Puncakkromatogram seiring waktu elusi yg menghasilkan waktu retensi.

(perbandingan jum
Semakin tinggi puncak, semakin tinggi luas area, semakin besar konsentrasinya
Semakin lama elusi maka waktu retensi semakin besar
Waktu retensi dan luas area (2 dimensi), spektrum massa dari masing masing puncak yg dihasilkan (3
dimensi)
Puncak yg dihasilkan mewakili 1 senyawa, maka menghasilkan 1 spektrum masa, yg dapat
memberikan informasi bobot molekul, struktur senyawa, identitas kuantiti dan purity (jumlah
senyawa dan kemurnian senyawa)
Identitas bisa diketahui jika dibandingkan dengan standar.
Dengan lcms senyawa bisa diketahui tanpa standar karna memiliki bobot molekul dan strukturnya
Kelebihan lcms: tidak menggunakan proses pemanasan, ada beberapa senyawa yg tidak bisa
menggunakan hplc tanpa dilakukan derivatisasi, karna dengan lcms dapat menganalisis senyawa polar
maupun non polar tanpa proses derivatisasi (proses kimiawi untuk mengubah suatu senyawa
menjadisenyawa lain yang mempunyai sifat-sifat yang sesuai untuk dilakukan analisismenggunakan
kromatografi gas (menjadi lebih mudah menguap)) untuk menurunkan titik didih atau sifat fisik
senyawa agar mudah dianalisis
Dengan hplc tidak bisa mengidentifikasi bobot molekul, struktur, identitas senyawa tanpa adany
senyawa pembanding, sehingga lcms semua informasi bisa diperoleh
Lcms/ms memiliki selektif dan sensitive yg tinggi. Mampu membedakan satu jenis senyawa dengan
senyawa yg lain serta mampu teridentifikasi dengan sampel yg sedikit.
Setiap senyaw amemiliki pola pemisahan spektrum masa yg berbeda

Prinsip lcms:
Penampung fase gerak-> pompa untk menggerakkan fase egerak ke kolom-> injector utk masuk
sampel-> LC kolom-> detector MS-> masuk ion source (terjadi ionisasi agar semua senyawa berubah
menjadi ion+ )-> sampel yg sudah terionisasi masuk ke spektroskopi massa/ mass analyzer yg
mendeteksi berapa banyak sampel yg masuk, bobot molekul dan nilai mznya)-> masuk ke detector yg
akan menkonfersi nilai besaran ion yg berpisah pada spektroskopi massa dan meghasilkan bentuk
spektrum dengan nilai m/z yg menghubungkan massa atom per muatan dan puncak yg menunjukkan
kelimpahan isotop, jika semakin tinggi maka akan semakin banyak jumlah isotop stabil-> terbaca
sebakai bentuk spektrum melalui data recorder berupa spektrum masa dan kromatogram (data 3
dimensi yaitu spektrum masa, luas puncak / luas area, dan waktu retensi)
Pemisahan suatu zat melalui colum LC dengan bantuan pelarut yg dopomkan dan diinjeksikan dan
terjadi pemisahan, muncul krmatogram

Pompa pengkondisian ion sorce vakum, akan menyedot udara sampai tekanan sangat rendah karna
syarat utamanya harus dalam kondisi vakum.
Bentuk ionisasi (API, ESI, APCI, APTI) ESI dan APCI palin banyak dilakukan
Instrumen massa analyzers (Quadrupole, time of flight, ion trap, dan fourier transform ion…
Quadrupole paling banyak digunakan, karna bisa digunakan untuk scan dan harga lebih murah.
Peinsipnya terdiri dari 4 lempng logam, ion akan masuk ke dalam 4 celah lempengan tsb. Prinsipnya
adanya perbedaan voltase masing masing terbentuk ion yg masuk dan menghasilkan medan
elektromagnetik yg digunakan utk memisahkan rasio massa per molekul dari ion yg akan melewati
masing masing elektroda kuotrupole. Batang elektroda pertama berfungsi sebagai filter utk
menyeleksi ion mana saja yg akan dilewatkan lebih dulu dan belakangan, karna memiliki kekuatan
medan Listrik yg berbeda yg mempengaruhi terbentuknya elektromagnetik fill. Sederhana, murah.
Kualitatif. Berdasarkan medan elektromagnetik yg dihasilkan maisng masing ion
tof/ time of flight jauh lebih selektif dan sensitive. Bagus untuk analisis kuantitatif. Sampel yg masuk
akan diberikan gaya elktromagnetik yg sama baik ion kecil maupun besar pada waktu yg sama
sehingga akan terakselerasi dan masuk ke tabung pemisahan. Ion yg lebih kecil akan melewati flight
tube tempat terjadiny pemisahan lebih cepat sampai ke detector dibandingkan ion yg memiliki ukuran
lebih besar atau berat. Perbedaan waktu tempuh masing masing ion tergantung ukurannya, sehingga
akan terjadi pemisahan senyawa uk lebih kecil lebih dulu terdeteksi keluar di detector dengan
menghasilkan penganalisis masa ygberbeda beda dan menghasilkan nilai m/z masing masing ion.
Lebih banyak digunakan dan aplikasinya lebih luas. Terjadi proses sekelsi berdasarkan perbedaan
ukuran molekul.
LCMS/MS: MS pertama menghasilkan bobot molekul atau membentuk ion molekul (memisahkan
protein menjadi fragmenny) dan MS kedua menghasilkan fragmen (terbaca puncak puncak tunggal
dari masing masing asam amino)
Terdapat2 mode ionisasi yaitu MALDI (dengan sinar laser yg ditembakkan ke dalam lempengan
sehingga terbentuk ionisasi) atau bisa juga menggunakan ESI.
Pengujian LCMS/MS (pendeteksi berdasarkan berat molekul) dan HPLC (pendeteksi berdasarkan
Panjang gelombang masing masing senyawa target). sehingga LCMS/MS lebih spesifik dibandingkan
HPLC. Perbedaan dari keduanya pada istrumen ialah pada detektornya yg menggunakan detector MS.
Pada MS/MS akan lebih spesifik karna jika hanya menggunakan MS saja maka pada pendeteksian
menggunakan 1 massa atau massa utama, sedangkan pada MS/MS akan mendeteksi dengan massa
utama dan massa fregmentasinya sehingga akan lebih spesifik.
Pompa menggunakan UPLC sehingga tekanannya jauh lebih tinggi dibandingkan tekanan HPLC.
Tempat injector hanya dilengkapi dengan auto sampler
Menggunakan detector MS
Merk waters