/7 gram substrat, dimana
sumber Nitrogen ini didapatkan dari kulit kakao sebesar 2.43
gram/gram, dan dedak padi sebesar 1.613 gram/gram. Senyawa
Nitrogen sangatlah berperan dalam proses fermentasi dari haasil
analisa total gula dan protein dapat dikatakan bahwa kulit kakao dan
dedak padi merupakan substrat yang baik digunakan untuk

pertumbuhan microorganism, hal ini sesuai dengan pendapat Hardjoko
dkk (1989) bahwa media fermentasi yang baik adalah media yang
dapat mensuplai kebutuhan unsur dasar-dasar sel mikroba. Unsur
utama penunjang pertumbuhan mikroba dan perkembangan mikroba
adalah senyawa Karbon (C), Nitrogen (N), Sulfur (S), dan Phospor (P).
B. Isolasi Mikroba
Kultur yang digunakan untuk produksi enzim selulase merupakan
kultur jamur murni yang mana diremajakan setiap 1 bulan menggunakan
media PDA agar miring yang diinkubasi selama 3 x 24 jam pada suhu
ruang. Kultur yang diperoelh kemudian dilepaskan sporanya dengan
penambahan aquadest steril pada tabung reaksi yang berisi kulutr.
Dimana kultur Trichoderma Viride ditambahkan aquadest steril
sebanyak 3 ml dan kultur Aspergillus niger sebanyak 3 ml. kemudia
setelah spora terlepas dihitung menggunakan cytometer yang diamati
dibawah mikroskop.
C. Penambahan Larutan Mineral (Penentuan Kondisi Pertumbuhan
Jamur)
Salah satu penelitian pendahuluan yang dilakukan pada
penelitian ini adalah penambahan larutan mineral, dimana penelitian
pendahuluan ini dilakukan variasi penambahan larutan mineral yaitu 25
ml, 20 ml, 15 ml, dan 10 ml. Dari percobaan itu diperoleh penambahan
larutan mineral terbaik adalah 15 ml. Penelitian ini menggunakan sistem
fermentasi padat dimana sistem fermentasi ini merupakan fermentasi

dimana substartnya tidak larut dan tidak mengandung air bebas. Hal ini
sesuai dengan pendapat Chalal (1985) bahwa fermentasi media padat
adalah proses fermentasi yang substratnya tidak larut dan tidak
mengandung air bebas, tetapi cukup mengandung air untuk keperluan
mikroorganisme.
D. Evolusi Berat Kering
Selama proses fermentasi berlangsung dilakukan perhitungan
berat kering, yang dilakukan setiap 1 x 24 jam, dari hasil pengamatan
terjadi penurunan berat kering. Penurunan berat kering dapat dilihat
pada gambar 04, dan gambar 05 berikut ini.

50
1210C, 30
40 1000C, 90
Berat Kering (%)
1000C,60
30
20
10
0
24 48 72 96
Waktu Inkubasi (Jam)
Gambar 04. Penurunan Berat Kering Media Fermentasi Oleh Kultur

Trichoderma viride
40 1210C, 30
1000C, 90
30
Berat Kering (%)
20
10
0
24 48 72 96
Waktu Inkubasi (Jam)
Gambar 05. Penurunan Berat Kering Media Fermentasi Oleh Kultur
Aspergillus Niger
Seiring dengan lamanya inkubasi, pertumbuhan mikroorganisme
semakin meningkat sehingga semakin banyak nutrient yang digunakan
untuk memnuhi kebutuhan hidupnya, dengan kata lain berat kering juga
semakin menurun. Nutrient tersebut dikonversi menjadi senyawa yang
dapat digunakan oleh mikroorganisme untuk metabolisme yang
selanjutnya digunakan untuk pertumbuhan. Penurunan berat kering
tersebut menandakan bahwa pertumbuhan jamur pada media
fermentasi berlangsung. Hal ini sesuai dengan pendapat Purwoko
(2007) berat kering semakin menurun karena substrat dikonsumsi oleh
mikroorganisme untuk pertumbuhannya.
E. Analisa Enzimatik
1. Aktivitas Total selulase
Produksi enzim total selulase pada penelitian ini
menggunakan kultur kapang spesies Trichoderma viride dan
Aspergillus niger, yang diinokulasi pada media fermentasi dengan
perbandingan susbtrat kulit kakao dan dedak padi 5:2 dan
masing-masing media fermentasi diberikan perlakuan pemanasan
1210C selama 30 menit, 1000C selama 60 menit, 1000C selama 90
menit. Pemanasan ini bertujuan agar substrat tergeletinisasi dan
menjadi kental. Data aktivitas total selulase yang diproduksi oleh
kultur jamur untuk setiap perlakuan dapat dilihat pada gambar 6.

Tricoderma (mg) Niger (mg)
aktivitas enzim (mg substrat/ml

enzim/menit/gr berat kering)
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
WAKTU INKUBASI
B1 (24jam)
B2(48jam)
B3(72jam)
B4(96jam)
B1 (24jam)
B2(48jam)
B3(72jam)
B4(96jam)
B1 (24jam)
B2(48jam)
B3(72jam)
B4(96jam)
SUHU PEMANASAN
A1 (121°C), selama 30 menit
A3 (100°C),selama 60 menit
suhu dam waktu pemanasan
Gambar 6. Hubungan suhu dan waktu pemanasan media serta

