com
MetodeX
beranda jurnal:www.el sevier. com/lokasi/mex
Artikel Metode
abstrak
Metode kromatografi cair kinerja tinggi fase balik cepat (RP-HPLC) dikembangkan dan divalidasi untuk kuantifikasi simultan
parasetamol, ibuprofen, olanzapine, simvastatin dan asam simvastatin dalam konteks bioremediasi mikroalga. Metode ini
divalidasi menurut pedoman dari US Food and Drug Administration (FDA), Konferensi Internasional tentang Harmonisasi
(ICH), dan Eurachem sehubungan dengan kesesuaian sistem, linearitas, akurasi, presisi, pemulihan, batas deteksi dan
kuantifikasi, kekasaran, selektivitas dan spesifisitas. Batas estimasi deteksi dan kuantifikasi masing-masing adalah 0,03 dan
0,10 g mL1untuk parasetamol, 0,03 dan 0,09 g mL1untuk ibuprofen, 0,04 dan 0,13 g mL1untuk olanzapine, 0,27 dan 0,83 g mL
1untuk simvastantin, dan 0,05 dan 0,14 g mL1untuk asam simvastantin. Hasil presisi antar hari dan intrahari berada dalam
batas penerimaan deviasi standar relatif (% RSD) kurang dari 2, dan persentase pemulihan ditemukan berada dalam batas
yang dipersyaratkan 80-110%. Metode yang dikembangkan cepat, linier, tepat, kuat dan akurat, dan telah berhasil diterapkan
pada penentuan produk farmasi umum di atas selama bioremediasi mikroalga.
info artikel
Nama metode:Metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik cepat (RP-HPLC) Kata kunci:
Bioremediasi, HPLC, Validasi Metode, Mikroalga, Farmasi, Air Limbah
Sejarah artikel:Diterima 10 Juli 2020; Diterima 24 September 2020; Tersedia online 28 September 2020
-
Pengajuan Langsung atau Pengajuan Bersama: Co-submissions adalah makalah yang telah dikirimkan bersama dengan makalah penelitian
asli yang diterima untuk diterbitkan oleh jurnal Elsevier lain Direct Submission
∗
Penulis yang sesuai.
Alamat email:tencarnacao@qui.uc.pt (T. Encarnação).
https://doi.org/10.1016/j.mex.2020.101083
2215-0161/© 2020 Penulis. Diterbitkan oleh Elsevier BV Ini adalah artikel akses terbuka di bawah lisensi CC BY-NC-ND (http://
creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/)
2 T. Encarnação, A. Aguiar dan C. Palito dkk. / MetodeX 7 (2020) 101083
tabel spesifikasi
Nama dan referensi metode asli Jika berlaku, sertakan rincian bibliografi lengkap dari referensi utama yang menjelaskan
metode asli dari mana metode baru itu berasal. Jika berlaku, sertakan tautan ke sumber
Ketersediaan sumberdaya daya yang diperlukan untuk mereproduksi metode (misalnya data, perangkat lunak,
perangkat keras, reagen)
pengantar
Polusi air merupakan ancaman global yang parah bagi kesehatan manusia dan satwa liar. Sebagai hasil
dari penggunaan air domestik, pertanian dan industri, limbah dari air limbah sering mengandung polutan
yang dapat bertahan di lingkungan, terakumulasi melalui jaring makanan dan mencapai air minum.
Beberapa bahan kimia organik lingkungan di mana-mana, misalnya obat-obatan, plasticizer, polutan organik
persisten (POPs) tidak dihilangkan dengan metode pengobatan konvensional, dan dapat ditemukan dalam
air minum. EPA AS memperkirakan bahwa 20% dari total paparan makanan terhadap polutan yang muncul
berasal dari air minum[1],2]. Teknologi pengolahan air limbah konvensional meliputi pengolahan
pendahuluan, primer dan sekunder[3], yang menghilangkan sebagian besar kebutuhan oksigen biokimia
(BOD) dan padatan tersuspensi, yang ditemukan dalam air limbah. Namun, pengolahan konvensional tidak
dapat menghasilkan limbah berkualitas tinggi, karena air yang tampaknya bersih sarat dengan polutan yang
muncul, bersama dengan nitrogen dan fosfor yang menyebabkan eutrofikasi. Pengolahan air limbah
lanjutan meliputi pengolahan tersier, menggunakan teknik fisikokimia, seperti pengendapan kimia, ozonasi,
sinar UV, reverse osmosis, bersama dengan pengolahan kuarter. Perlakuan kuaterner dirancang untuk
menghilangkan logam berat, polutan organik dan ion mineral terlarut (juga dilambangkan sebagai kuintern).
