NAMA: VIVI SEPDAVITRI

NO BP: 1801145

KELAS : 2018B

TUGAS: TEB (TEKNIK EVALUASI BIO-AKTIVITAS)

TEKNIK EVALUASI BIOAKTIFITAS

Judul : Efek hipokolesterolemia ekstrak kasar daun kelor oleifera

Lam dalam diet lemak-tinggi terhadap tikus wistar.
Volume : Vol. 69 Hal. 21-25.
Tahun : 2000.
Penulis : Ghasi, Nwobodo, dan Ofili.

Latar Belakang

Sejumlah penelitian telah menghubungkan peningkatan konsentrasi

kolesterol total atau kolesterol LDL dalam plasma dengan peningkatan insiden
kejadian aterosklerotik (Goldstein et al., 1973; Keys, 1975). Lebih lanjut telah
ditunjukkan bahwa komplikasi klinis aterosklerosis dapat dikurangi dan umur
diperpanjang ketika lipid plasma diturunkan oleh agen hipokolesterolemia (Lipid
Program Klinik Penelitian, 1984a; Program Klinik Penelitian Lipid
1984b; Studi Jantung Helsinki, 1987).
Banyak obat dengan aktivitas hipokolesterolemia terbukti tersedia secara klinis
untuk mengatasi kasus arteriosklerosis prematur dan orang-orang dengan faktor risiko
lain, seperti hipertensi atau diabetes mellitus (Brown dan Goldstein,
1992).
Banyak pengobatan herbal di dunia yang dapat menurunkan kolesterol dan
mengobati pasien dengan penyakit jantung dan obesitas. Beberapa penelitian telah
membuktikan efek ekstrak kasar daun Moringa oleifera Lam terhadap serum,
kolesterol hati dan ginjal tikus wistar, dan efeknya terhadap protein total serum, dan
albumin.
 Moringa oleifera Lam berasal dari Asia selatan, tetapi tumbuh di dataran
Afrika yang beriklim tropis dan Amerika Latin (Ramachandran et al., 1980;
Sofowora, 1982). Karna khasiatnya yang baik tumbuhan ini dapat dimanfaatkan
untuk mencegah, bahkan mengatasi kejadian hiperkolesterolemia. Di Nigeria,
daun kelor dimakan sebagai sayuran tanpa adanya efek samping yang dilaporkan.
Daun ini juga biasa dimakan sebagai makanan oleh bayi dan anak- anak di India
selatan, karena kandungan b-karoten yang tinggi membantu mencegah
berkembangnya kebutaan akibat kekurangan vitamin A.

Metode Penelitian
Persiapan ekstrak kasar daun Moringa oleifera
Identitas Moringa oleifera Lam (tanaman lobak) dikonfirmasi oleh Dr
JC Okafor dari herbarium Kehutanan, Kementerian Pertanian dan Sumber
Daya Alam, Enugu, Nigeria. Spesimen disimpan di herbarium kehutanan
kementerian (No.18/7830).
Daun lobak dikumpulkan dan tangkainya dibuang. Sebanyak 10 g daun
dihaluskan dan dihomogenkan dengan 50 ml aquades dalam blender
listrik. Rebusan kemudian disaring melalui kain keju yang disterilkan.
Filtrat bening disimpan dalam lemari es pada suhu 4 ° C dan disiapkan
sebagai stok ekstrak kasar. Bobot ekstrak dinyatakan sebagai bobot
daun kelor yang menghasilkan ekstrak kasar. Konsentrasi akhir ekstrak
adalah 200 mg/ml.
Persiapan diet standar dan diet lemak tinggi
diet standar dan diet lemak tinggi disiapkan dengan mencampur
sejumlah bahan yang dihitung dari tepung jagung, susu bubuk, kelapa
sawit, kulit millet, campuran garam dan tablet multivitamin. persentase
akhir masing-masing komponen dalam ransum adalah sebagai berikut:
karbohidrat, 73%; protein 16%; lemak, 3%; serat kasar 5%; garam
mineral, 2%; vitamin 1%, untuk diet standar dan karbohidrat, 56%;
protein, 16%; lemak, 20%; serat kasar, 5%; garam mineral, 2%; dan
vitamin, 1%, untuk diet tinggi lemak.
Persiapan terhadap kondisi hewan
Lima belas ekor tikus wistar jantan dengan berat badan antara 150 dan
250 g dibagi menjadi tiga kelompok yang masing-masing terdiri dari lima
ekor tikus. Tikus kelompok pertama diberi makan ad libitum dengan
diet standar. Ini adalah kelompok kontrol pertama. Kelompok kedua dan
ketiga diberi makan ad libitum dengan diet tinggi lemak. Tikus kelompok
ketiga diberikan, selain diet tinggi lemak, dosis harian ekstrak, 1 mg/g
berat badan diberikan secara oral. Kelompok kedua berfungsi sebagai
kelompok kontrol lain. Kelompok kontrol diet normal dan tinggi lemak
tidak diberikan ekstrak tetapi menerima volume salin normal yang setara
setiap hari.
Semua hewan disimpan di kandang yang berventilasi baik. Mereka diberi
makan dengan makanan mereka masing-masing dan ekstrak atau garam
normal seperti yang diberikan selama 30 hari. Pada akhir periode, hewan
dipelihara untuk puasa semalam. Hewan dibius dengan eter dan sampel
darah diambil dengan tusukandi bagian jantung. Hewan-hewan itu
kemudian dikorbankan dan hati serta ginjalnya diambil untuk berbagai
estimasi.
Estimasi kolesterol total serum
asam asetat glasial; dan reagen warna 4,0 ml; sampel standar (S): 1,0 ml
0,2 mg/ml standar kolesterol; 0,05 ml air suling; 5.0 ml asam asetat
glasial; dan reagen warna 4,0 ml; sedangkan untuk sampel blangko (B)
ditambahkan reagen sebagai berikut: 0,05 ml air suling; 6,0 ml asam asetat
glasial; dan 4,0 ml reagen warna.
Dua lapisan yang terbentuk antara reagen warna dan asam asetat glasial
dicampur secara menyeluruh segera setelah terbentuk untuk
memastikan pemerataan panas. Tabung reaksi didinginkan dan
absorbansi dibaca dengan filter 540 nm. Nilai akhir diperoleh dengan
menggunakan relasi: Total serum kolesterol=T-B/S- B×0,2×100/0.05=T-
B/S-B×400 mg/100 ml.
Estimasi kolesterol total jaringan
0,4 g jaringan ditimbang dan direfluks dengan 20 ml etanol-eter (3:2 v/v)
selama 15 menit. Infus disaring dan volume disesuaikan menjadi 25 ml
dengan etanol eter. 0,1 ml ekstrak kasar daun kelor diuapkan sampai
kering dalam tabung didih dan ditambahkan 6,0 ml asam asetat glasial
dan 4,0 ml reagen warna dalam tabung reaksi sebagai sampel uji (T).
Sampel standar (S) mengandung 1,0 ml kolesterol (0,2 mg/ml); 0,1 ml
air suling; 5.0 ml asam asetat glasial dan 4.0 ml reagen warna. Sampel
kosong (B) tabung reaksi berisi 0,1 ml air suling, 6,0 ml asam asetat
glasial dan 4,0 ml reagen warna. Absorbansi diukur pada 540 nm. Nilai
akhir diperoleh dengan menggunakan relasi: Kolesterol total jaringan=
T-B/S-B×0,2×100/0,1=T-B/S-B×200 mg/g jaringan.