waktu inkubasi terhadap aktivitas total selulase.
Hasil analisa sidik ragam memperlihatkan perlakuan suhu
dan lama pemanasan media fermentasi, waktu inkubasi serta
interaksi berepengaruh sangat nyata P > (0,01) terhadap aktivitas
total selulase untuk kedua jenis kultur jamur Trichoderma viride dan
Aspergillus niger (Lampiran 4b dan Lampiran 5b).
Hasil uji BJND (Beda Jujur Nyata Duncan) menunjukkan
bahwa semua perlakukan pemanasan media fermentasi berbeda
nyata pada taraf 1 % (Lampiran 4c dan Lampiran 5c). Hasil tersebut
menunjukkan bahwa perlakuan pemanasan substrat sangatlah
penting, dimana proses pemanasan bertujuan agar substrat dapat
tergelatinisasi dan menjadi kental untuk memecah selulosa dengan
baik sehingga substrat yang dihasilkan dapat diurai menjadi glukosa.
Hal ini sesuai dengan pendapat Enari (1983) bahwa selulase
merupakan suatu komplek enzim yang terdiri dari beberapa enzim
yang bekerja terhadap atau bersama-sama menguraikan selulosa
menjadi glukosa.
Hasil uji BJND menunjukkan bahwa perlakuan lama inkubasi
untuk kultur Trichoderma viride waktu inkubasi 48 dan 72 angat
berbeda nyata dengan 24 dan 96 jam, sedangkan 24 jam dan 92
jam tidak berbeda nyata, sedangkan untuk kultur Aspergillus niger
semua waktu inkubasi sangat berbeda nyata (Lampiran 4d dan
Lampiran 5d). Fermentasi sangat berpengaruh terhadap aktivitas
enzim yang dihasilkan dalam penelitian yang dilakukan
menunjukkan bahwa hasil yang diperoleh cenderung meningkat dan
menurun kembali pada setiap kultur hal ini sesuai dengan pendapat
(Rose, 1980) bahwa waktu fermentasi berpengruh terhadap aktivitas
enzim yang dihasilkan, aktivitas enzim yang cenderung meningkat
kemudian menurun lagi disebabkan karena karena produksi yang
terhenti yang disebabkan oleh mekanisme represi “feed back” yaitu
gangguang terhadap sisi aktif enzim oleh produk hasil degradasi.
Berdasarkan gambar 06 dapat diketahui bahwa aktivitas
tertinggi total selulase hasil interaksi suhu pemanasan dan lama
inkubasi yang dihasilkan oleh kultur Aspergiilus niger adalah pada
pemanasan 1000C selama 90 menit setelah 96 jam inkubasi yang
dihasilkan yaitu (2,73 mg/ml enzim/menit/gr berat kering substrat)
sedangkan aktivitas tertinggi yang dihasilkan kultur Trichoderma
viride adalah pada pemanasan 1210C selama 30 menit setelah 24
jam inkubasi (2,425 mg/ml enzim/menit/gr berat kering substrat).
Aktivitas enzim yang dihasilkan cenderung menurun dan meningkat

itu disebabkan karena produksi enzim yang terhambat. Hal ini
disebabkan karena tingginya kadar selulosa, semakin besar kadar
selulosa bahan maka semakin besar pula glukosa yang terbentuk
oleh hidrolisis enzim. Hal ini sesuai dengan pendapat Gong & Tsao
(1979) bahwa menurunnya produksi enzim akibat terhambatnya
sebagai efek glukosa dimana glukosa umunya menghambat
pembentukan enzim katabolit.
2. Aktivitas Enzim Endoglukanase
Pada penelitian ini, kultur jamur yang digunakan untuk
memproduksi enzim endoglukanase yaitu kultur Trichoderma viride
dan Aspergillus niger. Kultur jamur ini juga ditumbuhkan pada media
fermentasi dengan perbandingan substrat kulit kakao dan dedak padi
5 : 2, dimana media fermentasi tersebut diberikan tiga jenis
perlakuan pemanasan yang berbeda yaitu sterilisasi 121 0C selama
30 menit, sterilisasi 1000C selama 60 menit, dan sterilisasi 1000C
selama 90 menit. Pemanasan ini bertujuan agar substrat
tergeletinisasi dan menjadi kental. Data aktivitas enzim
endoglukanase yang diproduksi oleh kultur jamur tersebut dapat
dilihatpada gambar 07 berikut:

5
4.5
Aktivitas enzim (mg substrat/ml enzim/mnit/gr

4 Tricoderma (mg) Niger (mg)
3.5
3
2.5
2
1.5
1
brat kering)
0.5
0
WAKTU INKUBASI
B1 (24jam)
B2(48jam)
B3(72jam)
B4(96jam)
B1 (24jam)
B2(48jam)
B3(72jam)
B4(96jam)
B1 (24jam)
B2(48jam)
B3(72jam)
B4(96jam)
SUHU PEMANASAN
A3 (100°C),selama 90 menit
Gambar 8. Pengaruh Suhu dan Lama Pemanasan terhadap

Aktivitas Enzim Endoglukanase.
Hasil analisa sidik ragam memperlihatkan perlakuan suhu
pemanasan media fermentasi, waktu inkubasi serta interaksi
berpengaruh nyata pada P > (0,01) terhadap aktivitas
endoglukanase untuk kedua jenis kultur jamur Trichoderma viride
dan Aspergillus niger (Lampiran 6b dan Lampiran 7b).
Hasil uji BJND menunjukkan bahwa semua perlakukan
pemanasan media fermentasi berbeda nyata pada taraf 1 %
(Lampiran 6c dan Lampiran 7c). Aktivitas enzim tertinggi untuk
kultur Trichoderma viride pada peemanasan 1000C selama 60 menit
dan Aspergillus niger pada suhu pemanasan 1000 selama 90 menit
proses pemanasan dilakukan agar substrat dapat terdegradasi
sehingga kandungan nutrisi di dalam substrat dapat digunakan oleh
kapang Trichoderma viride dan Aspergillus niger untuk
pertumbuhannya dan menghasilkan enzim. Hal ini sesuai dengan