Penggunaan mikroalga untuk pengolahan air limbah bukanlah hal baru dan telah dieksploitasi selama
beberapa dekade.[4], limbah susu[5]dan air limbah perkotaan
[6]. Saat ini, penggunaan mikroalga telah diterapkan di beberapa stasiun untuk pengolahan berbagai
sumber air limbah, termasuk kota dan industri.[7,8]. Pengolahan air limbah adalah proses yang mahal tetapi
mikroalga merupakan sumber berbagai produk seperti pigmen, bioplastik dan metabolit sekunder.[9], yang
dapat membantu mengurangi beban masing-masing.
Untuk mengurangi efek pembuangan polutan dan mematuhi peraturan sekarang dan masa depan untuk
pembuangan air limbah, diperlukan sistem yang lebih maju. Juga, metode yang lebih banyak dan lebih baik
untuk pemantauan dan validasi polutan yang muncul diperlukan.
Obat-obatan yang digunakan dalam penelitian ini termasuk parasetamol (atau acetaminophen) (PAR),
ibuprofen (IBU), olanzapine (OLA) dan simvastatin (SIM). Mereka dipilih karena kemunculan atau
kegigihannya di lingkungan; perlu dicatat bahwa parasetamol dan ibuprofen umumnya diklasifikasikan
sebagai berbahaya bagi organisme air[10]. Parasetamol adalah obat analgesik yang paling umum digunakan
dan banyak terdapat dalam limbah. Ibuprofen adalah salah satu obat antiinflamasi nonsteroid yang paling
sering digunakan. Olanzapine, obat antipsikotik, digunakan untuk pengobatan skizofrenia, tahan terhadap
fotodegradasi oleh sinar matahari, dan ditemukan di permukaan air.[11,12]. Simvastatin merupakan
pengatur lipid dan juga sering ditemukan pada limbah cair. Farmasi ini adalah lakton yang dihidrolisis dalam
air menjadiβ-hydroxyacid, asam simvastatin (SIMA) (Gambar 1). Dalam influen, konsentrasi 492340–6924 ng
L1dari PAR, 1681–33764 ng L1dari IBU, 7–115 ng L1OLA dan 1230 ng L1SIM telah dilaporkan[10,13].
HPLC banyak digunakan oleh industri farmasi untuk mengukur obat-obatan, dengan fokus khusus pada
kuantifikasi dalam tablet[14,15]. Kuantifikasi polutan yang muncul, seperti obat-obatan dalam air limbah
adalah bidang yang membutuhkan eksplorasi lebih lanjut. Dalam konteks ini, tujuan dari penelitian ini
adalah untuk mengembangkan dan memvalidasi metode RP-HPLC untuk empat obat-obatan umum, dengan
relevansi untuk tujuan bioremediasi. Metode yang divalidasi berhasil diterapkan pada penilaian kinerja dan
efisiensi sel mikroalga yang bebas dan tidak bergerak Nannokloropsissp. dalam menghilangkan empat obat-
obatan[16].
T. Encarnação, A. Aguiar dan C. Palito dkk. / MetodeX 7 (2020) 101083 3
Gambar 1.Struktur kimia (a) parasetamol, (b) ibuprofen, (c) olanzapine, (d) simvastatin dan (e) asam simvastatin.
Eksperimental
Parasetamol dibeli dari Fagron Iberica (Spanyol) dan Ibuprofen dipasok oleh Laboratórios Medinfar
(Lisboa, Portugal). Olanzapine diakuisisi dari Zhejiang MYOY Import & Export Co., Ltd (Hangzhou, China).
Simvastatin disediakan oleh Labesfal, Laboratórios Almiro, SA (Santiago de Besteiros, Portugal). Medium
mikroalga f2 diperoleh dari Varicon Aqua Solution (Malvern, UK). Semua reagen dan pelarut lainnya adalah
kelas analitik atau HPLC (Gambar 2.).
