Vergio V.E.

/10618064

IMMUNOBLOT DAN ELISA (ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT

ASSAY)

Immunoblot assay merupakan suatu metode untuk visualisasi secara spesifik protein yang ingin
divisualisasi. Protein yang telah dipisahkan dengan metode elektroforesis jel, dipindahkan
secara elektroforesis ke membran nitroselulosa. Setelah itu diberi perlakuan seperti di ELISA,
yaitu peambahan antibodi primer, antibodi sekunder yang terikat enzim, dan substrat. Hasilnya
berupa endapan berwarna di sepanjang ita yang mengandung protein yang diinginkan.

ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) adalah suatu metode yang dipakai untuk
visualisasi dan kuantifikasi suatu antigen yang terdapat di dalam sampel. Persiapan berupa
sampel protein yang diadsorbsi ke dalam 96 well yang terbuat dari polistirena. Permukaan well
dicuci dangan larutan seperti protein kasein susu. Hal ini dilakukan untuk mencegah protein
yang digunakan terserap ke dalam tempat yang belum terisi. Setelah itu pada permukaan well
ditambahkan larutan berisi antibodi primer sebagai respons terhadap protein yang ingin diuji.
Antibodi sekunder juga ditambahkan sebagai respons terhadap protein primer. Pada antibodi
sekunder, terikat enzim yang digunakan untuk mengkatalisis reaksi sehingga jika hasil uji
positif ketika ditambahkan substrat akan menghasilkan perubahan warna. Antibodi sekunder
berlebih akan dicuci dan hasil berupa warna proporsional dengan konsentrasi protein yang
ingin di uji.