pendapat Nathalia (2011) bahwa media fermentasi biasanya
diberikan perlakuan fisik berupa pemanasan dan perendaman.
Perlakuan fisik ini menyebabkan media terdegradasi .
Hasil uji BJND menunjukkan bahwa perlakuan lama inkubasi
untuk kultur Trichoderma viride waktu inkubasi semua berbeda
nyata, sedangkan untuk kultur Aspergillus niger waktu inkubasi 24
jam dan 48 jam bebeda sangat nyata dengan waktu inkubasi 72 dan
96 jam, sedangkan untuk waktu 72 dan 96 jam tidak berbeda nyata.
(Lampiran 6d dan Lampiran 7d). Kultur yang diinokulasi pada media
fermentasi diinkubasi selama 4 x 24 jam. Setiap 24 jam, enzim
diekstrak dari media fermentasi dan analisa. Bedasarkan lama
inkubasinya, maka diperoleh hasil aktivitas enzim endoglukanase
optimum diproduksi pada inkubasi 96 jam oleh kultur Aspergillus
niger yaitu 4,75 mg/ ml enzim/menit/gr berat kering substrat hal ini
dikarenakan bahwa kultur Aspergillus niger dapat memproduksi
enzim pada waktu 96 jam karena pada saat itu kadar selulosa tinggi,
dimana semakin besar kadar selulosa bahan maka semakin besar
pula glukosa yang terbentuk oleh hidrolisis enzim. Hal ini sesuai
dengan pendapat Gong & Tsao (1979) bahwa menurunnya produksi
enzim akibat terhambatnya produksi enzim oleh glukosa yang
dihasilkannya. Hal ini disebut sebagai efek glukosa dimana glukosa
umumnya menghambat pembetukan enzim katabolit.

Hasil penelitian yang dilakukan menunjukkan bahwa hasil
yang diperoleh cenderung meningkat dan menurun kembali pada
setiap kultur hal ini sesuai dengan pendapat (Rose, 1980) bahwa
waktu fermentasi berpengruh terhadap aktivitas enzim yang
dihasilkan, aktivitas enzim yang cenderung meningkat kemudian
menurun lagi disebabkan karena karena produksi yang terhenti yang
disebabkan oleh mekanisme represi “feed back” yaitu gangguang
terhadap sisi aktif enzim oleh produk hasil degradasi.
Berdasarkan gambar 07 dapat diketahui bahwa aktivitas
tertinggi endoglukanase hasil interaksi suhu pemanasan dan lama
inkubasi yang dihasilkan oleh kultur Aspergiilus niger adalah pada
pemanasan 1000C selama 60 menit setelah 96 jam inkubasi yang
dihasilkan yaitu (4,75 mg/ml enzim/menit/gr berat kering substrat)
sedangkan aktivitas tertinggi yang dihasilkan kultur Trichoderma
viride adalah pada pemanasan 1000C selama 60 menit setelah 96
jam inkubasi (3,71 mg/ml enzim/menit/gr berat kering substrat). Hal
ini disebabkan karena tingginya kadar selulosa, semakin besar kadar
selulosa bahan maka semakin besar pula glukosa yang terbentuk
oleh hidrolisis enzim. Hal ini sesuai dengan pendapat Gong & Tsao
(1979) bahwa menurunnya produksi enzim akibat terhambatnya
sebagai efek glukosa dimana glukosa umunya menghambat
pembentukan enzim katabolit. Selain dari itu hal juga disebabkan

pula karena susbtrat yang dihasilkan dapat memotong ikatan β
dalam substrat dengan cepat. Hal ini sesuai dengan Anonim (1999),
bahwa enzim selulase merupakan enzim yang dapat memutuskan
ikatan glukosida β-1,4 di dalam selulosa. Enzim terdiri dari
komponen enzim yaitu selobiohidrolase (CBH), endoglukanase dan
p-glukosidase yang bekerja secara sinergi memecah selulosa
dialam.
V. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Kesimpulan yang dapat diperoleh dari penelitian ini adalah
sebagai berikut:
1. Perbandingan substrat yang baik adalah 5:2 (kulit kakao 5 gram dan
dedak padi 2 gram).
2. Suhu dan lama pemanasan untuk aktivitas total selulase terbaik untuk
Aspergillus niger pada suhu 1000C, 90 menit dan untuk Trichoderma
viride 1210C, 30 menit. Dan untuk endoglukanase suhu dan lama
pemanasan 1000C, 60 menit untuk kedua mikroorganisme.
3. Aktivitas selulase (total selulase dan endoglukanase) maximum terjadi
pada waktu 96 jam inkubasi/ferementasi
4. Aktivitas selulase dari aspergillus niger 11 % lebih tinggi dibanding
Trichoderma viride dan aktivitas endoglukanase dari Aspergillus niger
25 % lebih tinggi disbanding Trichoderma viride.
B. Saran
Saran untuk penelitian selanjutnya sebaiknya dilakukan pemurnian
enzim untuk total selulase pada suhu 1000C selama 90 menit dengan waktu
inkubasi 96 jam kapang Aspergillus niger dan 1210C selama 30 menit
inkubasi 24 jam oleh kapang Trichoderma viride. Dan untuk aktivitas
endoglukanase dilakukan pemurnian enzim pada suhu 100 0C selama 60

menit inkubasi 96 jam untuk kedua kapang Trichoderma viride dan
Aspergillus niger sehingga enzim yang dihasilkan bukan enzim kasar lagi.
DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 1999. Enzim Selulase dari Trichoderma viridae. http://www.