Peralatan
Analisis HPLC PAR, IBU, OLA, SIM, dan SIMA dilakukan menggunakan sistem Dionex Ultimate 3000 yang
dilengkapi dengan injektor otomatis dan empat detektor panjang gelombang ganda UV/VIS variabel. Kolom
yang digunakan untuk analisis adalah Luna Phenyl-Hexyl, Phenomenex© R(Torrance, AS), dengan
Ukuran partikel 5 m, diameter internal 3 mm, dan panjang 150 mm, didukung dengan SecurityGuardTM
fenomena kartrid© R(Torrance, USA), dengan diameter internal 3,0 mm, yang berada dalam oven pada suhu
suhu 35 C. Data direkam menggunakan software Chromeleon. Analisis kromatografi dilakukan dalam mode
gradien bertingkat, seperti yang ditunjukkan padaTabel 1. Khususnya, detektor UV ditetapkan pada 230 nm
untuk deteksi simultan PAR, IBU, OLA, SIM, dan SIMA. Volume injeksi adalah 10 L untuk standar dan sampel.
Sebelum analisis, setiap standar dan sampel disaring melalui filter 0,22 m. Sebuah waktu berjalan 8 menit
ditemukan cukup untuk pemisahan lima analit, diikuti dengan langkah pencucian 3 menit dengan buffer
antara berjalan.
4 T. Encarnação, A. Aguiar dan C. Palito dkk. / MetodeX 7 (2020) 101083
Gambar 2.Kromatogram standar 75 g mL1solusi PAR, IBU, SIMA dan SIM dipertimbangkan untuk evaluasi kesesuaian sistem.
Tabel 1
Kondisi kromatografi metode HPLC gradien.
Waktu (menit) Eluen A (%) Eluen B (%) Laju aliran (ml min1)
0 30 70 0.8
1 40 60 0.8
2 60 40 0.8
5 65 35 0.8
7 70 30 0.8
8 30 70 0.8
Persiapan fase gerak, larutan stok dan standar serta kontrol kualitas
Fase gerak terdiri dari campuran buffer dan asetonitril menurut mode gradien,Tabel 1. Buffer dibuat
dengan melarutkan 1,15 g garam dipotassium hidrogen fosfat dalam 650 mL air ultra murni. Nilai pH
disesuaikan menjadi 7,3±0,1 dengan asam fosfat. Semua larutan disaring melalui filter membran 0,22 dan
disonikasi hingga degas. Lima larutan stok asetonitril pada 1 mg mL1PAR, IBU, OLA, SIM dan SIMA disiapkan.
SIMA diperoleh dengan hidrolisis basa SIM; larutan metanol SIM 2 mg mL1disiapkan dan dicampur dengan
volume yang sama dari larutan NaOH 0,04 M. Campuran ini dipanaskan sampai 60°C selama 45 menit
kemudian dinetralkan dengan HCl 1 M. Sebuah solusi SIMA ca. 1 mg mL1diperoleh dan dikonfirmasi dengan
tidak adanya puncak SIM dalam analisis HPLC[17]. Dua larutan standar kerja yang mengandung lima analit
disiapkan pada konsentrasi 100 dan 10 g mL1dengan pengenceran setiap larutan stok dengan fase gerak
(asetonitril:penyangga, 50:50). Untuk penentuan batas deteksi dan kuantifikasi, enam larutan standar (0,1,
0,25, 0,5, 0,75, 1 dan 1,25 g mL1) dibuat dari 10 g mL1
solusi kerja. Delapan larutan standar (0,5, 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100 g mL1) dibuat dengan pengenceran larutan
standar kerja dengan fase gerak (asetonitril:penyangga, 50:50). Untuk solusi kontrol kualitas, enam ulangan
0,5, 1,5, 50 dan 100 g mL1standar yang mengandung lima analit dipertimbangkan. Semua larutan stok
disimpan pada suhu -20°C dan solusi kerja baru disiapkan sesuai kebutuhan.