Penentuan Albumin serum danprotein total

Total protein dan albumin ditentukan dengan metode Reinhold (1953).

Larutan sulfat sebanyak 7,5 ml dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan
ditambahkan 0,5 ml serum secara perlahan. Tabung reaksi ditutup dan
isinya dicampur dengan cara membalik tabung. Volume 2 ml campuran
ditambahkan ke 5,0 ml reagen biuret dalam tabung reaksi lain untuk
penentuan protein total.
Untuk estimasi albumin, 3,0 ml eter dituangkan ke dalam tabung reaksi
yang berisi sisa campuran serum-sulfat-sulfit. Tabung reaksi ditutup dan
dikocok secara menyeluruh. Ini disentrifugasi pada 2500 rpm selama 7
menit dan super natant digunakan untuk estimasi albumin. Berikut ini
ditambahkan ke dalam lima tabung reaksi yang berbeda menggunakan pipet
volumetrik 5 ml. Biuret blank, 5,0 ml reagen Biuret dan 2,0 ml larutan
sulfat-sulfit; Serum kosong, larutan tartrat-iodida 5,0 ml dan supernatan 2,0
ml; Kosong standar, reagen Biuret 5,0 ml dan air suling 2,0 ml; Standar
protein, reagen Biuret 5,0 ml dan supernatan 2,0 ml.
 Tabung reaksi ditempatkan dalam penangas air pada 30 ° C selama 10 menit
dan absorbansi diukur pada 540 nm menggunakan biuret kosong untuk
pengaturan nol. Serum blanko dibaca terlebih dahulu. Dalam semua kasus
protein dan albumin estimasi, hubungan berikut digunakan: Protein, g/100
ml=(U-Bu)×C/S-B), di mana U singkatan absorbansi dari sampel uji, S
adalah absorbansi serum standar, Bs adalah absorbansi blanko standar,
absorbansi blanko serum dan C adalah konsentrasi protein dalam serum
standar dalam g/100 ml. Albumin sama dengan protein yang tersisa
dalam larutan sulfat-sulfit.

Hasil

Dalam analisis ini, nilai yang diperoleh dari diet tinggi lemak tikus yang
diberi makan eksklusif dibandingkan dengan kelompok normal, sedangkan nilai
untuk kelompok yang diberi diet tinggi lemak ditambah ekstrak kasar Moringa
oleifera dibandingkan dengan kelompok eksklusif tinggi lemak.
tikus pada diet tinggi lemak secara signifikan meningkat kadar kolesterol
total dalam serum (PB0,0005), hati (PB0,0005), dan ginjal (PB 0,01)
dibandingkan dengan tikus pada diet normal. Peningkatannya 28% di serum, 38%
di hati, dan 24% di ginjal. Ketika diet tinggi lemak diberikan bersama dengan
ekstrak kasar daun Moringa oleifera Lam, efek peningkatan kolesterol dari diet
tinggi lemak berkurang. Tindakan penurun kolesterol dari ekstrak kasar
ditemukan signifikan (PB0,001) dalam serum, tetapi tidak dalam hati dan ginjal
(PB0,1). Persentase penurunan serum, hati dan ginjal adalah 14,35% (115–103,2
mg/100 ml serum), 6,40% (9,4–8,8 mg/g berat basah) dan 11,09% (1,09–0,97 mg/g
berat basah) masing-masing.