Indobiogen.or.i/selulase.pdf. Akses 21 Desember 2007.
Aidaoo, K.E.R. Hendry and B.J. Wood. Olid Substrate Frementation.

Dalam Advances in Applied Microbiology. Academic Press, Inc,
28:201-203.
Ashady, 1998. Pemanfaatan Limbah Kakao Menjadi Etanol

Menggunakan Metode SFF.
http://brownengineer.wordpress.com/teknik-kimia/bioetanol-dari-kulit-
kakao/ . akses tangga 14 Januari 2014. Makasar .
Belitz, H.D, Grosch, W, dan Schieberle,P. 2008. Food Chemistrym 4th ed.
Production. Appl. Environ. Microbial. 49:205-210.
Chalal, D.S. 1985. Solid State Fermentation With T.reesei for Cellulosa
Production. Appl. Environ. Microbial .49:205-210..
Deacon, J.K. 1983. Modern Micology. Blackwell Science. New York. 303
pp.
Enkaras. 2012 . SEKAM PADI .

http://www.baronjayasantika.com/2012/10/manfaat-bekatul.html .
Akses tanggal 14 januari 2013
Enari, T.M. 1997. Microbial Cellulasse. Di dalam W.M Fogarty. 1985.

Microbial Enzymes and Biotechnology. Appl. Sci. Publishing, New
York.
Fraizier, W.C. dan D.C. Westhoff. 1981. Food Microbiology. Mc Grawa Hill
Publishing Co.ltd. New York
Fowler M.W.1988. Enzyme Technology in Biotechnology for Engineers,

Biological System in Technology Processes, Edited:Scragg, A.H,
John Wiley & Sons, New York.
Frost, G.M and D.A. Moss. Production of Enzymes by Fermentation. Di

dalam Biotechnology vol 7a. VHC. Germany.
Gong C.S. dan G.T. Tsao. 1979. Celulase and Biosynthesiss Regulation.
Di dalam D. Pearlman (ed). Annual on Fermentation Process.
Academic Press. New York.
Ghori, M.I. 2008. Production and Kinetic Study of Cellulase From

Agrivultural Wastes . Thesis for the degree of Doctor of Philosophy
in Chemistry:Bahauddin Zakryia University. Pakistan
Hardjo, S.N.S. Indrasti, T. Bantacut. 1989. Biokonversi Pemanfaatan

Limbah Industri Pertanian. PAU Pangan dan Gizi IPB Bogor.
Hartadi, H. Reoksohadiprodjio, S. dan Tillman, A.D. 1997. Tabel

Komposisi Pakan untuk Indonesia. Gajah Mana University Press,
Bulasumur, Yogyakarta.
Harjosuwito dan Tri Haryati. 1984. Pemanfaatan Limbah Hasil

Perkebunan Coklat sebagai Bahan dasar Pembuatan Pektin.
Menara Perkebunan 52, G: 213-216.
Ikram ul haq, Muhammad Mohsin Javed, Tehmina Saleem and Zafar Sidiq.
2005. Cotton Saccharifying Activity of Cellulases Produced by
Co-culture of Aspergillus niger and Trichoderma viride. Res. J.
Agric & Biol. Sci. 1 (3):241-245.
Jatinder, Kour. Bhupinder S and Haruinder S. 2005. Enzyme and
Microbial Technology. Regulation of Cellulase Production in two
Thermophilic Fungi Melanocarpus sp MTCC 3922 and Sytalidium
Tkermophillum MTcc. 4520. Department of Microbiology. Guru nanak
Dev University. Punjab, India. 931-936.
Kampiang I.P, Sinurat A.P, Purwadaria T, Darma J, dan Supriyati. 1995.

Cassapro in Broiler Ration: Interaction with Rice Bran. JITV.
1(2):86-88. Manurung T. 1995. Penggunaan Hijaun Laguminosa
Pohon sebagai Sumber Protein Ransum Sapi Potong. JI TV. 1
(3): 143-148.
Lindner. W.A. Dennison and G.V. Quicke. 1983. Pitfalls in the Assays of
Carboxymethylcellulae Activity. Biotechnol. Bioeng. 25 :377-385.
Mandells, M.R. Andreoti and C. Roche. 1976. Measurement of

Saccharifying Cellulase. Biotechnol.Bioeng. Symp. No. 26:21-33
Miller, G.L. 1959. The Use of Dinitrosaliclicylic Acid Reagent for

Determination of Reducing Sugar. Anal. Chem. 31 (3): 467-428.
M. Saban Tanyildizi, Dursun Ozer, Muarat Elibol. 2007. Production of
Bacterial α-amylase by B. Amyloliquefaciens Under Solid
Substrate Fermentation. Biochemical Enginering Journal Volume
37, Issue 3, 15 Desember 2007, pages 294-297.
Moore, E. and Lendacker. 1982. Fundamental of Fungi Prentice Hall

Inc.New York Jersey.
Murty, J, Hall, D.T Earl, M. Hnery, R.C, & Holberg, J.B. 1999, Apj, 522, 904
National Research Councill. 1994. Nutrient Requitements of
Poultry. National Academy Press. Washintong DC.
Nathalia, 2011. Produksi Xilooligosakarida dari Tongkol Jagung Sebagai

Kandidat Prebiotik dengan Pemanasan Suhu Tinggi dan Hidrolisis
Enzimatik.http://repository.ipb.ac.id/bitstream/handle/123456789/5
2025 /2011dnn.pdf?sequence=1. Akses Tanggal 26 Juli 2013.
Makassar.
Nicholson, M.D. and F.M. Merrits. 1983. Cellulose Chemistry and Its
Applications. Ellis Horwood Limited. New York.
Opeke, L.K. 1984. Optimising Economic Return (Profit) From Cacao