T. Encarnação, A. Aguiar dan C. Palito dkk. / MetodeX 7 (2020) 101083 5
Validasi metode
Metode kuantifikasi PAR, IBU, OLA, SIM, dan SIMA telah divalidasi menurut Food and Drug Administration
(FDA) AS.[18], dan pedoman Konferensi Internasional tentang Harmonisasi (ICH)[19]selain Eurachem[20],
sehubungan dengan kesesuaian sistem, linieritas, akurasi, presisi, pemulihan, batas deteksi dan kuantifikasi,
selektivitas dan spesifisitas.
Kesesuaian sistem
Uji kesesuaian sistem memastikan bahwa sistem pengujian lengkap, termasuk instrumen, reagen, kolom
dan analis, sesuai untuk aplikasi yang dimaksud. Untuk itu dilakukan injeksi enam kali berturut-turut dengan
larutan standar PAR, IBU, OLA, SIM dan SIMA pada konsentrasi 75 mL.1. Parameter teoritis nomor pelat (N),
faktor kapasitas (ḱ ), resolusi (R), faktor pembuangan (T) dianalisis.Nmenunjukkan efisiensi kolom,ḱ adalah
ukuran di mana puncak minat terletak sehubungan dengan volume kosong,Radalah ukuran seberapa baik
dua puncak dipisahkan, danTadalah ukuran simetri puncak.
Linearitas
Linearitas adalah kriteria kritis untuk analisis kuantitatif dan merupakan ukuran akurasi pada rentang
metode. Linearitas metode yang diusulkan dievaluasi melalui kurva kalibrasi, dibangun dengan delapan
larutan standar, yang mengandung lima analit, mulai dari 0,5 hingga 100 g mL1, untuk menghitung nilai
koefisien korelasi, kemiringan, dan intersep. Data dianalisis menggunakan Analysis ToolPak Microsoft Excel©
R(Microsoft Corp., Redmond, WA) dengan regresi linier
respon larutan yang hanya mengandung PAR, IBU, OLA, SIM dan SIMA dibandingkan dengan media kultur
mikroalga f2.
Pemulihan
Studi pemulihan dapat digunakan untuk mengatasi tingkat bias. Pemulihan PAR, IBU, OLA, SIM dan SIMA
dari media kultur mikroalga ditentukan dengan perbandingan konsentrasi masing-masing dengan larutan
standar dalam fase gerak pada tiga konsentrasi yang berbeda (1, 50 dan 100 g mL).1).
Penerapan metode
Metode RP-HPLC untuk analisis simultan PAR, IBU, OLA, SIM dan SIMA dikembangkan. Menurut literatur
yang diterbitkan, metode HPLC sebelumnya untuk penentuan simultan OLA, SIM dan SIMA, menggunakan
kolom Fenil-Heksil untuk analisis tiga analit dengan pemisahan yang baik dan waktu retensi yang singkat,
yang memotivasi pilihan untuk kolom ini. Mengenai analisis PAR dan IBU, ada sejumlah metode yang
dilaporkan dalam literatur[22].
pKa analit juga dipertimbangkan; pKaś dari PAR, IBU, OLA, SIM adalah 9,46, 4,85, 7,24 dan
14,91, masing-masing. Mengikuti aturan umum, pH fase gerak harus dipilih dua unit di atas atau di bawah
pKa analit. Mencapai nilai pH mendekati nilai pH yang lebih tinggi dan lebih rendah, 12,91 dan 2,85,
bagaimanapun, merugikan kolom. Untuk nilai pH yang sangat asam, IBU tidak terdisosiasi dan menunjukkan
daya tarik hidrofobik yang kuat dengan lapisan silika, menghasilkan waktu retensi mendekati 4 menit.
Namun, pada pH 3, waktu retensi PAR dan OLA adalah 1,103 dan 1,047 menghasilkan pemisahan puncak
yang buruk dan resolusi rendah. Oleh karena itu, nilai pH sekitar 7 dipilih untuk pemisahan lima analit.
Mengenai fase gerak, metanol dibuang karena, dengan adanya sejumlah kecil asam, transesterifikasi
ibuprofen ke metil ester yang sesuai dapat terjadi. Dengan demikian,Tabel 1. Di bawah kondisi yang
dijelaskan, PAR, IBU, OLA, SIM dan SIMA dielusi pada 1,26, 2,10, 3,72, 6,35 dan 2,99 menit, masing-masing.
Metode ini divalidasi pada kisaran 05– 100 g mL1.
T. Encarnação, A. Aguiar dan C. Palito dkk. / MetodeX 7 (2020) 101083
Meja 2
Parameter uji kesesuaian sistem.
kromatografi PAR (75 g mL1) IBU (75 g mL-1) SIMA (75 g mL1) OLA (75 g mL1) SIM (75 g mL-1)
parameter
Penyimpanan Daerah puncak Penyimpanan Daerah puncak Penyimpanan Daerah puncak Penyimpanan Daerah puncak Penyimpanan Daerah puncak Penerimaan
waktu (menit) waktu (menit) waktu (menit) waktu (menit) waktu (menit) kriteria
Berarti (n=6) 1.26 37.15 2.10 25.0 2.99 17.6 3.72 51.0 6.35 31.3 -
SD 0,002 0,51 0,002 0,50 0,004 0,25 0,004 0,67 0,006 0,50 -
%RSD 0.13 1.38 0.11 2.00 0.13 1.42 0.11 1.30 0,09 1.58 ≤ 2.0%sebuah
Pelat teoretis (N) 2816 8670 23708 20120 64570 > 1000 sebuah
[23].
sebuah
b
[24].
c
[25].
7
8 T. Encarnação, A. Aguiar dan C. Palito dkk. / MetodeX 7 (2020) 101083
Tabel 3
Perkiraan batas deteksi LOD dan LOQ kuantifikasi untuk PAR, IBU, SIMA, OLA dan
SIM.
Tabel 4
Hasil yang diperoleh dari analisis regresi dengan metode weighted least squares
untuk PAR, IBU, SIMA, OLA dan SIM (n=6).
Validasi metode
Kesesuaian sistem
Parameter kesesuaian sistem, diringkas dalamMeja 2, termasuk %RSD, pelat teoretis, faktor tailing dan
resolusi, memenuhi kriteria yang disyaratkan. Puncak menunjukkan simetri dan resolusi tinggi. %RSD area
puncak dan waktu retensi untuk PAR, IBU, SIM dan SIMA lebih rendah dari 2% (Meja 2), menunjukkan bahwa
sistem ini tepat untuk menganalisis lima senyawa secara bersamaan. Nilai faktor kapasitas untuk PAR dan
IBU di bawah 2, namun, dalam kromatogram gradien, nilai dari faktor kapasitas tidak memiliki arti teoretis.
Hasil yang diperoleh dengan kesesuaian sistem menunjukkan bahwa parameter kromatografi yang dipilih
sesuai untuk mengidentifikasi PAR, IBU, OLA, SIM dan SIMA.
Linearitas
Untuk penilaian linieritas metode, larutan dengan konsentrasi dalam kisaran 0,5–100 g mL1dievaluasi.
Koefisien korelasi ditemukan lebih dari 0,9999 untuk lima analit, menunjukkan linearitas yang baik dari kurva
kalibrasi (Tabel 4). Standar deviasi residual mendekati nol, 0,17, 0,15, 0,11, 0,25, 0,5 untuk PAR, IBU, OLA, SIM
dan SIMA masing-masing, mengkonfirmasi linearitas. Namun, dengan inspeksi visual dari respons plot
terhadap konsentrasi, tren sistematis dalam distribusi, mencerminkan perubahan varians dengan level. Plot
residu untuk simvastatin menunjukkan bahwa model cocok untuk konsentrasi tinggi, dan prediktor yang
baik untuk nilai konsentrasi yang lebih rendah (Tabel 4).
Tabel 5
Presisi dan akurasi intraday dan interday untuk PAR, IBU, SIMA, OLA dan SIM (n=6).
Tabel 6
Persentase pemulihan PAR, IBU, SIMA, OLA dan SIM dari media kultur mikroalga (n=6).
%Pemulihan 102,5 98,0 98,7 99,8 96,9 95,7 99,6 108,7 108,9 80,8 93,0 101,3 104,7 93,0 101,3
Pemulihan
Seperti yang terlihat dariTabel 6, semua perolehan rata-rata yang dihitung (kebenaran) berada dalam kisaran
81-109% berada dalam persentase pemulihan yang dapat diterima dari 80-110% untuk konsentrasi analit 1 ppm
yang menunjukkan kecukupan kuantitas simultan dari lima analit.