Cultivation Through Efficient Use of cacao By Products. 9 th
Internasional cocoa Research Conference, Cocoa Producers
Alliance.
Pahlevi, l. 1987. Pemanfaatan Kulit Buah Coklat Sebagai Media Untuk

Memproduksi Enzim Pektinase oleh Aspergillus niger Dengan
cara fermentasi Media PAdat. Skripsi. Fateta-IPB Bogor.
Poulsen, O.M. and L.W. Petersen (1987) .Purifiction of An Extraceluller

Celulose Binding Endoglucanase of Cellulomonas sp. ATCC
21399 by Affinity Chromotography on H3PO4- Swollen Cellulose.
Biotechnol. Bioeng. 29:799-804.
Purwoko, Tjahjadi. 2007 . Fisiologi Mikroba. Bumi Karsa: Jakarta.
Rasyaf, M. 1984. Makanan Ayam Broiler. Kanisius. Jakarta.
Rose, A.H. 1980. History and Scientific Basic of Commercial

Exploitation of Microbial Enzymes and Bioconvertation.
Academic Press. London.
Saha, J.Ind. Microbial. Biotechnol. 30 (1991) 279.

Sabili Hadzihi. 2012. Klasifikasi Enzim . Judhasratman Blogspot.com.
Akses tanggal 14 januari 2014. Makassar .
Tribak, M.J.A. Ocampo, I. Garcia-Romera. 2002.Production of

Xiloglucanalytic Enzymes by Trichoderma Viride, Paecilamyces
Farinous, Wardomyces Inflatus, and Plearotus Ostreatus,
Mylogia. 3:404-410.
Tsao, G.T.C. Ladisch, T.A. Hsu. B. Dale and T. Chou. 1979. Fermentatiom
Substrate from Cellulosic Materials: Production of Fermentable
Sugars From Cellulosic Materials. Di dalam Pearlman, D Annuals
Reports on Fermentation Processes, Vol 2.
Troller, J.A. 1980. Effect Water Activity on Enterotoxin Bacillus

Production and Growth of Staphylococcus aureus. Appl.
Microbial.
Thenzawidjaja, M. 1989. Enzim dan Bioteknologi. Pusat Antar

Universitas-IPB.
.Timotius, K.H. 1982. Mikrobiologi Dasar. Salatiga:Universitasn Kristen

LAMPIRAN
Lampiran 1. Hasil Pengukuran Berat Kering Media Fermentasi

Ulangan Rata-
Waktu Inkubasi Jumlah rata
Perlakuan (Jam) I II (%) (%)
0 39 41 80 40
pemasan 1210C 24 38 39 77 39
selama 30 menit 48 30 30 60 30
+ kultur 72 29 31 60 30
Tricodema viride 96 28 28 56 28
0 38 37 75 38
pemasan 1210C 24 35 34 69 35
selama 30 menit 48 29 30 59 30
+ kultur 72 26 26 52 26
Aspergillus niger 96 25 26 51 26
Sumber: Data Sekunder Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi
Pangan, 2013.
Ulangan Rata-
0 45 44 89 45
pemasan 1000C 24 38 31 69 35
selama 60 menit 48 31 30 61 31
+ kultur 72 29 30 59 30
0 32 30 62 31
pemasan 100 C 0 24 30 30 60 30
selama 60 menit 48 28 30 58 29
+ kultur 72 28 26 54 27
Aspergillus niger 96 25 2s7 52 26
Pangan, 2013
Ulangan Rata-
0 36 35 71 36
pemasan 1000C 24 34 34 68 34
selama 90 menit 48 30 29 59 30
+ kultur 72 28 29 57 29
0 28 28 56 28
pemasan 1000C 24 25 26 51 26
selama 90 menit 48 24 25 49 25
+ kultur 72 21 21 42 21
Aspergillus niger 96 21 19 40 20
Pangan, 2013.
Lampiran 2. Kurva Standar Aktivitas Enzim Selulase
Kurva Standar Analisa Enzim
Selulase
konsentrasi Absorbansi
0 0
0.01 0.013
0.02 0.176
0.03 0.35
0.04 0.492
0.05 0.665
sss0.06 0.984
Kurva Standae Enzim Selulase
1.2
1
y = 16.329x - 0.107
0.8 R² = 0.9569
Absorbansi
0.6
0.4
0.2
0
-0.2 0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07
Konsentrasi (%)
Lampiran 3. Rumus Perhitungan Aktivitas Enzim Selulase
y = 16,32 x – 0,0107
Dari persamaan kurva standar, akan diperoleh nilai x
x X Fp = a
a / 100 / lama inkubasi / gr berat kering = aktivitas enzim
Keterangan Fp = Faktor Pengenceran
Lampiran 4a. Tabel Hasil Analisa Aktivitas Filtrat Paperease (Total