Penerapan metode
Gambar 3.Kromatogram (A) medium f2 dan (B) standar PAR, IBU, SIMA dan SIM dipertimbangkan untuk evaluasi efek matriks.
metabolit yang diekskresikan koresponden. Penelitian ini menunjukkan bahwa spesies yang digunakan
untuk menghilangkan obat-obatan cocok untuk bioremediasi PAR, IBU, OLA, SIM dan SIMA dalam air limbah
yang sangat pekat.
Kesimpulan
Metode HPLC dikembangkan dan dioptimalkan untuk penentuan dan kuantifikasi PAR, IBU, OLA, SIM dan
SIMA selama bioremediasi menggunakan mikroalga. Metode yang dikembangkan terbukti cepat, linier,
presisi, kuat dan akurat, dan cocok untuk evaluasi efisiensi bioremediasi mikroalga.
Kontribusi penulis
Konsepsi dan desain penelitian, semua perhitungan, analisis dan interpretasi data telah dilakukan oleh
TE. TE, AA dan CP melakukan optimasi HPLC; SEBAGAI sumber daya yang disediakan; Itu
T. Encarnação, A. Aguiar dan C. Palito dkk. / MetodeX 7 (2020) 101083 11
naskah ditulis oleh TE; HB dan ACCP meninjau perhitungan dan naskah; Pekerjaan ini disupervisi oleh HB,
ACCP dan MC.
Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak mengetahui adanya persaingan kepentingan keuangan atau hubungan
pribadi yang tampaknya dapat mempengaruhi pekerjaan yang dilaporkan dalam makalah ini.
Para penulis mengakui Fundação para a Ciência e Tecnologia (FCT), Badan Penelitian Ilmiah Portugis, atas
hibah penelitian PhD kepada TE, SFRH/BD/81385/2011. Kami berterima kasih atas pendanaan dari Coimbra
Chemistry Center (CQC) yang didukung oleh FCT melalui program UID/QUI/UI0313/2019 dan COMPETE.
Penulis juga berterima kasih kepada Labesfal-Laboratórios Almiro, SA atas donasi simvastatin yang baik.
Referensi
[1] A. Reade, T. Quinn, JS Schreiber, penilaian Ilmiah dan Kebijakan untuk mengatasi zat per-dan polifluoroalkil (PFAS) dalam Air Minum
- MI 2019, (2019) 1-102.
[2] Badan Perlindungan Lingkungan AS, Tanpa Judul, Tentang Penilaian Risiko, 2018. (nd).https://www.epa.gov/risk/ about-risk-
assessment(diakses Juni 2019).
[3] A. Sonune, R. Ghate, Perkembangan metode pengolahan air limbah, Desalinasi (2004), doi:10.1016/j.desal.2004.06.113.
[4] NO San Keskin, A. Celebioglu, T. Uyar, T. Tekinay, Mikroalga diimobilisasi oleh jaring nanofibrous untuk menghilangkan pewarna
reaktif dari air limbah, Ind. Eng. Kimia Res. (2015), doi:10.1021/acs.iecr.5b01033.
[5] R. Yadavalli, GRV Heggers, Dua tahap pengolahan limbah susu menggunakan amobil Chlorella pyrenoidosa, J. Environ. Sembuh. Sci.
Ind. (2013), doi:10.1186/2052-336x-11-36.
[6] A. Ruiz-Marin, LG Mendoza-Espinosa, T. Stephenson, Pertumbuhan dan penghilangan nutrisi dalam ganggang hijau bebas dan tidak bergerak
dalam kultur batch dan semi-kontinyu yang mengolah air limbah nyata, Bioresour. teknologi. (2010), doi:10.1016/j.biortech.2009.02.076.
[7]http://www.clearaswater.com(diakses Juni 2019).
[8]https://algaerefinery.eu/#about(diakses Juni 2019).