Selulase) dari kultur Trichoderma viride
Perlakuan Ulangan Standar
Lama Rata- Deviasi
Suhu inkubasi I II Total rata
24 Jam 2.43 2.42 4.85 2.425 0.0070
48 Jam 1.67 1.69 3.36 1.68 0.0141
A1 (Pemanasan
1210C selama 72 Jam 1.98 1.94 3.92 1.96 0.0282
30 menit) 96 Jam 2.22 2.06 4.28 2.14 0.1131
24 Jam 1.77 1.78 3.55 1.775 0.0070
48 Jam 1.1 1.08 2.18 1.09 0.0141
A2 (Pemanasan
1000C selama 72 Jam 1.16 1.17 2.33 1.165 0.0070
60 menit) 96 Jam 1.68 1.67 3.35 1.675 0.0070
24 Jam 0.9 0.93 1.83 0.915 0.0212
48 Jam 0.61 0.63 1.24 0.62 0.0141
A3 (Pemanasan
1000C selama 72 Jam 1.48 1.47 2.95 1.475 0.0070
90 menit) 96 Jam 1.27 1.6 2.87 1.435 0.2333
Pangan, 2013.
Lampiran 4b. Tabel Hasil Analisa Sidik Ragam Aktivitas Filtrat
Paperease (Total Selulase) dari Kultur Trichoderma Viride
Sumber
keragaman JK DB KT Fhitung F 5% F 1%
Suhu 3.662533 2 1.831267 316.87** 3.89 6.93
lama inkubasi 1.434213 3 0.478071 82.72** 3.49 5.95
Interaksi 0.9168 6 1.676769 290.140** 3 4.82
Galat 0.06935 12 0.005779
Total 6.082896 23
Keterangan : Sangat Berbeda Nyata pada taraf 5 % dan taraf 1 %, KK = 4,
97 %
Lampiran 4c. Uji Lanjutan BJND Pengaruh Suhu dan Lama Pemanasan
terhadap Aktivitas Enzim Filtrat Paperease (Total Selulase)
dari kultur Trichoderma Viride
BJND
Perlakuan Suhu Pemanasan 5% 1%
0
A1(Pemanasan 121 C,30 menit C C
0
A2(Pemanasan 100 C, 60 menit) b B
0
A3(Pemanasan 100 C,90 menit) A A
Keterangan : Perlakuan yang diikuti oleh huruf yang sama, berarti beda
tidak nyata
Lampiran 4d. Uji Lanjutan BJND Pengaruh Lama Inkubasi terhadap
Aktivitas Filtrat Paperease dari Kultur Trichoderma Viride
BJND
Lama Inkubasi 5% 1%
B1 (24 jam) C C
B2 (48 Jam) A A
B3 (72 Jama) B B
B4 (96 jam) Dc DC
tidak nyata
Lampiran 4e. Uji Lanjutan BJND Analisa Pengaruh Interaksi Suhu

Pemanasan dan Lama Inkubasi terhadap Aktivitas Filtrat
Paperease (Total Selulase) dari Kultur Trichoderma Viride
Perlakuan BNJD
Lama
Suhu inkubasi 5% 1%
24 jam I I
A1(Pemanasan 48 jam Ij IJ
0 72 jam Jk JK
121 C,30 menit
96 jam L L
24 jam De DE
A2(Pemanasan 48 jam Ef EF
0 72 jam H H
100 C, 60 menit)
96 jam Fg FG
24 jam Bc BC
48 jam A A
A3(Pemanasan 72 jam B B
0
100 C,90 menit) 96 jam Cd CD
tidak nyata.
Lampiran 5a. Tabel Hasil Analisa Aktivitas Filtrat Paperease (Total
Selulase) dari Kultur Aspergillus Niger
Perlakuan Ulangan Rata- Standar
Suhu Lama inkubasi I II Total rata Deviasi
24 Jam 1.83 1.81 3.64 1.82 0.0141
48 Jam 1.98 1.97 3.95 1.975 0.0070
A1 (Pemanasan
1210C selama 30 72 Jam 2.14 2.11 4.25 2.125 0.0212
menit) 96 Jam 0.86 0.83 1.69 0.845 0.0212
24 Jam 0.56 0.56 1.12 0.56 0
48 Jam 1.93 1.93 3.86 1.93 0
A2 (Pemanasan
1000C selama 60 72 Jam 2.27 2.25 4.52 2.26 0.0141
menit) 96 Jam 2.36 2.36 4.72 2.36 0
24 Jam 2.01 1.98 3.99 1.995 0.0212
48 Jam 0.98 1.01 1.99 0.995 0.0212
A2 (Pemanasan
1000C selama 90 72 Jam 1.89 1.89 3.78 1.89 0
menit) 96 Jam 2.73 2.73 5.46 2.73 0
Pangan, 2013.
Lampiran 5b. Tabel Hasil Analidsa Sidik Ragam Aktivitas Filtrat

Paperease (Total Selulase) dari Kultur Aspergillus Niger
Sumber
Suhu 0.180508333 2 0.090254 481.355** 3.89 6.93
lama inkubasi 1.5661125 3 0.522038 2784.200** 3.49 5.95
Interaksi 7.626025 6 1.271004 6778.688** 3 4.82
Galat 0.00225 12 0.000187
Total 9.374895833 23
Keterangan : Sangat Beda Nyata Pada Taraf 5 % dan 1 %, KK = 0, 76 %
terhadap Aktivitas Filtrat Paperease (Total Selulase) dari
Kultur Aspergillus Niger
BJND
A1(Pemanasan 121,30 menit a A
A2(Pemanasan 100, 60 menit) b B
A3(Pemanasan 100,90 menit) c C
tidak nyata
Lampiran 5d. Uji Lanjutan BJND Pengaruh Lama Inkubasi terhadap
Aktivitas Filtrat Selulase (Total Selulase) dari Kultur
Aspergillus Niger
BJND
Lama Inkubasi 5% 1%
B1 (24 jam) a A
B2 (48 Jam) b B
B3 (72 Jama) c C
B4 (96 jam) d D
tidak nyata

Pemanasan dan Lama Inkubasi terhadap Aktivitas Filtrat
Paperease (Total Selulase) dari Kultur Aspergillus Niger
Perlakuan BNJD
lama
Suhu inkubasi 5% 1%
24 jam F F
48 jam I I
0
A1(Pemasan 121 C, 72 jam H H
selama 30 menit 96 jam G G
24 jam Cd CD
48 jam Cd CD
0 72 jam Bd BD
A2(Pemasan 100 C,
selama 60 menit 96 jam Cd CD
A3 (Pemasan 24 jam A A
1000C, selama 90 48 jam E E
menit 72 jam Ab AB
96 jam Bc BC
tidak nyata
Lampiran 6a. Tabel Hasil Analisa Aktivitas Endoglukanase Kultur

Trichoderma Viride
Perlakuan Ulangan Rata- Standar
Suhu Lama inkubasi I II Total rata Deviasi
24 Jam 1.79 1.83 3.62 1.81 0.0282
48 Jam 2.3 1.99 4.29 2.145 0.2192
A1 (Pemanasan
1210C selama 30 72 Jam 2.11 2.04 4.15 2.075 0.0494
menit) 96 Jam 2.4 2.39 4.79 2.395 0.0070
24 Jam 2.01 2.17 4.18 2.09 0.1131
48 Jam 2.49 2.5 4.99 2.495 0.0070
A2 (Pemanasan
1000C selama 60 72 Jam 2.5 2.46 4.96 2.48 0.0282
menit) 96 Jam 3.71 3.71 7.42 3.71 0
24 Jam 1.51 1.55 3.06 1.53 0.0282
48 Jam 1.57 1.59 3.16 1.58 0.0141
A2 (Pemanasan
0
100 C selama 90 72 Jam 2.84 2.75 5.59 2.795 0.0636
menit) 96 Jam 2.89 2.86 5.75 2.875 0.0212
Sumber : Data Sekunder Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi
Pangan, 2013.
Lampiran 6b. Tabel Hasil Analisa Sidik Ragam Aktivitas

Endoglukanase Kultur Trichoderma Viride
Sumber
Suhu 1.604758333 2 0.802379 136.57** 3.89 6.93
lama inkubasi 4.744066667 3 1.581356 269.166** 3.49 5.95
Interaksi 1.853808333 6 0.005875 52.590** 3 4.82
Galat 0.0705 12 0.005875
Total 8.273133333 23
Keterangan : Sangat Berbeda Nyata pada Taraf 5 % dan Taraf 1 %, KK =
0,03 %
terhadap Aktivitas Endoglukanase Kultur Trichoderma Viride
BJND
0
A1(Pemanasan 121 C,Selama 30 menit) a A
A2(Pemanasan 1000C,Selama 60 menit) b B
0
A3(Pemanasan 100 C, Selama 90 menit) c C
Keterangan : Perlakuan yang diikuti oleh huruf yanga sama, berarti beda
tidak nyata.
Lampiran 6d. uji Lanjutan Pengaruh Lama Inkubasi Terhadap Aktivitas
Endoglukanase kultur Trichoderma Viride
BJND
Lama Inkubasi 5% 1%
B1 (24 jam) a A
B2 (48 Jam) b B
B3 (72 Jam) c C
B4 (96 jam) d D
tidak nyata.

Pemasan dan Lama Inkubasi terhadap Aktivitas
Endoglukanase dari Kultur Trichoderma Viride
Perlakuan BNJD
lama
Suhu inkubasi 5% 1%
24 jam F F
A1(Pemansan 48 jam I I
0
121 C, selama 30 72 jam C C
menit) 96 jam G G
24 jam H H
A2(Pemansan 48 jam D D
0 72 jam B B
100 C, selama 60
menit) 96 jam J J
A3(Pemansan 24 jam A A
0
100 C, selama 90 48 jam E E
menit) 72 jam K K
96 jam L L
tidak nyata.
Lampiran 7a. Tabel Hasil Analisa Aktivitas Endoglukanase dari Kultur

Aspergillus Niger
Perlakuan Ulangan Standar
Lama Rata- Deviasi
Suhu inkubasi I II Total rata
24 2.92 2.98 5.9 2.95 0.0424
48 1.63 1.72 3.35 1.675 0.0636
A1 (Pemanasan
1210C selama 72 1.69 2 3.69 1.845 0.2192
30 menit) 96 1.46 1.45 2.91 1.455 0.0070
24 1.72 1.7 3.42 1.71 0.1484
48 2.72 2.69 5.41 2.705 0.0282
A2 (Pemanasan
0
100 C selama 72 2.65 2.64 5.29 2.645 0.0424
60 menit) 96 4.75 4.75 9.5 4.75 0.0212
24 3.08 2.87 5.95 2.975 0.0141
48 1.91 1.87 3.78 1.89 0.0212
A3 (Pemanasan
1000C selama 72 2.01 2.07 4.08 2.04 0.0070
90 menit) 96 2.2 2.23 4.43 2.215 0
Sumber : Data Sekunder Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi
Pangan, 2013.
Lampiran 7b. Tabel Hasil Analisa Sidik Ragam Aktivitas

Endoglukanase dari Kultur Aspergillus Niger
Sumber
Suhu 3.959558333 2 1.979779 297.89** 3.89 6.93
lama inkubasi 1.993779167 3 0.664593 100.00** 3.49 5.95
Interaksi 11.91690833 6 0.006646 298.85** 3 4.82
Galat 0.07975 12 0.006646
Total 17.94999583 23
Keterangan : Sangat Berbeda Nyata pada Taraf 5 % dan Taraf 1 %, KK =
0,03 %
terhadap Aktivitas Endoglukanase Kultur Aspergillus Niger
BJND
A1(Pemanasan 121,30 menit A A
A2(Pemanasan 100, 60 menit) b B
A3(Pemanasan 100,90 menit) C C
tidak nyata.
Lampiran 7d. uji Lanjutan Pengaruh Lama Inkubasi Terhadap Aktivitas
Endoglukanase kultur Aspergillus Niger
BJND
Lama Inkubasi 5% 1%
B1 (24 jam) B B
B2 (48 Jam) A A
B3 (72 Jma) ac AC
B4 (96 jam) D D
tidak nyata.