[9] T. Encarnação, AACC Pais, MG Campos, HD Burrows, Cyanobacteria dan mikroalga: Sumber terbarukan senyawa bioaktif dan bahan
kimia lainnya, Sci. Prog. (2015) 98, doi:10.3184/003685015X14298590596266.
[10] B. Petrie, R. Barden, B. Kasprzyk-Hordern, Tinjauan tentang kontaminan yang muncul dalam air limbah dan lingkungan:
pengetahuan saat ini, area yang dipelajari dan rekomendasi untuk pemantauan di masa depan, Water Res 72 (2015) 3-27, doi :10.
1016/j.watres.2014.08.053.
[11] J. Karpinska, A. Sokol, A. Bernatowicz, A. Szulecka, U. Kotowska, Studi fotodegradasi levomepromazine dan olanzapine di bawah
kondisi lingkungan simulasi, Photochem. fotobiol. Sci. 11 (2012) 1575–1584, doi:10.1039/c2pp25068c.
[12] JP Bercu, NJ Parke, JM Fiori, RD Meyerhoff, Penilaian risiko kesehatan manusia untuk tiga senyawa neurofarmasi di perairan
permukaan, Regul. racun. farmasi. 50 (2008) 420–427, doi:10.1016/j.yrtph.2008.01.014.
[13] KJ Ottmar, LM Colosi, JA Smith, Nasib dan transportasi obat atorvastatin dan simvastatin selama pengolahan air limbah
konvensional, Chemosphere (2012), doi:10.1016/j.chemosphere.2012.03.066.
[14] JT Franeta, D. Agbaba, S. Eric, S. Pavkov, M. Aleksic, S. Vladimirov, uji HPLC asam asetilsalisilat, parasetamol, kafein dan fenobarbital
dalam tablet, Farmaco (2002), doi:10.1016/S0014-827X(02)01265-X.
[15] FA El-Yazbi, OA Amin, EI El-Kimary, EF Khamis, SE Younis, Penentuan simultan metokarbamol dan aspirin dengan adanya zat terkait
farmakope dalam tablet gabungan menggunakan metode HPLC-DAD baru, Drug Dev. Ind. Farmasi. (2019), doi:
10.1080/03639045.2018.1535603.
[16] T. Encarnação, C.Palito T, AACC Pais, AJM Valente, HD Burrows, Penghapusan Farmasi dari Air oleh Mikroalga, Molekul Bebas dan
Imobil (2020)https://doi.org/10.3390/molecules25163639.
[17] C. Vitorino, JJ Sousa, AACC Pais, Metode HPLC fase terbalik cepat untuk analisis simultan olanzapine dan simvastatin dalam
pembawa lipid berstruktur nano ganda, Anal. Metode 5 (2013) 5058–5064, lakukan:10.1039/c3ay40757h.
[18]FDA, Panduan untuk Industri: validasi metode bioanalitik, US Dep. Sembuh. Bersenandung. melayani Food and Drug Adm.Cent. Evaluasi Obat. dan Pusat
Penelitian. Dokter hewan. Med. (2001).
[19]ICH, Panduan untuk industri: validasi Q2B dari prosedur analitis, metodologi, US Dept. Heal. Manusia, Food Drug Adm.Cent. Obat
Res. Sen. Biol. evaluasi. Res. (1996) Rockville, MD.
[20] Eurachem, Kecocokan untuk Tujuan Metode Analitis-Panduan Laboratorium untuk Validasi Metode dan Topik Terkait, (2014).
[21] AOAC, Pedoman prosedur studi kolaboratif untuk memvalidasi karakteristik metode analisis, (2002).http://www. aoac.org.
[22] S. Jahan, J. Islam, R. Begum, R. Kayesh, A. Rahman, A Studi pengembangan metode, validasi, dan degradasi paksa untuk kuantifikasi
simultan parasetamol dan ibuprofen dalam bentuk sediaan farmasi dengan metode RP-HPLC , Anal. Kimia Wawasan 9 (2014) 75–
81, lakukan:10.4137/Acici.S18651.
12 T. Encarnação, A. Aguiar dan C. Palito dkk. / MetodeX 7 (2020) 101083
[23] NA pshtein, Validasi teknik HPLC untuk analisis farmasi, Pharm. Kimia J. (2004), doi:10.1023/b:fac. 0000038422.27193.6c.