Pemasan dan Lama Inkubasi terhadap Aktivitas
Endoglukanase dari Kultur Aspergillus Niger
Perlakuan BNJD
lama
Suhu inkubasi 5% 1%
24 jam F F
A1(Pemanasan 48 jam I I
0
121 C, selama 30 72 jam c C
menit 96 jam gf GF
24 jam h H
A2 (Pemanasan 48 jam d D
0
100 C, selama 60 72 jam b B
menit 96 jam hj HJ
LAMPIRAN FOTO
Gambar 10. Proses shake subtrat
Gambar 11. Penyaringan substrat

Gambar 12. Perendaman dalam air es
AA

NWE0 NDM5 Ym I1 MZK 3 YWU5 MDYz ODE0 MWM3 NGU5 NWU5 NZHH NDK 1 NDEy Yw

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

NWE0 NDM5 Ym I1 MZK 3 YWU5 MDYz ODE0 MWM3 NGU5 NWU5 NZHH NDK 1 NDEy Yw

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PEMANFAATAN KULIT KAKAO DAN DEDAK PADI

SEBAGAI SUBSTRAT ATAU MEDIA PERTUMBUHAN

The Utilization Of Cocoa Feel And Rice Bran As Substrate Or Growth

PROGRAM STUDI ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN

Skripsi Hasil Penelitian

PROGRAM STUDI ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN

Judul : Pemanfaatan Limbah Kulit Kakao Dan Dedak Padi

Dr. Ir. Mariyati Bilang, DEA Dr. Ir. Jumriah Lankong, MP

2. Ketua Jurusan Teknologi Pertanian 3. Ketua Panitian Ujian Sarjana

Prof. Dr. Ir. Hj. Mulyati M. Tahir Ir. Nandi K. Kusendar.M.App.Sc

Sulawesi adalah penghasil kakao terbesar, sehingga limbah dalam bentuk

Kata kunci: Fermentasi Media Padat, Selulase, Trichoderma viride,

Sulawesi is the largest producer of cocoa. Howover it produces the largest

Keyword: Solid State Fermentation, Cellulase, Trichoderma viride,

Puji syukur saya haturkan ke hadirat Allah SWT, karena dengan

karunia-Nya saya dapat menyelesaiakan tugas akhir yang berjudul

“Pemanfaatan Kulit Kakao dan dedak Padi sebagai Substrata tau

Media Pertumbuhan Kapang Trichoderma viride dan Aspergillus

niger”. Meskipun banyak hambatan yang saya alami dalam proses

pengerjaannya, tapi saya bersyukur dapat menyelesaikan tugas akhir ini

Tidak lupa saya sampaikan terimakasih kepada dosen pembimbing

yang telah membantu dan membimbing, serta memotivasi saya dalam

mengerjakan tugas akhir ini. saya juga mengucapkan terimakasih kepada

Tentunya ada hal-hal yang ingin penulis berikan kepada para

dapat meberikan informasi kepada pembaca mengenai pemanfaatan

menjadi sesuatu yang berguna bagi penulis maupun yang membacanya.

Penulis menyadari bahwa dalam menyusun tulisan ini masih jauh

dari kesempurnaan, untuk itu penulis sangat mengharapkan kritik dan

saran yang bersifat membangun guna sempurnanya tulisan ini.

Makassar, Januari 2013

Ucapan terima kasih kepada semua pihak yang telah membantu

penulis dalam menyelesaikan skirpsi ini sehingga dapat terselesaikan

“terima kasih kepada”

1. Ketua Jurusan dan sekertari jurusan Teknologi Pertanian

2. Ketua Program Studi dan sekertaris Program Studi Ilmu dan

Teknologi Pangan Universitas Hasanuddin

pembimbing I dan pembimbing II yang dengan sabar membimbing,

mendorong, memotivasi dan senantiasa memberikan masukan

kepada penulis selama pelaksanaan penelitian hingga penulisan

M.Foodtech selaku dosen penguji yang senangtiasa memberikan

saran dan masukan dalam penyusunan skiripsi ini

5. Dosen-dosen dan seluruh staf Jurusan Teknologi Pertanian yang

telah memberikan ilmu, semangat, bimbingan serta motivasi selama

perkuliahan hingga penyusunan skiripsi.

6. Ibu Ati selaku laboran yang selalu membantu penulis selama

7. Pak Amir dan Bu Yuli yang selalu membantu dalam pengurusan

Universitas Hasanuddin, terima kasih karena kalian telah

memberikan warna pada penulis selama penulis menjadi mahasiswa

9. Terima kasih kepada kelurga besarku yang selalu memberikan

semangat dan bantuannya baik moral maupun materi.

mahasiswa hingga sekarang yang selalu memberikan semangatnya

kepada penulis terima kasih atas kebersamaannya selama ini.

11. Sahabat-sahabat “The Tc” yang memberikan semangat yang begitu

luar biasa, dukungan kalian sangat berarti untuk ku.

12. Terima kasih kepada “Teletubies” Yuyun, Amrida, Anita, yang

selalu memberikan bantuannya selama ini.

Halim, Mustar, Irha, Tono, Yoland, Hikma, Icha, Hamsah, Erick,

Adhi yang selalu memberikan semangat, dukungan selama masa

perkuliahan hingga sekarang. Kalian takkan pernah terlupakan

semoga kita tetap menjadi saudara. Teman seperjuangannku di

laboratorium “ Upi, Nira, K’ Aan, K’ Arni terima kasih bantuanya

semua semangatnya kalian tidak akan terlupakan

15. Terimah kasih kepada kepada sahabat “Pepromeno” Dila, Fandi,